一种防治心肌纤维化的中药组合物及其医药用途的制作方法

1.本发明涉及一种组合物及其制备方法，具体涉及一种防治心肌纤维化的中药组合物及其医药用途，属于医药领域。


背景技术：

2.心肌纤维化(myocardial fibrosis，mf)是多种心脏疾病发展到一定阶段的共同病理改变，是最具特征性的结构改变之一，为mi后心室重构的主要表现之一，可促进心肌收缩和舒张功能失调。研究显示，心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts，cfs)的长期激活，即增强的胶原含量、肌成纤维细胞分化和伴随的细胞外基质分泌，可导致心肌纤维化。
3.心肌细胞是一种高度分化的终末细胞，在长期的机械刺激、体液因素刺激压力和/或容积负荷过度等病理状态下，心肌成纤维细胞增殖并且向肌成纤维细胞表型转化，使胶原蛋白等细胞外基质的合成增加及降解减少，这些细胞外基质成分的含量可以用来评估心肌纤维化的程度。其中ⅰ型、ⅲ型胶原是细胞外基质的主要组成成分，分别占心肌胶原的80％和11％。随着心肌纤维化程度的增加，心肌僵硬度增加、顺应性降低，导致充盈受限和舒张功能不全，这将直接激活raas系统，导致体内水钠潴留，进一步刺激心房分泌心房钠尿因子(anf)以排水利钠，anf是临床上反映患者心功能的一项重要指标。
4.目前，在临床上对于心肌纤维化最主要的药物治疗方法包括血管紧张素转化酶抑制剂(acei)、醛固酮受体拮抗剂(arb)、β受体阻滞剂等。但是由于acei类药物可引起刺激性干咳及血管性水肿，很多病人无法耐受。服用arb类药物，高钾血症的发生率高达8.6％～26％，且常以心律失常为首发表现，用药期间必须密切随访血钾和心电图。β受体阻滞剂存在引起低血压、诱发或加重支气管哮喘、加重房室传导阻滞的风险，而且长期使用后突然停药常使原来的症状加重。
5.川蛭通络胶囊用于中风病中经络(脑梗死)恢复期血瘀气虚证，症见:半身不遂，言语涩或不语，偏身麻木，口舌歪斜，神倦乏力，舌质暗，或有瘀斑、瘀点，舌下青筋显露，脉沉细、细涩或细弦，苔薄白。川蛭通络胶囊由水蛭、川芎、黄芪、丹参等4中药制成，以补阳还五汤为依据研发而成。
6.王飞等(王飞,饶峰,秦亚勤,赵福兰.川蛭通络胶囊联合瑞舒伐他汀对血脂正常急性脑梗死患者的疗效[j].世界中医药,2019,14(04):887-890)研究了川蛭通络胶囊联合瑞舒伐他汀对血脂正常急性脑梗死患者的疗效，发现川蛭通络胶囊联合瑞舒伐他汀治疗血脂正常aci的疗效明显好于单用瑞舒伐他汀。吴清强等(吴清强,林亚发,王永和.川蛭通络胶囊联合头孢呋辛治疗成人大叶性肺炎的临床效果观察[j].中药药理与临床,2017,33(01):175-177)研究发现联合使用川蛭通络胶囊后患者炎症水平控制更理想，推测其原因可能与川蛭通络胶囊中的多种中药成分具有一定的抗菌活性有关。


