一种预防宫腔粘连的中药处方

1.本发明涉及医疗技术领域，具体为一种预防宫腔粘连的中药处方。


背景技术：

2.宫腔粘连(intrauterine adhesion，iua)是目前宫腔术后最常见的并发症，iua的发生是多因素作用的结果，iua患者多表现为闭经、月经过少、盆腔疼痛，严重时出现不孕和习惯性流产，严重影响到了女性患者日常生活及生育要求，因此iua的防治是目前妇科临床治疗棘手问题，同时也是探讨的热点问题。通过查阅文献发现，iua发生的本质特征是子宫内膜基底层和功能层之间边界的破坏，纤维组织瘢痕的大量形成，hippo信号通路目前被认为在器官、组织的纤维化中起到重要作用，通过调控下游taz/yap靶蛋白促进及抑制纤维化。本发明拟在前人文献的基础上，建立宫腔粘连大鼠模型，采用镜下观察、he+masson染色、免疫组化法检测、rt
‑
pcr等检测，通过观察hippo信号通路下游yap、taz、gtgf靶蛋白等的表达量对宫腔粘连的影响，进一步阐明宫腔粘连的分子机制，以及进一步探讨中医药“补肾滋阴，活血通络”预防宫腔粘连是否hippo信号通路作用，明确中医药“补肾滋阴，活血通络”治疗该病的分子靶点，为中医药防治宫腔粘连提供新的思路。


