一种生物酶伤口创面敷料及其制备方法与流程

1.本发明涉及创面敷料技术领域，具体涉及一种生物酶伤口创面敷料及其制备方法。


背景技术：

2.创面是正常皮肤（组织）在外界致伤因子如外科手术、外力、热、电流、化学物质、低温以及机体内在因素如局部血液供应障碍等作用下所导致的损害。常伴有皮肤完整性的破坏以及一定量正常组织的丢失，同时，皮肤的正常功能受损。
3.为了避免伤口感染，伤口敷料应具有良好的抗菌活性，目前敷料实现抗菌作用通常是在敷料中添加的化学药物。化学药物本身有一定的副作用和刺激性；在较大面积使用或经常使用时，这些成分会被机体吸收，产生毒副作用，尤其对儿童不安全。


技术实现要素：

4.本发明提供一种生物酶伤口创面敷料及其制备方法，所述的敷料具有良好的抑菌效果，且具有良好的生物相容性。
5.本发明解决其技术问题采用以下技术方案：一种生物酶伤口创面敷料，由以下重量份原料制备而成：0.01~0.06份蛋白酶、0.05~0.2份胶原蛋白肽、0.1~0.25份三乙醇胺、0.2~0.8积雪草苷、0.2~0.7份凝血酶冻干粉、0.4~1份芫花提取物、0.5~1.2份白芷提取物、1~1.6份氯化钠、1~2份尿囊素、1~3份吐温60、3~7份甘油、6~15份氯化钙水溶液、65~80份去离子水。
6.本发明所述的生物酶伤口创面敷料采取上述的原料制备而成，将所述的敷料涂布于蚕丝布上，冻干，即可使用，所述的伤口创面敷料具有良好的抑菌消炎效果，具有良好的生物相容性，有效的促进细胞增殖分化，促进创面伤口愈合。
7.作为一种优选方案，所述生物酶伤口创面敷料由以下重量份原料制备而成：0.02~0.06份蛋白酶、0.05~0.12份胶原蛋白肽、0.18~0.25份三乙醇胺、0.2~0.6积雪草苷、0.3~0.7份凝血酶冻干粉、0.5~1份芫花提取物、0.8~1.2份白芷提取物、1~1.5份氯化钠、1.2~2份尿囊素、1.5~3份吐温60、4~7份甘油、8~15份氯化钙水溶液、70~80份去离子水。
8.作为一种优选方案，所述生物酶伤口创面敷料由以下重量份原料制备而成：0.05份蛋白酶、0.1份胶原蛋白肽、0.2份三乙醇胺、0.5积雪草苷、0.6份凝血酶冻干粉、0.8份芫花提取物、1份白芷提取物、1.2份氯化钠、1.5份尿囊素、2份吐温60、6份甘油、10份氯化钙水溶液、76.05份去离子水。
9.作为一种优选方案，所述芫花提取物的制备方法为：s1、将芫花清洗，干燥，粉碎至20~100目，得到芫花粉；s2、将芫花粉加入到40~70wt%甲醇溶液中，分散均匀，在45~60℃下超声处理25~45min，过滤，取滤液，在40~50℃、真空度0.04～0.06mpa下减压浓缩至滤液无醇味，离心，取上清液；
s3、将上清液加入到去离子水中，以0.4~0.8bv/h上ab-8大孔吸附树脂柱，以0.4~0.8bv/h的速度洗脱，以去离子水洗脱0.4~1.2 bv，以40~60wt％乙醇溶液洗1~2bv，收集乙醇溶液洗液，干燥，得到芫花提取物。
10.本发明通过清洗、干燥、粉碎，甲醇超声提取，减压浓缩，离心，大孔吸附树脂柱处理，得到了具有良好的抑菌效果的芫花提取物，且不同的芫花提取物的制备方法制备得到的芫花提取物的抑菌效果是不同的，采取本发明所述的芫花提取物制备得到的芫花提取物相比于其他方法能够更加显著的提高抑菌效果。
11.作为一种优选方案，所述s2中超声处理功率为400~800w。
12.作为一种优选方案，所述s2中芫花粉与甲醇溶液的重量比为1：4~10，所述s3中上清液与去离子水的重量比为1：2~4。
