DHC在制备动脉粥样硬化治疗制剂中的应用

本发明涉及化合物的新应用，特别涉及dhc在制备动脉粥样硬化治疗制剂中的应用。

背景技术：

心血管疾病（cvd）被认为是人类生命的最大威胁，是全世界的主要死因，包括冠状动脉疾病（cad）、高血压、心律失常、心肌病和血栓栓塞。心血管系统的动态平衡是由相互影响的遗传和表观遗传程序来维持的，其不平衡导致了复杂疾病过程的发病机理，例如动脉粥样硬化及其危及生命的并发症，中风和心肌梗塞。动脉粥样硬化是冠状动脉疾病、外周动脉疾病（pad）和脑血管疾病最常见的病理学基础，造成了心血管疾病的主要死亡率和发病率，每年在全世界导致了数百万人死亡。

动脉粥样硬化与多种危险因素相关，例如高胆固醇血症，高血压，糖尿病，肥胖症，高甘油三酸酯，遗传异常以及生活方式包括压力，缺乏运动和吸烟等，均可能导致动脉内层受损，从而导致动脉粥样硬化的产生。动脉粥样硬化是一种大中型动脉的慢性炎症性疾病，不稳定的动脉粥样硬化斑块破裂，血管狭窄，血小板聚集和血栓形成均可导致急性心血管疾病。斑块稳定性与炎症细胞的水平和纤维帽的厚度有关，纤维帽和充满免疫细胞的斑块被称为"软"或脆弱的斑块。临床使用的动脉粥样硬化治疗方法，有效地防止或遏制动脉粥样硬化的进展更多地关注在胆固醇代谢和降脂上，比如使用他汀类药物。

脱氢紫堇碱（dhc），一种从科里达利·西扬胡索（wtwang，1985年）分离出的生物碱。最初被确定可以阻止去甲肾上腺素和肺动脉中去甲肾上腺素从肾上腺能神经末梢的释放。1982年报导dhc对冠状动脉具有显着的解痉作用，初步认为dhc是延胡索治疗冠心病的主要成分，随后在心血管的研究中，有研究报导dhc降低细胞内游离钙浓度并提高心肌细胞的自我保护能力，但关于动脉粥样硬化的研究几乎没有。先前的研究报导它被证明具有抗炎特性，减轻炎症性疼痛，被广泛用于治疗痉挛性疼痛，腹痛和因损伤引起的疼痛。并且dhc通过将小胶质m1/m2偏向m2表型转移来减轻骨癌疼痛。此外，dhc具有抗过敏和抗肿瘤作用，降低非小细胞肺癌细胞的迁移能力，通过抑制黑色素瘤中的mek1/2-erk1/2级联抑制细胞增殖、迁移和入侵。未有研究表明dhc可以用于改善或治疗动脉粥样硬化的作用。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供dhc在制备改善或治疗动脉粥样硬化制剂中的新应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供：

脱氢紫堇碱及其衍生物在制备改善或治疗动脉粥样硬化组合物中的应用。

在一些实例中，所述衍生物的结构通式如式ⅰ所示：

(式ⅰ)

式中，r1～r4独立选自h、c1～c3的烷基；r5选自c1～c3的烷基。

在一些实例中，r1～r4中的至少2个为甲基。

在一些实例中，r1～r4中的至少3个为甲基。

在一些实例中，r5为甲基。

在一些实例中，r1～r4中的至少2个为甲基，r5为甲基。

在一些实例中，r1～r4中的至少3个为甲基，r5为甲基。

在一些实例中，r1～r4独立选自h、c1～c3的烷基；r5选自c1～c3的烷基，所述衍生物还包括其药学上可接受的盐。

在一些实例中，所述衍生物为脱氢紫堇碱药学上可接受的盐。

本发明的第二个方面，提供：

组合物在制备改善或治疗动脉粥样硬化组合物中的应用，所述组合物中的活性成分包括脱氢紫堇碱及其衍生物中的至少一种。

在一些实例中，所述衍生物的结构通式如式ⅰ所示：

(式ⅰ)

