补阳还五汤及其应用的制作方法

本发明涉及中药组合物领域，特别是涉及补阳还五汤及其应用。
背景技术：
：特纳综合征(turnersyndrome,ts)又称先天性卵巢发育不良综合征，是一种以矮身材、性腺发育不良为基本特征的先天性染色体异常疾病。该病在活产女婴中的发病率约为1/2500～1/3000，属于罕见病。骨代谢异常是ts患者主要合并症之一，表现为骨量低和骨组织微架构退化，易导致骨质疏松及骨折。骨代谢异常在正常女性中常发生于绝经期及老年妇女，然而ts患者骨代谢异常的发生时间较正常女性约提前三四十年，发生率高3～4倍，严重危及ts患者的身体健康和生活质量。目前对于ts患者骨代谢异常的相关研究还较少，其发病机制尚不清楚。有研究认为ts患者性腺发育不全，导致雌激素分泌延迟和不足，是ts患者骨密度低的主要原因，但难以解释单纯雌激素治疗不足以恢复骨量；还有研究认为性染色体基因剂量不足与临床表型异常相关，性染色体单倍剂量不足导致了ts患者骨代谢异常，但近期有研究证实ts患者性染色体核型与临床表现无明显相关性。因此，传统对ts骨代谢异常的治疗方案中采用性激素治疗，能一定程度上预防骨代谢异常，但治疗效果并不理想。例如，雌激素替代治疗并不足以恢复骨量；生长激素虽然能在一定程度上降低骨折率，但并不能明显改善骨结构和骨矿化；经过1年性激素序贯替代治疗，ts骨代谢异常患者仅股骨部位的骨密度状况发生好转，其他部分并无变化，尤其椎骨部分无变化等。此外，鼓励患者多参加户外活动、补充钙及维生素d等支持治疗，尚无其他特别有效的治疗策略。技术实现要素：基于此，本发明提供了一种补阳还五汤及其应用；在制备预防和改善特纳综合征骨代谢异常试剂的应用中，能有效预防和改善特纳综合征骨代谢异常。本发明解决上述技术问题的技术方案如下。一种补阳还五汤在制备预防和改善特纳综合征骨代谢异常试剂中的应用。一种补阳还五汤在制备抑制card11表达水平、smad2表达水平或rankl表达水平试剂中的应用。在其中一些实施例中，所述的补阳还五汤的应用中，所述补阳还五汤按质量份数计，包括如下组分：在其中一些实施例中，所述的补阳还五汤的应用中，所述补阳还五汤还包括土茯苓和鸡血藤两者的组合、葛根和黄芩两者的组合、或补骨脂、牛膝和麦芽三者的组合。在其中一些实施例中，所述的补阳还五汤的应用中，所述补阳还五汤按质量份数计，还包括土茯苓10～30份和鸡血藤10～30份。在其中一些实施例中，所述的补阳还五汤的应用中，所述补阳还五汤按质量份数计，包括如下组分：在其中一些实施例中，所述的补阳还五汤的应用中，所述补阳还五汤按质量份数计，还包括葛根20～40份和黄芩10～20份。在其中一些实施例中，所述的补阳还五汤的应用中，所述补阳还五汤按质量份数计，包括如下组分：在其中一些实施例中，所述的补阳还五汤的应用中，所述补阳还五汤按质量份数计，还包括补骨脂10～20份、牛膝10～20份和麦芽10～20份。在其中一些实施例中，所述的补阳还五汤的应用中，所述补阳还五汤按质量份数计，包括如下组分：本发明还提供了一种补阳还五汤，包括黄芪、当归、赤芍、地龙、川穹、红花和桃仁，还包括土茯苓和鸡血藤两者的组合、葛根和黄芩两者的组合、或补骨脂、牛膝和麦芽三者的组合。在其中一些实施例中，在补阳还五汤中，按质量份数计，包括如下组分：一种补阳还五汤，按质量份数计，包括如下组分：一种补阳还五汤，按质量份数计，包括如下组分：本发明的补阳还五汤在制备预防和改善特纳综合征骨代谢异常试剂的新应用中具有如下有益效果：发明经过大量的研究发现，补阳还五汤能在短期内明显改善特纳综合征骨代谢异常患者的中医证候量表评分，改善倦怠乏力、腰酸和肢体困重等症状；调节乳酸及咪唑乳酸的表达水平，参与调控特纳综合征骨代谢。