13.作为一种优选方案，所述白芷提取物的制备方法为：s11、将白芷清洗，干燥，粉碎至20~100目，得到白芷粉；s12、将白芷粉加入到酶解液中，在50~60℃下酶解2~5h，得到混合液；所述白芷粉与酶解液的重量比为1：4~10；s13、将混合液加入到无水乙醇中，置于微波提取装置中，微波处理，得到微波处理液；s14、将微波处理液在40~50℃、真空度0.04～0.06mpa下减压浓缩至滤液无醇味，干燥，得到白芷提取物。
14.本发明通过清洗、干燥、粉碎，酶解、微波辅助醇提、减压浓缩制备得到了能够显著抑菌的白芷提取物。
15.且发明人在所述的白芷提取物的制备方法中，采取不同的酶解液制备得到的白芷提取物的抑菌效果是不同的，采取本发明所述的由十六烷基三甲基溴化铵、木瓜蛋白酶、淀粉酶、去离子水组成的酶解液制备得到的白芷提取物具有良好的抑菌效果，而采取其他的酶会导致抑菌效果显著下降。
16.作为一种优选方案，所述酶解液由1~4重量份十六烷基三甲基溴化铵、2~6重量份木瓜蛋白酶、2~8重量份淀粉酶、80~95重量份去离子水配制而成。
17.作为一种优选方案，所述微波处理处理功率为600~1000w，微波处理时间为15~25min。
18.且本发明所制备得到的芫花提取物、白芷提取物二者在抑菌方面具有显著的协同增效作用。
19.本发明还提供了一种生物酶伤口创面敷料的制备方法，包括以下步骤：将氯化钠、尿囊素、吐温60、甘油加入到去离子水中，以200~600rpm转速搅拌40~100min，再加入积雪草苷、氯化钙水溶液，以200~600rpm转速搅拌20~60min，再加入蛋白酶、胶原蛋白肽、凝血酶冻干粉、芫花提取物、白芷提取物，以100~400rpm转速搅拌60~180min，再加入三乙醇胺，以50~100rpm转速搅拌20~80min，得到生物酶伤口创面敷料。
20.本发明的有益效果：所述的伤口创面敷料具有良好的抑菌消炎效果，具有良好的生物相容性，有效的促进细胞增殖分化，促进创面伤口愈合；将所述的敷料涂布于蚕丝布上，冻干，即可使用，本发明通过在配方体系中加入芫花提取物、白芷提取物显著提高抑菌效果，且二者在抑菌方面具有显著的协同增效作用，且所述的芫花提取物、白芷提取物为天
然提取物，具有良好的安全性。
具体实施方式
21.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
22.在本发明中，除特别声明，所述的份均为重量份。
23.实施例1一种生物酶伤口创面敷料，由以下重量份原料制备而成：0.05份蛋白酶、0.1份胶原蛋白肽、0.2份三乙醇胺、0.5积雪草苷、0.6份凝血酶冻干粉、0.8份芫花提取物、1份白芷提取物、1.2份氯化钠、1.5份尿囊素、2份吐温60、6份甘油、10份氯化钙水溶液、76.05份去离子水。
24.所述芫花提取物的制备方法为：s1、将芫花清洗，干燥，粉碎至80目，得到芫花粉；s2、将芫花粉加入到60wt%甲醇溶液中，分散均匀，在50℃下以500w超声处理30min，过滤，取滤液，在45℃、真空度0.05mpa下减压浓缩至滤液无醇味，以5000rpm转速离心8min，取上清液；所述芫花粉与甲醇溶液的重量比为1：5；s3、将上清液加入到去离子水中，以0.5bv/h上ab-8大孔吸附树脂柱，以0.5bv/h的速度洗脱，以去离子水洗脱1bv，以50wt％乙醇溶液洗1.2bv，收集乙醇溶液洗液，干燥，得到芫花提取物。
