增强抗炎及杀菌力的用于预防或改善牙周病的组合物的制作方法

本申请是申请日为2015年06月18日、申请号为201580032638.6、发明名称为“增强抗炎及杀菌力的用于预防及改善牙周病的组合物”的中国专利申请的分案申请。本发明涉及一种用于改善及预防牙周病的口腔组合物，其抗炎症效果优异且通过增加杀菌剂的齿面附着力从而使杀菌效果极大化。
背景技术：
：牙周病一般还称为风齿，根据程度分为牙龈炎(gingivitis)和牙周炎(periodontitis)。牙周病的直接原因在于：由口腔内细菌在牙齿上持续地形成的被称为牙菌斑(plaque)的细菌膜，牙菌斑未被去除而变硬时转变为牙结石。当牙菌斑和牙结石堆积时牙龈从牙齿萎缩，由此缝隙张开导致在牙齿和牙龈之间形成牙囊肿，并且牙周炎越严重时牙囊肿的深度越深。随着牙囊肿变深在齿周韧带上产生炎症从而产生骨流失的现象即为牙周病。症状较轻且恢复较快的形态的牙周病仅局限在牙龈(齿龈)、即软组织的形态称为牙龈炎，并且这样的炎症延伸至牙龈和齿槽骨(牙龈骨)周围的情况称为牙周炎。这种牙周炎的病因可列举出，存在于口腔内的有害细菌排出的炎症诱发物质脂多糖(lipopolysaccharide,lps)。由所述脂多糖引起牙龈肿胀、出血等炎症，至今为止已经进行了很多研究，通过添加用于改善这种炎症的抗炎物质(主要是生药提取物)从而确认效果。同时，虽然韩国国内产品中已有分别使用泛酰醇、生育酚乙酸酯的先例，国外产品中已有使用甘草酸二钾的产品的先例，但已确认：没有以改善及预防牙周病为目的而将所述成分全部、尤其选择及组合地进行制作的产品。牙周炎的另一病因可列举出牙菌斑以及牙结石。为了预防及改善牙菌斑和牙结石，需要对直接病因口腔内有害细菌进行杀菌，为此现有研究以及市售产品中使用各种杀菌剂。但是，虽然增加杀菌剂的含量可以增加效果但无法避免口腔刺激，而且也不能忽视费用问题，因此目前无法继续增加含量。为此，开展的很多研究中，使用增稠物质等提高相同含量的杀菌物质的齿面附着率从而增强杀菌力。与此相关的技术例如有，韩国专利号10-2006-0089890中公开的增强二氯苯氧氯酚的口腔内残留效果的方法，韩国授权专利公报10-0659139中公开的将特定的非离子接触面活性剂以最佳配比浓度增强抗菌力的组成，韩国专利号10-2012-0058713中公开的包含聚-γ-谷氨酸从而增强口腔内阳离子抗菌剂残留的组成。但是根据这样的现有技术，只能实现利用抗菌作用的通过对牙周炎病菌进行杀菌的预防，而对已经发生的牙龈炎症几乎没有改善效果。另外，虽然韩国授权专利10-0167019中公开了利用nα-长链酰基碱性氨基酸低级烷基酯或其盐而增加作为杀菌物质的氯化十六烷吡啶的齿面附着力，但实际应用时没有显现出期待的效果。由此，本发明人们为了开发牙周患者的口腔内刺激较小且效果增强的用于改善及预防牙周病的口腔用组合物而进行了认真研究，结果确保了抗炎症效果优异、通过增加杀菌剂的齿面附着力而杀菌效果被极大化的优秀的组成，并确认这样的组成在临床试验中也显现出优秀的效果，从而完成了本发明。技术实现要素：本发明要解决的问题本发明的目的在于，提供一种抗炎症及杀菌效果同时优秀的用于预防或治疗牙周病的医药组合物。本发明的另外一个目的在于，提供一种抗炎症及杀菌效果同时优秀的用于预防或改善牙周病的口腔组合物。用于解决问题的技术方案作为达成所述目的的一个方式，本发明提供一种包含甘草酸或其盐、泛酰醇及生育酚乙酸酯的、用于预防或治疗牙周病的医药组合物。作为另外一个方式，本发明提供一种包含甘草酸或其盐、泛酰醇及生育酚乙酸酯的、用于预防或改善牙周病的口腔组合物。所述组合物还包含阳离子杀菌剂。本发明提供一种包含甘草酸或其盐、泛酰醇及生育酚乙酸酯的用于预防或治疗牙周病的医药组合物。