一种银杏二萜内酯注射液及其制备方法与流程

1.本发明涉及医药生产技术领域，具体地说，涉及一种银杏二萜内酯注射液及其制备方法。


背景技术：

2.银杏内酯(ginkgolides)是仅在银杏叶中发现的一类具有特殊结构及显著药理活性的重要成分，是国际上公认的银杏叶中最重要的药效成分，已被列入治疗心脑血管疾病的重要药物。
3.与银杏黄酮相比，银杏内酯存在以下不同：1、是paf拮抗剂；2、具有神经保护作用；3、具有明确的分子结构，分子量较小(400)，较容易通过血脑屏障；4、对脑血管及脑神经的影响较为显著，具有扩张冠状血管、改善脑循环、抑制血小板聚集、防止动脉粥样硬化、拮抗血管通透性增加、缓解支气管收缩等药理作用，对心、脑缺血损伤，中枢神经系统具有保护作用，可抗衰老、抗休克、抗过敏、抗菌抗炎、抗肿瘤、抗器官移植中的排斥作用。
4.银杏二萜内酯包含银杏内酯a(ga)、银杏内酯b(gb)、银杏内酯c(gc)、银杏内酯j(gj)等，在临床上用来治疗血栓、炎症和心血管疾病等。银杏内酯a、b、c均为血小板活化因子(platelet
‑
activating factor,paf)受体拮抗剂，银杏内酯b(gb)的活性最强，银杏内酯a(ga)次之，银杏内酯c(gc)再次之，其抗paf活性作用的情况见表1。
5.表1银杏内酯抗paf活性作用的情况
6.化合物ic50(ug)银杏内酯a1.36银杏内酯b0.24银杏内酯c5.59银杏内酯j27.44
7.注：ic50为产生50％的抑制效果的浓度。
8.银杏二萜内酯中的银杏内酯b(gb)是迄今发现的自然界中最强的血小板活化因子拮抗剂，具有清除氧自由基、抑制脂质过氧化等作用，可用于治疗老年性痴呆、阿尔茨海默症以及提升记忆力等。从表1中可知，银杏内酯c抗paf活性仅为银杏内酯a的1/4，银杏内酯b的1/23；银杏内酯j抗paf活性仅为ga的1/20，gb的1/114。银杏内酯j(gj)成分的等含量少，其利用价值也更少，而银杏内酯a(ga)、银杏内酯b(gb)、银杏内酯c(gc)不溶于水，体内吸收差，生物利用度不高，因此，我们研究的重点是银杏内酯a(ga)、银杏内酯b(gb)、银杏内酯c(gc)的提取、分离、精制，选择科学的提取方法，选择适宜的萃取溶剂、重结晶方法，最大限度的浓缩有效成分，去除无效成分，以获得较高纯度的银杏内酯。高纯度的银杏内酯组合物可作为有效部位制成治疗心脑血管方面的注射剂。
9.中国专利文献(cn101085780a)公开了一种银杏内酯的制备方法，将银杏叶粗提取物，加醋酸乙酯萃取，回收醋酸乙酯至尽，干燥，得银杏内酯粗提物；将银杏内酯粗提物上酸性氧化铝柱，收集乙醇洗脱液，浓缩、结晶，得银杏内酯晶体混合物，重结晶后，得高纯度银
杏内酯a和银杏内酯b。
10.中国专利文献(cn102293790a)公开了一种银杏内酯的制备方法，以银杏叶为原料，用乙醇加热回流提取，提取液浓缩回收乙醇，过大孔树脂柱分离，乙醇解吸，产物加水稀释后，再通过凝胶型氢键吸附树脂吸附和解吸，收集流出液和解吸液，浓缩、干燥，乙醇溶解后，脱色，浓缩干燥，即得银杏内酯，总内酯含量为80～95％。
11.以上两个专利文献所公开的两种银杏内酯的制备方法均采取了柱层析分离纯化工艺，生产工艺复杂，生产成本较高，不利于大规模生产。
12.中国专利文献(cn102626383a)公开了一种银杏内酯注射液，具有组分清晰且比例固定的优点，活性成分是采用高纯度，组分清晰且比例固定的银杏内酯，有效部位含量在95％以上。该银杏内酯注射液含有下述成份：银杏内酯(以bb、ga、gb、gc计)：1
‑