25.所述上清液与去离子水的重量比为1：3。
26.所述白芷提取物的制备方法为：s11、将白芷清洗，干燥，粉碎至50目，得到白芷粉；s12、将白芷粉加入到酶解液中，在55℃下酶解4h，得到混合液；所述白芷粉与酶解液的重量比为1：9；s13、将混合液加入到无水乙醇中，置于微波提取装置中，以800w微波处理20min，得到微波处理液；所述混合液与无水乙醇的重量比为1：2；s14、将微波处理液在45℃、真空度0.05mpa下减压浓缩至滤液无醇味，干燥，得到白芷提取物。
27.所述酶解液由2重量份十六烷基三甲基溴化铵、4重量份木瓜蛋白酶、5重量份淀粉酶、89重量份去离子水配制而成。
28.所述的生物酶伤口创面敷料的制备方法，包括以下步骤：将氯化钠、尿囊素、吐温60、甘油加入到去离子水中，以500rpm转速搅拌80min，再加入积雪草苷、氯化钙水溶液，以500rpm转速搅拌50min，再加入蛋白酶、胶原蛋白肽、凝血酶冻干粉、芫花提取物、白芷提取物，以200rpm转速搅拌100min，再加入三乙醇胺，以80rpm转速搅拌60min，得到生物酶伤口创面敷料。
29.实施例2一种生物酶伤口创面敷料，由以下重量份原料制备而成：0.01份蛋白酶、0.2份胶
原蛋白肽、0.1份三乙醇胺、0.8积雪草苷、0.2份凝血酶冻干粉、1份芫花提取物、0.5份白芷提取物、1.6份氯化钠、1份尿囊素、3份吐温60、3份甘油、15份氯化钙水溶液、73.59份去离子水。
30.所述芫花提取物的制备方法为：s1、将芫花清洗，干燥，粉碎至20目，得到芫花粉；s2、将芫花粉加入到50wt%甲醇溶液中，分散均匀，在50℃下以500w超声处理30min，过滤，取滤液，在45℃、真空度0.05mpa下减压浓缩至滤液无醇味，以5000rpm转速离心8min，取上清液；所述芫花粉与甲醇溶液的重量比为1：4；s3、将上清液加入到去离子水中，以0.5bv/h上ab-8大孔吸附树脂柱，以0.5bv/h的速度洗脱，以去离子水洗脱1bv，以60wt％乙醇溶液洗1.2bv，收集乙醇溶液洗液，干燥，得到芫花提取物。
31.所述白芷提取物的制备方法为：s11、将白芷清洗，干燥，粉碎至100目，得到白芷粉；s12、将白芷粉加入到酶解液中，在55℃下酶解3h，得到混合液；所述白芷粉与酶解液的重量比为1：4；s13、将混合液加入到无水乙醇中，置于微波提取装置中，以800w微波处理20min，得到微波处理液；所述混合液与无水乙醇的重量比为1：2；s14、将微波处理液在45℃、真空度0.05mpa下减压浓缩至滤液无醇味，干燥，得到白芷提取物。
32.所述酶解液由1重量份十六烷基三甲基溴化铵、6重量份木瓜蛋白酶、2重量份淀粉酶、91重量份去离子水配制而成。
33.所述的生物酶伤口创面敷料的制备方法，包括以下步骤：将氯化钠、尿囊素、吐温60、甘油加入到去离子水中，以500rpm转速搅拌80min，再加入积雪草苷、氯化钙水溶液，以500rpm转速搅拌50min，再加入蛋白酶、胶原蛋白肽、凝血酶冻干粉、芫花提取物、白芷提取物，以200rpm转速搅拌100min，再加入三乙醇胺，以80rpm转速搅拌60min，得到生物酶伤口创面敷料。
34.实施例3一种生物酶伤口创面敷料，由以下重量份原料制备而成： 0.06份蛋白酶、0.05份胶原蛋白肽、0.2份三乙醇胺、0.2积雪草苷、0.7份凝血酶冻干粉、0.4份芫花提取物、1.2份白芷提取物、1份氯化钠、2份尿囊素、2份吐温60、7份甘油、6份氯化钙水溶液、79.19份去离子水。
