细胞治疗和治疗性回输方法与流程

细胞治疗和治疗性回输方法
相关申请的交叉引用
1.本pct申请要求2019年7月22日提交的美国临时申请号62/877,011的优先权，该美国临时申请以引用方式完全并入本文。


背景技术：

2.癌症是美国、其他国家和世界的主要死因。传统上，癌症已经用手术、化疗、放射疗法或它们的组合进行治疗。最近，基于免疫疗法的方法已经获得了成功和关注。这些方法包括单克隆抗体、非特异性免疫疗法、溶瘤病毒疗法、t细胞疗法(诸如嵌合抗原受体(car)t细胞疗法)、和肿瘤抗原疫苗。这些疗法的有效性在很大程度上是由于这些疗法对靶患者的个性化。尽管取得了显著进展，但是癌症的“治愈”仍有待实现，并且仍期望对癌症疗法进行改进。
3.相关出版物包括：us20190023670、us20180362519、us20180044630、us20140227781、us20130122049、和us6036681。


技术实现要素：

4.本公开提供了用于处理从受试者提取的组织和/或细胞以随后治疗性输注回受试者体内，通常作为治疗癌症的肿瘤抗原疫苗的方法、系统和设备。
5.本公开的各方面提供了用于处理组织或细胞以供用于治疗性回输的方法。可以从受试者收获肿瘤组织，包括软组织和/或骨组织。肿瘤组织通常可以在容纳室或特定的粉碎设备中进行粉碎。经粉碎的肿瘤组织中的癌细胞可以被破坏或以其他方式灭活，而不破坏所述肿瘤组织中的肿瘤抗原。癌细胞可以通过诸如通过液氮进行(例如，低温地)冷却来破坏。细胞的这种灭活或破坏可以通过一个或多个冷冻/解冻循环来加强，并且这些循环可以通过调节冷冻/解冻循环中的冷却和加温速率和/或冷冻/解冻循环的长度、数量和/或模式来进一步优化。冷冻/解冻循环可以用容纳经粉碎的组织的容纳室来具体实施。然后，可以从容纳室中提取出具有经灭活或破坏的癌细胞和保存的抗原的肿瘤组织并重新导入受试者中。该组织可仅在其已达到阈值条件后被提取，所述阈值条件为诸如阈值温度或处理室中的浸没水平，和/或一定次数的指定长度和/或模式的冷冻/解冻循环。在一些情况下，该组织用诸如套管的容纳元件重新导入，该容纳元件可经优化以增强对重新植入的组织的免疫应答。
6.本公开的各方面还提供了用于处理组织或细胞以供用于治疗性回输的系统和设备。示例性系统可包括以下中的一者或多者：匣盒(cartridge)，所述匣盒用于存储和处理所收获的肿瘤组织；组织粉碎器，所述组织粉碎器在所述匣盒内，所述组织粉碎器可操作地耦接至所述匣盒，或者独立于所述匣盒操作；外壳，所述外壳包括用于可移除地保持匣盒的容纳室和可选地用于组织粉碎器的驱动器；冷却流体端口，所述冷却流体端口流体耦接至所述容纳室以将冷却剂引入到容纳室中来冷却所述匣盒；和/或用户界面，所述用户界面用于以下中的一者或多者：(i)显示时间、容纳室中的温度、和/或粉碎状态中的一者或多者，
和/或(ii)控制计时器、温度和/或组织粉碎器的驱动器中的一者或多者，和/或(iii)监测和驱动一个或多个冷冻/解冻循环的特性。这些特性可包括冷冻的速率和持续时间、解冻的速率和持续时间、冷冻和解冻的目标温度等。该系统可进一步包括暖空气或流体端口，所述暖空气或流体端口流体耦接至所述容纳室以用于将暖空气或流体引入所述容纳室以加温或解冻匣盒。替代地或组合地，可以提供加温元件，诸如感应和/或电阻加热元件，以加温或解冻匣盒。匣盒可以为导管、托盘和/或网柱的形式。