10mg/ml、甘油：0.2
‑
0.5mg/ml、乙醇：0.2
‑
0.5mg/ml、注射用水：0
‑
0.5mg/ml。
13.中国专利文献(cn1594319a)提供了一种对银杏内酯采用羟丙基
‑
β
‑
环糊精增溶制得的水溶液，其制备方法：将羟丙基
‑
β
‑
环糊精加入到注射用水中，搅拌溶解，加入银杏内酯，搅拌并加热溶解，再加等渗调节剂和螯合剂搅拌溶解，加活性炭处理后粗滤，加注射用水定容后精滤，分装，热压灭菌。
14.上述两个专利文献所公开的技术内容，其原料药中含有白果内酯(bb)，而白果内酯(bb)不是paf受体拮抗剂，在清除氧自由基、抑制脂质过氧化方面作用较弱。


技术实现要素：

15.本发明的目的在于，提供一种银杏二萜内酯注射液及其制备方法，以解决上述的技术问题。
16.为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
17.一种银杏二萜内酯注射液，其特征在于：采用以下原料配方制成：银杏二萜内酯1
‑
5mg/ml、丙二醇0.1
‑
0.5ml/ml、乙醇0.1
‑
0.5ml/ml、聚乙二醇0.1
‑
0.5ml/ml、注射用水0.1
‑
1ml/ml。
18.优选的，所述银杏二萜内酯注射液采用以下原料配方制成：银杏二萜内酯50mg、丙二醇4ml、乙醇8ml、聚乙二醇1ml，加注射用水至20ml。
19.优选的，所述银杏二萜内酯注射液采用以下原料配方制成：银杏二萜内酯75mg、丙二醇4ml、乙醇8ml、聚乙二醇1ml，加注射用水至20ml。
20.优选的，所述银杏二萜内酯中银杏内酯a的含量为50％～60％、银杏内酯b的含量为30％～40％、银杏内酯c的含量为5％～10％。
21.优选的，所述乙醇与丙二醇的体积比为1:1～5:1。
22.优选的，所述丙二醇与聚乙二醇的体积比为2:1～5:1。
23.本发明所述银杏二萜内酯注射液的制备方法，包括以下步骤：
24.1、制备银杏二萜内酯
25.1a、在银杏叶提取物中加入6
‑
8倍量的水，使溶解，再用10倍量的醋酸乙酯萃取3次，每次0.5
‑
1小时，搅拌，转速500r/min；制得的有机层萃取液经浓缩、抽干，得萃取物，其中银杏二萜内酯的总含量＞30％；
26.1b、取步骤1a制得的萃取物以8倍质量的50％乙醇，在60℃下溶解；在10℃下放置
36h；抽滤，得滤饼，在60℃下干燥，得银杏二萜内酯，其中，银杏内酯a含量为50～60％、银杏内酯b含量为30～40％、银杏内酯c含量为5～10％；
27.2、配制：按照原料配方准备好各种原料；先将乙醇、丙二醇和聚乙二醇混合均匀，再加入银杏二萜内酯，充分溶解后，补加乙醇或注射用水至全量；再用5～10％枸橼酸溶液或1～10％盐酸溶液调节ph值至3.5～6.5；
28.3、过滤、除菌；
29.4、灌封、灯检；
30.5、灭菌。
31.有益效果：本发明以银杏提取物为主要原料，通过萃取、乙醇重结晶得到银杏内酯a(ga)、银杏内酯b(gb)、银杏内酯c(gc)，三种二萜内脂含量之和在银杏内酯中的百分占比＞90％；再以ga、gb、gc三种银杏内酯为原料，添加适宜的水溶性溶剂(例如乙醇、丙二醇、聚乙二醇等)，通过微孔滤膜过滤除菌、灌封、蒸汽灭菌等步骤制成银杏二萜内酯注射液。与现有技术相比，本发明所述银杏二萜内酯注射液在治疗血栓所致的偏瘫及半身不遂、炎症和心血管疾病等方面均有较好疗效，且制备方法简单、可重现性好，适合规模化生产，环保压力较小。同时，经加速实验和长期稳定性实验，本发明所述银杏二萜内脂注射液在12个月质量稳定，验证了制备方法的可靠性和可操作性，为下一步动物实验和临床研究提供了质量保证。