35.所述芫花提取物的制备方法为：s1、将芫花清洗，干燥，粉碎至100目，得到芫花粉；s2、将芫花粉加入到40wt%甲醇溶液中，分散均匀，在50℃下以500w超声处理30min，过滤，取滤液，在45℃、真空度0.05mpa下减压浓缩至滤液无醇味，以5000rpm转速离心8min，取上清液；所述芫花粉与甲醇溶液的重量比为1：4；s3、将上清液加入到去离子水中，以0.5bv/h上ab-8大孔吸附树脂柱，以0.5bv/h的速度洗脱，以去离子水洗脱1bv，以60wt％乙醇溶液洗1.2bv，收集乙醇溶液洗液，干燥，得到芫花提取物。
36.所述白芷提取物的制备方法为：s11、将白芷清洗，干燥，粉碎至60目，得到白芷粉；s12、将白芷粉加入到酶解液中，在55℃下酶解3h，得到混合液；所述白芷粉与酶解液的重量比为1：4；s13、将混合液加入到无水乙醇中，置于微波提取装置中，以800w微波处理20min，得到微波处理液；所述混合液与无水乙醇的重量比为1：2；s14、将微波处理液在45℃、真空度0.05mpa下减压浓缩至滤液无醇味，干燥，得到白芷提取物。
37.所述酶解液由4重量份十六烷基三甲基溴化铵、2重量份木瓜蛋白酶、8重量份淀粉酶、86重量份去离子水配制而成。
38.所述的生物酶伤口创面敷料的制备方法，包括以下步骤：将氯化钠、尿囊素、吐温60、甘油加入到去离子水中，以500rpm转速搅拌80min，再加入积雪草苷、氯化钙水溶液，以500rpm转速搅拌50min，再加入蛋白酶、胶原蛋白肽、凝血酶冻干粉、芫花提取物、白芷提取物，以200rpm转速搅拌100min，再加入三乙醇胺，以80rpm转速搅拌60min，得到生物酶伤口创面敷料。
39.对比例1对比例1与实施例1不同之处在于，对比例1采用等量的芫花提取物替换白芷提取物，其他都相同。
40.一种生物酶伤口创面敷料，由以下重量份原料制备而成：0.05份蛋白酶、0.1份胶原蛋白肽、0.2份三乙醇胺、0.5积雪草苷、0.6份凝血酶冻干粉、1.8份芫花提取物、1.2份氯化钠、1.5份尿囊素、2份吐温60、6份甘油、10份氯化钙水溶液、76.05份去离子水。
41.对比例2对比例2与实施例1不同之处在于，对比例2采用等量的白芷提取物替换芫花提取物，其他都相同。
42.一种生物酶伤口创面敷料，由以下重量份原料制备而成：0.05份蛋白酶、0.1份胶原蛋白肽、0.2份三乙醇胺、0.5积雪草苷、0.6份凝血酶冻干粉、1.8份白芷提取物、1.2份氯化钠、1.5份尿囊素、2份吐温60、6份甘油、10份氯化钙水溶液、76.05份去离子水。
43.对比例3对比例3与实施例1不同之处在于，对比例3所述的芫花提取物的制备方法不同于实施例1，其他都相同。
44.在本对比例，所述的芫花提取物的制备方法中，采用等量去离子水替换60wt%甲醇溶液。
45.所述芫花提取物的制备方法为：s1、将芫花清洗，干燥，粉碎至80目，得到芫花粉；s2、将芫花粉加入到去离子水中，分散均匀，在50℃下以500w超声处理30min，过滤，取滤液，在45℃、真空度0.05mpa下减压浓缩至滤液无醇味，以5000rpm转速离心8min，取上清液；所述芫花粉与去离子水的重量比为1：5；s3、将上清液加入到去离子水中，以0.5bv/h上ab-8大孔吸附树脂柱，以0.5bv/h的速度洗脱，以去离子水洗脱1bv，以50wt％乙醇溶液洗1.2bv，收集乙醇溶液洗液，干燥，得到
芫花提取物。
46.所述上清液与去离子水的重量比为1：3。