7.本公开的各方面提供了用于治疗癌症的方法。示例性方法可包括将从受试者收获的肿瘤组织重新导入所述受试者的步骤，所述重新导入的肿瘤组织的癌细胞已进行灭活，而未破坏所述癌细胞中的肿瘤抗原。
8.从受试者收获的肿瘤组织可包括软组织或骨组织中的一者或多者。该方法可进一步包括从受试者收获肿瘤组织的步骤。该方法可进一步包括在将从所述受试者收获的肿瘤组织重新导入受试者之前粉碎所述肿瘤组织的步骤。可通过将所收获的肿瘤组织放置在容纳室中来粉碎肿瘤组织，肿瘤组织在所述容纳室中被粉碎。
9.该方法可进一步包括将从受试者收获的肿瘤组织中的癌细胞灭活的步骤。将肿瘤组织中的癌细胞灭活可包括破坏癌细胞。将肿瘤组织中的癌细胞灭活可包括冷却肿瘤组织。肿瘤组织可以在粉碎后冷却。冷却的肿瘤组织可以被加温。该方法可进一步包括对肿瘤组织重复一个或多个冷却和加温循环的步骤。该一个或多个冷却和加温循环可符合特定的冷却和加温速度范围，被优化以灭活或杀死细胞而不破坏肿瘤抗原。在所述肿瘤组织已达到阈值次数的冷却和加温循环之后和/或在所述肿瘤组织已达到阈值温度并且可选地达预定时间段之后，可以将具有经灭活的癌细胞的肿瘤组织重新导入受试者。肿瘤组织可以通过诸如用液氮低温处理肿瘤组织来冷却。具有经灭活的癌细胞的肿瘤组织可以用诸如容纳容纳套筒的容纳元件重新导入。
10.本公开的各方面提供了用于处理组织或细胞以供用于治疗性回输的系统。示例性系统可包括：匣盒，所述匣盒用于存储和处理所收获的肿瘤组织；外壳，所述外壳包括容纳室以可移除地保持匣盒；
11.冷却流体端口，所述冷却流体端口流体耦接至所述容纳室以用于将冷却剂引入容纳室中以冷却所述匣盒；和用户界面。所述用户界面可被配置用于以下中的一者或多者：(i)显示时间、所述容纳室中的温度、或冷冻/解冻循环的阶段中的一者或多者，或(ii)控制计时器或所述容纳室中的温度中的一者或多者，或(iii)监测和驱动一个或多个冷冻/解冻循环的特性。
12.该系统可进一步包括组织粉碎器，所述组织粉碎器在所述匣盒内。外壳可包括用于组织粉碎器的驱动器。用户界面可被配置为显示所收获的肿瘤组织的粉碎状态。用户界面可被配置为控制用于组织粉碎器的驱动器。
13.该系统可进一步包括暖空气端口，所述暖空气端口流体耦接至所述容纳室以用于将暖空气引入所述容纳室以加温或解冻所述匣盒。
14.所述匣盒可为各种形式，诸如导管、托盘、网柱等。援引加入
15.本说明书中所提到的所有出版物、专利和专利申请都以引用方式并入本文，并入程度如同指示每个单独出版物、专利或专利申请明确且单独地通过引用并入一般。
附图说明
16.本公开的新颖特征具体地在所附权利要求书中阐述。将通过参考阐述了利用本公开的原理的说明性实施方式的以下具体实施方式和附图获得对本公开的特征和优点的更好理解，在所述附图中：
17.图1a是根据本公开的实施方式的肿瘤组织处理设备的示意图。
18.图1b是图1a的肿瘤组织处理设备的容纳室的俯视图。
19.图2是根据本公开的实施方式的用于肿瘤组织处理设备的示例性容纳室的侧视图。
20.图3是根据本公开的实施方式的肿瘤组织处理和回输方法的流程图。
21.图4a示出了根据本公开的实施方式的组织处理系统的透视图。
22.图4b示出了图4a的组织处理系统的分解图。
23.图4c、图4d和图4e分别示出了图4a的组织处理系统的控制台壳体的透视图、(左)侧视图和(右)侧视图。
24.图4f和图4g示出了图4a的组织处理系统的多用途盖子的透视图。
25.图4h示出了图4a的组织处理系统的盖子锁的透视图。
26.图4i、图4j和图4k分别示出了处于冷冻/冷却循环位置、过渡位置和加温循环位置的图4a的组织处理系统的透视图。