且补阳还五汤能通过调节抑制card11表达水平，抑制smad2和rankl通路，从而预防和改善特纳综合征骨代谢异常。附图说明为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为正常组(n)，补阳还五汤治疗前(a)、治疗后(m)的pls-da得分图；图2为正常组(n)，补阳还五汤治疗前(a)、治疗后(m)的乳酸代谢物的箱图及roc曲线；图3为正常组(n)，补阳还五汤治疗前(a)、治疗后(m)的咪唑乳酸代谢物的箱图及roc曲线；图4为正常组(n)，补阳还五汤治疗前(a)，治疗后(m)的rankl与smad2表达水平；图5为ts骨代谢异常患者与健康对照组的card11拷贝量；图6为体外过表达card11后成骨相关基因的表达水平；图7为过表达card11对细胞增殖的影响；图8为过表达card11对细胞凋亡的影响；图9为过表达card11对smad2和rankl表达的影响。具体实施方式以下结合具体实施例对本发明的补阳还五汤在制备预防和改善特纳综合征骨代谢异常试剂中的应用作进一步详细的说明。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的
技术领域：
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。在本发明的描述中，需要理解的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。本发明实施例说明书中所提到的相关成分的重量不仅仅可以指代各组分的具体含量，也可以表示各组分间重量的比例关系，因此，只要是按照本发明实施例说明书相关组分的含量按比例放大或缩小均在本发明实施例说明书公开的范围之内。具体地，本发明实施例说明书中所述的重量可以是μg、mg、g、kg等化工领域公知的质量单位。本发明提供一种补阳还五汤在制备预防和改善特纳综合征骨代谢异常试剂中的应用。本发明还提供一种补阳还五汤在制备抑制card11表达水平、smad2表达水平或rankl表达水平试剂中的应用。可选地，一种补阳还五汤在制备抑制card11表达水平试剂中的应用。可选地，一种补阳还五汤在制备抑制smad2表达水平和rankl表达水平试剂中的应用。其中，card11＝caspaserecruitmentdomainfamilymember11，为半胱天冬酶募集结构域的膜相关鸟苷酸激酶蛋白1。smad2＝mothersagainstdpphomolog2，为骨代谢相关因子母亲dpp同源物2；rankl＝receptoractivatorfornuclearfactor-κbligand，为核因子-κb受体活化因子配体。在一个具体示例中，补阳还五汤在制备预防和改善特纳综合征骨代谢异常药物制剂中的应用。可选地，制剂可为片剂、混悬剂、颗粒剂或胶囊剂。可以理解，本发明提供的补阳还五汤在制备预防和改善特纳综合征骨代谢异常试剂中的应用，指的是补阳还五汤不仅可以用于在制备预防和改善特纳综合征骨代谢异常药物制剂中的应用，还可用于科研或其他领域中。传统的补阳还五汤为黄芪、当归、赤芍、地龙、川穹、红花和桃仁的组合，为益气活血、祛瘀通络经典代表方，方中重用黄芪益气，川芎、红花、赤芍、桃仁活血化瘀；地龙通络全方以补为主；而活血通络药物使用量小，通补兼施，益气活血，祛瘀。临床上补阳还五汤早已广泛用于脑梗死、糖尿病周围神经病变、糖尿病肾病、高血脂症等的治疗。发明经过大量的研究发现，补阳还五汤能在短期内明显改善特纳综合征骨代谢异常患者的中医证候量表评分，改善倦怠乏力、腰酸和肢体困重等症状；调节乳酸及咪唑乳酸的表达水平，参与调控特纳综合征骨代谢。