一种用于治疗不孕症的药物组合物及其制备方法和用途

1.本发明属于药物组合物制剂领域，具体涉及一种治疗不孕症的药物组合物。


背景技术：

2.不孕症是全世界共同关注的疑难病症，也是妇科常见病之一，治疗较棘手，是急需解决的医学难题。由于输卵管在捡拾卵子和运输卵子、精子和胚胎方面发挥着重要作用，也是精子获能，精卵相遇、受精的场所，而感染和手术操作极易使输卵管黏膜受损，进而导致纤毛消失，造成蠕动障碍，甚至阻塞或与周围组织粘连，影响输卵管的通畅性功能。输卵管阻塞或通而不畅是女性不孕的重要原因，由输卵管炎引发的输卵管阻塞导致发展的不孕症称为输卵管炎性阻塞性不孕症。西医治疗大多采用输卵管导管导丝扩通术等腔镜介入治疗，而其费用高、创伤大，易复发，容易导致输卵管腔内再粘连，而药物治疗创伤小、毒副作用小，疗效高，再粘连率低，优势明显，是目前医学界关注的重点。
3.其中，中医药治疗通常采用活血化瘀、通经活络、助孕安胎的药理为基础，根据具体类型辩证加减用药，辅以中药外敷、针灸、中药例子导入等多种方法进行综合治疗，体现了中医药在加减用药上优势互补的特点，在减弱临床风险的同时，提高了正常宫内怀孕率。然而中医药治疗诊断与疗效判定标准缺乏统一性,且临床治疗周期相对较长。因此，在治疗因输卵管阻塞导致的不孕症上需要进一步研究新的药物，以更好发挥药物治疗疾病中无创性、毒副作用小、疗效肯定的优势，进一步研究具有明确治疗不孕症同时不良反应小、复发率低的药物十分有必要。因而本发明进一步研发制备疗效好、副作用小、更安全有效的药物组合物。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于寻求一种疗效好、副作用小、更安全有效的药物组合物，从而提供了一种治疗不孕症的药物组合物及其制备方法和用途。
5.所述治疗不孕症的药物组合物，由式i化合物、绿原酸、败酱草提取物、表儿茶素组成，
6.其中，式i化合物结构如下
[0007][0008]
所述治疗不孕症的药物组合物，以重量份数比包括以下原料：式i化合物0.02
‑
0.04份、绿原酸0.01
‑
0.04份、败酱草提取物0.08
‑
0.12份、表儿茶素0.08
‑
0.12份。
[0009]
更优选的，所述治疗不孕症的药物组合物，以重量份数比包括以下原料：式i化合物0.02
‑
0.03份、绿原酸0.02
‑
0.03份、败酱草提取物0.10
‑
0.12份、表儿茶素0.08
‑
0.1份。
[0010]
更优选的，所述治疗不孕症的药物组合物，以重量份数比包括以下原料：式i化合物0.02份、绿原酸0.03份、败酱草提取物0.1份、表儿茶素0.08份。
[0011]
本发明所述治疗不孕症的药物组合物按如下方法制备：取式i化合物、绿原酸、败酱草提取物、表儿茶素，粉碎，混合，其中败酱草提取物具体方法为取败酱草粉碎，加入8倍量石油醚回流脱脂2次，每次1h，在16倍量水85℃条件下浸3次，每次2h，合并药液，过滤浓缩而得。
[0012]
本发明还提供了一种含有上述的治疗不孕症的药物作为活性成份的药物制剂，该药物制剂是采用本领域常规制备方法制备成药剂学上的常用剂型，如口服液、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂等。优选片剂、口服液、口含片、咀嚼片、散剂。
[0013]
所述的药物制剂还可以包括医学上可接受的载体，所述各药材组份重量之和占所述药物总重量的百分比为1％
‑
99.9％；更优选的，所述各药材组份重量之和占所述药物总重量的百分比为10％
‑
80％；进一步优选的，所述各药材组份重量之和占所述药物总重量的百分比为30％
‑
60％。
[0014]
本发明还提供了所述药物组合物在制备治疗不孕症药物中的应用，可以治疗由输卵管炎引发的输卵管阻塞导致的不孕症。
[0015]
本发明中所述式i所示结构的化合物是一种已知黄酮类化合物，为从黑龙江省道地药材黄檗的乙醇提取物中分离出的经纯化得到的化合物。黄檗是芸香科黄檗属落叶乔木，树皮灰褐色至黑灰色，常将树皮内层经炮制后入药，其味苦性寒，具有清热解毒、泻火燥湿的作用。本发明式i所示结构的化合物为黄檗干燥叶提取物，其英文名称为(2s)
‑5‑
hydroxy
‑2‑
(4
‑
hydroxyphenyl)