式中，r1～r4独立选自h、c1～c3的烷基；r5选自c1～c3的烷基。

在一些实例中，r1～r4中的至少2个为甲基。

在一些实例中，r1～r4中的至少3个为甲基。

在一些实例中，r5为甲基。

在一些实例中，r1～r4中的至少2个为甲基，r5为甲基。

在一些实例中，r1～r4中的至少3个为甲基，r5为甲基。

在一些实例中，r1～r4独立选自h、c1～c3的烷基；r5选自c1～c3的烷基，所述衍生物还包括其药学上可接受的盐。

在一些实例中，所述衍生物为脱氢紫堇碱药学上可接受的盐。

本发明的有益效果是：

发明人研究发现：（1）相比于模型组，超声b超图显示给药(dhc)后apoe^-/-小鼠的斑块形成减少，多普勒血流分析显示dhc能够降低小鼠升主动脉、主动脉弓、头臂干三处的血流速度，提示dhc改善血管顺应性。（2）相比于模型组，he染色显示dhc能够减少动脉粥样硬化病变的面积；油红o染色显示dhc减少了斑块内油脂面积；masson染色显示dhc组胶原纤维的含量更高；f4/80免疫荧光染色显示给药后巨噬细胞浸润减少。表明dhc能够减轻apoe^-/-小鼠的动脉粥样硬化，dhc及其衍生物，特别是dhc的盐，有望开发成为新型的动脉粥样硬化改善或治疗制剂。

附图说明

图1是小鼠体内超声成像结果；a.超声生物显微镜胸主动脉长轴视图中的b超图；b.多普勒血流分析升主动脉处的血流速度；c.多普勒血流分析主动脉弓处的血流速度；d.多普勒血流分析头臂干处的血流速度。数据表示为mean±sem。n=6，*p<0.05，**p<0.01。

图2是dhc可减轻apoe^-/-小鼠的动脉粥样硬化的结果。a.主动脉根部冰冻切片的he染色；n=5。比例尺，250毫米。b.主动脉根部冰冻切片的油红o染色；n=5。比例尺，250毫米。c.主动脉根部冰冻切片的masson染色；n=6。比例尺，300毫米。d.主动脉根部冰冻切片的f4/80免疫荧光染色；n=7。比例尺，100毫米。e.主动脉根部冰冻切片的αsma免疫荧光染色；n=6。比例尺，100毫米。f.斑块易损性（（巨噬细胞染色％+脂质染色％）/（vsmc染色％+胶原蛋白染色％））的定量分析。数据表示为mean±sem。*p<0.05，**p<0.01；ns，没有显著性差异。

图3是dhc抑制血管和体内炎症的结果；a.血浆tnf-α的elisa测定；n=6-7。b.血浆il-1β的elisa测定；n=6-7。c.rt-pcr检测主动脉中tnf-α，nlrp3和il-18mrna的表达。所有值均为mean±sem。*p<0.05，**p<0.01。

图4是cck8测定不同剂量脱氢紫堇碱（dhc）的细胞毒性结果；用dmso和10、25、50、100、200μm的dhc处理bmdm24h，cck8测定的细胞生存率，数据表示为mean±sem。**p<0.01。

图5是dhc抑制巨噬细胞活化的结果。a.用dmso和dhc（100μm）处理原代骨髓巨噬细胞24h后，提取细胞总rna，进行转录本测序的基因表达量差异分析；b.kegg富集通路分析；c.计算得出骨髓巨噬细胞中il-1β、ccl5、vcam1、cxcl10、cx3cr1、ccr2、ccr3、ccl22、ccr1l1、ccl24、tlr1、tlr9的fpkm值。结果数据表示为mean±sem。n=3，*p<0.05，**p<0.01。

图6是dhc在体外抑制巨噬细胞的炎症的结果。在六孔板中培养巨噬细胞5天，提取细胞rna和蛋白，用rt-pcr和wb观察炎症因子的变化。a.用100μm的dhc分别处理原代骨髓巨噬细胞6h和12h，rt-pcr检测il-18和il-1β的变化；b.分别用50μm和100μm的dhc处理原代骨髓巨噬细胞12h，rt-pcr检测il-18和il-1β的变化；c.用100μm的dhc分别处理原代骨髓巨噬细胞12h和24h，wb检测cd80和il-18蛋白表达水平及蛋白印迹灰度值统计图；d.分别用50μm和100μm的dhc处理原代骨髓巨噬细胞24h，wb检测cd80和il-18蛋白表达水平及蛋白印迹灰度值统计图；e.在lps（脂多糖）/ifnγ（干扰素γ）诱导的情况下，用dmso和dhc（100μm）处理原代骨髓巨噬细胞24h，wb检测cd80、inos、nlrp3、il-1β、il-18的蛋白表达水平及蛋白印迹灰度值统计图。数据表示为mean±sem。*p<0.05，**p<0.01。

