一种稳定的包含抗CD147单克隆抗体的药物制剂的制作方法

一种稳定的包含抗cd147单克隆抗体的药物制剂
技术领域
1.本技术涉及药物制剂，特别是涉及稳定的包含抗cd147单克隆抗体的药物制剂及其制备方法。


背景技术：

2.研究表明，cd147分子在肿瘤发展过程中介导多种生物学功能：(1)促进肿瘤细胞伪足形成，铺展及粘附；(2)促进肿瘤细胞运动；(3)促进肿瘤内皮细胞vegf表达，促进肿瘤新生血管形成；(4)影响下游分子表达；(5)抑制内质网应激诱导的肿瘤细胞凋亡和化学药物敏感性的降低；(6)通过tgf-β1-slug信号通路影响emt形成；(7)参与t细胞活化和免疫突触形成；(8)促进肿瘤细胞侵袭和转移(zhang dw等人，j hepatol.2012；chen yk等人，plos one，7(7)，2012；tang j等人，cell death differ，19(11)，2012；li y等人，j biol chem，287(7)，2012；wu j等人，oncogene，2011；zhao p等人，hepatology，54(6)，2011；zhao p等人，cancer sci.101(2)，2010；gou xc等人，cancer sci.100(5)，2009；chen yk等人，cancer letters，278(1)，2009)。
3.hchab18单克隆抗体是一种人源化修饰性嵌合igg1单克隆抗体，可特异性的结合肺癌等上皮源性肿瘤组织细胞表面的cd147分子，阻断该分子介导的生物学效应，从而抑制肿瘤细胞的生长和侵袭转移。
4.由于抗体分子具有复杂的蛋白质多级结构，并且易于物理上粘结在一起，从而可能导致不期望的免疫反应，或者可能在施用期间堵塞注射器或泵而对患者不安全，抗体的液体制剂长期以来面临的问题之一是凝聚所导致的稳定性问题，无论是贮存还是临床使用相对不便，而冷冻干燥技术可以将抗体均匀地固定在制剂中，减小抗体的聚集，从而提高抗体稳定性。但是制剂中过多的辅料容易产生不期望的毒副作用，因此，需要一种辅料简单却仍具有稳定性的抗cd147抗体(例如hchab18单克隆抗体)的药物制剂。
5.发明概述
6.本技术提供了包含抗cd147单克隆抗体的稳定的药物制剂，其具有辅料简单，并能在长时间内保持均一和稳定的优点。
7.在一方面，本技术提供了一种药物制剂，所述药物制剂由抗cd147单克隆抗体、缓冲液和蛋白保护剂组成，其中，所述抗cd147单克隆抗体的浓度为1～40mg/ml，所述缓冲液的浓度为5～50mmol/l，所述蛋白保护剂的浓度为10～200mg/ml，其中所述缓冲液为琥珀酸缓冲液、组氨酸缓冲液或柠檬酸缓冲液，所述蛋白保护剂为蔗糖、海藻糖或其组合。
8.在某些实施方案中，所述抗cd147单克隆抗体包含如seq id no：1所示的氨基酸序列的重链和/或如seq id no：2所示的氨基酸序列的轻链。
9.在某些实施方案中，所述抗cd147单克隆抗体在所述药物制剂中的浓度为10～30mg/ml。
10.在某些实施方案中，所述抗cd147单克隆抗体在所述药物制剂中的浓度为20mg/ml。
11.在某些实施方案中，所述缓冲液为组氨酸缓冲液。
12.在某些实施方案中，所述组氨酸缓冲液在所述药物制剂中的浓度为5～15mmol/l。
13.在某些实施方案中，所述组氨酸缓冲液在所述药物制剂中的浓度为10mmol/l。
14.在某些实施方案中，所述蛋白保护剂为蔗糖。
15.在某些实施方案中，所述蔗糖在所述药物制剂中的浓度为80～120mg/ml。
16.在某些实施方案中，所述蔗糖在所述药物制剂中的浓度为100mg/ml。
17.在某些实施方案中，所述药物制剂由20mg/ml的抗cd147单克隆抗体、10mmol/l的组氨酸缓冲液和100mg/ml的蔗糖组成。
18.在某些实施方案中，所述药物制剂为冻干形式。
具体实施方式
19.本技术的如下描述仅旨在说明本技术的各个实施方案。所描述的具体实施例不应被理解为是对本技术的范围的限制。在不偏离本技术的精神和实质的情况下，本领域技术人员可进行各种等同替代、改变或变化，而且应了解本文也包括这些等同实施方案。本文引用的所有文献，包括出版物、专利和专利申请等以全文引用方式并入本文。
20.在本公开中提及的方法包括两个或更多个限定步骤的情况时，所定义的步骤可以以任何顺序或同时进行(除非上下文排除该可能性)，并且该方法可以包括一个或多个其他步骤，所述步骤可以在任何定义的步骤之前，在两个定义的步骤之间或在所有定义的步骤之后执行(除非上下文排除了该可能性)。
21.抗体
22.如本文所用，术语“单克隆抗体”是指含有均一的或基本上均一的单个同样抗体的抗体群。单克隆抗体可以获自单一的杂交瘤细胞克隆(milstein，c(1999).