技术实现要素：

3.本发明解决的技术问题在于克服现有技术的宫腔术后复发的缺陷，提供一种预防宫腔粘连的中药处方。所述一种预防宫腔粘连的中药处方具有预防术后宫腔粘连等特点。
4.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种预防宫腔粘连的中药处方，包括以下步骤：
5.(1)：实验动物的选定；
6.(2)：动物造模；
7.(3)：对实验动物进行分组操作，受试对象分为4组，分别为a组(空白对照组)：正常大鼠；造模成功后的大鼠按随机数字表分为b组(模型对照组)，c组(模型中药组)，d组(模型雌激素组)；
8.(4)：药物的选定、煎制、混悬液的制备和药物的喂养操作；
9.(5)：对动物进行处理，术后按5天、10天、15天、20天四个时相点于模型组和空白组各取5只鼠处死，先肉眼观察宫腔粘连情况，再取整个宫腔组织作为切片标本，将标本横切+纵切做成切片，镜下观察宫腔狭窄情况、腺体分布情况、胶原纤维分泌及排列情况，记录相关数据；
10.(6)：检验指标；
11.(7)：对数据进行统计分析；
12.(8)：得出中药处方的结论。
13.优选的，步骤(1)中选取无特定病原体(specefic pathogen free,spf)级未交配、雌性sprague
‑
dawley(sd)大鼠，鼠龄8
‑
10周，体重220
‑
280g，将大鼠饲养于昼夜各12小时，
温度20
‑
26℃，湿度50％
‑
60％环境中，正常采食、饮水，适应性喂养1周后，每天早晨8：00和下午3：00用棉签对大鼠进行阴道涂片并用载玻片在显微镜下判断动情周期，连续涂片两个动情周期(8天)，选取其中有规律动情周期的大鼠80只。
14.优选的，步骤(2)和步骤(3)中动物造模采用10％水合氯醛(3ml/kg)对sd大鼠进行腹腔麻醉，常规下腹部备皮后，在无菌条件下消毒大鼠腹壁，模型中药组和模型对照组于下腹部正中，尿道上端1.5cm处纵向切开约2cm切口，逐层进入腹腔，寻找“y”形子宫并将其暴露，无齿镊稍夹住右侧子宫远端以防药液渗流伤及卵巢组织，用“4”号针头于子宫汇合处向右侧卵巢方向缓慢推注0.04ml苯酚胶浆并停留3min后将子宫内残留的胶浆液回吸干净，操作完毕后消毒创口，将子宫复位，逐层缝合腹壁，待大鼠苏醒后放回笼中饲养观察，空白对照组同上法，于子宫汇合处向右侧卵巢方向缓慢推注0.04ml生理盐水并停留3min后将子宫内残留的生理盐水回吸干净，操作完毕后消毒创口，将子宫复位，逐层缝合腹壁，待大鼠苏醒后放回笼中饲养观察。
15.优选的，步骤(4)中重要成分为熟地、肉苁蓉、菟丝子、覆盆子、桑葚、大血藤、西洋参、佛手、山药、酒黄精、月季花、莲子、三七花。
16.优选的，步骤(4)中制备养膜方的混悬液，参照《中药药理实验方法学》，大鼠剂量(mg/kg)＝6.25*人的剂量(mg/kg)，根据人与大鼠剂量的折算系数配制成含养膜方0.125g/ml的混悬液，以供使用。
17.优选的，步骤(4)中从造模后第一天起，每天早晚各灌药一次，a组(空白对照组)予以0.9％生理盐水灌胃2ml灌胃，b组(模型对照组)予以0.9％生理盐水灌胃2ml，c组(模型中医药组)予以养膜方混悬液2ml灌胃，d组(模型雌激素组)予以雌激素灌胃。
18.优选的，步骤(6)中包括取下宫腔组织后在镜下观察宫腔粘连程度，按照欧洲妇科内镜协会分级、组织学he染色+masson染色、免疫组化法检测血清中tgf
‑
β1、vegf、il
‑
6、、adams、yap、taz和tead的表达、western blot检测的yap、taz、gtgf的表达、rt
‑
pcr检测yap、taz、tead蛋白与mrna的表达变化的表达。
19.优选的，步骤(7)中所有实验数据采用spss 22.0软件进行统计分析，定量数据以均数
±
标准差表示，差异统计性检验采用配对t检验，p＜0.05表明具有差异具有统计学意义。
20.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
21.1、本发明通过造模后宫腔粘连进展的不同时期通过镜下观察、检测家兔血清中各项的水平放映出hippo信号通路在宫腔粘连中的作用机理；
22.2、本发明通过探讨hippo信号通路对宫腔粘连的作用机制，后续可以探讨hippo信号通路、tgf
‑
β1/smad信号通路、wnt信号通路、tlr4/nfkb信号通路等通路对宫腔粘连发生、发展的相互关系，从而从多因素、多方面、多分子靶向之间的相互关系为预防宫腔粘连提供新的治疗方向与思路。
附图说明
23.图1为本发明的技术路线图。
具体实施方式
24.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
25.请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种预防宫腔粘连的中药处方，包括以下步骤,
26.实验动物的选定，选取无特定病原体(specefic pathogen free,spf)级未交配、雌性sprague
‑
dawley(sd)大鼠，鼠龄8
‑
10周，体重220
‑
280g，将大鼠饲养于昼夜各12小时，温度20
‑
26℃，湿度50％
‑
60％环境中，正常采食、饮水，适应性喂养1周后，每天早晨8：00和下午3：00用棉签对大鼠进行阴道涂片并用载玻片在显微镜下判断动情周期，连续涂片两个动情周期(8天)，选取其中有规律动情周期的大鼠80只，动物造模，采用10％水合氯醛(3ml/kg)对sd大鼠进行腹腔麻醉，常规下腹部备皮后，在无菌条件下消毒大鼠腹壁，模型中药组和模型对照组于下腹部正中，尿道上端1.5cm处纵向切开约2cm切口，逐层进入腹腔，寻找“y”形子宫并将其暴露，无齿镊稍夹住右侧子宫远端以防药液渗流伤及卵巢组织，用“4”号针头于子宫汇合处向右侧卵巢方向缓慢推注0.04ml苯酚胶浆并停留3min后将子宫内残留的胶浆液回吸干净，操作完毕后消毒创口，将子宫复位，逐层缝合腹壁，待大鼠苏醒后放回笼中饲养观察，空白对照组同上法，于子宫汇合处向右侧卵巢方向缓慢推注0.04ml生理盐水并停留3min后将子宫内残留的生理盐水回吸干净，操作完毕后消毒创口，将子宫复位，逐层缝合腹壁，待大鼠苏醒后放回笼中饲养观察，对实验动物进行分组操作，受试对象分为4组，分别为a组(空白对照组)：正常大鼠；造模成功后的大鼠按随机数字表分为b组(模型对照组)，c组(模型中药组)，d组(模型雌激素组)，药物的选定、煎制、混悬液的制备和药物的喂养操作，中药成分为熟地、肉苁蓉、菟丝子、覆盆子、桑葚、大血藤、西洋参、佛手、山药、酒黄精、月季花、莲子、三七花，制备养膜方的混悬液，参照《中药药理实验方法学》，大鼠剂量(mg/kg)＝6.25*人的剂量(mg/kg)，根据人与大鼠剂量的折算系数配制成含养膜方0.125g/ml的混悬液，以供使用，喂养操作时从造模后第一天起，每天早晚各灌药一次，a组(空白对照组)予以0.9％生理盐水灌胃2ml灌胃，b组(模型对照组)予以0.9％生理盐水灌胃2ml，c组(模型中医药组)予以养膜方混悬液2ml灌胃，d组(模型雌激素组)予以雌激素灌胃，对动物进行处理，术后按5天、10天、15天、20天四个时相点于模型组和空白组各取5只鼠处死，先肉眼观察宫腔粘连情况，再取整个宫腔组织作为切片标本，将标本横切+纵切做成切片，镜下观察宫腔狭窄情况、腺体分布情况、胶原纤维分泌及排列情况，记录相关数据，检验指标，取下宫腔组织后在镜下观察宫腔粘连程度，按照欧洲妇科内镜协会分级，分级为i度：子宫腔内多处有纤维膜样粘连带，两侧宫角及输卵管开口正常、ii度：子宫前后壁间有致密的纤维粘连。两侧宫角及输卵管开口见、ⅲ度：纤维索状粘连致部分宫腔及一侧宫角闭锁、ⅳ度：纤维索状粘连致部分宫腔及两侧宫角闭锁、
ⅴ
a度：粘连带疤痕化致宫腔极度变形及狭窄、
ⅴ
b度：粘连带疤痕化致宫腔完全消失，组织学he染色+masson染色:取各时段标本he染色后观察组织学形态,免疫组化法检测血清中tgf
‑
β1、vegf、il
‑
6、、adams、yap、taz和tead的表达、western blot检测的yap、taz、gtgf的表达、rt
‑
pcr检测yap、taz、tead蛋白与mrna的表达变化的表达,对数据进行统计分析，所有实验数据采用spss 22.0软件进行统计分析，定量数
据以均数
±
标准差表示，差异统计性检验采用配对t检验，p＜0.05表明具有差异具有统计学意义，得出中药处方的结论。
27.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。