‑8‑
(3
‑
methyl
‑2‑
buten
‑1‑
yl)
‑4‑
ox o
‑
3,4
‑
dihydro
‑
2h
‑
chromen
‑7‑
ylβ
‑
d
‑
glucopyranoside，常用名为phellodensin f，结构式为：
[0016]
提取方法为取黄檗干燥落叶,用8倍量95％乙醇回流提取2次,每次2h,回流浓缩得棕色浸膏。将浸膏分散于水中,过滤,滤液过diaionhp
‑
20大孔吸附树脂,用50％乙醇洗脱，经硅胶柱(80
‑
100目)分离,氯仿
‑
甲醇15∶1洗脱,再经sephadex lh
‑
20纯化得到式i化合物，具有潜在的抗炎、抗氧化作用。本发明中所述绿原酸是中药大血藤中重要的药效组分，具有清热解毒,活血祛风的功效,研究表明,绿原酸可直接作用于细菌细胞壁抑制细菌细胞壁的合成,使其具广泛抑菌活性。本发明中所述败酱草蒸馏液部位在体外对大肠杆菌、链球菌、金黄色葡萄球菌的抑菌活性较强，因此在本发明中采取水煎提取，败酱草提取物具体方法为取败酱草粉碎，加入8倍量石油醚回流脱脂
2次，每次1h，在16倍量水85℃条件下浸3次，每次2h，合并药液，过滤浓缩而得。本发明中所述表儿茶素是一种天然植物黄烷醇化合物，呈白色晶体，易溶于水、甲醇，在大量食品、中药材中存在，具有抗氧化、清除自由基、加强新陈代谢、调节免疫和抗肿瘤等功能，还有诸多其他生理活性，如降脂降糖、预防心血管疾病、抗炎、保护神经、抑菌等作用。本发明中各原料药均属于天然植物药为原料，经多年实验配伍而成，科学合理，通过药理实验发现，由式i化合物、绿原酸、败酱草提取物、表儿茶素为主要成分的药物组合物各组分之间相互协同作用，利用各成分的综合作用，通过散瘀、消炎，抑制炎症因子发展进而治疗输卵管阻塞性不孕症，无任何毒副作用，且不会产生依赖性。
[0017]
本发明的药物组合物，其组成是经过大量筛选得到的，其制备也经过了优化处理使达到最佳，为使达到优化，发明人做了大量的工作，经过了比较实验，筛选实验，并经过动物实验证实，本发明的制剂与现有技术相比在治疗不孕症上具有显著效果，相对现有技术而言本发明具有突出的实质性特定和显著的进步。
具体实施方式
[0018]
下面对本发明的实施例作详细说明，各实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
[0019]
实施例1
[0020]
一种治疗不孕症的药物组合物，将式i化合物0.03g、绿原酸0.02g、败酱草提取物0.1g、表儿茶素0.08g粉碎、混合。
[0021]
实施例2
[0022]
一种治疗不孕症的药物组合物，将式i化合物0.02g、绿原酸0.03g、败酱草提取物0.11g、表儿茶素0.08g粉碎、混合。
[0023]
实施例3
[0024]
一种治疗不孕症的药物组合物，将式i化合物0.03g、绿原酸0.02g、败酱草提取物0.1g粉碎混合。
[0025]
实施例4
[0026]
一种治疗不孕症的药物组合物，将式i化合物0.03g、败酱草提取物0.10g、表儿茶素0.08g粉碎、混合。
[0027]
实施例5
[0028]
一种治疗不孕症的药物组合物，将式i化合物0.03g、绿原酸0.02g、表儿茶素0.08g粉碎、混合。
[0029]
实施例6
[0030]
一种治疗不孕症的药物组合物，将式i化合物0.08g、绿原酸0.15g粉碎、混合。
[0031]
实施例7
[0032]
一种治疗不孕症的药物组合物，将败酱草提取物0.10g、表儿茶素0.13g粉碎、混合。
[0033]
实施例8
[0034]
一种治疗不孕症的药物组合物，式i化合物0.03g。
[0035]
实验例1本发明药物对不孕症的药效学试验
[0036]
(1)实验造模：240只wistar雌性大鼠适应性喂养一周，随机分为正常组20只，造模组220只。造模组大鼠禁食不禁水12h，用10％水合氯醛腹腔注射，约5分钟麻醉起效后将大鼠固定于操作台上，腹部剪毛、酒精、碘伏消毒后，下腹部正中切口长0.8
‑
1cm，暴露子宫、输卵管、卵巢，分别在子宫靠近输卵管处，按照输卵管至卵巢方向注射细菌悬液0.1ml(由大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌按2∶1∶1用无菌盐水稀释，浓度为3