″
the hybridoma revolution：an offshoot ofbasic research
″
.bioessays.21(11)：966-73)。完整的单克隆抗体包含两个重链和两个轻链。每个重链由重链可变区(vh)和重链第一、第二和第三恒定区(c
h1
、c
h2
、c
h3
)组成，而每个轻链由轻链可变区(v
l
)和轻链恒定区(g
l
)组成。重链和轻链的vh和v
l
区中还各有三个互补决定区(cdr)，三个cdr由被称为框架区(fr)的连续部分间隔开，框架区比cdr更加高度保守并形成一个支架支撑超变环。一条重链和一条轻链的6个cdr共同构成抗体的抗原结合部位，决定抗体的特异性。本文所述的单克隆抗体还包括完整的单克隆抗体的具有抗原结合功能的片段或衍生物，所述片段或衍生物与完整的单克隆抗体具有相同的抗原结合特异性，但是所述片段或衍生物与其特异性抗原结合的亲和力可以与完整的单克隆抗体相同或不同。
23.在一些实施方案中，本文所述的单克隆抗体包括抗原结合片段。抗原结合片段指保留与抗原特异性结合的能力的一种或多种抗体片段。抗原结合片段的例子包括但不限于(i)fab片段，其是指由v
l
、vh、c
l
和c
h1
结构域组成的单价片段；(ii)fab
′
片段，其是指包含一部分铰链区的fab片段；(iii)f(ab
′
)2片段，其是指包含由铰链区的二硫键连接的2个fab片段的二价片段；(iv)由vh和c
h1
结构域组成的fd片段；(v)由抗体单臂的v
l
和vh结构域组成的fv片段，(vi)dab片段(ward等人，nature 341：544-546(1989)；pct公开wo 90/05144)，其包含单个可变结构域；(vii)分离的cdr；(viii)单链fv片段，其是指v
l
和vh结构域直接相连或通过一个肽链连接而形成的单价片段(huston js等，proc natl acad sci usa，85：5879
(1988))。
24.在一些实施方案中，本文所述的单克隆抗体包括嵌合的单克隆抗体，其部分重链和/或轻链与从特定种类中衍生获得的或属于特定抗体类或亚类的抗体对应序列是相同或同源，而剩余的链与从另一种类中衍生获得的或属于另一抗体类或亚类的抗体以及这种抗体的片段的对应序列是相同或同源的，只要它们表现出所需的功能活性。
25.在一些实施方案中，本文所述的单克隆抗体包括人鼠嵌合的单克隆抗体，其具有鼠重链和轻链可变区和人重链和轻链恒定区。
26.在一些实施方案中，本文所述的单克隆抗体包括人源化的单克隆抗体。非人体来源(如鼠源型)抗体的人源化形式是包含最少的从非人源型免疫球蛋白中获得的序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(如fv、fab、fab’、f(ab’)2或抗体的其它与抗原结合的序列)。在一些例子中，人源化抗体可以是cdr嫁接的抗体，其中将人源型cdr的氨基酸序列引入非人源型vh和v
l
的氨基酸序列以替换相应的非人源型cdr的氨基酸序列。在另一些例子中，人源化抗体的大部分氨基酸序列可以来自于人源型免疫球蛋白(受体抗体)，其中受体的cdr的氨基酸残基被具有所需特异性、亲合性和能力的非人源型(例如小鼠、大鼠、兔)抗体的cdr的氨基酸残基替代。通常，人源化抗体基本上都包含至少一个，一般包括两个可变结构域，其中所有或基本上所有的cdr区对应于非人源型免疫球蛋白的序列，且所有或基本上所有的构架(fr)区是人源型免疫球蛋白的序列。在一些例子中，人源型免疫球蛋白的可变区的构架区残基被相应的非人源型残基取代。而且，人源化抗体可包括在受体抗体和输入的cdr或构架区序列中均没有的残基。
27.本文所述的抗cd147单克隆抗体是指能够特异性结合cd147蛋白的单克隆抗体。
