滨蒿内酯的新用途

1.本发明属于滨蒿内酯研究领域，尤其涉及滨蒿内酯的新用途。


背景技术：

2.草本植物茵陈蒿在中医中被传统地用于治疗黄疸以及其他肝胆疾病。研究发现，茵陈蒿在糖尿病和脂质代谢疾病中也发挥重要作用。因此，滨蒿内酯作为茵陈蒿的主要提取物受到了许多研究者的关注。滨蒿内酯是一种具有降压作用及利胆、抗炎、镇痛、降血脂、平喘、抗凝等作用的药，分子式为c
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h
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o4。
3.目前，滨蒿内酯主要在肝炎、骨关节炎和心脏疾病治疗中发挥着抗炎作用。近年来一些研究发现滨蒿内酯对结直肠癌和前列腺癌细胞有毒性作用，但其对肺癌细胞的影响尚未报道。
4.针对p53信号通路的研究也较少，p53信号通路抑制剂还需进一步补充研究。


技术实现要素：

5.针对上述问题，本发明提供提供了滨蒿内酯在治疗肿瘤药物中应用，主要提供了肿瘤新的治疗方式，也为滨蒿内酯提供了新的应用途径。
6.为了解决上述问题，本发明采用如下技术方案：
7.滨蒿内酯在制备治疗肿瘤药物中应用。
8.在一些实施例中，所述应用为滨蒿内酯在制备抑制肿瘤细胞增殖药物中应用。
9.在一些实施例中，所述应用为滨蒿内酯在制备促进肿瘤细胞凋亡药物中应用。
10.在一些实施例中，滨蒿内酯在制备治疗肿瘤药物中作为激活p53信号通路有效组份的应用。
11.在一些实施例中，所述应用为滨蒿内酯在制备治疗肿瘤药物中作为诱导dna损伤，激活p53信号通路有效组份的应用。
12.在一些实施例中，所述肿瘤疾病为肺癌。
13.治疗肿瘤的药物，包含滨蒿内酯。
14.在一些实施例中，滨蒿内酯为激活p53信号通路的有效组份。
15.在一些实施例中，滨蒿内酯为通过激活p53信号通路来抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡的有效组份。
16.在一些实施例中，滨蒿内酯为诱导dna损伤，激活p53信号通路的有效组份。
17.抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡的药物，包含滨蒿内酯。
18.激活p53信号通路来抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡的药物，包含滨蒿内酯。
19.诱导dna损伤激活p53信号通路来抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡的药物，包含滨蒿内酯。
20.滨蒿内酯作为p53信号通路激活剂的应用。
21.p53信号通路激活剂，包括滨蒿内酯。
22.p53信号通路激活剂在制备治疗肿瘤疾病的药物中的应用。
23.其中，所述p53信号通路激活剂包括滨蒿内酯。
24.本发明的有益效果是：
25.滨蒿内酯为一种新的p53信号通路激活剂；滨蒿内酯通过诱导dna损伤激活p53信号通路，抑制了肿瘤细胞的增殖，阻滞其细胞周期的进展并促进细胞的凋亡。
附图说明
26.图1为滨蒿内酯cck8增殖实验结果；
27.图2为edu免疫荧光实验结果；
28.图3为流式细胞术检测凋亡结果图；
29.图4为tunel实验结果图；
30.图5为westernblot检测了dna损伤相关分子磷酸化h2a.x(γ
‑
h2a.x)蛋白的表达结果图；
31.图6为转录组测序结果图；
32.图7为细胞周期检测实验结果图；
33.图8为westernblot蛋白免疫印迹实验中检验p53蛋白的表达结果图。
具体实施方式
34.下面结合具体实施方式作进一步说明：
35.滨蒿内酯作为p53信号通路激活剂的应用。
36.p53信号通路激活剂，包括滨蒿内酯。
37.p53信号通路激活剂在制备治疗肿瘤疾病的药物中的应用。
38.其中，所述p53信号通路激活剂包括滨蒿内酯。
39.滨蒿内酯在制备p53失活引起的疾病的药物中的应用。
40.滨蒿内酯在制备治疗p53失活引起的肿瘤疾病的药物中的应用。
41.其中，p53失活引起的肿瘤疾病主要表现为p53失活为该病症的主要诱因，具有直接因果关系。或，作为疾病治疗中，p53失活相关的佐药。凡解决机理相同，问题想近的均应在本技术保护范围内。
42.滨蒿内酯在制备治疗p53失活引起的肿瘤疾病的药物中的应用，其中滨蒿内酯用于激活p53信号通路。
43.p53失活包括阻断和阻碍。
44.p53信号为p53基因信号。
45.所述应用为滨蒿内酯在制备治疗肿瘤药物中作为诱导dna损伤，激活p53信号通路有效组份的应用。
46.肿瘤细胞dna损伤诱导剂，包括滨蒿内酯。
47.所述肿瘤疾病为肺癌、腺癌。
48.治疗p53失活引起的疾病的药物，包含滨蒿内酯，优选的，滨蒿内酯为激活p53信号通路的有效组份。
49.肿瘤细胞dna损伤诱导剂和/或肿瘤细胞p53信号通路激活剂，包括滨蒿内酯。
50.滨蒿内酯在制备抑制p53失活型肿瘤细胞增殖药物中的应用。p53失活型肿瘤细胞增殖在一种情况中表示，该细胞增殖由p53失活诱发。