×
109个/ml)，注射后依次缝合肌肉层、皮肤，酒精消毒后放置鼠笼中待自然苏醒。造模术后于第5、10、15、20天分别从造模大鼠中随机处死1只进行病理学观察，经验证20天后均表现为输卵管腔黏连、僵硬、闭塞，造模成功。
[0037]
(2)实验分组：把造模成功的200只大鼠随机分为10组，每组20只，分别做为模型组、阳性组、实施例1
‑
8各一组，分别于造模结束后第20天等容量灌胃给药。模型组灌胃生理盐水，阳性组给与中狮血府逐瘀片0.03g/ml(柴胡、当归、地黄、赤芍、红花、桃仁、枳壳、甘草、川穹、牛膝、桔梗)，实施例1
‑
8组分别给与实施例1药物至实施例8药物0.03g/ml，各组按照人鼠比重换算后按1ml/100g体积灌胃给药。未进行造模的正常组灌胃等体积生理盐水。所有组大鼠每天灌胃1次，连续给药30天。
[0038]
(3)实验方法：在给药15、30天给药后1.5
‑
2h，分别取5只大鼠进行水合氯醛麻醉，取双侧输卵管剔除多余脂肪组织后进行观察。肉眼观察正常组输卵管组织结构清晰、管腔通畅、纤毛丰富，细胞间连接紧密，未见纤维组织增生及炎性细胞浸润。模型组第15天管壁增厚、管腔变小、纤毛粘连，纤维组织增生、血管扩张，第30天管壁增厚明显、管腔明显变小，纤毛增粗、纤维组织明显增生，可见慢性炎性细胞浸润。各给药组第15天输卵管粗细均匀，与周围组织有不同程度粘连、可见不同程度积水。
[0039]
取腹主动脉血5ml，采用双抗夹心elisa法检测血清中il
‑
1、tnf
‑
α含量，实验结果见表1。采用免疫组化sabc法检测输卵管egfr和icam
‑
1蛋白表达，实验结果见表2。取血加抗凝剂后，采用全自动血黏度仪检测血液流变学指标，包括全血黏度、红细胞刚性指数、红细胞聚集指数和红细胞压积，实验结果见表3。
[0040]
表1各组药物对大鼠血清中il
‑
1、tnf
‑
α水平的影响(x
±
s，pg/ml，n＝5)
[0041][0042]
由于il
‑
1、tnf
‑
α是炎症反应的主要标志之一，具有多种生物学活性，在慢性炎症病理生理的发展过程中发挥一定作用，最终能导致机体的局部组织粘连及肉芽纤维组织的生长，在炎症损伤的输卵管血清中il
‑
1、tnf
‑
α含量显著增加，说明了其参与了输卵管的慢性炎症反应，降低il
‑
1、tnf
‑
α含量可以进一步治疗炎性阻塞性不孕症。根据表1实验结果显示，模型组il
‑
1、tnf
‑
α含量相较正常对照组的il
‑
1、tnf
‑
α含量显著升高,说明使用混合菌液造模可使血液中il
‑
1、tnf
‑
α含量增加而引发不孕症。实施例1
‑
8组及阳性组中il
‑
1、tnf
‑
α含量与正常对照组、模型组两组相比具有明显差异，其中实施例3
‑
8组的il
‑
1、tnf
‑
α含量降低明显，说明实施例3
‑
8可以通过降低il
‑
1、tnf
‑
α含量来治疗不孕症。实施例1
‑
2组、阳性给药组的il
‑
1、tnf
‑
α含量显著降低，说明实施例1
‑
2、阳性给药组可以通过降低il
‑
1、tnf
‑
α含量治疗不孕症。通过比较实施例1
‑
2、阳性组与实施例3
‑
8的数据，可进一步说明，实施例1
‑
2组、阳性给药组通过降低il
‑
1、tnf
‑
α含量而发挥对不孕症的治疗作用强于实施例3
‑
8组的药物。
[0043]
表2各组药物对大鼠输卵管egfr和icam
‑
1蛋白表达水平的影响(x
±
s，n＝5)
[0044][0045]
由于egfr表皮生长因子受体普遍存在于表皮细胞和基质细胞中，在调节细胞生长和组织修复过程中作用突出，正常输卵管中egfr分布与输卵管上皮分化程度有关，egfr的高表达增强了上皮细胞对生长因子的反应性，促进其与受体结合形成复合物，影响输卵管上皮的增值分化过程，促进炎症进一步加重，从而导致不孕症。细胞粘附分子icam
‑
1属于表达于细胞表面的糖蛋白，在正常情况下很少出现，在受到il
‑
1、tnf
‑
α刺激后明显增加，其表达的增加能促进或加剧炎症的发生，增加细胞间的粘附。根据表2实验结果显示，正常组输卵管上皮细胞中未见icam
‑
1表达，模型组egfr蛋白、icam
‑
1表达相较正常对照组的egfr蛋白、icam
‑