28.本文所述的cd147蛋白是指属于免疫球蛋白超家族的单次跨膜糖蛋白，其全长序列具有269个氨基酸残基，n端起始的前21个氨基酸残基为信号肽，22～205个氨基酸残基构成胞外区，206～229个氨基酸残基构成跨膜区，具有典型的亮氨酸拉链结构，靠近c端的230～269个氨基酸残基构成胞内区。胞外4个半胱氨酸形成2个二硫键，构成两个ig样结构域。cd147蛋白的代表性序列可以是，例如，如genbank号bac76828.1所示，也可以参考，例如，zhang dw等人，j hepatol.2012；chen yk等人，plos one，7(7)，2012；tang j等人，cell death differ，19(11)，2012；li y等人，j biol chem，287(7)，2012；wu j等人，oncogene，2011；zhao p等人，hepatology，54(6)，2011；zhao p等人，cancer sci.101(2)，2010；gou xc等人，cancer sci.100(5)，2009；chen yk等人，cancer letters，278(1)，2009。
29.在一些实施方案中，本文所述的抗cd147单克隆抗体进一步包括免疫球蛋白恒定区。在一些实施方案中，免疫球蛋白恒定区包括重链和/或轻链恒定区。所述重链恒定区包括c
h1
、c
h1-c
h2
或c
h1-c
h3
区，所述轻链恒定区包括c
l
区。
30.在一些实施方案中，本文所述的抗cd147单克隆抗体包括嵌合的抗cd147单克隆抗体，特别是人鼠嵌合的抗cd147单克隆抗体。
31.在一些实施方案中，本文所述的抗cd147单克隆抗体是hchab18单克隆抗体。hchab18单克隆抗体是通过基因工程手段，在cho细胞中表达，并且通过一系列标准的层析步骤纯化获得的。hchab18单克隆抗体是一种人源化修饰性嵌合igg1抗体，分子量为147kda，由2条igg1重链和2条κ轻链组成，每条重链含有447个氨基酸，分子量为49kda，其重链氨基酸序列如seq id no：1所示；每条轻链含有214个氨基酸，分子量为24kda，轻链氨基
酸序列如seq id no：2。
32.表1.hchab18单克隆抗体氨基酸序列
[0033][0034]
本技术涉及包含抗cd147单克隆抗体的药物制剂。本技术的药物制剂中包含的抗cd147单克隆抗体的浓度取决于药物制剂所需的具体性质以及预期使用药物制剂的特定环境和目的而变化。在一些实施方案中，本技术的药物制剂为固体制剂。在某些实施方案中，所述固体制剂可包含经复溶后浓度为1～40mg/ml的所述抗cd147单克隆抗体。在某些实施方案中，抗cd147单克隆抗体的浓度可以是适于治疗的任一浓度值。例如，根据需要，抗cd147单克隆抗体在本技术的药物制剂中的浓度可为至少1mg/ml、至少2mg/ml、至少3mg/ml、至少4mg/ml、至少5mg/ml、至少6mg/ml、至少7mg/ml、至少8mg/ml、至少9mg/ml、至少10mg/ml、至少11mg/ml、至少12mg/ml、至少13mg/ml、至少14mg/ml、至少15mg/ml、至少16mg/ml、至少17mg/ml、至少18mg/ml、至少19mg/ml、至少20mg/ml、至少21mg/ml、至少22mg/ml、至少23mg/ml、至少24mg/ml、至少25mg/ml、至少26mg/ml、至少27mg/ml、至少28mg/ml、至少29mg/ml、或者至少30mg/ml，和/或至多40mg/ml、至多39mg/ml、至多38mg/ml、至多337mg/ml、至多36mg/ml、至多35mg/ml、至多34mg/ml、至多33mg/ml、至多32mg/ml、至多31mg/ml、至多30mg/ml、至多29mg/ml、至多28mg/ml、至多27mg/ml、至多26mg/ml、至多25mg/ml、至多24mg/ml、至多23mg/ml、至多22mg/ml、至多21mg/ml、或者至多20mg/ml。在某些实施方案中，hchab18单克隆抗体在本技术的药物制剂中的浓度为10～30mg/ml.在某些实施方案中，hchab18单克隆抗体在本技术的药物制剂中的浓度为20mg/ml.
