一种封闭抗体减少或缺失引起的习惯性流产治疗试剂盒的制作方法

1.本发明属于第三类医疗技术——免疫细胞治疗行业。


背景技术：

2.在正常孕妇体内存在着一种抗配偶淋巴细胞的抗体，这种抗体会结合到胎盘细胞表面抗原上，从而阻断了母体t淋巴细胞对胎盘发动的免疫攻击，这种抗体被称为封闭抗体。当某种原因导致孕妇体内缺少这种封闭抗体的时候，胚胎就会受到来自母体淋巴细胞的攻击，导致习惯性流产。目前，针对这种因为封闭抗体减少或者缺少引起的习惯性流产，主要采取取配偶淋巴细胞作为抗原进行主动免疫治疗，即从配偶全血中分离淋巴细胞进行皮下注射，使体内产生足够的封闭抗体。但在临床使用过程中，分离淋巴细胞较为繁琐，细胞纯度不高，医生操作比较复杂、而且容易引起污染，甚至注射后引起患者身体不良反应。


技术实现要素：

3.针对以上这些缺点，本发明的目的是提供一种封闭抗体减少或缺失引起的习惯性流产治疗试剂盒。本剂盒中包含的一次性特制离心管，采用全封闭式无菌操作，能够快捷方便地从全血中分离出高纯度的淋巴细胞，操作简单、同时减少污染的发生；并且所有接触的试剂和耗材都是采用临床级医用产品与无菌独立包装，保证了临床治疗的安全性。
4.一种封闭抗体减少或缺失引起的习惯性流产治疗试剂盒中包含的一次性特制离心管，结构如说明书附图中图1所示：其分为上仓（1）、中仓（2）、底仓（3）三个仓，上仓（1）顶部设有抽样孔（4）；中仓（2）上方左右对称分别设有进样孔（5）和透气孔（6），并通过密封胶塞（13）密封，中仓（2）内部设有内锁装置（7），通过顺、逆时针旋转工型腔体（8）来开、关中、底仓间相连的工型孔（9）；底仓（3）同样通过顺、逆时针旋转底仓腔体（10）来上推、下放底仓（3）内液体，底仓（3）设有开关阀门（11）和底盖（12），可以弃掉仓内的液体。具体使用方法，参考具体实施方式。
5.本发明的试剂盒具体由2支10ml的抗凝剂、1瓶100ml淋巴细胞分离液、1瓶200ml细胞洗涤液、2支特制离心管、2支50ml注射器、2支20ml注射器、2支5ml注射器组成。抗凝剂选用的是临床注射用枸橼酸钠注射液，防止全血体外凝固。淋巴细胞分离液选用临床级的葡聚糖、泛影酸葡甲胺与蒸馏水的组合，密度为1.077mg/ml，利用血液中各细胞密度的差别通过离心法将淋巴细胞分离出来。细胞洗涤液选用0.9%的氯化钠注射液与5%人血白蛋白的组合，洗涤细胞的目的是去除残留红细胞和淋巴分离液等杂质，得到安全纯净的临床用淋巴细胞。配套耗材选用一次性50ml、20ml、5ml医用注射器。
6.本试剂盒所有试剂和耗材都是采用临床级医用的产品，试剂瓶口采用胶塞封闭式抽吸，并且各组份独立无菌包装，符合临床治疗的安全性。
附图说明
7.图1为特制离心管示意图。
具体实施方式
8.以下实施例是对本发明进一步详细说明，而不是对本发明的限制。一种封闭抗体减少或缺失引起的习惯性流产治疗试剂盒使用方法如下。
9.取一支一次性50ml无菌注射器，吸取5ml 10%的枸橼酸钠注射液。
10.护士静脉抽取患者配偶30ml外周血，轻轻混匀得到新鲜抗凝血，常温无菌保存备用。
11.取出一支特制离心管，去掉外包装，检查装置是否缺损，关闭底仓（3）底部阀门（11），逆时针打开内锁装置（7），打开透气孔（6）的密封胶塞（13），备用。
12.取出1瓶淋巴细胞分离液，用一支一次性20ml无菌注射器从瓶口刺破胶塞抽取瓶内分离液17.5ml(淋巴细胞分离液与新鲜抗凝血的体积比为1：2），从特制离心管中的进样孔（5）中注入，直到所有分离液到达底仓（3）后，将新鲜抗凝血从进样孔（5）中缓慢注入，禁止摇晃与倒置，不破坏淋巴细胞分离液界面，并尽量使血液和人淋巴分离液有较清晰的界面，然后关闭透气孔（6），小心垂直放入离心机中，600g离心20分钟。
13.离心结束后，垂直轻拿出特制离心管，可以看到液体分为4层，从上到下依次为血清层、白膜层（淋巴细胞层）、分离液层、红细胞层，首先判断白膜层和红细胞层分别处在哪个仓，通过顺时针旋转底仓腔体（10）来上推底仓（3）内液体，使白膜移至中仓（2），逆时针旋转底仓腔体（10）来下放红细胞，使红细胞层全部处于底仓（3）。
14.顺时针关紧内锁装置（7），然后倒置离心管，500g离心10分钟，离心结束后倒置离心管，打开内锁装置（7），同时打开底仓阀门（11）和底盖（12），弃掉离心上清。
15.弃掉上清后，关闭内锁装置（7），用50ml注射器从进样孔中注射细胞洗涤液，倒置离心管，左右摇匀上仓（1）细胞，再次500g离心10分钟，倒置离心管，打开内锁装置（7），同时打开底仓阀门（11）和底盖（12），排除离心上清。同上操作，洗涤2次。
16.倒置离心管，上仓（1）底部细胞沉淀，用一支一次性5ml注射器吸取0.9%的氯化钠注射溶液(含5%的人血白蛋白）从进样孔（5）注入，充分摇匀重悬细胞，再用一支一次性5ml注射器从上仓（1）顶部的抽样孔（4）处抽取淋巴细胞悬液，即为临床治疗用淋巴细胞，淋巴细胞浓度调至20～30*109/l，混合均匀。
17.在患者上臂上选取3
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4个皮丘点，每点注射0.5ml，每过3周再进行下一次治疗，每4次为一个疗程。
18.一个疗程后检查封闭抗体情况，如果没有到达正常水平，可酌情追加1
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3次治疗。