另外，本发明提供一种包含甘草酸或其盐、泛酰醇及生育酚乙酸酯的用于预防或改善牙周病的口腔组合物。发明效果本发明的组合物基于抗炎及杀菌效果而显现出优秀的抑制生成牙菌斑及预防牙龈炎的效果，从而能够有效地应用于预防、改善或治疗牙周病的用途。附图说明图1为根据抗炎试验结果的图表来表示实施例1-9、比较例1-5的no生成量的程度的图。图2及图3为表示牙龈炎或轻度的牙周病患者在使用实施例3-1和普通牙膏时牙菌斑指数的变化值和经过6周后的变化量的图。图4及图5为表示牙龈炎或轻度的牙周病患者在使用实施例3-1和普通牙膏时牙龈指数的变化值和经过6周后的变化量的图。具体实施方式本发明的发明人为了开发兼具优异的抗炎效果及杀菌力的、用于预防及改善牙周病的口腔用组合物而进行研究的过程中，确定将甘草酸或其盐、泛酰醇及生育酚乙酸酯混合使用时具有优异的抗炎症效果，并确定将这些按照固定成分比使用时阳离子杀菌剂的牙齿粘着力增加，杀菌力随之增强，从而完成了本发明。因此，在优选的实施方式中，根据本发明的组合物可以为抗炎症、杀菌或抗牙菌斑用组合物。本发明中所使用的甘草酸为来自甘草的成分，在炎症反应过程中减少炎症反应介质物的生成从而具有抑制炎症的效果，虽然在本发明中能够以如甘草酸二钾、甘草酸铵的形态而被使用，但并非限定于所述例示的盐。由于甘草酸或其盐能够对阳离子杀菌剂的齿面附着效果产生影响，因此其组成含量的调整较为重要。具体的一个实施方式为，根据本发明的组合物，在整体为100重量份的组合物中，所述甘草酸或其盐可以占0.001至2重量份、0.01至1重量份或0.05至0.5重量份。当占2重量份以上时产品的香味降低，所包含的阳离子杀菌剂的齿面附着力减小而影响杀菌力，导致效果下降。本发明所使用的泛酰醇促进细胞的生长和组织的恢复，并且防止炎症和红肿从而具有保护口腔内伤口的效果。当并用生育酚乙酸酯及甘草酸或其二钾盐时，显现出更优秀的改善牙龈炎症的效果。在本发明一个实施方式中，在整体为100重量份的组合物中，所述泛酰醇可占0.005至5重量份、0.01至3重量份或0.1至2重量份。当低于0.005重量份时对改善牙周病的效果及保护伤口的效果可能微乎其微，而当超过5重量份时由于相对于添加量而效果上升的程度较小从而效率可能较低。本发明所使用的生育酚乙酸酯为维生素e，是可以促进牙龈的血液循环并且影响治疗牙龈伤口及炎症的物质，也是公知的抗氧化物质。在本发明的另一个实施例中，在整体为100重量份的组合物中，所述生育酚乙酸酯可占0.01至1重量份、0.05至0.5重量份或0.1至0.5重量份。当低于0.05重量份时效果可能微乎其微，而超过1重量份时可能影响制剂的稳定性。在本发明的另一个实施例中，所述组合物还可以包含阳离子杀菌剂。所述阳离子杀菌剂具有阳离子并与齿面细菌膜或唾液蛋白质结合从而抑制牙结石并显现出对唾液内细菌的杀菌作用，具体使用选自氯化十六烷吡啶、己基二甲基苄基氯化铵、苯扎氯铵及双氯苯双胍己烷中的一种以上，优选使用氯化十六烷吡啶但并非限定于此。本发明的另一个实施例中，在整体为100重量份的组合物中，所述阳离子杀菌剂可占0.01至1重量份或0.01至0.1重量份，但并非限定于此。所述口腔用组合物还可以包含添加剂，例如可以包含氟化合物、研磨剂、润湿剂、甜味剂、香味剂、起泡剂、结合剂、防腐剂、ph调节剂等添加剂，但并非限定于此。所述氟化合物通过增强牙齿的耐酸性从而起到预防龋齿的作用，可以为选自例如氟化钠、单氟磷酸钠、氟化亚锡中的一种或它们的混合物，优选为单氟磷酸钠但并非限定于此。在整体为100重量份的所述口腔用组合物中，所述氟化合物可占0.01至2重量份、0.1至1.5重量份或0.5至1重量份。