且补阳还五汤能通过调节抑制card11表达水平，抑制smad2和rankl通路，从而预防和改善特纳综合征骨代谢异常。在其中一些示例中，在补阳还五汤的应用中，补阳还五汤按质量份数计，包括如下组分：在其中一些示例中，在补阳还五汤的应用中，补阳还五汤为黄芪、当归、赤芍、地龙、川穹、红花和桃仁，以及土茯苓和鸡血藤；可以理解，需土茯苓和鸡血藤两者配伍，鸡血藤和土茯苓中的一种则没法达到该效果。在其中一些示例中，在补阳还五汤的应用中，补阳还五汤为黄芪、当归、赤芍、地龙、川穹、红花和桃仁，以及葛根和黄芩；可以理解，需葛根和黄芩两者配伍，而葛根和黄芩中的一种则没法达到该效果。在其中一些示例中，在补阳还五汤的应用中，补阳还五汤为黄芪、当归、赤芍、地龙、川穹、红花和桃仁，以及补骨脂、牛膝和麦芽；可以理解，需补骨脂、牛膝和麦芽三者配伍，而补骨脂、牛膝和麦芽中的一种或两种则没法达到该效果。在其中一些示例中，在补阳还五汤的应用中，补阳还五汤按质量份数计，还包括土茯苓10～30份和鸡血藤10～30份。在其中一些具体示例中，在补阳还五汤的应用中，补阳还五汤按质量份数计，包括如下组分：可以理解，在该份数范围内预防和改善特纳综合征骨代谢异常的效果更佳。在上述补阳还五汤中，黄芪，补益元气，意在气旺则血行，瘀去络通，为君药；当归活血通络而不伤血，用为臣药；赤芍、川芎、桃仁、红花协同当归尾以活血祛瘀；地龙通经活络，力专善走，周行全身，以行药力，亦为佐药；土茯苓及鸡血藤亦有祛风活血、舒筋活络，亦为佐药。优选地，在补阳还五汤的应用中，补阳还五汤按质量份数计，包括如下组分：在其中一些示例中，在补阳还五汤的应用中，补阳还五汤按质量份数计，还包括葛根20～40份和黄芩10～20份。在其中一些具体示例中，在补阳还五汤的应用中，补阳还五汤按质量份数计，包括如下组分：可以理解，在该份数范围内预防和改善特纳综合征骨代谢异常的效果更佳。在上述补阳还五汤中，黄芪，补益元气，意在气旺则血行，瘀去络通，为君药；当归活血通络而不伤血，用为臣药；赤芍、川芎、桃仁、红花协同当归尾以活血祛瘀；地龙通经活络，力专善走，周行全身，以行药力，亦为佐药；葛根、黄芩具有清热燥湿，泻火解毒，则为使药。优选地，在补阳还五汤的应用中，补阳还五汤按质量份数计，包括如下组分：在其中一些示例中，在补阳还五汤的应用中，补阳还五汤按质量份数计，还包括补骨脂10～20份、牛膝10～20份和麦芽10～20份。在其中一些具体示例中，在补阳还五汤的应用中，补阳还五汤按质量份数计，包括如下组分：可以理解，在该份数范围内预防和改善特纳综合征骨代谢异常的效果更佳。在上述补阳还五汤中，黄芪，补益元气，意在气旺则血行，瘀去络通，为君药。当归活血通络而不伤血，用为臣药。赤芍、川芎、桃仁、红花协同当归尾以活血祛瘀；地龙通经活络，力专善走，周行全身，以行药力，亦为佐药；补骨脂、牛膝、麦芽具有逐瘀通经，引血下行，则为使药。优选地，在补阳还五汤的应用中，补阳还五汤按质量份数计，包括如下组分：本发明还提供了一种补阳还五汤，包括黄芪、当归、赤芍、地龙、川穹、红花和桃仁，还包括土茯苓和鸡血藤两者的组合、葛根和黄芩两者的组合、或补骨脂、牛膝和麦芽三者的组合；其中，还包括土茯苓和鸡血藤两者的组合、葛根和黄芩两者的组合、或补骨脂、牛膝和麦芽三者的组合的质量分数为补阳还五汤中的10％～40％。可以理解，在其中一些示例中，在补阳还五汤中，包括黄芪、当归、赤芍、地龙、川穹、红花、桃仁、土茯苓和鸡血藤。在其中一些示例中，在补阳还五汤中，包括黄芪、当归、赤芍、地龙、川穹、红花、桃仁、葛根和黄芩。