一种美白胶原蛋白肽冻干粉及其制备方法与流程

1.本发明属于护肤外用药物领域，具体涉及一种美白胶原蛋白肽冻干粉及其制备方法。


背景技术：

2.人体皮肤的色素沉着过程十分重要，它不仅决定皮肤、眼睛和头发的颜色，还是保护皮肤免受紫外线辐射损伤的首要屏障。但黑色素代谢障碍可引起如色斑、雀斑、黄褐斑和黑色素瘤等色素沉着症。黑色素代谢过程包括黑色素的生成、黑色素由黑素细胞向角质形成细胞的转运以及黑色素在角质形成细胞内的分布与降解。简单过程如下：首先，在基因的调控下，形成黑素体的结构，酪氨酸酶在内质网合成后到达高尔基体进行糖化加工,然后由运转囊泡携带到达ⅱ期黑素体。在黑素体中，酪氨酸酶等蛋白酶催化体内酪氨酸经一系列生化反应过程合成黑色素，通过树枝状突起将黑色素颗粒转运至周围的角质形成细胞，在角质形成细胞分布后，随表皮生长移行到角质层，最后随角质层周期换新而脱落。
3.胶原是一种天然蛋白质，广泛存在于动物的皮肤、骨、软骨、牙齿、肌腱韧带和血管中，是哺乳动物体内含量最多、分布最广的蛋白质，是结缔组织极重要的结构蛋白质，起着支撑器官、保护肌体的功能，具有很强的生物活性和生物功能。胶原是大分子蛋白质，并不能被人体直接吸收。胶原蛋白肽是胶原的水解产物，含有胶原蛋白全部的氨基酸，其良好的吸收性、溶解性、吸水性等是胶原不可比拟的。
4.目前，胶原蛋白肽产品种类很多，但缺乏美白效果良好的产品。