27.图4l示出了根据本公开的实施方式的使用图4a的组织处理系统的示例性方法的流程图。
28.图5a示出了根据本公开的进一步实施方式的组织处理系统的透视图。
29.图5b示出了图5a的组织处理系统的前视图。
30.图5c示出了图5a的组织处理系统的转化室的俯视图。
31.图5d、图5e和图5f分别示出了处于冷冻/冷却循环位置、过渡位置和加温循环位置的图5a的组织处理系统的转化室的侧剖视图。
32.图5g示出了图5a的组织处理系统的未覆盖的转化室的底部透视图。
33.图5h和图5i分别示出了用于图5a的组织处理系统的转化室的组织托盘的透视图和侧视图。
34.图5j示出了图5a的组织处理系统的转化室的盖的透视图。
35.图5k示出了根据本公开的实施方式的使用图5a的组织处理系统的示例性方法的流程图。
36.图6a和图6b分别示出了根据本公开的进一步实施方式的组织处理系统的透视图和侧视图。
37.图6c和图6d分别示出了处于“冷气开启”位置和“冷气关闭”位置的图6a和图6b的组织处理系统的侧剖视图。
38.图6e和图6f分别示出了根据本公开的实施方式的用于保持待由图6a和图6b的组织处理系统处理的组织的网组件的透视图和侧视图。
39.图6g示出了根据本公开的实施方式的适用于图6e和图6f的网组件的环形组织/骨填塞器的透视图。
40.图6h示出了未被覆盖的图6e和图6f的网组件的透视图。
41.图6i示出了与图6a和图6b的网组件一起使用的图6g的环形组织/骨填塞器的透视图。
42.图6j示出了根据本公开的实施方式的使用图6a和图6b的组织处理系统的示例性方法的流程图。
具体实施方式
43.本公开提供了用于处理从受试者提取的组织和/或细胞以随后治疗性输注回受试者体内，通常作为治疗癌症的肿瘤抗原疫苗的方法、系统和设备。具体而言，提供了这样的设备，所述设备被配置为杀死肿瘤细胞，同时保留肿瘤抗原，以允许将被杀死的肿瘤细胞再植入(在本文中也称为“回输”或“重新导入”)到患者中来刺激对肿瘤的免疫应答。
44.合适的肿瘤组织处理设备应满足许多设备要求。设备应该可预测地准备组织以供用于组织处理方法的杀死肿瘤细胞的步骤，所述步骤通常将包括冷冻处理，所述冷冻处理可选地涉及一个或多个冷冻/解冻循环。设备应该以可预测的方式促进肿瘤组织的冷冻处理，以允许完全冷冻组织，之后进行细胞裂解，从而导致对细胞活力的破坏。设备应能够输送所得组织以用于再植入或回输。设备可具有植入套囊以用于容纳肿瘤组织并易于再植入或回输。
45.肿瘤组织处理设备的许多关键元件在图1a中示出，该图示出了示例性肿瘤组织处理设备100。一个关键部件是容纳室110，该容纳室可以与用于组织粉碎、组织存储和/或其他处理的可更换匣盒对接。所收获的肿瘤组织可以放置在匣盒中，在该匣盒中可以执行肿瘤组织处理的各个阶段。如此肿瘤组织可以在整个处理中保持在该匣盒内，从而确保完全处理而不会污染未处理的组织。通常，组织在处理完成之前不会离开匣盒，尽管在一些情况下，组织可以用独立的设备粉碎并放置在匣盒中进行处理，诸如用冷却和加温循环进行处理。可提供两种类型的匣盒—一种用于骨组织和硬组织，一种用于软组织。
46.在一些实施方式中，组织在与下游(冷却和加温)处理相同的匣盒中被粉碎。骨/硬组织匣盒可具有机械刀片130，该机械刀片使组织自旋并破碎成更小的块，所述块可以可预测地通过液氮或其它低温/冷却流体进行处理，如图1b所示。所述块的大小可以通过实验室研究来确定，所述实验室研究观察低温处理穿透(典型地用如图1a所示由漏斗140引入的液氮)时间过程的深度以确保完全处理。刀片130可以与设备100的上部中的钻头150相互作用，该钻头使刀片130自旋达所需时间量。