[0035]
本技术的药物制剂可以包含一种或多种辅料。本文所用的术语“辅料”一般是指添加至制剂中来提供所需的稠度、粘度或稳定作用的任何非治疗性试剂。
[0036]
缓冲液
[0037]
术语“缓冲液”一般是指通过其酸碱共轭组分的作用而耐受ph值变化的缓冲溶液。本文所用的“缓冲液”指已知可安全地应用于药学制剂中、具有维持或控制该制剂的ph值在所需范围的化合物溶液。
[0038]
本技术的稳定的药物制剂可包含使得药物制剂具有5.0～8.0的ph值，例如具有5.0～6.0、6.0～7.0或7.0～8.0的ph值的缓冲液。在一些实施方案中，合适的缓冲液使得本
申请的药物制剂具有5.0～6.0的ph值。特别地，本技术的药物制剂的ph值可以是如上列举的那些ph值范围内的任一ph值，例如5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6。1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0。
[0039]
可将药物制剂的ph值控制在所需范围内的缓冲液的例子包括琥珀酸缓冲液、组氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液和其他有机酸或无机酸缓冲液。这些缓冲液可以单独使用1种，也可以将2种以上混合使用。优选地，本技术的药物制剂包含琥珀酸缓冲液、组氨酸缓冲液或柠檬酸缓冲液。更优选地，本技术的药物制剂包含组氨酸缓冲液。
[0040]“琥珀酸缓冲液”为包含琥珀酸根离子的缓冲液。琥珀酸缓冲液可包含琥珀酸、琥珀酸一钠、琥珀酸二钠、琥珀酸一钾、琥珀酸二钾、氯化钠、氯化钾中的一种或多种等。在一些实施方案中，琥珀酸缓冲液可为琥珀酸-琥珀酸二钠缓冲液。在一些实施方案中，琥珀酸缓冲液的ph值可为在5.0～6.0范围内的任一ph值，例如5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9或6.0。
[0041]“组氨酸缓冲液”为包含组氨酸根离子的缓冲液。组氨酸缓冲液可包括组氨酸、组氨酸盐酸盐、组氨酸醋酸盐、组氨酸磷酸盐、组氨酸硫酸盐等中的一种或多种。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液可为组氨酸-组氨酸盐酸盐缓冲液。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液的ph值可为在5.0～6.0范围内的任一ph值，例如5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9或6.0。
[0042]“柠檬酸缓冲液”为包含柠檬酸根离子的缓冲液。柠檬酸缓冲液可包含柠檬酸、柠檬酸一钠、柠檬酸二钠、柠檬酸三钠、柠檬酸一钾、柠檬酸二钾、柠檬酸三钾、氯化钠、氯化钾中的一种或多种等。在一些实施方案中，柠檬酸缓冲液为柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液。在一些实施方案中，柠檬酸缓冲液的ph值可为在5.0～6.0范围内的任一ph值，例如5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9或6.0。
[0043]