技术实现要素：

5.针对现有美白胶原蛋白肽产品缺乏的问题，本发明提供一种美白胶原蛋白肽冻干粉，所述胶原蛋白肽冻干粉的酪氨酸酶抑制活性可达50％以上，可降低黑素瘤细胞的黑色素含量40％以上。
6.本发明还提供了上述美白胶原肽冻干粉的制备方法，所述制备方法对多种来源的胶原蛋白都能利用，通过两次复合酶酶解，制备的胶原蛋白肽冻干粉美白活性高，工艺简单，容易操作，能进行工业化大规模生产。
7.为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：
8.一种美白胶原蛋白肽冻干粉，所述冻干粉中蛋白的含量≥95wt.％；其中所述蛋白中分子量为500-1000的蛋白肽的含量≥95wt.％；所述蛋白肽中含有酪氨酸残基的短肽的含量≥50wt.％。
9.一种上述美白胶原蛋白肽冻干粉的制备方法，采用以下步骤：
10.(1)原料准备：将胶原蛋白加入水中，调节ph并搅拌制备溶液；
11.(2)一次酶解：向步骤(1)中的溶液加入胃蛋白酶和木瓜蛋白酶，调节ph并搅拌，控温酶解，灭酶，调节ph至中性；
12.(3)膜分离：对步骤(2)得到的酶解液进行超滤处理，收集截留液；
13.(4)二次酶解：将步骤(3)得到的截留液加入胰糜复合蛋白酶和碱性蛋白酶，调节ph并搅拌，控温酶解，灭酶；通过二次酶解降低胶原蛋白肽的分子量，便于吸收；
14.(5)真空冷冻干燥：将步骤(4)得到的酶解液进行真空冷冻干燥，干燥后的粉末即为美白胶原蛋白肽冻干粉。
15.优选地，步骤(1)所述胶原蛋白来源于动物皮、骨或鱼鳞；步骤(1)所述ph为3-4。
16.优选地，步骤(1)采用乙酸调节ph。
17.优选地，步骤(2)所述胃蛋白酶和木瓜蛋白酶的添加量为步骤(1)所述胶原蛋白质量的0.3-1.0％，胃蛋白酶：木瓜蛋白酶为1:1-1:3，ph为1.5-2.5，酶解温度为30-40℃，酶解时间0.5-2小时。
18.优选地，步骤(3)所述超滤膜截留分子量为1500da，通过超滤去除一次酶解释放的短肽，富集含有tyr残基的肽段。
19.步骤(4)所述胰糜复合蛋白酶和碱性蛋白酶添加量为步骤(1)所述胶原蛋白质量的1.0-2.0％，胰糜复合酶：碱性蛋白酶为3:1-2:1，ph为7.5-8.5，酶解温度为30-40℃，酶解时间1-3小时。
20.本发明中，所述的真空冷冻干燥为本领域的常规技术，本领域技术人员可以根据需要进行选择条件，在此不做特殊限定。
21.与现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：本发明制备方法可以制备美白胶原蛋白肽冻干粉，对多种来源的胶原蛋白都能利用，制备的胶原蛋白肽冻干粉美白活性高，酪氨酸酶抑制活性可达50％以上，可降低黑素瘤细胞的黑色素含量40％以上，且该方法工艺简单，容易操作，能进行工业化大规模生产。
具体实施方式
22.以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制，在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
23.实施例1
24.一种美白胶原蛋白肽冻干粉的制备方法，采用以下步骤：
25.(1)原料准备：将100g猪皮胶原蛋白加入水中，用乙酸调节ph3.0并搅拌制备溶液；
26.(2)一次酶解：向步骤(1)中的溶液加入0.15g胃蛋白酶和0.15g木瓜蛋白酶，调节ph为1.5并搅拌，控温30℃酶解0.5小时，灭酶，调节ph至中性；
27.(3)膜分离：对步骤(2)得到的酶解液用截留分子量为1500da的超滤膜进行超滤处理，收集截留液；
28.(4)二次酶解：将步骤(3)得到的截留液加入0.75g胰糜复合蛋白酶和0.25g碱性蛋白酶，调节ph为7.5并搅拌，控温30℃酶解1小时，灭酶；
29.(5)真空冷冻干燥：将步骤(4)得到的酶解液进行真空冷冻干燥，干燥后的粉末即为美白胶原蛋白肽冻干粉。
30.经检测，制备的胶原蛋白肽冻干粉，所述冻干粉中蛋白的含量为95.4wt.％，其中分子量为500-1000的蛋白肽含量为96.1wt.％，含有酪氨酸残基的短肽含量为51.3wt.％，酪氨酸酶抑制活性为52.4％，可降低黑素瘤细胞的黑色素含量41.3％。
31.实施例2
32.一种美白胶原蛋白肽冻干粉的制备方法，采用以下步骤：
33.(1)原料准备：将100g牛骨胶原蛋白加入水中，用乙酸调节ph4.0并搅拌制备溶液；
34.(2)一次酶解：向步骤(1)中的溶液加入0.2g胃蛋白酶和0.4g木瓜蛋白酶，调节ph为2.5并搅拌，控温40℃酶解2小时，灭酶，调节ph至中性；
35.(3)膜分离：对步骤(2)得到的酶解液用截留分子量为1500da的超滤膜进行超滤处理，收集截留液；
36.(4)二次酶解：将步骤(3)得到的截留液加入1.5g胰糜复合蛋白酶和0.5g碱性蛋白酶，调节ph为8.5并搅拌，控温40℃酶解3小时，灭酶；
37.(5)真空冷冻干燥：将步骤(4)得到的酶解液进行真空冷冻干燥，干燥后的粉末即为美白胶原蛋白肽冻干粉。
38.经检测，制备的胶原蛋白肽冻干粉，所述冻干粉中蛋白的含量为96.7wt.％，其中分子量为500-1000的蛋白肽含量为98.3wt.％，含有酪氨酸残基的短肽含量为50.8wt.％，酪氨酸酶抑制活性为51.2％，可降低黑素瘤细胞的黑色素含量40.7％。
39.实施例3
40.一种美白胶原蛋白肽冻干粉的制备方法，采用以下步骤：
41.(1)原料准备：将100g鱼鳞胶原蛋白加入水中，用乙酸调节ph3.5并搅拌制备溶液；
42.(2)一次酶解：向步骤(1)中的溶液加入0.35g胃蛋白酶和0.35g木瓜蛋白酶，调节ph为2.0并搅拌，控温35℃酶解1小时，灭酶，调节ph至中性；
43.(3)膜分离：对步骤(2)得到的酶解液用截留分子量为1500da的超滤膜进行超滤处理，收集截留液；
44.(4)二次酶解：将步骤(3)得到的截留液加入1.0g胰糜复合蛋白酶和0.5g碱性蛋白酶，调节ph为8.0并搅拌，控温35℃酶解2小时，灭酶；
45.(5)真空冷冻干燥：将步骤(4)得到的酶解液进行真空冷冻干燥，干燥后的粉末即为美白胶原蛋白肽冻干粉。
46.经检测，制备的胶原蛋白肽冻干粉，所述冻干粉中蛋白的含量为97.3wt.％，其中分子量为500-1000的蛋白肽含量为98.1wt.％，含有酪氨酸残基的短肽含量为53.4wt.％，酪氨酸酶抑制活性为55.1％，可降低黑素瘤细胞的黑色素含量42.7％。
47.对比例1
48.(1)将100g猪皮胶原蛋白加入水中，用乙酸调节ph3.0并搅拌制备溶液；
49.(2)酶解：向步骤(1)中的溶液加入0.15g胃蛋白酶和0.15g木瓜蛋白酶，调节ph为1.5并搅拌，控温30℃酶解0.5小时，灭酶，调节ph至中性；
50.(3)膜分离：对步骤(2)得到的酶解液用截留分子量为1500da的超滤膜进行超滤处理，收集截留液；
51.(4)真空冷冻干燥：将步骤(3)得到的截留液进行真空冷冻干燥，干燥后的粉末即为胶原蛋白肽冻干粉。
52.对比例2
53.(1)将100g牛骨胶原蛋白加入水中，用乙酸调节ph3.0并搅拌制备溶液；
54.(2)酶解：向步骤(1)中的溶液加入0.75g胰糜复合蛋白酶和0.25g碱性蛋白酶，调
节ph为7.5并搅拌，控温30℃酶解1小时，灭酶；
55.(3)膜分离：对步骤(2)得到的酶解液用截留分子量为1500da的超滤膜进行超滤处理，收集截留液；
56.(4)真空冷冻干燥：将步骤(3)得到的截留液进行真空冷冻干燥，干燥后的粉末即为胶原蛋白肽冻干粉。
57.对比例3
58.(1)将100g鱼鳞胶原蛋白加入水中，用乙酸调节ph3.0并搅拌制备溶液；
59.(2)一次酶解：向步骤(1)中的溶液加入0.3g胃蛋白酶，调节ph为1.5并搅拌，控温30℃酶解0.5小时，灭酶，调节ph至中性；
60.(3)二次酶解：将步骤(2)得到的酶解液加入0.75g胰糜复合蛋白酶和0.25g碱性蛋白酶，调节ph为7.5并搅拌，控温30℃酶解1小时，灭酶；
61.(5)真空冷冻干燥：将步骤(4)得到的酶解液进行真空冷冻干燥，干燥后的粉末即为胶原蛋白肽冻干粉。
62.表1胶原蛋白肽冻干粉结果对比表
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