在其中一些示例中，在补阳还五汤中，包括黄芪、当归、赤芍、地龙、川穹、红花、桃仁、补骨脂、牛膝和麦芽。在一些具体示例中，提供的一种补阳还五汤，按质量份数计，包括如下组分：可选地，包括如下组分：在一个较优的实施例中，一种补阳还五汤，按质量份数计，包括如下组分：一种补阳还五汤，按质量份数计，包括如下组分：可选地，包括如下组分：在一个较优的实施例中，一种补阳还五汤，按质量份数计，包括如下组分：一种补阳还五汤，按质量份数计，包括如下组分：可选地，包括如下组分：在一个较优的实施例中，一种补阳还五汤，按质量份数计，包括如下组分：发明经过大量的研究发现，补阳还五汤能在短期内明显改善特纳综合征骨代谢异常患者的中医证候量表评分，改善倦怠乏力、腰酸和肢体困重等症状；调节乳酸及咪唑乳酸的表达水平，参与调控特纳综合征骨代谢。且补阳还五汤能通过调节抑制card11表达水平，抑制smad2和rankl通路，从而预防和改善特纳综合征骨代谢异常。具体实施例以下按照本发明的补阳还五汤及其应用举例，可理解，本发明的补阳还五汤及其应用并不局限于下述实施例。下述中药组合物中的中药颗粒是用符合炮制规范的传统中药饮片作为原料，经现代制药技术提取、浓缩、分离、干燥、制粒获得。实施例1黄芪颗粒60g，当归颗粒5g，赤芍颗粒20g，地龙颗粒10g，川穹颗粒20g，红花颗粒6g，桃仁颗粒10g。实施例2黄芪颗粒60g，当归颗粒10g，赤芍颗粒20g，地龙颗粒10g，红花颗粒6g，桃仁颗粒10g，川穹颗粒20g，土茯苓颗粒20g，鸡血藤颗粒20g。实施例3黄芪颗粒60g，当归颗粒5g，赤芍颗粒20g，地龙颗粒10g，川穹颗粒20g，红花颗粒6g，桃仁颗粒10g，葛根颗粒30g，黄岑颗粒10g。实施例4黄芪颗粒60g，当归颗粒5g，赤芍颗粒20g，地龙颗粒10g，川穹颗粒20g，红花颗粒6g，桃仁颗粒10g，补骨脂颗粒15g，牛膝颗粒15g，麦芽颗粒15g。实施例5黄芪颗粒90g，当归颗粒8g,赤芍颗粒15g，地龙颗粒8g，红花颗粒8g，桃仁颗粒15g，川穹颗粒16g，土茯苓颗粒22g，鸡血藤颗粒22g。实施例6黄芪颗粒120g，当归颗粒6g,赤芍颗粒30g，地龙颗粒5g，红花颗粒5g，桃仁颗粒20g，川穹颗粒30g，土茯苓颗粒30g，鸡血藤颗粒10g。对比例1黄芪颗粒60g，当归颗粒10g，赤芍颗粒20g，地龙颗粒10g，红花颗粒6g，桃仁颗粒10g，川穹颗粒20g，土茯苓颗粒40g。对比例2黄芪颗粒60g，当归颗粒5g，赤芍颗粒20g，地龙颗粒10g，川穹颗粒20g，红花颗粒6g，桃仁颗粒10g，葛根颗粒40g。对比例3黄芪颗粒60g，当归颗粒5g，赤芍颗粒20g，地龙颗粒10g，川穹颗粒20g，红花颗粒6g，桃仁颗粒10g，补骨脂颗粒30g，牛膝颗粒15g。实验方法：1、招募ts骨代谢异常并气虚血瘀症志愿者4名作为治疗组，给予口服补阳还五汤治疗4周(排除禁忌症)；正常志愿者4名作为对照组，由同一名中医妇科医生进行中医四诊，分别对ts骨代谢异常并气虚血瘀症志愿者口服补阳还五汤治疗前后的行气虚血瘀中医证候量表评分，结果见表1。表1实施例1234治疗前6656治疗后3323评分标准：中医症候量表评分参照《中药新药临床研究指导原则》结合本病，根据症状对治疗前和治疗4周后，进行评分。a.倦怠乏力：无，0分；肢体稍倦，可坚持轻体力活动，1分；四肢乏力，勉强坚持日常活动，2分；全身无力，终日不愿活动，3分；b.腰酸：无，0分；晨起腰酸，捶打可止，1分；持续腰酸，劳则加重，2分；腰酸如折，休息不止，3分；c.肢体困重：无，0分；有困重感，尚不影响活动，1分；肢体沉重，活动费力，2分；沉重如裹，活动困难，3分。