本文所述的缓冲液的浓度指缓冲液中缓冲离子的浓度。在一些实施方案中，用于本技术的药物制剂的合适的缓冲液的浓度可为5～50mmol/l。在一些实施方案中，缓冲液的浓度是在上述范围内的任一浓度值。例如，缓冲液的浓度可为至少5mmol/l、至少6mmol/l、至少7mmol/l、至少8mmol/l、至少9mmol/l、至少10mmol/l、至少11mmol/l、至少12mmol/l、至少13mmol/l、至少14mmol/l、至少15mmol/l、至少16mmol/l、至少17mmol/l、至少18mmol/l、至少19mmol/l、至少20mmol/l、至少21mmol/l、至少22mmol/l、至少23mmol/l、至少24mmol/l、至少25mmol/l、至少30mmol/l、至少35mmol/l、至少40mmol/l、或者至少45mmol/l，和/或至多50mmol/l、至多45mmol/l、至多40mmol/l、至多35mmol/l、至多30mmol/l、至多25mmol/l、至多24mmol/l、至多23mmol/l、至多22mmol/l、至多21mmol/l、至多20mmol/l、至多19mmol/l、至多18mmol/l、至多17mmol/l、至多16mmol/l、至多15mmol/l、至多14mmol/l、至多13mmol/l、至多12mmol/l、至多11mmol/l、至多10mmol/l、至多9mmol/l、至多8mmol/l、至多7mmol/l、或者至多6mmol/l，取决于具体的缓冲液和药物制剂所需的稳定性。在一些实施方案中，用于本技术的药物制剂的缓冲液为组氨酸缓冲液，包括组氨酸-盐酸组氨酸缓冲液，其浓度可为5～15mmol/l。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液的浓度可为6～14mmol/l、7～13mmol/l、8～12mmol/l、9～11mmol/l或者10mmol/l。
[0044]
蛋白保护剂
[0045]
如本文所用，术语“蛋白保护剂”指这样一种试剂，当其与感兴趣的蛋白质结合时，其能阻止或减少蛋白质的化学和/或物理不稳定性。蛋白保护剂的例子包括糖类、醇类、酸类、盐类、聚合物等。糖类的例子包括非还原性糖，例如，淀粉、纤维素、糖原、阿拉伯聚糖、半乳聚糖、果聚糖、木聚糖、葡聚糖、阿拉伯木聚糖、阿拉伯半乳聚糖、壳多糖、昆布多糖、岩藻多糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻糖、蔗糖、棉子糖、松三糖、二羟基丙酮。在一些实施方案中，蛋白保护剂选自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖和葡聚糖。醇类的例子包括山梨醇等。酸类的例子包括柠檬酸、磷酸、酒石酸、氨基酸、乙二胺四乙酸等。盐类的例子包括硫酸钠、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵等。聚合物的例子包括聚乙二醇、聚维酮等。
[0046]
在一些实施方案中，用于本技术的药物制剂的蛋白保护剂选自糖类。在一些实施方案中，用于本技术的药物制剂的蛋白保护剂为非还原性糖(例如，淀粉、纤维素、糖原、阿拉伯聚糖、半乳聚糖、果聚糖、木聚糖、葡聚糖、阿拉伯木聚糖、阿拉伯半乳聚糖、壳多糖、昆布多糖、岩藻多糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻糖、蔗糖、棉子糖、松三糖、二羟基丙酮)。在一些实施方案中，用于本技术的药物制剂的蛋白保护剂选自蔗糖、海藻糖或它们的组合。在一些实施方案中，用于本技术的药物制剂的蛋白保护剂为蔗糖。
[0047]
在一些实施方案中，用于本技术的药物制剂的蛋白保护剂在药物制剂中的浓度可为10～200mg/ml。在一些实施方案中，蛋白保护剂的浓度是在上述范围内的任一浓度值。例如，蛋白保护剂在药物制剂中的浓度可为至少10mg/ml、至少20mg/ml、至少30mg/ml、至少40mg/ml、至少50mg/ml、至少60mg/ml、至少70mg/ml、至少80mg/ml、至少90mg/ml，和/或至多200mg/ml、至多150mg/ml、至多100mg/ml、至多90mg/ml、至多80mg/ml、至多70mg/ml、至多60mg/ml、至多50mg/ml、至多40mg/ml、至多30mg/ml、至多20mg/ml、或者至多10mg/ml，取决于具体的蛋白保护剂和药物制剂所需的稳定性。
