一种3-(苯基硒基)-1H吡咯[2,3-b]吡啶在抗炎药物制备中的应用

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种式(i)的化合物(代号34#)或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防急性肺损伤药物中的用途。

背景技术：

急性肺损伤(ali)及其严重表现形式急性呼吸窘迫综合征(ards)是由多种肺内外诱导因素导致呼吸窘迫、顽固性低氧血症以及非心源性肺水肿为特征的临床综合征，是重症患者呼吸衰竭的主要原因，是危重的icu患者脓毒症后的常见并发症。急性肺损伤的特征主要是肺水肿、肺部的炎症反应、炎症细胞的迁移浸润以及炎症介质的释放、肺毛细血管通透性增加。根据现有的ali发病机理研究，呼吸道及肺部组织的失控性炎症反应是其中一个主要的原因，巨噬细胞、中性粒细胞等大量炎性细胞在肺部聚集,继而引发的炎性因子瀑布样释放效应。

本发明人在多年的工作基础上，发现了式(i)的化合物(34#)能够有效治疗脂多糖(lps)诱导的急性肺损伤。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供了式(i)的化合物，代号为34#的新的用途。

具体而言，本发明提供了式(i)的化合物(34#)或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防急性肺损伤的药物中的用途。

优选本发明的用途是在制备用于改善急性肺损伤的药物中的用途。

急性肺损伤的病因可归为两大类，直接和间接肺部损伤因素。直接肺损伤因素包括严重肺部感染、胃内容物吸入、肺挫伤、吸入有毒气体、淹溺、氧中毒；间接肺损伤因素严重感染、严重的非胸部创伤、重症急性胰腺炎、大量输血、体外循环、弥漫性血管内凝血等。在临床上，急性肺损伤是由多种致病菌引起的，主要来自于革兰氏阴性菌的感染。革兰氏阴性菌的细胞壁主要成分是脂多糖(1ipopolysaecharide，lps)，是icu和手术室常见的感染的致病因素。不同的原因导致的肾病的症状以及治疗方式都有所不同，作为优选，本发明所针对的主要是由lps诱发的急性肺损伤。

优选在本发明的用途中，急性肺损伤的主要症状为级联炎症反应，包括炎症因子的释放和炎性细胞的浸润。

本发明的用途中的药物含有有效剂量的式(i)的化合物(34#)。有效剂量可以是单位给药剂量形式(如，一片、一针、一丸或一剂)的药物中的含量，也可以是所需治疗/预防的患者的单位剂量(如，单位体重剂量)。药物制造商能够很容易地通过所需治疗/预防的患者群体的平均体重将所需治疗/预防的患者的单位体重剂量换算成单位给药剂量形式的药物中的含量，例如，成人患者的平均体重可以是60kg，因此通过平均体重乘以成人的单位体重剂量，即可得到用于成人的单位给药剂量形式的药物中的含量。在本发明中，患者可以是哺乳动物，如人、兔、狗或鼠。根据本领域普通技术人员所公知的实验动物与人的等效剂量换算关系(通常可参见fda、sfda等药品管理机构的指导意见，也可参见“黄继汉等.药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算.中国临床药理学与治疗学,2004，9(9):1069-1072”)可从实验动物的剂量推导出人的单位体重剂量。例如，对于常用的实验动物小鼠而言，根据上述文献，其与成人的换算关系约为12：1；对于常用的实验动物大鼠而言，根据上述文献，其与成人的换算关系约为6：1。在本发明中，有效剂量(以含量计)可以是10ug-1g优选是0.1mg-500mg，更优选是1mg-100mg。

本发明的用途中的药物通常还含有药学上可接受的载体。本文中使用的药学上可接受的载体指无毒的填充剂、稳定剂、稀释剂、佐剂或其他制剂辅料。例如，稀释剂、赋形剂，如水、生理盐水等；填充剂，如淀粉、蔗糖等；粘合剂，如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和/或聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂，如甘油；崩解剂，如琼脂、碳酸钙和/或碳酸氢钠；吸收促进剂，如季铵化合物；表面活性剂，如十六烷醇；吸附载体，如高岭土和/或皂粘土；润滑剂，如滑石粉、硬脂酸钙/镁、聚乙二醇等。另外，本发明的药物组合物还可以进一步含有其它辅料，如香味剂、甜味剂等。根据本领域的公知技术，可以根据治疗目的、给药途径的需要将药物组合物制成各种剂型，优选该组合物为单位给药剂量形式，如冻干剂、片剂、胶囊、粉剂、乳液剂、水针剂或喷雾剂，更优选该药物组合物为注射剂型(如，冻干粉针剂)或口服剂型(如，片剂、胶囊)。药物可以通过常规途径施用，特别是肠内，例如口服，例如以片剂或胶囊剂形式，或非肠道施用，例如以可注射溶液剂或混悬剂形式，局部施用，例如以洗剂或凝胶剂，或以鼻剂或检剂形式。