51.p53失活型肿瘤细胞增殖抑制剂，包括滨蒿内酯。
52.疗肿瘤的药物，滨蒿内酯为通过激活p53信号通路来抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡的有效组份；滨蒿内酯为诱导肿瘤细胞dna损伤，激活p53信号通路的有效组份。
53.诱导肿瘤细胞dna损伤激活p53来抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡的药物，包含滨蒿内酯。诱导肿瘤细胞(一种情况为非小细胞肺癌细胞)dna损伤激活p53信号通路来抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡的药物，包含滨蒿内酯，并且滨蒿内酯作为直接诱导肿瘤细胞dna损伤激活p53信号通路来抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡的的成分。
54.实施例1cck8法检测细胞增殖
55.使用不同浓度的滨蒿内酯(0.25mm，0.5mm，0.75mm)，溶剂为dmso，对a549细胞处理24小时，使用0.1％dmso处理的细胞作为对照组，取处理后的a549细胞，0.25％胰酶消化离心，接种3
×
103个细胞于96孔板中，37℃、5％co2培养箱中培养，每组设置6个复孔，培养96h，每孔加入含10μl cck8工作液的细胞培养液，于细胞培养箱培养2h后，于酶标仪450nm下测定吸光值(a450)，并绘制cck8曲线图。如图1中所示，结果表明，随着滨蒿内酯浓度的增高od值下降。
56.实施例2edu增殖实验
57.将a549细胞按每孔3
×
104个细胞接种于24孔板，待细胞贴壁后，加入滨蒿内酯处理24h。200μl细胞固定液(pbs含4％多聚甲醛)分别加入24孔板，常温下孵育30min，加入甘氨酸200μl(2mg/ml)，摇床脱色孵育5min，500μl pbs分别加入24孔，脱色摇床清洗后200μl渗透剂(0.5％tritonx
‑
100的pbs)分别加入24孔板，摇床脱色孵育10min；pbs清洗，200μl apollo染色反应液分别加入24孔板，常温避光摇床脱色孵育30min弃液；200μl渗透剂分别加入24孔板，pbs清洗2～3次进行摇床脱色，按hoechest：pbs(1∶1000)配染色，每孔200μl，pbs清洗；在共聚焦显微镜下拍照。体现了滨蒿内酯对a549增殖的抑制(图2)，0.5mm滨蒿内酯处理的a549 edu阳性的细胞数显著少于对照组。
58.实施例3tunel染色
59.将药物处理后的细胞接种在细胞爬片上，按照试剂盒要求配制好tunel检测液，在爬片上滴加适量检测液，37℃孵育60min，pbs洗3次，每次5min；最后滴加含dapi的抗荧光淬灭剂，激光共聚焦显微镜下观察。在tunel实验(图4)中，滨蒿内酯处理组tunel荧光阳性，表明肿瘤细胞dna发生了断裂。
60.实施例4western blot检测蛋白表达
61.在1％dmso或滨蒿内酯处理后的人肺癌细胞a549中加入蛋白裂解液收集细胞蛋白样品，定量后取等量蛋白样品进行sds
‑
page电泳分离、转膜，5％脱脂奶粉封闭1h，加入γ
‑
h2a.x,h2a.x,p53或gapdh抗体，4℃孵育过夜。洗涤后加入hrp标记的二抗，室温孵育1h，洗涤后加入化学发光液显色，成像拍照。western blot技术检测了dna双链损伤相关分子磷酸化h2a.x(γ
‑
h2a.x)蛋白的表达(图5)，发现随着滨蒿内酯浓度的增高，γ
‑
h2a.x蛋白表达含量增高。
62.实施例5流式细胞术检测凋亡和细胞周期
63.在凋亡实验中，将处理后的细胞用pbs清洗一遍，按照annexin v/pi凋亡检测试剂
盒的说明书加入annexin v和pi试剂，室温避光孵育30min后上机检测。使用flow jo软件分析凋亡实验数据。为了检测细胞周期，将pbs清洗后的细胞用70％冰乙醇固定过夜，用pbs清洗后加入pi
‑
rnasea试剂，室温避光孵育30min后上机检测，使用modfit软件分析周期数据。使用流式细胞术(图3)发现滨蒿内酯以浓度依赖的方式促进了a549细胞的凋亡。在细胞周期检测实验(图7)中，滨蒿内酯处理的细胞g1期比例明显增加，表明其将细胞阻滞在了g1期。
64.实施例6转录组测序
65.trizol法提取1％dmso或滨蒿内酯处理后a549细胞的rna。首先制备转录组文库并上机测序。然后在不同分组中筛选差异基因，并对差异基因进行聚类分析及火山图等可视化展示，对差异基因进行go/kegg功能注释及功能富集分析。转录组测序(图6)结果展示了滨蒿内酯通过激活p53信号通路来发挥对a549细胞的抑制作用，并在westernblot蛋白免疫印迹实验中验证了p53蛋白的表达(图8)。
66.本领域的技术人员可以明确，在不脱离本发明的总体精神以及构思的情形下，可以做出对于以上实施例的各种变型。其均落入本发明的保护范围之内。本发明的保护方案以本发明所附的权利要求书为准。