[0048]
在一些实施方案中，用于本技术的药物制剂的蛋白保护剂为蔗糖，其在药物制剂中的浓度可为10～200mg/ml。在一些实施方案中，蔗糖在药物制剂中的浓度可为20～180mg/ml、40～160mg/ml、60～140mg/ml、80～120mg/ml或者100mg/ml。
[0049]
制剂
[0050]
在一方面，本技术提供了包含抗cd147单克隆抗体、缓冲液和蛋白保护剂的稳定的药物制剂。所述药物制剂具有ph 5.0～8.0，在一些实施方案中为ph 5.0～6.0，以达到足够的稳定性。
[0051]
在一些实施方案中，本技术的药物制剂包含：
[0052]
hchab18单克隆抗体，其浓度为1～40mg/ml，优选为5～35mg/ml、10～30mg/ml、15～25mg/ml或20mg/ml；
[0053]
缓冲液，其优选为琥珀酸缓冲液、组氨酸缓冲液或柠檬酸缓冲液，最优选为组氨酸缓冲液，且所述缓冲液在所述药物制剂中的浓度为5～50mmol/l，优选为5～15mmol/l或者10mmol/l；
[0054]
蛋白保护剂，其优选为蔗糖或海藻糖，最优选为蔗糖，且所述蛋白保护剂在所述药物制剂中的浓度为10～200mg/ml，优选为20～180mg/ml、40～160mg/ml、60～140mg/ml、80～120mg/ml或者100mg/ml。
[0055]
在一些实施方案中，本技术的药物制剂包含浓度为1～40mg/ml的hchab18单克隆抗体、浓度为5～50mmol/l的组氨酸缓冲液和浓度为10～200mg/ml的蔗糖。在一些实施方案
中，上述药物制剂中包含浓度为5～35mg/ml、10～30mg/ml、15～25mg/ml或20mg/ml的hchab18单克隆抗体。
[0056]
在一些实施方案中，本技术的药物制剂包含浓度为约10～30mg/ml的hchab18单克隆抗体、浓度为约5～15mmol/l的组氨酸缓冲液和浓度为约80～120mg/ml的蔗糖。
[0057]
在一些实施方案中，本技术的药物制剂包含浓度为约20mg/ml的hchab18单克隆抗体、浓度为约10mmol/l的组氨酸缓冲液和浓度为约100mg/ml的蔗糖。
[0058]
抗体分子的化学降解、或凝聚形成聚合物，或者抗体分子的脱糖基、糖基化修饰、氧化或可能导致单体蛋白质至少一种功能活性降低的其它结构性修饰等，都可能引起抗体制剂的不稳定。对于包含抗cd147单克隆抗体的药物制剂而言，在药物制剂储存过程中，抗cd147单克隆抗体可能发生化学降解，从而导致抗体的浓度下降；抗cd147单克隆抗体还可能凝聚而形成有时不可溶的以含有多个抗体分子的多聚分子形式存在的聚合物，从而导致含单个抗体分子的单体含量减少。因而，聚合物抗体的含量增加，将导致单体抗体的纯度下降。而且，由于不溶性聚合物的形成，药物制剂的浊度可能增大。
[0059]
在一些实施方案中，本技术的包含抗cd147单克隆抗体的药物制剂可以在长时间内保持稳定性，其中抗cd147单克隆抗体的物理和/或化学稳定性和/或功能活性等随时间变化而保持相对恒定。在一些实施方案中，抗体蛋白浓度、蛋白纯度、蛋白活性、制剂的外观、制剂中的不溶性微粒、制剂的水分等可作为药物制剂的稳定性的标志。本领域中已有多种测定蛋白质稳定性的分析技术，这在peptide and protein drug delivery，247-301，vincent lee编辑，marcel dekker inc.，纽约，纽约出版社(1991)和jones，a.adv.drug delivery rev.10：29-90(1993)中有所综述。在一些实施方案中，药物制剂的稳定性可通过本领域已知的方法在选定的条件和时间内进行测量。