47.软组织匣盒可具有一系列锋利的筛子，该一系列锋利的筛子可以再次基于温度穿透研究，但也针对处置要求—更容易处置的小块，将组织切割成所需大小。这些锋利的筛子可以由机械杠杆150启动，该机械杠杆由临床医生按下或者被自动化到设备的功能中。
48.肿瘤组织处理设备可以具有第一部分以允许初始设备功能工作—允许将匣盒放置到设备中，然后在匣盒的帮助下执行组织粉碎功能(例如，如图2所示的初始容纳室120a)。肿瘤组织处理设备可包括杠杆或柱塞150(例如，以顶板/前板的形式)，该杠杆或柱塞可被展开以将匣盒移动到设备100的第二部分中，该第二部分将匣盒浸入液氮(或某种其他冷却剂)中，该匣盒然后被完全浸没达所需时间(例如，如图2所示的最终容纳室120b)。如图1a所示，在设备100上可有定时器160，当处理完成时，所述定时器产生视觉和/或听觉信号。如图1a所示，设备100还可具有温度读出器170(由传感器180测量，该传感器可测量温度
以及其他条件，诸如ph、氧化、水含量等)，以及读出冷冻/加热循环次数的读出器。然后可以将冷却剂从设备的组织容纳室中排出(如图1b所示的用于排出的抽吸/重力端口190)，以最小化灼伤临床医生的可能性，然后可将匣盒从设备中输送出以允许组织再植入或回输。可选地，该装置可促进具有特定特性的一个或多个冷冻/解冻循环。可选地，然后可以将肿瘤组织输送到可植入袋中以便于再植入。再植入袋可以由可再吸收材料或不可吸收材料制成以允许容易移植。这种材料可经优化以提高或加强对再植入的组织的免疫应答。袋可以是多孔的以允许容易的生物利用度，所述容易的生物利用度对于刺激免疫应答通常是至关重要的。在容器室的顶部已经被移除或打开后，袋或套筒可以适配在该室的顶部上。该设备可进一步包括匣盒温度监测器以确认达到适当的温度循环来杀死肿瘤细胞，但是也允许临床医生知道温度何时已经回到室温以允许安全处置和再植入。
49.图3示出了肿瘤组织处理和回输方法300的流程图。例如，在步骤310中，可以首先收获肿瘤组织。肿瘤组织可为骨组织、软组织或两者。然后，例如在步骤320中，可以将所收获的肿瘤组织放置在容纳室中，通常在匣盒内。然后，例如在步骤330中，可粉碎肿瘤组织。然后，例如在步骤340中，可用诸如液氮的低温试剂处理肿瘤组织，以杀死或以其他方式灭活细胞而不破坏它们的肿瘤抗原。可将肿瘤组织被冷却到-50℃或以下的温度，以杀死、破坏或以其他方式灭活经粉碎的组织中的癌细胞。在步骤350中，可以监测经处理的组织的温度和/或浸没水平，并且一旦达到阈值温度(诸如-50℃或以下)持续至少给定的时间段，诸如一分钟，就可以解冻(即，加热或加温)经处理的组织。一旦再次达到阈值温度(诸如-50℃或以下)持续至少给定的时间段，诸如一分钟，就可以再次冷却经处理的组织。在一个或多个冷冻/加热循环或重复步骤340和350之后，在步骤360中，可以收集经处理的组织。在一些实施方式中，重复冷却和加热可能不是必需的。在步骤370中，可将经处理的组织从匣盒和组织处理系统中取出。然后，例如在步骤380中，可以再植入经处理的组织。经处理的组织通常可以在组织容纳套管或袋内再植入，但也可以分离地再植入。一种用途是用于融合手术中的骨移植。
