一种含多苞桉桉树精油的双多菌剂在用于制备防治宠物泪痕的制剂中的应用的制作方法

本发明属于宠物养殖领域，具体涉及一种含多苞桉桉树精油的双多菌剂在用于制备防治宠物泪痕的制剂中的应用。

背景技术：

宠物泪痕又名泪溢，是一种宠物眼部过度流泪的现象。泪痕一般位于宠物眼睛下方，是一条红褐色的痕迹，在浅色毛发的宠物身上尤为明显。泪痕的产生因素包括倒睫、泪腺粗大、眼部疾病、眼部感染、营养不良、鼻泪管堵塞等外因造成，也可能是肝脏功能不全、免疫力弱、胆汁酸分泌不足、卟啉代谢异常等内部原因造成的。泪痕不仅会影响宠物的颜值，还会影响宠物的健康，因此宠物出现的泪痕问题应当被重视。

目前，针对于宠物泪痕问题多是采用补充营养、外部擦拭、修剪毛发、使用银胶或泪痕粉等外部药物处理外，并没有一种十分有效并彻底解决宠物泪痕的方法，且泪痕问题容易复发。

技术实现要素：

为了解决现有技术的缺点和不足，本发明提供了一种含多苞桉桉树精油的双多菌剂在用于制备防治宠物泪痕的制剂中的应用。所述的双多菌剂经过科学的配比，能够有效的防治宠物出现的由细菌或/和真菌感染、免疫力弱引起的宠物泪痕问题。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明提供了一种含多苞桉桉树精油的双多菌剂在用于制备防治宠物泪痕的制剂中的应用。

进一步的，所述双多菌剂包括多粘类芽孢杆菌菌粉和多苞桉桉树精油。

进一步的，所述多粘类芽孢杆菌菌粉和多苞桉桉树精油的质量比为3-5:4-8。

进一步的，所述双多菌剂的菌含量不少于5×10⁸cfu/g。

进一步的，所述多粘类芽孢杆菌菌粉是由保藏编号为cgmccno.20819的多粘类芽孢杆菌lcp-01经发酵干燥制成的。

进一步的，所述多粘类芽孢杆菌lcp-01菌粉的菌含量不小于5×10⁹cfu/g。

进一步的，所述宠物泪痕是由细菌或/和真菌感染、免疫力低下引起的宠物泪痕。

进一步的，在治疗宠物泪痕时，所述双多菌剂的使用方法为：将所述双多菌剂直接给宠物口服，或与宠物饲料或饮用水混合后使用；使用剂量为：10kg及以下宠物，每日4-8g；10kg以上宠物，每增加10kg体重，增加2-3g所述双多菌剂，连续使用5-10天。

进一步的，在预防宠物泪痕时，所述双多菌剂的使用方法为：将所述双多菌剂直接给宠物口服，或与宠物饲料或饮用水混合后使用；使用剂量为：每日1-3g；连续使用5-20天。

进一步的，所述双多菌剂的使用方法为：将所述双多菌剂直接外涂于宠物被细菌或/和真菌感染的部位上，连续使用5-14天。

进一步的，所述宠物包括宠物犬和宠物猫。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：

土壤中筛选出一株多粘类芽孢杆菌lcp-01，其具有很好的抗菌作用，并将其通过发酵干燥制备成菌粉，与多苞桉桉树精油经过科学的配比制备出一种双多菌剂，用来防治宠物泪痕。所述双多菌剂成分天然，无毒副作用，对环境无害，使用简单，能够有效抑制细菌和/或真菌的繁殖和生长，进而起到抑菌的作用，同时还可以起到驱虫除螨作用，改善宠物因细菌和/或真菌感染、寄生虫而导致的眼部或耳部疾病，继而降低泪痕、耳螨的出现几率，达到预防和治疗宠物泪痕的目的，并且该双多菌剂还可以提高宠物的自身免疫力，减轻动物溢泪现象，恢复宠物的颜值。除此之外，所述双多菌剂易于吸收，不会在内服或外涂时，给宠物带来不适的感觉，影响其正常生活，因此具有广阔的应用前景。

附图说明

图1为多粘类芽孢杆菌lcp-01的菌落图片。

图2为含多苞桉桉树精油的双多菌剂对美短加白宠物猫泪痕的影响。

图3为含多苞桉桉树精油的双多菌剂对斗牛犬泪痕的影响。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步详细的说明。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1：

一、多粘类芽孢杆菌lcp-01发酵液的制备

1、多粘类芽孢杆菌lcp-01的筛选和鉴定

以土壤为样品，将土壤和无菌水混匀混匀制成土壤的10-1稀释液，然后分别制取10^-2、10^-3、10^-4、10^-5稀释液。分别取10^-3、10^-4、10^-5稀释液涂布于营养琼脂培养基（牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，nacl5.0g，琼脂20.0g，蒸馏水1.0l，ph7.0）上，37℃恒温培养48h，选取明显的菌落进行多次纯化后得到单菌落，并将其命名为lcp-01。

如图1所示，所述菌株lcp-01在营养琼脂培养基的菌落呈圆形、类圆形或椭圆形，米黄色，直径3-5mm，扁平，表面光滑无光泽，不透明，边缘呈不规则的波状且具半透明镶边。