所述研磨剂可以为选自二氧化硅、碳酸钙、含水氧化铝、磷酸一氢钙以及重碳酸钠中的一种或它们的混合物，在整体为100重量份的所述口腔用组合物中，可占10至60重量份。所述润湿剂可以为选自非结晶性山梨糖醇液、甘油、丙二醇及聚乙二醇中的一种或它们的混合物，相对于100重量份的所述全部口腔用组合物，可以被包含3至60重量份。所述甜味剂可以为选自糖精钠、木糖醇、赤藓糖醇、甜菊糖、三氯蔗糖、安赛蜜以及阿斯巴甜中的一种或它们的混合物，在整体为100重量份的所述口腔用组合物中，可占0.01至2重量份。所述香味剂可以为选自薄荷油、留兰香油及薄荷醇中的一种或它们的混合物，并且所述香味剂的含量可以为在口腔用组合物中常用的含量，并未被特别地限定。所述起泡剂可以为选自月桂醇硫酸钠、月桂酰肌氨酸钠、椰油酰胺丙基甜菜碱、聚氧乙烯氢化蓖麻油以及聚氧乙烯聚氧丙烯缩合高分子中的一种或它们的混合物，在整体为100重量份的所述口腔用组合物中，可占0.5至5重量份。所述结合剂可以选自卡拉胶、黄原胶、羧甲基纤维素钠以及聚乙烯吡咯烷酮中的一种或它们的混合物，在整体为100重量份的所述全部口腔用组合物中，可占0.1至5重量份。所述防腐剂可以为对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯。所述ph调节剂可以为选自磷酸二氢钠、磷酸一氢钠、柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸、酒石酸、酒石酸钠中的一种或它们的混合物，本发明的口腔用组合物通过采用所述ph调节剂而调节为适当的ph，例如ph5至8。根据本发明的组合物可以被制作为各种剂型，具体可包括牙膏、口腔清洁剂、漱口水、口腔按摩霜等剂型。另外，本发明所提供的口腔用组合物的配比成分除了在上述所说明的成分以外还可以根据组合物的用途和种类以各种配比使用。实施例下面，为帮助理解本发明列举出实施例并详细地进行说明。但是以下实施例只是对本发明的内容的例示，而本发明的范围并非限定于以下实施例。本发明的实施例是为了将本发明向本领域技术人员更完整地进行说明而被提供的。<制备例1>制备实施例1至9、比较例1至5的组合物如下表1，制备出改善牙龈炎症的各种浓度成分的组合物。为了排除被添加于制剂中的其他原料的影响，仅以如下表中的组成比例来制备组合物。将作为比较例而被使用的组合物的成分记载于表2至表3中。为了有助于对牙周病用而市售的益周适(gsk)及itchi(dong-wha药品)的药效成分组成和本发明的组成进行对比，比较例4制备出具有与所述市售产品相同的组成的组合物，而为了确定溶剂对组合物的影响而制备比较例5。【表1】【表2】含量(％)甘草酸二钾泛酰醇生育酚乙酸酯乙醇纯净水比较例10.1--5至100比较例2-1-5至100比较例3--0.25至100【表3】含量(％)甘菊酊剂拉檀根酊剂没药酊剂乙醇纯净水比较例40.1250.1250.0625至100比较例5---5至100<制备例2>制备实施例1-1至9-1及比较例1-1至1-3的液体牙膏为了确定添加所述改善炎症组合物后制得的基于阳离子杀菌剂的液体牙膏的杀菌力，制备了液体牙膏。作为实施例1-1至9-1及比较例1-1至1-3的牙膏，以如下表4中所记载的组成比例使用甘草酸二钾、泛酰醇、及生育酚乙酸酯；并且使用：单氟磷酸钠重量百分比0.76％，氯化十六烷吡啶重量百分比0.05％，聚氧乙烯氢化蓖麻油重量百分比0.5％，乙醇重量百分比5％，香味剂适量，添加纯净水使整体含量为重量百分比100％，从而制备液体牙膏。将生育酚乙酸酯、香味剂、聚氧乙烯氢化蓖麻油溶解到乙醇中，并将剩下的成分溶解到纯净水中。将前面制备的乙醇组的溶液倒入纯净水组中进行溶解然后定容制备。