50.尽管上述步骤描述了根据许多实施方式的收获、处理和重新导入组织的特定方法，但是本领域普通技术人员将基于本文描述的教导认识到许多变化。这些步骤可以按不同的次序完成。可以增加或省略步骤。所述步骤中一些步骤可包括子步骤。所述步骤中的许多步骤可以尽可能多地重复，只要对处理有益即可。
51.参考图4a至图4m，描述了组织处理系统400和系统400的示例性使用方法4000。组织处理系统400可包括转化室控制台410、盖子420，以及用于保持经粉碎的组织的用于试管432的圆盘式传送装置430，如图4b所示。替代于或结合使用带有试管432的圆盘式传送装置430来保持经粉碎的组织，可以使用如本文所述的网组件，例如下面并结合图6a至图6j进一步描述的网组件。室控制台410可包括电源按钮412和用户界面414，该用户界面可以包括图形显示器，如图4a所示。系统400可进一步包括盖子盖422，该盖子盖可操作地耦接至盖子420。室控制台410可包括控制台壳体416，并限定转化室440和(冷却/加温)循环开关450。如图4c至图4e所示，控制台壳体416可限定空隙460。该空隙460可容纳在一侧上的低温或冷却气体输送系统，和在相对侧上的暖空气输送系统，以及系统400的电子控制部件。系统400可进一步包括低温或冷却气体入口470和解冻和/或暖空气入口480。
52.盖子420是多用途盖子并且具有多种用途，包括关闭转化室440，在低温/冷却循环
与加温/解冻循环之间切换系统400，允许低温/冷却气体或暖空气进入转化室，和/或提供通风。如图4f和图4g所示，盖子420可包括通风口424、可与低温气体入口470对齐的低温或冷却气体入口426、以及可与暖气体入口480对齐的暖气体入口428。如图4h所示，盖子锁422可包括栓槽轴423和开口425，所述开口可以与处于(通风口)打开位置的盖子420的通风口424对齐。盖子420可以相对于(相对静止的)盖子锁422旋转，以打开和关闭通风口424。栓槽轴423可以定向窗口或开口425，以便当其被致动时允许424的盖子的可预测打开和关闭。盖子锁422可以例如通过位于转化室440底部的磁体(诸如稀土元素磁体)保持在适当位置。
53.如图4i至图4k所示，盖子420可经旋转以打开和关闭通风口424、425，以及通过与循环开关450对接来使系统400在冷却功能与加温/解冻功能之间切换。盖子420可以定位在低温或冷却循环位置450c，其中通风口424被关闭，如图4ai所示。在一些实施方式中，当通风口424被关闭时，通风口424没有被完全密封，使得存在低压力积聚至没有压力积聚。在低温或冷却循环位置450c，盖子420的低温气体入口426可以与低温气体入口470对齐，以允许低温或冷却气体进入转化室440，如图4f所示，同时使暖气体入口428与暖气体入口480不对齐以防止暖气体进入转化室440。
54.盖子420可以定位在过渡位置，其中盖子的通风口424部分打开，如图4j所示。在该过渡位置中，盖子420的低温气体入口426可以与低温气体入口470不对齐以防止低温或冷却气体进入转化室440，并且暖气体入口428可以与暖气体入口480不对齐以防止暖气体进入转化室440。