为了便于理解，本发明引用了公开文献，这些文献是为了更清楚地描述本发明，其全文内容均纳入本文进行参考。以下将通过具体的实施例和附图对本发明进行详细地描述。需要特别指出的是，这些描述仅仅是部分示例性的描述，并不构成对本发明范围的限制。依据本说明书的论述，本发明的许多变化、改变对所属领域技术人员来说都是显而易见了。

附图说明：

图1式(i)的化合物(34#)对腹腔原代巨噬细胞上清液中炎症因子的影响。

图2式(i)的化合物(34#)对腹腔原代巨噬细胞基因水平上炎症因子高表达的改善效果。

图3式(i)的化合物(34#)对ali小鼠肺泡灌洗液中蛋白浓度，总细胞数和中性粒细胞数的影响。

图4式(i)的化合物(34#)对ali小鼠血清和肺泡灌洗液中炎症因子高表达的改善效果以及对ali小鼠肺组织病理变化的改善情况。

图5式(i)的化合物(34#)ali小鼠肺组织中炎症细胞高表达的影响。

具体实施方式：

本发明在以下的实施例中进一步说明。这些实施例只是为了说明的目的，而不是用来限制本发明的范围。

实施例1本发明的化合物可以抑制腹腔原代巨噬细胞中lps诱导的炎症因子释放。

精确称取牛肉膏0.15g、蛋白胨0.5g、nacl0.25g，加入50ml纯化水,加热溶解，再加入可溶性淀粉3g，搅拌加热溶解配制成6％淀粉肉汤溶液，冷却并用0.22μm滤膜过滤放置于无菌管。取2.5ml6％淀粉肉汤溶液腹腔注射于每只57l/b6小鼠体内。正常饲养小鼠2天后，脱颈处死小鼠，进行腹腔巨噬细胞的提取。

5×10⁵个/孔mpms铺于六孔板后，分别加入34#(5μm，10μm，20μm，40μm)孵育30min，加入lps(0.5μg/ml)24h孵育后，收取上清液进行elisa检测炎症因子表达情况。

检测结果如图1所示，在lps刺激后，炎症因子tnf-α和ιl-6水平显著上升，而34#可以明显的抑制巨噬细胞炎症因子的释放，且具有剂量依赖性。

实施例2本发明的化合物明显改善巨噬细胞中基因水平炎症因子高表达。

按照实施例1提取腹腔原代巨噬细胞，1×10⁶个/孔mpms铺于六孔板后，预给药34#(5μm，10μm，20μm)30min后，加入lps(0.5μg/ml)，于6h后收样，用trizol试剂提取总mrna,用rt-qpcr的方法检测炎症因子tnf-α、il-6、il-1β以及内参β-actin的表达。

结果如图2所示，可以看出与空白对照组相比，lps刺激后，细胞中炎症因子tnf-α(a)、il-6(b)、il-1β(c)的mrna表达上调,而34#能够很好的抑制炎症因子mrna水平上调

