龙血素B在制备预防和/或治疗肥胖药物中的应用

龙血素b在制备预防和/或治疗肥胖药物中的应用
技术领域
1.本发明属于龙血素b新的医药用途技术领域，特别涉及龙血素b在制备预防和/或治疗肥胖药物中的应用。


背景技术：

2.随着人们生活水平的不断提高，肥胖已成为12世纪严重威胁公众健康的重要因素。肥胖会引起多种代谢性疾病，如血脂异常、2型糖尿病(t2dm)和心脑血管疾病等，甚至会增加某些癌症的发病率。2014年，全世界超过三分之一(39％)的成年人超重，5亿多成年人被列为肥胖。如此高的发病率以及多种严重的并发症，使得肥胖成为当代社会急需解决的问题。白色脂肪组织褐色样变，在2010年被发现，是指白色脂肪组织在某些因素下，转变为浅褐色，并从而消耗更多能量，其效应为减肥，优化胰岛素敏感性，改善糖脂代谢等。
3.龙血素b是是传统名贵药材龙血竭的主要成分之一。龙血素b具有活血散瘀，镇痛止血，敛疮生肌的功效。适用于跌打损伤，淤血作痛，外伤出血等症状。龙血素b还被报道具有抗炎，抗氧化的活性。临床上将其用于治疗外伤出血，心绞痛，心肌梗塞等。关于龙血素b可以通过促进白色脂肪褐变预防或治疗肥胖未见报道。