【表4】含量(％)甘草酸二钾泛酰醇生育酚乙酸酯实施例1-10.00510.2实施例2-10.0110.2实施例3-10.110.2实施例4-1110.2实施例5-10.10.010.2实施例6-10.10.10.2实施例7-10.130.2实施例8-10.110.05实施例9-10.110.5比较例1-10.100比较例2-1010比较例3-1000.2<试验例1>氧化氮(no)生成抑制能力的评价为了确定抗炎症成分甘草酸二钾在不同浓度时的抗炎症效果，对源自牙周病病原菌牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)的脂多糖(lps)进行处理从而诱发炎症，并且基于评价物质对lps处理后生成的炎症介质物no量的减小程度进行了评价。具体方法如下。将巨噬细胞(raw264.7cell)(韩国细胞株银行(kclb),韩国)种植(seeding)在96孔培养板中并培养24小时。换成培养基(dmem培养基+10％fbs+青霉素+链霉素)并在约1小时之后进行药物处理，在进行药物处理1小时之后对lps进行处理，并且在24小时后提取50μl/well的培养细胞的培养基，与测量液(将1％的磺胺的5％的磷酸和0.1％的萘乙二胺的5％的磷酸在测量之前以1：1进行混合使用：1％sulfanilamidein5％phosphoricacidand0.1％naphthylethylenediaminein5％phosphoricacid)以1:1进行混合，并且在540nm处利用吸光度测量了no生成值。将结果示于如下表5及图1中。【表5】如所述表5及图1所示，与比较例1至5相比，在包含甘草酸二钾、泛酰醇、生育酚乙酸酯的实施例中的组合物效果优异，炎症反应介质物no生成量减少。另外，实施例1至9与具有市售产品组成的比较例4相比抗炎作用更优异。虽然在实施例中确定了根据三种物质组合物的浓度的no生成量变化，但结果显示泛酰醇和生育酚乙酸酯在固定浓度以上时效果不再增加。为了确定这样的抗炎物质被投入到制剂中时产生的影响而实施了附加试验。<试验例2>阳离子杀菌剂的齿面附着力评价将羟基磷灰石(ha)(bio-radlaboratories，inc.，u.s)250mg以直径成为13mm的方式形成圆盘(disc)后在600℃下烧结6小时，从而制备了hadisc。将上述hadisc投入到提取的唾液2ml中并放置18小时进行前处理后，再次转移至分别具有实施例1-1至9-1及比较例1-1至3-1的试验液1ml的小瓶(vial)中，并置入37℃100rpm条件的水槽(waterbath)中反应30分钟。之后将disc取出，并用蒸馏水6ml洗涤粘在表面上的试验液，并且置入盛有萃取溶剂(50mm月桂醇硫酸钠，40mm柠檬酸缓冲液(ph3.0)/乙腈＝30/70)10ml的小瓶(vial)中，进行20分钟的超声处理(sonication)。将萃取的液体用0.45μm过滤器过滤并且根据氯化十六烷吡啶(cetylpyridiniumchloride,cpc)定量法进行了高效液相色谱法(hplc)分析，将结果示于如下表6中。【表6】区分cpc(μg/ml)实施例1-119.9实施例2-119.8实施例3-119.9实施例4-115.8实施例5-117.6实施例6-118.6实施例7-120.1实施例8-118.7实施例9-118.8比较例1-113.3比较例2-120.9比较例3-120.3对添加甘草酸二钾和泛酰醇而制备的实施例进行吸附力评价，其结果确定：虽然甘草酸二钾降低杀菌剂的吸附力，但相反泛酰醇提高氯化十六烷吡啶的齿面附着力。