图7是dhc抑制erk1/2和p65磷酸化的结果。用dhc预先处理bmdm（骨髓源性巨噬细胞）30min，再将细胞与lps（脂多糖）共同孵育处理，检测p65和mapk（有丝分裂原活化蛋白）通路蛋白的表达情况。a.用dmso和100μmdhc预先处理bmdm30min，然后lps（脂多糖）诱导15min和30min。wb检测p65和mapk（有丝分裂原活化蛋白）通路蛋白的表达情况及蛋白印迹灰度值统计图；b.用dmso和50μm，100μm的dhc预先处理bmdm30min，然后再用lps（脂多糖）诱导15min，wb检测p65和mapk（有丝分裂原活化蛋白）通路蛋白的表达情况及蛋白印迹灰度值统计图。数据表示为mean±sem。*p<0.05，**p<0.01。

具体实施方式

下面结合实验，进一步说明本发明的技术方案。

实验材料与方法

实验动物

spf级apoe^−/−（c57bl/6j,8周）小鼠，雄性，购自北京华阜康生物科技股份有限公司。动物批准字号（scxk2019-0008）。所有实验操作符合guideforthecareanduseoflaboratoryanimals（nih颁布，no.85-23）要求，获得广州医科大学动物保护委员会批准。小鼠饲养环境温度（22-26）℃；湿度（40-70）%；12h光照循环，饲养期间自由摄食饮水。

实验细胞

骨髓巨噬细胞（bmdm）来源于6-8周大的c57bl/6j小鼠的腿部骨髓

动脉粥样硬化动物模型构建

载脂蛋白e（apoe）是一种主要在肝脏和大脑中合成的糖蛋白，用作清除乳糜微粒和非常低密度脂蛋白（vldl）残留物的受体配体。这种糖蛋白缺乏（apoe^-/-）会导致血浆总胆固醇水平升高，主要是vldl和乳糜微粒。高脂饮食或西方饮食使这增加三倍，所以apoe^-/-模型广泛用于实验性动脉粥样硬化的研究。8周龄的apoe^-/-小鼠适应环境一周，一周后给予15只小鼠西方饮食（0.15％胆固醇和21％脂肪）喂养12周。动脉粥样硬化的动物模型是基于富含胆固醇/西方饮食喂养下加速了斑块形成，涉及到胆固醇代谢的基因和引入动脉粥样硬化的其他危险因素。

动物给药及分组

15只apoe^-/-小鼠随机分为动脉粥样硬化组（as，n=7）和给药组（as+dhc，n=8），喂养西方饮食12周，并同时腹腔注射12周。动脉粥样硬化组注射溶剂媒介物，给药组注射dhc。每三天称量一次体重，记录体重变化。

脱氢紫堇碱（dhc），纯度≥98%，常温储存，将其溶解在二甲基亚砜（dmso）中制成储存浓度为60mg/kg的混悬液，工作浓度按照5mg/kg/day对给药组小鼠进行腹腔注射。每天根据体重计算注射量，现配现用，工作浓度按照1%dhc、30%peg300、5%tween80和64%ddh2o的配比进行溶解。dmso作为对照组。

小鼠超声成像

使用vevo2100超高分辨率小动物超声实时成像系统对小鼠进行超声成像。用异氟烷麻醉小鼠，然后仰卧在温度和心电图（ecg）控制的板上。将小鼠胸部部位的毛发用脱毛膏去掉，在皮肤上涂抹上偶合剂，用450探头进行测量。在测量过程中，将动物维持在大约450次/分钟的正常生理心率下，使用b超模式观察小鼠胸主动脉中动脉粥样硬化斑块形成的程度，并使用多普勒血流测量升主动脉，主动脉弓，头臂干三处动脉的血流速度。

血脂检测

小鼠眼球取血，收集在干净的含肝素的采血管中，4℃、3000rpm，离心30min获得血浆。使用日立7600全自动化生化分析仪检测小鼠血浆中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇的四项血脂含量。