技术实现要素：

4.发明目的：针对现有技术中的缺陷，本发明提供了龙血素b在制备预防和/或治疗肥胖药物中的应用，所述龙血素b可以作为白色脂肪组织褐色样变刺激剂，能够有效预防和/或治疗肥胖。
5.技术方案：为达到上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
6.本发明中所述龙血素b，cas:119425
‑
90
‑
0，分子式：c
18
h
20
o5，平均分子量316.35。
7.本发明公开了龙血素b在制备预防和/或治疗肥胖药物中的应用。
8.白色脂肪组织褐色样变刺激剂在制备药物中的应用，所述白色脂肪组织褐色样变刺激剂是龙血素b。
9.进一步的，所述药物用于预防和/或治疗肥胖。
10.一种用于预防和/或治疗肥胖的组合物，所述组合物中包括龙血素b或其药学上可接受的盐，和至少一种药学上可接受的辅料，例如载体、稀释剂、赋形剂或辅助剂等。
11.优选，所述组合物的剂型选自片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、缓释剂、注射剂、输液、注射用无菌粉末中的一种。
12.包含龙血素b的组合物在制备预防和/或治疗肥胖药物中的应用。
13.白色脂肪组织褐色样变刺激剂在制备药物中的应用，所述白色脂肪组织褐色样变刺激剂是包含龙血素b的组合物。
14.进一步的，所述药物用于预防和/或治疗肥胖。
15.所述龙血素b或包含龙血素b的组合物应用时，优选地：
16.所述药物是以每次龙血素b1mg/kg剂量范围给予的形式存在。
17.所述药物的给予形式为腹膜内给药。
18.所述药物是以每天给药一次的形式存在。
19.本发明采用60％高脂饮食喂养的c57bl/6小鼠为研究对象，首次公开了1mg/kg龙血素b能够显著地抵御与治疗肥胖的药物用途。本发明将实验小鼠分成龙血素b(1mg/kg)和对照溶剂(dmso)注射组，每天测量体重和摄食量。龙血素b注射14天后，通过mri检测体脂和瘦体重，通过qpcr检测脂肪组织中褐色样变标志分子。实验结果显示：1mg/kg龙血素b能够显著刺激白色脂肪组织褐变，提高能量消耗，促进脂肪分解，抑制脂肪合成，能够显著的预防治疗肥胖，且毒性低和无代谢抑制作用，为肥胖的预防和治疗提供了新的方向。
20.有益效果：相对于现有技术，本发明公开了龙血素b一种新的医药用途，发现其具有优异的预防和/或治疗肥胖的效果。本发明通过研究表明，龙血素b可以显著抑制高脂诱导肥胖的体重增长。并且龙血素b主要减少脂肪重量，对瘦体重几乎没有影响。此外，它还可以显著提高小鼠的基础代谢率和脂肪利用率。分子水平的研究表明，龙血素b可显著提高白色脂肪组织褐变分子标记物的表达，促进白色脂肪组织褐色样变。
附图说明
21.图1：左图为饮食诱导肥胖小鼠模型药物活性测试实验中小鼠的体重图，右图为饮食诱导肥胖小鼠模型药物活性测试实验中小鼠的进食量图。
22.图2：饮食诱导肥胖小鼠模型药物活性测试实验中给药结束后小鼠的腹股沟白色脂肪(iwat)、附睾白色脂肪(ewat)，肾周白色脂肪(pwat)的重量图。
23.图3：a为饮食诱导肥胖小鼠模型药物活性测试实验中小鼠体成分分析结果的体脂重量图；b为饮食诱导肥胖小鼠模型药物活性测试实验中小鼠体成分分析结果的体脂率图；.c为饮食诱导肥胖小鼠模型药物活性测试实验中小鼠体成分分析结果的瘦体重重量图；.d为饮食诱导肥胖小鼠模型药物活性测试实验中小鼠体成分分析结果的瘦体重率图。
24.图4：a为饮食诱导肥胖小鼠模型药物活性测试实验中呼吸能量代谢笼结果中的小鼠氧气消耗量图；b为饮食诱导肥胖小鼠模型药物活性测试实验中呼吸能量代谢笼结果中的小鼠呼吸熵图；c为饮食诱导肥胖小鼠模型药物活性测试实验中呼吸能量代谢笼结果中的小鼠二氧化碳生成量图；d为饮食诱导肥胖小鼠模型药物活性测试实验中呼吸能量代谢笼结果中的小鼠能量消耗图。
25.图5：a为饮食诱导肥胖小鼠药物活性测试实验中呼吸能量代谢笼结果中的小鼠活动情况图；b为饮食诱导肥胖小鼠药物活性测试实验中呼吸能量代谢笼结果中的小苏进食量图。
26.图6：饮食诱导肥胖小鼠药物活性测试实验中小鼠白色脂肪褐变相关基因的qpcr结果图。
具体实施方式
27.下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下面描述的实例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所用的材料、试剂、仪器等，若无特殊说明，均可从商业途径得到。
28.实施例
29.c57bl/6j小鼠，雄性，8周，20～22g，购买于北京大学医学部动物部。
30.维持饲料：购买与北京大学医学部动物部。
31.高脂饲料：购买与博奥派克公司。
32.所有动物实验都严格按照《实验动物管理和使用指南》的要求，并取得北大实验动物管理委员会的许可。在处死动物的过程中，在麻醉的状态下并尽量减轻动物的痛苦。
33.龙血素b由上海陶素生化科技有限公司提供。龙血素b，分子式：c
18
h
20
o5，平均分子量316.35，水溶性较差。
34.一、实验方法：
35.1.6
‑
8周龄雄性c57bl/6小鼠，饲养条件：环境温度22摄氏度
±
0.5℃，12小时/12小时明暗交替。所有实验数据用均数
±
标准误差表示。对小鼠喂食包含60％脂肪、20％蛋白质和20％碳水化合物的高脂饲料(研究用饲料，d12492)。喂食期间，小鼠连续14天每天一次腹膜内(i.p.)注射溶媒(dmso)、包含化合物龙血素b的溶媒(1mg/kg)，并检测小鼠的体重，进食量。
36.2.1mg/kg龙血素b注射14天后，取腹股沟，附睾，肾周的白色脂肪以及肩胛的棕色脂肪，称重记录脂肪重量。
37.3.给与c57bl/6小鼠60％高脂饮食，每天注射1mg/kg龙血素b一次，连续14天。mri检测给药组小鼠及对照组小鼠的体脂和瘦体重的重量，并统计数据。
38.4.给与c57bl/6小鼠60％高脂饮食，注射1mg/kg龙血素b后，将小鼠放入呼吸代谢笼，连续24h监测小鼠的耗氧量、二氧化碳生成量以及小鼠的能量消耗和物理运动情况。
39.5.给与c57bl/6小鼠60％高脂饮食，注射1mg/kg龙血素b连续14天后，取小鼠的腹股沟脂肪，利用qpcr技术监测龙血素b对腹股沟白色脂肪组织中脂肪褐变标志分子mrna水平的影响。
40.6.利用western blot技术对给予60％高脂饮食喂养的c56bl/6小鼠与对照溶剂(dmso)后小鼠腹股沟白色脂肪(iwat)中ucp
‑
1蛋白的表达情况进行检测。
41.二、实验结果：
42.1.龙血素b显著降低饮食诱导肥胖小鼠的体重增长
43.如图1所示，高脂饮食下，对照溶媒组小鼠体重显著增长。但龙血素b组小鼠的体重增长缓慢，即龙血素b显著降低了饮食诱导肥胖小鼠的体重增长(9.8％)，并且龙血素b并不抑制小鼠的进食量。
44.2.龙血素b降低饮食诱导肥胖小鼠的脂肪含量
45.如图2所示，与对照溶媒组高脂喂养小鼠相比，给予龙血素b的小鼠腹股沟白色脂肪(iwat)，附睾白色脂肪(ewat)，肾周白色脂肪(pwat)明显减少，棕色脂肪没有明显变化。
46.3.龙血素b不降低饮食诱导肥胖小鼠的瘦体重
47.如图3所示，mri分析结果可知，对照溶媒高脂喂养小鼠相比，给与龙血素b小鼠的脂肪含量明显减少，体脂率明显下降。但龙血素b小鼠的瘦体重并没有明显的改变。
48.4.龙血素b显著提高小鼠的能量消耗，促进脂肪的利用率
49.如图4所示，从呼吸代谢笼的结果可知，龙血素b明显提高了小鼠的耗氧量(vo2)，而且提高了小鼠的能量消耗(ee)和降低了小鼠的rer(呼吸交换率，vco2/vo2)。如图5所示并且龙血素b组小鼠的物理活动和摄食量与对照组小鼠没有明显差异。综上结果表明，龙血
素b提高了小鼠的基础代谢率和脂肪利用率。
50.5.龙血素b可以促进白色脂肪褐变
51.如图6所示，14天的龙血素b给药结束后，取给药物和对照溶媒组小鼠的腹股沟脂肪，利用qpcr技术检测白色脂肪组织与白色脂肪组织褐变相关的基因表达情况，结果发现龙血素b可以显著提高白色脂肪组织ucp
‑
1和cd137的表达。
52.以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明的保护范围应以所附权利要求为准。