提取所述菌株lcp-01的基因组dna，并以此为模板，使用16srrna通用引物进行pcr扩增，获得16srrna扩增序列后测序，然后将该序列进行blast比对，结果显示菌株lcp-01与genbank基因库中的多粘类芽孢杆菌paenibacilluspolymyxa同源性最高，因此判定菌株lcp-01为多粘类芽孢杆菌。

将筛选到的多粘类芽孢杆菌lcp-01进行菌种保藏，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（cgmcc）；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2020年09月25日；多粘类芽孢杆菌paenibacilluspolymyxa的保藏编号为cgmccno.20819。

2、多粘类芽孢杆菌lcp-01菌粉的制备

将保存的多粘类芽孢杆菌lcp-01在营养液体培养基（牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，nacl5.0g，蒸馏水1.0l，ph7.0）中，37℃培养36h后，10000rmp离心10min，弃上清，得到的沉淀菌体使用灭菌的低盐营养液体培养基（牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，nacl1.0g，蒸馏水1.0l，ph自然）重悬，重悬的发酵液采用真空干燥法干燥成粉状，得到多粘类芽孢杆菌lcp-01菌粉，确保菌粉中的菌含量不少于5×10⁹cfu/g。

二、多苞桉桉树精油的制备

将澳大利亚多苞桉桉树叶放入水洗塔清洗后，放到烘干机中烘干，再于粉碎机中粉碎后分别进入水蒸气蒸馏釜、冷凝器和油水分层器中分离油相和水相，其中水相进入乙醚萃取器分离出废水，含有乙醚的液体进入乙醚回收塔中回收乙醚，将回收的乙醚和油相液体添加到固体床吸附干燥器进一步去除油相中的水分，最后将油相液体加入到减压精馏塔中精馏以此去除杂质油后便得到多苞桉桉树精油。将制备出的多苞桉桉树精油保存在密封、不透光的容器中并避光放置。对多苞桉桉树精油进行色谱分析，在多苞桉桉树精油中包含1,8-桉树脑（83.8%）、β-甲基异丙基苯（3.43%）、柠檬烯（2.5%）、α-蒎烯（1.8%）、别香橙烯（1.08%）、松油烯-4-醇（0.88%）、α-松油醇（0.58%）、蓝桉烯（0.54%）、p-甲基异丙基苯（0.51%）等。

三、含多苞桉桉树精油的双多菌剂的制备

将上述制备的多粘类芽孢杆菌lcp-01菌粉与多苞桉桉树精油以3:5的质量比利用混匀器混合均匀即可，得到的双多菌剂的菌含量不少于5×10⁸cfu/g。

双多菌剂在使用时，可以口服，混于宠物口粮或饮用水中，还可以外涂。为改善和治愈泪痕，10kg及以下宠物，每日用量4-8g，10kg以上宠物，每增加10kg则增加2-3g的用量，连续使用5-10天。为达到巩固效果或预防泪痕的作用，可以每日1-3g的用量给宠物内服，连续使用5-20天。

实施例2

四川成都市温江区某宠物医院收治一只2周岁的美短加白宠物猫，体重2.7公斤，名叫小贝。小贝一直有严重的泪痕、结膜炎和耳螨（图2a），且使用多种眼药水后，泪痕和结膜炎的问题仍没有好转。经宠物医院的兽医诊断，小贝的结膜炎属于细菌感染性结膜炎，而泪痕则是由结膜炎引起的。

确诊后，将本发明的双多菌剂以每天4g的用量混在小贝的猫粮中，让其服用，同时每天在小贝的耳朵外涂适当的双多菌剂，先使用7天，在此期间，注意保持小贝耳朵和眼睛的清洁。7天后复诊（图2b），小贝的耳螨基本消失，结膜红肿状况减轻，轻微泪痕。继续依照之前的使用方法使用10天后（图2c），小贝的耳螨完全消失，结膜基本无红肿迹象，泪痕基本消失。由此说明，双多菌剂不仅能够起到抑菌和驱虫作用，改善宠物的结膜炎和耳螨，还能够改善因眼部感染而引起的泪痕问题，恢复宠物的颜值。

实施例3

重庆某宠物诊所收治一只活泼的2岁半斗牛犬，体重10.6斤，名叫xt5。据xt5主人的描述，xt5一直爱流泪，因此眼睛下面留下了两道深深的泪痕（图3a），并且也使用过常用的擦洗产品，虽然有短暂效果，但一停用就又出现泪痕问题。宠物诊所的兽医经诊断发现，xt5是免疫力稍弱以及眼部轻微真菌感染造成的泪痕，虽然问题不大，但仍然需要引起重视。

确诊后，将本发明的双多菌剂以每天4g的用量混在xt5的狗粮中，让其服用，同时每天在小贝的眼睛外周外涂适当的双多菌剂，由于本发明的双多菌剂中的多苞桉桉树精油不油腻且吸收快，因此不会给斗牛犬带来任何的眼部不适感，也不影响其正常视物，使用7天后，xt5的泪痕得到明显的改善，继续使用5天后，xt5的泪痕基本消失（图3b）。暂时使用双多菌剂一周后，泪痕问题也没有再次出现（图3c）。但为了继续巩固效果以及预防泪痕、真菌感染，提高斗牛犬的免疫力，兽医建议选取每月中固定的5天时间继续使用双多菌剂，用量为2g/d。

由此说明，本发明的双多菌剂能够起到抑制真菌的繁殖和生长，提高宠物机体免疫力，改善并预防泪痕问题的出现，并且经双多菌剂治愈好的泪痕问题不易复发。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。