[0060]
在研究制剂的长期稳定性时，本技术所用的表示制剂稳定的预设标准为：蛋白浓度变化不超过
±
2.0mg/ml(对于20mg/ml的初始蛋白浓度)，由ce-sds法测得的蛋白纯度≥95.0％，由se-hplc法测得的蛋白纯度中单体含量≥99.0％，聚合物含量≤1.0％，水分含量≤3.0％，抗体的结合活性为不低于1∶8000，功能活性为阳性。
[0061]
所述蛋白浓度可根据《中国药典》2015年版，三部，通则0401，通过紫外-可见光分光光度法测定。
[0062]
所述水分含量可根据《中国药典》2015年版，三部，通则0832，费休氏法测定。
[0063]
所述结合活性表示抗体与靶点的特异性结合活性，其可根据《中国药典》2015版，三部，通则3418通过酶联免疫法测得。本技术中以a549细胞爬片，加入以5％正常羊血清的pbs溶液按1∶4000、1∶8000、1∶16000进行稀释的抗体(以1mg/ml为基准)与荧光二抗(羊抗人igg-fitc)进行反应，于荧光显微镜下观察细胞的特异性荧光强度，不得低于1∶8000。
[0064]
所述功能活性是指药物制剂针对特定靶细胞产生杀伤或抑制作用的能力，并可通过细胞毒性检测法测得。本法以冻存的人脾细胞作为效应细胞，通过mts与活细胞产生可溶性的甲瓉检测活细胞含量并绘制曲线，观察在某同一杀伤率下，单抗浓度不高于阴性对照抗体浓度的1/10。药物制剂的功能活性为阳性表示该药物制剂具有针对特定靶细胞的杀伤活性。
[0065]
本文所述的药物制剂，优选冻干制剂，尽管辅料简单(仅包含缓冲剂和蛋白保护剂)，制备成本低廉，由辅料引起的毒副作用小，却具有意料不到的长期稳定性，在5℃可以
保存长达12个月、24个月、36个月、48个月、或甚至60个月。
[0066]
制剂制备
[0067]
在另一方面，本技术提供了制备药物制剂的方法，其包括：
[0068]
1)提供制剂溶媒和抗cd147单克隆抗体(例如hchab18单克隆抗体)，其中所述制剂溶媒包含浓度为约5～50mmol/l、约5～15mmol/l或约10mmol/l的缓冲液，和浓度为约10～200mg/ml、约80～120mg/ml或约100mg/ml的蛋白保护剂；
[0069]
2)使用所述制剂溶媒对所述抗cd147单克隆抗体原液(例如hchab18单克隆抗体存储于磷酸缓冲液体系中)进行过滤换液，从而得到如本文所述的药物制剂。在一些实施方案中，所述过滤为超滤、渗滤、凝胶过滤，和/或本领域技术人员所知晓的其它过滤方法。
[0070]
如本文所用，术语“超滤”是指混合物(例如，抗cd147单克隆抗体原液)在例如压力驱动下移动通过膜(例如，超滤膜)，并且其中不同物质(例如，溶剂和溶质)因其响应于给定的压力驱动力而过滤穿过膜的速率的差异从而得到分离的过程。
[0071]
如本文所用，术语“渗滤”是指利用例如可渗透膜过滤器将混合物(例如，抗cd147单克隆抗体原液)根据其中各组分的分子大小进行分离的过程。通常蛋白质原液穿过保留蛋白质并允许缓冲液交换的膜而进行渗滤，由此，随着时间的推移，含有蛋白质的原液被新的缓冲液所替代。
[0072]
如本文所用，术语“凝胶过滤”是指利用凝胶通过将比树脂孔大的分子(例如蛋白质)排斥，使其比扩散到树脂孔中并因此被保留且较慢地移动通过固相的较小分子更快地穿过固相，从而将较大分子和较小分子分离的过程。
[0073]
在一些实施方案中，所述方法进一步包括冷冻干燥所述药物制剂，从而得到如本文所述的冻干粉针或其他冻干形式。
[0074]
应用
[0075]
在另一方面，本技术还提供了治疗受试者的疾病的方法，其包括将治疗有效量的本技术的药物制剂施用至受试者，其中所述受试者具有或可能具有需要用针对cd147分子的抗体进行治疗的疾病。
[0076]