具体实施方式
32.下面结合具体实施例对本发明做进一步的描述。
33.需要说明的是，本发明具体实施例中使用的辅料、设备均为现有技术中的已知产品，主要原料银杏二萜内酯则是通过本发明自制获得。以下使用的银杏二萜内酯，按干燥品重量百分比计算，含银杏内酯a(c
20
h
24
o9)50％～60％、银杏内酯b(c
20
h
24
o
10
)30％～40％、银杏内酯c(c
20
h
24
o
11
)5％～10％，且银杏内酯a、银杏内酯b和银杏内酯c的含量之和在银杏内酯中的百分占比＞90％。
34.所述银杏二萜内酯的制备方法如下：
35.1、在银杏叶提取物中加入6
‑
8倍量的水，使溶解，再用10倍量的醋酸乙酯萃取3次，每次0.5
‑
1小时，搅拌，转速500r/min；制得的有机层萃取液经浓缩、抽干，得萃取物，其中银杏二萜内酯的总含量＞30％；
36.2、取步骤1制得的萃取物以8倍质量的50％乙醇，在60℃下溶解；在10℃下放置36h；抽滤，得滤饼，在60℃下干燥，得银杏二萜内酯，其中，银杏内酯a含量为55～60％、银杏内酯b含量为30～35％、银杏内酯c含量为5～10％。
37.实施例1：
38.本实施例为制备1000支银杏二萜内酯注射液(规格为:50mg:20ml/支)的原料配方：
[0039][0040]
本实施例所述银杏二萜内酯注射液的制备方法：
[0041]
1、按照原料配方准备好各种原料；先将乙醇、丙二醇和聚乙二醇混合均匀，再加入银杏二萜内酯，充分溶解后，补加注射用水至全量；再用5～10％枸橼酸溶液或1～10％盐酸溶液调节ph值至3.5～6.5；
[0042]
2、过滤、除菌；
[0043]
3、灌封、灯检；
[0044]
4、灭菌；
[0045]
5、包装；
[0046]
6、观测：在5℃下，放置72h，于24h、48h、72h观察有无颗粒析出；72h无颗粒析出，说明注射剂处方设计合理。
[0047]
实施例2：
[0048]
本实施例为制备1000支银杏二萜内酯注射液(规格为:50mg:20ml/支)的原料配方：
[0049][0050]
本实施例所述银杏二萜内酯注射液的制备方法：
[0051]
1、按照原料配方准备好各种原料；先将乙醇、丙二醇混合均匀，再加入银杏二萜内酯，充分溶解后，补加注射用水至全量；再用5～10％枸橼酸溶液或1～10％盐酸溶液调节ph值至3.5～6.5；
[0052]
2、过滤、除菌；
[0053]
3、灌封、灯检；
[0054]
4、灭菌；
[0055]
5、包装；
[0056]
6、观测：在5℃下，放置72h，于24h、48h、72h观察有无颗粒析出；72h无颗粒析出，说明注射剂处方设计合理。
[0057]
实施例3：
[0058]
本实施例为制备1000支银杏二萜内酯注射液(规格为:50mg:20ml/支)的原料配方：
[0059][0060]
本实施例所述银杏二萜内酯注射液的制备方法：
[0061]
1、按照原料配方准备好各种原料；先将乙醇、聚乙二醇混合均匀，再加入银杏二萜内酯，充分溶解后，补加注射用水至全量；再用5～10％枸橼酸溶液或1～10％盐酸溶液调节ph值至3.5～6.5；
[0062]
2、过滤、除菌；
[0063]
3、灌封、灯检；
[0064]
4、灭菌；
[0065]
5、包装；
[0066]
6、观测：在5℃下，放置72h，于24h、48h、72h观察有无颗粒析出；72h无颗粒析出，说明注射剂处方设计合理。
[0067]
本实施例中，乙醇用量达到60％，对人体耐受性有一定的影响。