47.对比例4对比例4与实施例1不同之处在于，对比例4所述的白芷提取物的制备方法不同于实施例1，其他都相同。
48.在本对比例中所述的白芷提取物的制备方法中，酶解液采用纤维素酶、果胶酶配制而成。
49.所述白芷提取物的制备方法为：s11、将白芷清洗，干燥，粉碎至50目，得到白芷粉；s12、将白芷粉加入到酶解液中，在55℃下酶解4h，得到混合液；所述白芷粉与酶解液的重量比为1：9；s13、将混合液加入到无水乙醇中，置于微波提取装置中，以800w微波处理20min，得到微波处理液；所述混合液与无水乙醇的重量比为1：2；s14、将微波处理液在45℃、真空度0.05mpa下减压浓缩至滤液无醇味，干燥，得到白芷提取物。
50.所述酶解液由5.5重量份纤维素酶、5.5重量份果胶酶、89重量份去离子水配制而成。
51.为了进一步证明本发明的效果，提供了以下测试方法：1.抑菌试验：菌落计数法测试实施例1~3、对比例1~4所述的敷料对大肠杆菌（atcc 25922）和表皮葡萄球菌（atcc 12228）的抑菌效果，无菌条件下，分别将实施例1~3、对比例1~4的500μl敷料制备于24孔板每孔中。将500μl细菌悬浮液（菌体浓度均为106cfu /ml）加入到相对应的孔板中。接下来，将该24孔板在37℃下在相对湿润的气氛中放入培养箱中孵育。计算检测试样中的菌落数，计算抑菌率，测试结果见表1。
52.从表1中可看出，本发明所述的敷料具有良好的抑菌效果。
53.对比实施例1~3可知，不同原料的配比以及白芷提取物、芫花提取物的制备参数能够影响其抑菌效果。
54.对比实施例1与对比例1~2可知，本发明所述的白芷提取物、芫花提取物二者在抑菌方面具有显著的协同增效作用。
55.对比实施例1与对比例3可知，不同的芫花提取物的制备方法制备得到的芫花提取物的抑菌效果是不同的，采取本发明所述的芫花提取物的制备方法制备得到的芫花提取物相比于其他方法制备得到的芫花提取物具有更好的抑菌效果。
56.对比实施例1与对比例4可知，在所述的白芷提取物的制备方法中，采取不同的酶解液制备得到的白芷提取物的抑菌效果是不同的，采取本发明所述的由十六烷基三甲基溴化铵、木瓜蛋白酶、淀粉酶、去离子水组成的酶解液制备得到的白芷提取物具有良好的抑菌效果，而采取其他的酶会导致抑菌效果显著下降。
57.2. 生物相容性试验（扩增试验）：将实施例1~3制备的敷料的细胞毒性用nih 3t3细胞存活率测定，评价水凝胶的生物相容性。首先将nih 3t3细胞以5000个/孔的密度接种于96孔细胞培养板中并培养24h。将100μl的敷料加入到培养板孔中，并在培养板中留出无添加样品的细胞对照孔，然后在培养箱中培养2天。待培养结束后，移除培养板中的溶液，加入100μl的mtt的磷酸盐缓冲液溶液（0.5mg/ml），在37℃湿润环境中培育4h，弃去孔中的mtt，各加入100μl dmso并在室温下振荡1min混合均匀，之后用酶标仪记录570nm处的吸光值，测试结果见表2。
58.扩增倍数＝添加敷料测得的吸光值/无添加样品测得的吸光值。
59.表2 扩增倍数从表2中可看出，本发明所述的敷料能够有效的促进细胞增殖分化，具有良好的生物相容性。
60.以上述依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关工作人员完全可以在不偏离本发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。