1表达显著升高,说明使用混合菌液造模可使输卵管上皮细胞中egfr蛋白、icam
‑
1表达增加而引发不孕症。实施例1
‑
8组及阳性组中egfr蛋白、icam
‑
1表达与正常对照组、模型组两组相比具有明显差异，其中实施例3
‑
8组的egfr蛋白、icam
‑
1表达降低明显，说明实施例3
‑
8可以通过降低egfr蛋白、icam
‑
1表达来治疗不孕症。实施例1
‑
2组、阳性给药组的egfr蛋白、icam
‑
1表达显著降低，说明实施例1
‑
2、阳性给药组可以通过降低egfr蛋白、icam
‑
1表达治疗不孕症。通过比较实施例1
‑
2、阳性组与实施例3
‑
8的数据，可进一步说明，实施例1
‑
2组、阳性给药组通过降低egfr蛋白、icam
‑
1表达而发挥对不孕症的治疗作用强于实施例3
‑
8组的药物。
[0046]
表3各组药物对大鼠血液流变学指标的影响(x
±
s，n＝5)
[0047][0048]
全血黏度、红细胞刚性指数、红细胞聚集指数、红细胞压积等均属于血液流变学指标，可以作为评价血液黏稠度的重要依据，在输卵管炎性阻塞性不孕大鼠模型中这几个指标会呈现出一定程度的提高。根据表3实验结果显示，模型组大鼠全血黏度、红细胞刚性指数、红细胞聚集指数、红细胞压积均显著升高，说明造模成功。各治疗组的血液流变学指标均较模型组明显降低，实施例1
‑
8组及阳性组中全血黏度、红细胞刚性指数、红细胞聚集指数、红细胞压积与正常对照组、模型组两组相比具有明显差异，其中实施例3
‑
8组的全血黏度、红细胞刚性指数、红细胞聚集指数、红细胞压积含量降低明显，说明实施例3
‑
8可以通过降低全血黏度、红细胞刚性指数、红细胞聚集指数、红细胞压积治疗不孕症。实施例1
‑
2组、阳性给药组的全血黏度、红细胞刚性指数、红细胞聚集指数、红细胞压积显著降低，说明实施例1
‑
2、阳性给药组可以通过降低全血黏度、红细胞刚性指数、红细胞聚集指数、红细胞压积治疗不孕症。通过比较实施例1
‑
2、阳性组与实施例3
‑
8的数据，可进一步说明，实施例1
‑
2组、阳性给药组通过降低全血黏度、红细胞刚性指数、红细胞聚集指数、红细胞压积而发挥对不孕症的治疗作用强于实施例3
‑
8组的药物。
[0049]
将每组剩余10只大鼠，各放入2只雄性大鼠，同笼饲养30天，分别观察各组大鼠受孕情况，结果见表4。
[0050]
表4各组药物对大鼠受孕率的影响(x
±
s，n＝10)
[0051][0052]
灌胃结束后对每组大鼠受孕率进行了比较，发现正常组受孕率为100％，模型组受孕率仅为10％，实验例1
‑
8组、阳性组各组分别为30％
‑
90％不等，该结果进一步说明实施例1
‑
2组、阳性组治疗炎性阻塞性不孕症的治愈率达到60％以上，其治疗效果明显优于实施例3
‑
8组的作用效果。同时上述数据说明本发明药物中各种药物原料之间的配伍精良，缺一不可，各种药物原料之间的组合产生了明显的协同增效的技术效果。
[0053]
实验例2本发明药物对不孕症的临床试验
[0054]
(1)分组：100例经子宫输卵管碘油造影检查确诊输卵管阻塞性不孕患者，其中原发性不孕26例,继发性不孕74例；输卵管双侧不通51例,双侧通而不畅35例，一侧阻而对侧不畅14例；年龄22
‑
42岁，病程1
‑
5年，随机分为2组，其中治疗组60例,对照组40例，两组在年龄、不孕年限、输卵管通畅情况等方面无明显差异。
[0055]
(2)治疗标准：痊愈：子宫输卵管造影证实通畅。有效：子宫输卵管造影提示输卵管通而不畅，或阻塞部位缩小。无效：输卵管依旧堵塞。对照组给与中狮血府逐瘀片，主要成分为柴胡、当归、地黄、赤芍、红花、桃仁、枳壳、甘草、川穹、牛膝、桔梗；实验组给与本发明实施例1制备的药物，3个月为一疗程。
[0056]
(3)结果，见表5。
[0057]
表5两组治疗效果及1年内受孕率比较
[0058][0059]
根据表5结果可知，实验组的治愈率、总有效率明显高于对照组的愈率、总有效率，同时一年内随访受孕人数和受孕率方面，实验组有明显优势。
[0060]
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对
于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。