首先对相同剂型、包含类似成分的市售产品的g.u.mdentalrinsegnn(sunstar,japan)的氯化十六烷吡啶的齿面附着力进行确定结果，其值为12.6μg/ml。如所述表7所示，实施例1-1至9-1的齿面附着力显现出与g.u.mdentalgnn相比更优异。与比较例的结果相比则可确定：在实施例1-1至9-1组成的制剂中甘草酸二钾的量越少、泛酰醇的量越多则齿面附着力越大，两种成分的投入含量较为重要。上述所提及的实施例的结果显示：上述甘草酸二钾和泛酰醇的含量能够改善氯化十六烷吡啶的齿面附着力。对所述已进行的抗炎症效果、氯化十六烷吡啶的齿面附着力这两种试验进行综合分析，显示实施例3-1最优异。另外考虑到或许通过提高齿面附着力能够增强杀菌效果，为此采用两种试验结果最优异的实施例3-1和吸附力较低的比较例1-1这两种制剂，对牙周病病原菌的杀菌力进行了评价。<试验例3>针对牙周病病原菌的杀菌力的试验对公知的牙周病病原菌的两种菌株的牙龈卟啉单胞菌(porphyromonasgingivalis)和伴放线放线杆菌(aggregatibacteractinomycetemcomitans)进行了附着及浮游抗菌力试验。通过对杀菌物质的吸附力较高的制剂和较低的制剂进行比较，从而确定附着力的改善是否能够改善杀菌力。[牙龈卟啉单胞菌(porphyromonasgingivalis)培养]在添加羊的血(sheepblood)、氯化血红素(hemin)、甲萘醌(menadione)的大豆酪蛋白琼脂(tsa)培养基中，将菌株进行划线接种，并置入厌氧容器中，并且在37℃恒温箱中培养直至观察到细菌菌落为止。当观察到菌落时，接种到添加有5％马血清(horseserum)、氯化血红素(hemin)、甲萘醌(menadione)的胰酪胨大豆肉汤培养基(tsb)中，进行培养直至a560＝0.7(约1×109cells/ml)。在传代培养后，在75cm2的细胞培养瓶(cellcultureflask)中接种添加了马血清(horseserum)、甲萘醌(heminmenadione)的胰酪胨大豆肉汤(tsb)培养基和培养菌0.1％，并且每隔24小时交换培养基并培养8天。[伴放线放线杆菌(aggregatibacteractinomycetemcomitans)培养]在脑心浸液琼脂(bhiagar)中将菌株进行划线接种并在被调节为37℃、5％co2的恒温箱中进行培养直至观察到细菌菌落。当观察到菌落时接种到脑心浸液肉汤(bhibroth)中并进行培养直至a560＝0.7(约1×109cells/ml)。在75cm2的细胞培养瓶(cellcultureflask)中接种脑心浸液肉汤(bhibroth)和培养菌0.1％，并且每隔24小时交换培养基并培养3天。[附着试验(biofilmmethod)]在培养该菌株后将盛在瓶(flask)中的培养菌丢弃。用硫化铅(pbs)对瓶(flask)内部进行3次清洗后添加3ml的试验溶液并摇晃18秒。用硫化铅(pbs)对瓶(flask)内部进行3次清洗后，添加1ml的硫化铅(pbs)并用细胞刮棒(cellscraper)刮掉生物膜。将刮下来的生物膜摇晃(vortexing)15秒。将悬浊液用硫化铅(pbs)稀释10倍，并且涂抹到事先准备的脑心浸液琼脂(bhiagar)和大豆酪蛋白琼脂平板(tsaplate)中，伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)培养3天后，牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)培养7天后对菌落进行观察。作为阴性对照组，以硫化铅(pbs)取代试验溶液进行了处理。