实施例3本发明的化合物改善lps诱导的ali小鼠的肺组织炎症细胞浸润和肺水肿。

将c57l/b6小鼠随机分为5组，每组7只，分别为：

空白对照组(con组)：c57l/b6小鼠用0.5％cmc-na灌胃3天，的第三天气管滴注生理盐水。

模型组(lps组)：c57l/b6小鼠用0.5％cmc-na灌胃三天，第三天气管滴注lps(5mg/kg)。

lps+34#l组(lps+34#10mg/kg)：c57l/b6小鼠以10mg/kg的剂量灌胃给药三天，第三天气管滴注lps(5mg/kg)。

lps+34#h组(lps+34#20mg/kg)：c57l/b6小鼠以20mg/kg的剂量灌胃给药三天，第三天气管滴注lps(5mg/kg)。

34#单给药组(20mg/kg)：c57l/b6小鼠以20mg/kg的剂量灌胃给药三天，第三天气管滴注生理盐水。

造模6h后，眼球取血处死小鼠，收集血清，肺泡灌洗液和肺组织，挑选左肺第二叶进行石蜡包埋。

我们检测了balf中的蛋白质浓度来评估lps引起的肺水肿，这是肺泡-毛细血管屏障损伤的特征，如图3(b)所示，与空白对照组对比，lps组balf的蛋白浓度明显增加，34#的给药有效降低了lps诱导balf中蛋白质浓度的增加，与lps组比较组间差异有统计学意义。

ali时，肺气-血屏障受损，肺泡-毛细血管的通透性增强，大量的炎性细胞渗出到肺间质及肺泡中，因此我们检测这些细胞在balf中的变化情况。正常小鼠balf中细胞的含量极低，对于balf中总细胞及中性粒细胞的计数如图3(a和c)所示。与对照组相比，lps组的总细胞及中性粒细胞较空白对照组明显升高，34#l(10mg/kg)和34#h(10mg/kg)均能够明显降低balf中总细胞及中性粒细胞的计数，说明34#对lps诱导的ali小鼠模型balf中总细胞及中性粒细胞的渗出具有抑制作用。

实施例4本发明的化合物能改善ali小鼠balf和血清中炎症因子的释放以及肺组织的病理学变化。

按照实施例1分组并进行试验，造模6h后，处死小鼠，取血清和肺泡灌洗液进行实验。

我们首先从肺脏组织结构，形态学角度，观察急性肺损伤小鼠的肺组织变化以34#的治疗效果，我们用苏木素-伊红染色(h&e染色)方法检测肺组织病理变化。h&e染色结果如图4(e)所示，空白对照组小鼠肺组织在光镜下可以观察到肺泡结构完整，无明显病变，表现为正常肺组织。lps组小鼠肺组织在光镜下观察肺组织病理学改变明显异常，其特点为大量炎症细胞弥漫性分布，以中性粒细胞为主，肺泡腔内及肺间隔较多红细胞渗出，局部肺泡腔内粉红色纤维蛋白渗出，肺泡壁明显增厚，严重者失去正常的肺泡结构，肺毛细血管内大量红细胞淤积。而经过34#的预处理的ali小鼠模型(lps+34#l组、lps+34#h组)在光镜下可以观察到相比于lps组，肺组织病理变化得到改善，肺组织炎性细胞的浸润明显减轻，肺泡腔及间质少许红细胞渗出，肺泡壁未明显增厚，毛细血管束见明显红细胞淤积减少。

接下来我们用elisa的方法检测了小鼠血清和balf中tnf-α和il-6的变化情况，结果如图3(a和c)所示，正常小鼠balf和血清中tnf-α的含量极低，lps组明显表达升高，34#的给药显著降低了lps诱导的ali小鼠balf和血清中tnf-α含量增加，与lps组比较组间差异有统计学意义。同样，如图3(b和c)所示，正常组小鼠balf和血清中il-6含量很低，lps组含量升高，34#的给药显著降低了lps诱导的ali小鼠balf和血清中il-6含量增加，与lps组比较组间差异有统计学意义。表明34#对ali小鼠模型balf和血清中tnf-α和il-6的表达均具有抑制作用。

实施例5本发明的化合物明显改善ali小鼠肺组织中炎症细胞高表达。

按照实施例1分组并进行试验，造模6h后，处死小鼠，取肺组织匀浆进行实验。将肺组织在trizol试剂中匀浆，然后提取总mrna,用rt-qpcr的方法检测炎症因子tnf-α、il-6、icam-1、vcam-1、mcp-1以及内参β-actin的表达。结果如图5所示，与空白对照组小鼠对比，滴注lps组小鼠的炎症基因tnf-α、il-6、vcam-1、icam-1和mcp-1高表达，34#预处理小鼠组能够有效抑制这些炎症基因高表达，与细胞层面结果相符合。说明34#能够改善ali小鼠肺组织中炎症基因的高表达。