冰冻切片的制作

将小鼠用异氟烷气麻后，用pbs进行心脏灌流，灌流完全后，剥离小鼠心脏和连接心脏的主动脉直至恰分支处。沿着垂直主动脉流出道的横切面从中间切开心脏，再切除主动脉，将含有主动脉根的心脏部分包埋到提先灌好的oct包埋盒中，让流出道垂直于包埋盒，负80℃凝固。将冰冻好的组织放置于冰冻切片机上切片，修片好后，以片厚6μm的厚度切到含有三尖瓣的位置，用黏附载玻片收集切片，负80℃保存。

he染色

he染色可以观察组织结构和病变情况，将模型组和给药组的主动脉根部的冰冻切片进行he染色。

（1）4%多聚甲醛固定20min；

（2）蒸馏水浸泡2min，洗去残余的多聚甲醛；

（3）苏木素染色液染2min，使细胞核着蓝色；

（4）浸入自来水冲洗去除多余的染色液，约10min；

（5）蒸馏水再洗一遍；

（6）用酸性乙醇分化液分化几秒；

（7）用自来水冲洗10min返蓝；

（8）伊红染色液染1min；

（9）梯度脱水：70%乙醇1min；80%乙醇1min；95%乙醇1min；100%乙醇2min；

（10）二甲苯透明10min，新鲜的二甲苯再透明5min；

（11）用中性树胶封片；

（12）阴凉处晾干。

用数字病理扫描仪扫描进行成像，观察模型组和给药组组织病变情况。

油红o染色

动脉粥样硬化的主要病变特征是脂质在动脉部分沉积，油红o染色能将组织内的脂肪染成红色，将模型组和给药组的主动脉根部的冰冻切片进行油红o染色。

（1）制成油红o染色悬浮液，用蒸馏水（6：4）稀释油红o悬浮液，过滤；

（2）冰冻切片用4%多聚甲醛固定20min；

（3）水化3次，每次3min；

（4）60%异丙醇脱色，脱去脂质以外的红色染色；

（5）水化3次，每次1min，终止异丙醇的脱色；

（6）苏木素染色2min，使细胞核着蓝色；

（7）自来水冲洗10min返蓝；

（8）用甘油封片（90%甘油+10%双蒸水）；

（9）阴凉处晾干。

用数字病理扫描仪扫描进行成像，观察模型组和给药组脂质累积情况。

masson染色

masson染色是显示组织中纤维染色的主要方法之一，是反应胶原纤维染色含量的一种技术。将模型组和给药组的主动脉根部的冰冻切片进行masson染色。

（1）冰冻切片4%多聚甲醛固定20min；

（2）水化3次，每次1min；

（3）切片加入bouin液，于室温作用一晚进行媒染，然后流水冲洗至切片上的黄色消失；

（4）天青石蓝染色液滴染2min，稍水洗；

（5）苏木素染色液滴染3min，稍水洗；

（6）酸性乙醇分化液分化数几秒，流水冲洗10min；

（7）丽春红品红染色液滴染3min，蒸馏水冲洗3次；

（8）磷钼酸溶液处理15min；

（9）倾去上液，切片不用水洗，直接滴入苯胺蓝染色液染5min，稍水洗；

（10）弱酸溶液处理2min；

（11）95%的乙醇快速脱水1次，无水乙醇脱水3次，每次5-10s；

（12）二甲苯透明3次，每次各10min；

（13）中性树胶封片；

（14）阴凉处晾干。

用数字病理扫描仪扫描进行成像，观察模型组和给药组胶原纤维的含量。

免疫荧光染色

动脉粥样硬化的特征在于动脉壁内单核细胞/巨噬细胞，平滑肌细胞和淋巴细胞的积累。将模型组和给药组的主动脉根部的冰冻切片进行免疫荧光染色，观察f4/80和αsma的表达情况。

（1）冰冻切片4%多聚甲醛固定45min；

（2）pbs浸泡10min；

（3）封闭1h，封闭液配方（0.3%triton100+10%wbr+pbs）；

（4）一抗孵育过夜（12-16h），一抗稀释液配方（0.3%triton100+10%wbr+pbs）；

（5）0.3%triton100洗组织总共洗3h，每次30min；

（6）二抗（种属根据一抗选择）和dapi共孵育1h，二抗稀释液配方（0.3%triton100+10%wbr+pbs），dapi用来标记细胞核。

（7）0.3%triton100洗组织洗1h，每次15min；

（8）pbs浸泡5-10min；

（9）滴加抗荧光淬灭剂，用指甲油封片，4℃保存。

共聚焦显微镜拍摄10倍和20倍镜下的荧光图片，观察模型组和给药组组织中f4/80和αsma蛋白的表达情况。

数据统计

根据正态分布，使用未配对的两面student-t检验或单向anova检验来计算p值。如果p<0.05，则认为具有统计学意义。数据表示为平均值±sem。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001和ns=不显着（p>0.05）。