[浮游试验(planktonicmethod)]取1ml在肉汤(broth)中培养的菌群并在13,500rpm下进行离心分离后去除了上层液。在沉淀物中添加试验溶液并且粉碎15秒之后在13,500rpm下进行了30秒的离心分离。去除上层液之后用硫化铅(pbs)清洗3次并用1ml的硫化铅(pbs)进行悬浊。将悬浊液用硫化铅(pbs)稀释10倍后涂抹到事先准备的脑心浸液(bhi)、大豆酪蛋白琼脂平板(tsaplate)中，伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)培养3天，牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)培养7天后对菌落进行了观察。作为阴性对照组，以硫化铅(pbs)取代试验溶液进行了处理。[数学式1]计算生菌数：n＝c×dn：生菌数，c：菌落数(各个菌落数平均值)，d：稀释倍数(稀释液的稀释倍数)[数学式2]减少率：d(％)＝[(a-b)/a]×100d：生菌数减少率，a：对照组的生菌数，b：样品处理组的生菌数将附着试验结果示于表7中，将浮游试验结果示于表8中。【表7】【表8】如上述表7及表8中所示，在实施例3-1的组成条件下，阳离子杀菌剂的齿面附着力增大，显示对牙周病病原菌具有优异的杀菌力。另外，可以发现随着齿面附着力增大而杀菌力增大。综上，采用上述全部试验结果，通过如下的临床试验对实施例3-1的改善及预防齿周炎的效果进行了确认。<试验例4>牙结石及齿缘指数测量为了确定本发明的牙菌斑及牙龈指数，在齿科医院招募被试者进行了试验。以牙龈炎及轻度的牙周炎患者成人男女46名为对象，采用市售中的液体牙膏(gageurin)和本发明的实施例3-1以开放实验的方式进行了试验，试验期间为共6周。对试验前基本量(baseline)进行测量并定标，并且在第2、4、6周对牙菌斑指数(plaqueindex,pi)、牙龈指数(gingivalindex,gi)进行了测量。在试验期间使他们每天使用3次牙膏并且在饭后使用。牙菌斑指数在作为上下颚代表牙齿的#16、21、24、36、41、44牙齿中使用loe-silnessplaqueindex(pi)进行观察，利用牙菌斑着色剂(gumredcote,sunstarbutler,chicago,il,usa)来对牙龈缘上牙菌斑积蓄状态进行观察。在每个牙齿6个部位(唇面、远中面、近中面、舌面、远中舌面、近中舌面)处进行评分，并且用各个齿面分数的平均值求出每个被试验者的全部pi分数。牙龈指数在#16、21、24、36、41、44牙齿中使用loe-silnessgingivalindex(gi)，在每个牙齿的6个部位(唇面、远中面、近中面、舌面、远中舌面、近中舌面)处对牙龈炎症状态进行评分，并且用各个齿面分数的平均值求出每个被试验者的全部gi分数。试验结果示于如下表9及图2至图5中。【表9】(*p<0.05)根据所述表9及图2及图4，牙菌斑指数(pi)和牙龈指数(gi)虽然在两个组都随着时间的经过而减少，但经过6周后实施例3-1的pi、gi指数减少更多，与普通牙膏相比改善率大，且抑制牙菌斑生成(实施例77.19％vs.对照组51.65％)及预防牙龈炎(实施例73.13％vs.对照菌25.74％)的效果(参照图3及图5)优异。另外，在试验期间未见异常反应及副作用。如上所述，本发明的含有氯化十六烷吡啶、单氟磷酸钠、生育酚乙酸酯、甘草酸二钾及泛酰醇的预防及改善牙周病用口腔组合物在牙龈指数、牙菌斑指数中显现出了优异的效果。因此，通过上述5种成分的组合增大了抗炎作用，并且通过添加泛酰醇使齿面附着力增大。由此可知，本发明通过增强抗菌作用，能够进一步增强牙周疾病的改善效果。当前第1页12