55.盖子420可以定位在加温或解冻循环位置450w，其中通风口424被(完全)打开。可以将高流量的暖空气推入到转化室440中，并且打开的通风口424可防止压力积聚并且还允许热交换。在该加温或解冻循环位置，盖子420的低温气体入口426可能与低温气体入口470不对齐以防止低温或冷却气体进入转化室440，同时暖气体入口428与暖气体入口480对齐以允许暖气体进入转化室440，如图4g所示。暖空气可包括被推入转化室440中的暖空气。例如，暖空气可能是无菌的并且来源于罐。例如，暖空气可包括被加温的氮气。在一些实施方式中，诸如感应线圈的加温元件可设置在暖气体入口428和/或暖气体入口480附近，以独立地加温进入的空气。在一些实施方式中，可以提供紫外光(uv light)发射器来对进入的暖空气进行消毒。
56.参考图4l，现在描述用于诸如使用系统400处理组织的方法4000。在步骤410中，可以将试管432中的一个或多个试管装载经粉碎的组织。经粉碎的组织可以从任何组织粉碎设备中提供，并以经粉碎的形式装载到一个或多个试管432中。如上所述，替代于或结合使用带有试管432的圆盘式传送装置430来保持经粉碎的组织，可以使用如本文所述的网组件，例如下面并结合图6a至图6j进一步描述的网组件。在步骤4020中，可将经装载的试管432放置在圆盘式传送装置430中。在步骤4030中，可将圆盘式传送装置430放置到转化室440中。在步骤4040中，可将多用途盖420放置在转化室440中的圆盘式传送装置430上方。在步骤4050中，可通过插入盖子锁422来紧固圆盘式传送装置430和盖子420。在步骤4060中，可将盖子420定位在低温或冷却循环位置450c。在步骤4070中，可以在低温或冷却循环中低温处理或冷却经粉碎的组织，以便杀死、破坏或以其他方式灭活经粉碎的组织中的癌细胞。如上面关于方法300进一步描述的，可将组织冷却至阈值温度。在步骤4080中，系统400可提供低温或冷却循环完成的警报。在步骤4090中，可将盖子420定位在解冻或加温循环450w
中。在步骤4100中，可以在解冻或加温循环中解冻和/或加温组织。如上面关于方法300进一步描述的，可将组织加温至阈值温度。虽然描述了暖空气的使用，但是也可以用其他方式来加温组织，诸如用加热元件，例如感应或电阻加热元件。系统400可提供解冻或加温循环完成的警报，并且在步骤4110中，可以按照系统400的指示重复冷却/加温(即，冷冻/解冻)。在一些实施方式中，重复冷却和加热可能不是必需的。在步骤4120中，可以从试管432和组织处理系统400中取出经处理的组织。然后，例如在步骤4130中，可以再植入经处理的组织。经处理的组织通常可以在组织容纳套管或袋内再植入，但也可以分离地再植入。一种用途是用于融合手术中的骨移植。
57.尽管上述步骤描述了根据许多实施方式的处理组织的特定方法，但是本领域普通技术人员将基于本文描述的教导认识到许多变化。这些步骤可以按不同的次序完成。可以增加或省略步骤。所述步骤中一些步骤可包括子步骤。所述步骤中的许多步骤可以尽可能多地重复，只要有益即可。
58.参考图5a至图5k，描述了组织处理系统500和系统500的示例性使用方法5000。如图5a和图5b所示，系统500可包括带有盖子通风口512的盖子510、转化室520和控制单元530，该控制单元可包括用户界面和/或显示器。如图5c至图5f所示，转化室520可包括摆臂521，该摆臂耦接至悬挂杆522以用于在加温盘524与冷却盘525之间承载和移动用于保持经粉碎的组织的组织托盘523(在图5h和图5i中更详细地示出)，如图5d中的箭头526所示。图5d还示出了用于加温盘524和冷却盘525的液位527，组织托盘523不放置在该液位527下方以防止所保持的组织被加温和冷却液污染。冷却液可为例如液氮。