结果：

为了评估dhc对动脉粥样硬化斑块的影响，我们使用了apoe^-/-小鼠，apoe^-/-小鼠随着年龄增长或进食富含脂肪，蔗糖和胆固醇的西方饮食而自发形成动脉粥样硬化病变。我们随机将apoe^-/-小鼠分成模型组和给药组，喂养西方饮食并同时腹腔注射给药12周后进行小鼠超声成像。如图，我们从小鼠的胸主动脉b超图箭头所指的头臂干处可以看出，模型组小鼠相比给药组小鼠的动脉粥样硬化斑块形成更明显（图1a）。同时也通过多普勒血流分析升主动脉（aa），头臂干（ba）和主动脉弓三处的血流速度，发现给药组相比于模型组血流速度下降（图1b,c,d），说明给药组血管的顺应性更好，dhc能改善血管顺应性。

脱氢紫堇碱可减轻apoe^-/-小鼠的动脉粥样硬化

在人类中，动脉粥样硬化斑块通常可以在主动脉，冠状动脉以及颈动脉和脑动脉中找到。小鼠的好发部位是主动脉根，主动脉弓和头臂干，左颈动脉和锁骨下动脉的分支点。我们对apoe^-/-小鼠主动脉根部的冰冻切片进行染色，与模型组小鼠相比，he染色显示给药组病变面积减少（图2a），油红o染色显示给药组的油脂阳性面积减少（图2b），masson染色显示给药组的胶原含量更高（图2c）。并且f4/80和αsma（平滑肌肌动蛋白）的免疫荧光结果显示给药组相比于模型组巨噬细胞含量明显减少，而平滑肌肌动蛋白阳性区域没有明显差异（图2d，e）。根据以上的数据得出dhc给药后斑块易损性（（巨噬细胞染色％+脂质染色％）/（vsmc染色％+胶原蛋白染色％））明显降低（图2f）。以上结果表明，dhc能够减轻动脉粥样硬化并能增加斑块稳定性。

脱氢紫堇碱抑制血管和体内炎症

我们通过elisa检测血浆中促炎性细胞因子的表达，如图所示给药组与模型组小鼠相比，给药组小鼠血浆中的tnf-α和il-1β水平显著降低（图3a，b）。我们还使用rt-pcr检测了喂养一周西方饮食并同时注射一周dhc的apoe^-/-小鼠的主动脉血管中炎症因子的表达，结果显示相比模型组，给药组炎症因子如tnf-α、nlrp3和il-18的表达量显著性降低（图3c）。这些结果表明dhc抑制了血管炎症和全身炎症，从而减轻了炎症反应。

脱氢紫堇碱（dhc）对细胞毒性的作用

为了评估脱氢紫堇碱对细胞毒性的作用，我们从c57小鼠中提取骨髓巨噬细胞，然后在96孔板中培养五天，细胞分化完全后，给予5种不同剂量的脱氢紫堇碱处理细胞24h，使用cck8分析法测试细胞活力。根据吸光度计算出不同浓度dhc处理细胞的生存率，结果显示与对照组（dmso）相比，10、25、50、100μm的dhc对细胞没有明显的毒性，但是200μm的dhc对细胞有毒性作用，导致细胞活性下降（图4）。

rna-seq结果表明脱氢紫堇碱抑制了巨噬细胞的活化

为了检测dhc对巨噬细胞活化的作用，用含m-csf的1640培养基培养原代骨髓巨噬细胞5天，诱导单核细胞分化成巨噬细胞后，用100μm的脱氢紫堇碱处理巨噬细胞24h，提取细胞总rna，进行转录组测序。采用deseq2对样本转录本基因进行差异表达量分析，我们发现与dmso组相比，用dhc处理有接近565个基因处于下降水平，260个基因处于上升的水平（图5a）。kegg富集通路分析与炎症和免疫相关等的通路，结果显示dhc处理后tnf信号通路，细胞因子与细胞因子受体的相互作用，结核，人t细胞白血病病毒1感染和foxo信号通路受影响较大（图5b）。并且通过fpkm值显示dhc处理导致相关的炎症因子，黏附分子和趋化因子，toll样受体，如il-1β、ccl5、vcam1、cxcl10、cx3cr1、ccr2、ccr3、ccl22、ccr1l1、ccl24、tlr1、tlr9表达量成显著性下降（图5c）。这些结果表明，dhc抑制了巨噬细胞的活化。