[0068]
实施例4：
[0069]
本实施例为制备1000支银杏二萜内酯注射液(规格为:50mg:20ml/支)的原料配方：
[0070][0071]
本实施例所述银杏二萜内酯注射液的制备方法：
[0072]
1、按照原料配方准备好各种原料；先将丙二醇、聚乙二醇混合均匀，再加入银杏二萜内酯，充分溶解后，补加注射用水至全量；再用5～10％枸橼酸溶液或1～10％盐酸溶液调节ph值至3.5～6.5；
[0073]
2、过滤、除菌；
[0074]
3、灌封、灯检；
[0075]
4、灭菌；
[0076]
5、包装；
[0077]
6、观测：在5℃下，放置72h，于24h、48h、72h观察有无颗粒析出；72h无颗粒析出，说
明注射剂处方设计合理。
[0078]
本实施例中，丙二醇用量达到60％，对人体耐受性有一定的影响。
[0079]
实施例5：
[0080]
本实施例为制备1000支银杏二萜内酯注射液(规格为:75mg:20ml/支)的原料配方：
[0081][0082]
本实施例所述银杏二萜内酯注射液的制备方法：
[0083]
1、按照原料配方准备好各种原料；先将乙醇、丙二醇、聚乙二醇混合均匀，再加入银杏二萜内酯，充分溶解后，补加注射用水至全量；再用5～10％枸橼酸溶液或1～10％盐酸溶液调节ph值至3.5～6.5；
[0084]
2、过滤、除菌；
[0085]
3、灌封、灯检；
[0086]
4、灭菌；
[0087]
5、包装；
[0088]
6、观测：在5℃下，放置72h，于24h、48h、72h观察有无颗粒析出；72h无颗粒析出，说明注射剂处方设计合理。
[0089]
【使用方法】实施例1
‑
5制成的银杏二萜内酯注射液用0.9％的氯化钠注射液250ml或5％的葡萄糖注射液250ml稀释后，静脉滴注。
[0090]
【中试样品的稳定性研究】
[0091]
按照实施例1的原料配方和制备方法进行放大实验研究，试制三批样品，每批1万支。对三批样品进行稳定性实验，验证注射液的稳定性，其中：
[0092]
1、加速实验供试品在温度40℃
±
2℃、相对湿度75％
±
5％的条件下放置6个月；
[0093]
2、长期实验供试品在温度25℃
±
2℃、相对湿度60％
±
5％的条件下放置12个月。
[0094]
实验结果见表2、表3、表4、表5、表6、表7。
[0095]
表2：190201批样品加速实验结果
[0096][0097]
表3：190202批样品加速实验结果
[0098][0099]
表4：190203批样品加速实验结果
[0100][0101]
由表2、表3、表4实验结果可知，三批中试样品在加速实验的6个月内各项质量指标稳定，说明本处方、方法符合设计要求，具备批量生产的条件。
[0102]
表5：190201批样品长期实验结果
[0103][0104]
表6：190202批样品长期实验结果
[0105][0106]
表7：190203批样品长期实验结果
[0107][0108]
由表5、表6、表7的实验结果可知，三批中试样品在长期实验的12个月内各项质量指标稳定，验证了本发明所述原料配方、方法的合理性、可操作性。
[0109]
以上对本发明的较佳实施方式进行了具体说明，但本发明并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明精神的前提下还可作出种种的等同变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本技术权利要求所限定的范围内。