图5d示出了放置在冷却盘525中的组织托盘523，图5e示出了从冷却盘525移出并移入中间位置的过程中的组织托盘523，并且图5f示出了放置在加温盘524中的组织托盘523。如图5g所示，转化室520的主体可包括一对隔热钢盘523，以用于例如图5j所示的加热盘524和冷却盘525。转化室520还可包括步进电机和电子控件534以及耦接至步进电机和摆臂521的致动轴536，以根据冷却/加温循环的当前阶段控制和移动摆臂521。如图5h和图5i所示，组织托盘523的底表面可以是波纹状的，以提供大表面积并优化冷却和加温期间的能量传递。
59.参考图5k，现在描述诸如使用系统500处理组织的方法5000。在步骤5010中，可将经粉碎的组织放置在组织托盘523中。经粉碎的组织可以从任何组织粉碎设备提供，并以经粉碎的形式装载到组织托盘523中。经粉碎的组织可放置在托盘523中，使得波纹状底表面中的所有空腔被填充并且与该表面齐平或稍稍嵌进(sub-flush)该表面。在步骤5020中，可将悬挂杆522耦接至组织托盘523。在步骤5030中，可打开系统盖子510。在步骤5040中，可将组织托盘523通过悬挂在摆臂520上而放置在转化室520中，通常处于中间位置。在步骤5050中，可以由系统500起动冷却/加温循环。如上面关于方法300进一步描述的，可以将组织冷却和加温至阈值温度。组织的冷却/冷冻可杀死、破坏或以其他方式灭活经粉碎的组织中的癌细胞。在冷却/加温循环中，臂521可以以预定的间隔从冷冻/冷却盘摆动到解冻/加温盘，以确保组织冷冻和解冻。该循环可以发生一次或多次。虽然描述了在托盘中使用暖液体，但是也可以用其他方式来加温组织，诸如用加热元件，例如感应或电阻加热元件。在步骤5070中，可以由系统500完成冷却/加温循环。在步骤5080中，可以从组织托盘523和组织处理系统500中取出经处理的组织。然后，例如在步骤5090中，可以再植入经处理的组织。经处理的组织通常可以在组织容纳套管或袋内再植入，但也可以分离地再植入。一种用途是用于融
合手术中的骨移植。
60.尽管上述步骤描述了根据许多实施方式的处理组织的特定方法，但是本领域普通技术人员将基于本文描述的教导认识到许多变化。这些步骤可以按不同的次序完成。可以增加或省略步骤。所述步骤中一些步骤可包括子步骤。所述步骤中的许多步骤可以尽可能多地重复，只要有益即可。
61.参考图6a至图6j，描述了组织处理系统600和系统600的示例性使用方法6000。如图6a和图6b所示，系统600可包括系统外壳610、转化室620、致动按钮或控件630、显示器或屏幕640、用于冷气体的柔性管道650、暖空气入口连接器660、通风口670和冷塔盖子680。如图6c和图6d所示，冷塔盖子680可被打开，并且冷气罐682可被放置在系统600的冷塔内。冷气罐682可保持冷却气体，诸如氮气。系统600可包括柱塞684，该柱塞可耦接至冷气罐682并且可用凸轮686操作。在“打开”位置，凸轮686可被致动以将柱塞684和冷气罐682推进到可调节的硬止动件688，从而打开冷气罐的顶部阀并允许冷气体通过柔性管道650进入转化室620，如图6c所示。转化室620可以可移除地收容用于容纳经粉碎的组织的网柱或网组件621。冷空气扩散器622可设置在转化室620内，以扩散来自冷气罐682的冷空气。在“关闭”位置，凸轮686可被致动以缩回柱塞684和冷气罐682，从而允许冷气罐的顶部阀关闭并防止冷气体通过柔性管道650进入转化室620，如图6d所示。在该“关闭”位置，可允许暖空气通过暖空气入口(球)阀662和暖空气入口连接器660进入转化室620。暖空气可包括被推入转化室620中的热空气。例如，暖空气可能是无菌的并且来源于罐。例如，暖空气可包括被加温的氮气。在一些实施方式中，可以在暖空气入口阀662和/或暖空气入口连接器660附近提供诸如感应线圈的加温元件，以独立地加温进入的空气。在一些实施方式中，可以提供紫外光(uv light)发射器来对进入的暖空气进行消毒。