如本文所用，术语“治疗”指减少或改善病症或其一种或多种症状的严重性和/或持续时间，抑制或预防病症进展，引起病症消退，抑制或预防与病症相关的一种或多种症状复发、发展、发作或进展。需要治疗的受试者包括已经患有疾病的受试者。
[0077]
术语“治疗有效量”指实现可测量的改善或预防特定的病症所需的最小浓度。
[0078]
本技术的药物制剂可用于治疗cd147分子相关的疾病，包括慢性和急性疾病。cd147分子相关的疾病包括疟疾、癌症、炎症等。在一些实施方案中，所述cd147分子相关的疾病为疟疾。在一些实施方案中，所述cd147分子相关的疾病为间日虐、三日虐、卵形虐或恶性虐。
[0079]
本技术的药物制剂可通过任何合适的途径施用于受试者。例如，所述药物制剂可通过静脉注射施用于受试者。
[0080]
在又一方面，本技术提供了药物制剂在制备预防和/或治疗cd147分子相关疾病的药物中的用途。
[0081]
实施例
[0082]
参照如下实施例可更好地理解本技术，然而，如下实施例旨在说明本技术，不应理
解为限制本技术的范围。考虑到本文的教导可能进行多种修改和改变，因此这些修改和改变在本技术的范围内。
[0083]
在实施例中所用的各种试剂、设备和测量方法如下：
[0084]
试剂
[0085]
抗cd147单克隆抗体：hchab18单克隆抗体，其包括如seq id no：1所示的重链和如seq id no：2所示的轻链。
[0086]
组氨酸缓冲液：由组氨酸溶液和组氨酸盐酸盐溶液配制而成。
[0087]
测试方法
[0088]
在研究制剂的长期稳定性时，本技术所用的表示制剂稳定的预设标准为：蛋白浓度变化不超过4.0mg/ml(对于20mg/ml的初始蛋白浓度)，由变性毛细管电泳(ce-sds)法测得的蛋白纯度≥95.0％，由高效液相凝胶色谱法(se-hplc法)测得的蛋白纯度中单体含量≥99.0％，聚合物含量≤1.0％，水分含量≤3.0％，抗体的结合活性为不低于1∶8000，功能活性为阳性。
[0089]
实施例1：hchab18单克隆抗体制剂的配方
[0090]
本实施例中使用的单克隆抗体制剂的配方如下：
[0091]
表2.hchab18单克隆抗体制剂的配方
[0092][0093]
所述单克隆抗体制剂制备方法如下：
[0094]
1)配制含有缓冲剂和蛋白保护剂的制剂溶媒，溶媒组成为：
[0095]
表3.制剂溶媒组分
[0096]
组分配制时所用的质量/体积组氨酸0.81g盐酸组氨酸1.0g蔗糖100g注射用水适量全量1l
[0097]
2)使用配制的制剂溶媒对纯化得到的hchab18单克隆抗体原液进行过滤换液。
[0098]
3)获得半成品，将半成品无菌分装入西林瓶中，冷冻干燥并加盖橡胶塞及铝塑盖，得到饼状物粉末，获得本技术所述冻干粉针。
[0099]
实施例2：长期稳定性测试
[0100]
将两个批次的冻干粉针(批次a和批次b)放置于5℃条件下，进行稳定性实验，实验结果见表4。由表4可知，本技术的制剂尽管配方简单，仅使用了由组氨酸和盐酸组氨酸配制而成的组氨酸缓冲液以及蔗糖两种辅料组分，但所得到的液体半成品经过冷冻干燥后仍然可以形成良好的饼状物粉末，并且即使经过3年，本技术的冻干粉针制剂中的蛋白浓度变化
不超过4.0mg/ml，蛋白纯度≥95.0％，甚至大于96.0％，蛋白纯度中单体含量≥99.0％，聚合物含量≤1.0％，甚至小于或等于0.6％，水分含量≤3.0％，抗体的结合活性为1∶8000，功能活性为阳性，具有预料不到的良好的长期稳定性。
[0101]
本技术的抗体制剂具有辅料组分简单、安全性高，且长期稳定性显著良好的优点，在制备工艺和经济角度方面都有着实质性的进步和良好的应用前景。
[0102][0103]
本技术不限于本文所述的具体实施方案的范围。事实上，根据上述说明，本技术的各种修改和改变对本领域技术人员而言是容易想到的。这些修改和改变也落在所附权利要求的范围内。