由表1可知，本申请所述的补阳还五汤能在短期内明显改善特纳综合征骨代谢异常患者的中医证候量表评分，改善倦怠乏力、腰酸和肢体困重等症状。2、收集研究对象及对照组血液进行代谢组学非靶向分析1)对ts骨代谢异常患者治疗前(a)、经实施例2组合物治疗后(m)以及正常组(n)同时收集治疗组及对照组血液，进行代谢组学非靶向分析，筛选ts骨代谢异常中潜在的生物标志物。结果参见图1，代谢组学实验经过多变量统计分析，正常对照组、补阳还五汤治疗前和治疗后具有明显的差异。pls-da建模参数(r2＝0.99，q2＝0.56)表明所建模型对ts骨代谢异常及补阳还五汤治疗后具有良好的解释及预测能力。2)对ts骨代谢异常患者治疗前(a)、经实施例2组合物治疗后(m)以及正常组(n)进行乳酸(di-lacticacid)代谢物和咪唑乳酸(l-β-imidazolelaticacid)代谢物的强度(intensity)检测。结果参见图2乳酸代谢物的箱图及roc曲线图，以及图3咪唑乳酸代谢物的箱图及roc曲线。结果显示，在补阳还五汤治疗之后，单变量统计显示乳酸及咪唑乳酸这两种代谢物具有显著性的变化，且使得ts骨代谢异常水平回归正常趋势。3、筛选ts骨代谢异常中潜在的生物标志物1)对ts骨代谢异常并气虚血瘀治疗组治疗前后血液中，骨代谢相关基因的表达量进行检测，结果见图4。在图4中，相关基因的表达量按照从高至低的顺序依次分为a、b、c、d、e五个等级，治疗前组a1～a4分别对应治疗后组m1～m4。实验结果显示，与对照组(n组)相比，ts骨代谢异常患者治疗前(a组)的smad2和rankl异常高表达，而在补阳还五汤治疗4周后，随着乳酸含量的升高，两者都有下降趋势。2)通过qpcr(实时荧光定量pcr)检测ts骨代谢异常患者外周血中card11基因拷贝量变异，检测ts骨代谢异常患者和健康对照组的card11基因拷贝量(foldcopynumberofcard11gene)。结果如图5，ts骨代谢异常患者外周血中card11拷贝量显著升高(p<0.001)。4、对体外培养的小鼠成骨细胞系mc3t3-e1过表达card11两天，检测体外过表达card11后成骨相关基因的表达水平。如图6，检测成骨细胞的相对car11水平(relativecard11leveinosteoblast)相关表达(relativeexpression)；通过用cck8试剂盒检测相对细胞增殖率(relativecellproliferationratio)来检测过表达card11对细胞增殖的影响，见图7；用annexinv-pe/7-aad双染检测过表达card11对细胞凋亡的影响，见图8。采用qrt-pcr检测过表达card11对smad2和rankl表达的影响，见图9。由图6～9可知，体外培养的小鼠成骨细胞系mc3t3-e1过表达card11两天后，瞬时过表达card11并不足以改变成骨细胞相关基因的表达水平(见图6～7)，也不会诱发细胞的增殖和凋亡(见图8)；但有趣的是，card11的过表达能显著上调骨代谢相关基因rankl和smad2的水平(见图9)。综上所述，card11可活化smad2和rankl信号通路促进ts骨代谢异常，而补阳还五汤可下调ts骨代谢异常患者体内smad2和rankl的表达。综上所述，我们提出：补阳还五汤能通过调节card11表达水平，抑制smad2和rankl通路，从而改善ts骨代谢异常。本发明补阳还五汤具有改善骨代谢的作用，尤其是对特纳综合征女性患者骨代谢的促进作用显著，具有良好的临床应用前景。以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。当前第1页12