脱氢紫堇碱在体外抑制巨噬细胞的炎症

ifn-γ（干扰素γ）和lps（脂多糖）的经典组合通过刺激巨噬细胞，巨噬细胞朝着促炎症表型极化，该表型反映了动脉粥样硬化斑块的环境。为了探索dhc对巨噬细胞炎症的作用，选择了不同浓度的无细胞毒性的dhc用于进一步的实验。在无炎症诱导的情况下，将50μm和100μm的dhc处理bmdm12h，或100μm的dhc处理bmdm6h或12h,然后用rt-pcr检测炎症因子mrna的表达情况，结果显示给药组il-18和il-1βmrna表达下降并具有显著性差异（图6a,b）。接下来，为了观察蛋白水平的变化，同样用50μm和100μm的dhc处理bmdm24h，或100μm的dhc处理bmdm12h或24h，然后用westernblot检测炎症因子蛋白的表达情况，结果显示相比于对照组（dmso组），100μm的dhc处理24h后，il-18和cd80蛋白表达下降并具有显著性差异（图6c,d)。并且用lps（脂多糖，100ng/ml）和ifnγ（干扰素γ，20ng/ml）组合激活巨噬细胞炎症，相比于对照组（dmso组），用100μm的dhc处理24h，westernblot发现cd80、inos、nlrp3、il-18和il-1β等炎症因子蛋白水平处于明显的下降趋势（图6e）。因此，脱氢紫堇碱（dhc）在不同程度上抑制了巨噬细胞的炎症，即减少了促炎细胞因子的产生。

脱氢紫堇碱抑制erk和p65信号的激活

磷酸化是细胞内信号传导的基本组成部分。作为核转录因子，nf-κb在调节炎症相关基因的表达中起着关键作用。nf-κb是p65和p50的异源二聚体，它与iκb结合后仍处于细胞质失活状态,当受刺激后，iκb被磷酸化，iκb亚基被泛素化修饰，进而被蛋白酶降解，游离的nf-κb异二聚体然后转移到细胞核中，与有nf-κb结合位点的基因结合，启动转录进程。已知的nf-κb通路激活因子有很多，包括：tnf-α、il-1β、il-12、inos、cox2、趋化因子、粘附分子、集落刺激因子等。mapk（有丝分裂原活化蛋白）通路参与炎症过程中促炎细胞因子的产生，并激活lps（脂多糖）诱导的巨噬细胞中的nf-κb。为了探究dhc是否通过调mapk（有丝分裂原活化蛋白）和p65信号通路来抑制lps（脂多糖）诱导的炎症因子表达，我们将用dhc（100μm）先预处理骨髓巨噬细胞30min，然后再加入lps（脂多糖）分别处理15和30min，westernblot比较对照组和给药组中mapk（有丝分裂原活化蛋白）和p65的变化。蛋白质印迹数据显示dhc抑制了lps（脂多糖）诱导的p65和erk1/2的磷酸化，而对p38和jnk的磷酸化没有抑制作用（图7a，b）。该结果表明dhc对nf-κb和mapk（有丝分裂原活化蛋白）的抑制作用是通过抑制p65和erk1/2的磷酸化。

综上，可知dhc通过抑制巨噬细胞p65和erk通路的磷酸化，减少inos，cd80，nlrp3，il-1β和il-18炎症因子的释放，从而降低巨噬细胞炎症发生，减轻动脉粥样硬化的发展并增加动脉粥样硬化斑块的稳定性。

可见预见，dhc的盐，也有望产生与dhc相同或极其接近的功效，同样可以改善或治疗动脉粥样硬化。如式ⅰ所示的dhc衍生物，也可以改善或治疗动脉粥样硬化：

(式ⅰ)

式中，r1～r4独立选自h、c1～c3的烷基；r5选自c1～c3的烷基。

以上是对本发明所作的进一步详细说明，不可视为对本发明的具体实施的局限。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的简单推演或替换，都在本发明的保护范围之内。