62.图6e至图6i示出了网柱或网组件621和/或将与网组件621一起使用的环状(骨)组织填塞器626。网组件621可包括外部网层623、内部网层624和基部627。环状组织填塞器626可用于将经粉碎的组织定位和填塞在外网层623与内网层624之间的空间中。可移除的漏斗625和盖子629可放置在网组件621上以导引组织填塞。在经粉碎的组织已经被填塞到所述空间中之后，可将网组件621放置在转化室620中。漏斗629和盖子625可以在将网组件621放置到转化室620中之前移除。
63.参考图6j，现在描述诸如使用系统600处理组织的方法6000。在步骤6010中，可将可移除的漏斗629和盖子625放置在网组件621的内网和外网上。在步骤6020中，可将经粉碎的组织放置在可移除的漏斗629和盖子625上。经粉碎的组织可以从任何组织粉碎设备提供，并以经粉碎的形式放置在可移除的漏斗和盖子629上。在步骤6030中，可使用环状填塞器626将经粉碎的(骨)组织压入内网与外网之间的空隙或空间中。在步骤6040中，可将环状填塞器626和漏斗629以及盖子625从网组件621移除。在步骤6050中，可将网组件621插入转化室620内部。在步骤6060中，可闭合转化室620的盖子。在步骤6070中，可将具有网组件621和组织的转化室620放置在控制台或系统外壳610内。在步骤6080中，可将冷气罐682放置在控制台或系统外壳610内，并且可关闭塔盖子680。在步骤6090中，可将柔性管道650插入转化室盖子中。在步骤6100中，可将暖空气导管连接至暖空气入口连接器660。在步骤6110中，可以由系统600起动冷却/加温循环。如上面关于方法300进一步描述的，可以将组织冷却和加温至阈值温度。组织的冷却/冷冻可杀死、破坏或以其他方式灭活经粉碎的组织中的癌细
胞。该循环可以发生一次或多次。虽然描述了暖空气的使用，但是也可以用其他方式来加温组织，诸如用加热元件，例如感应或电阻加热元件。在步骤6120中，可由系统600完成冷却/加温循环。在步骤6130中，可从网组件621和组织处理系统600取出经处理的组织。然后，例如在步骤6140中，可以再植入经处理的组织。经处理的组织通常可以在组织容纳套管或袋内再植入，但也可以分离地再植入。一种用途是用于融合手术中的骨移植。
64.尽管上述步骤描述了根据许多实施方式的处理组织的特定方法本领域普通技术人员将基于本文描述的教导认识到许多变化。这些步骤可以按不同的次序完成。可以增加或省略步骤。所述步骤中一些步骤可包括子步骤。所述步骤中的许多步骤可以尽可能多地重复，只要有益即可。
65.尽管已经在本文中示出和描述了本发明的优选实施方式，但是对于本领域技术人员而言将显而易见的是，此类实施方式仅为通过举例方式提供。在不脱离本发明的情况下，本领域技术人员现在将想到许多变化、改变和替换。应当理解的是，本文所述的本发明的实施方式的各种替代方案可用于实践本发明。所附权利要求旨在限定本发明的范围，并且由此涵盖这些权利要求及其等同物范围内的方法和结构。