技术实现要素：

[0007]
本发明的主要目的在于提供一种具有防治心肌纤维化的中药组合物，所述的中药
组合物主要由水蛭、川芎、黄芪、丹参制备而成。
[0008]
本发明目的之一在于，提供上述中药组合物的组成，即所述中药组合物主要由以下原料制备而成：
[0009]
水蛭300-750重量份川芎300-750重量份丹参250-500重量份黄芪250-500重量份。
[0010]
优选的，所述中药组合物主要由以下原料制备而成：
[0011]
水蛭450-700重量份川芎450-700重量份丹参300-450重量份黄芪300-450重量份。
[0012]
进一步优选的方案之一，所述中药组合物主要由以下原料制备而成：
[0013]
水蛭600重量份川芎600重量份丹参400重量份黄芪400重量份。
[0014]
本发明目的之二在于提供上述中药组合物的具体用途，主要有：
[0015]
本发明通过动物实验发现，灌胃本发明的中药组合物的各组血清中i型胶原含量、心肌组织羟脯氨酸的含量、左心室指数均得到了显著的降低，与模型对照组相比具有显著性差异(p＜0.05)或极显著性差异(p＜0.01)，这说明本发明的中药组合物可通过抑制异丙肾上腺素诱导的i型胶原合成的增加，从而抑制大鼠心肌纤维化的形成和发展。
[0016]
本发明研究了该中药组合物对自发性高血压大鼠(shr)心肌纤维化的影响，证实了本发明中药组合物具有抗心肌纤维化的作用。
[0017]
川蛭通络胶囊方中以水蛭为君药，善化瘀血，破血消积；川芎为臣药，其性上行，可协同水蛭达于脑络，活血通络，使整体气血流畅，脏腑功能健旺；黄芪、丹参为佐药，黄芪补气以行血滞、温通经脉，单身活血祛瘀、安神养心；全方共奏活血化瘀、益气通络之功效。
[0018]
本发明目的之三在于提供含有上述中药组合物的中药制剂，所述的中药制剂为临床上可接受的口服制剂；
[0019]
优选的，所述临床上可接受的口服制剂为丸剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂或液体口服制剂中的一种或多种；
[0020]
进一步更优选的，所述口服制剂为胶囊剂。
[0021]
与现有技术相比，本发明取得了显著的技术效果：
[0022]
本发明中药组合物用于防治心肌纤维化时效果显著，作用全面。临床使用结果表明，本发明中药组合物对毒副作用低。本发明防治心肌纤维化新用途的发现具有广阔的市场前景。
附图说明
[0023]
图1为实施例1本发明中药组合物防治心肌纤维化的he染色和pas染色。
具体实施例
[0024]
组方实施例1
[0025]
水蛭600重量份川芎600重量份丹参400重量份黄芪400重量份。
[0026]
组方实施例2
[0027]
水蛭300重量份川芎750重量份丹参250重量份黄芪500重量份。
[0028]
组方实施例3
[0029]
水蛭750重量份川芎300重量份丹参500重量份黄芪250重量份。
[0030]
组方实施例4
[0031]
水蛭700重量份川芎450重量份丹参450重量份黄芪300重量份。
[0032]
组方实施例5
[0033]
水蛭450重量份川芎700重量份丹参300重量份黄芪450重量份。
[0034]
实施例1本发明中药组合物防治心肌纤维化的疗效研究
[0035]
异丙肾上腺素为β1受体激动剂，已有大量资料表明，连续应用异丙肾上腺素可引起大鼠心肌纤维化的发生，其主要机制是增加了循环系统和心肌局部的angll浓度。该模型由于具有简单易行、费用低廉、效果稳定持久等特点，已成为研究心肌纤维化的常用方法。
[0036]
sd大鼠40只，雌性各半，体重180-220g，随机分为如下5组：正常组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组，每组8只。
[0037]
除正常组，其余各组均背部皮下注射异丙肾上腺素5mg/(kg
·
d)，连续7d，中药各组大鼠自第2天开始灌胃给予川蛭通络胶囊剂，14d，每天1次，每次灌胃剂量为10ml/kg，正常组和模型组每日给予相同体积的纯化水。
[0038]
川蛭通络胶囊：鲁南厚普制药有限公司；
[0039]
中药低剂量组：60mg/kg川蛭通络胶囊；
[0040]
中药中剂量组：120mg/kg川蛭通络胶囊；
[0041]
中药高剂量组：240mg/kg川蛭通络胶囊；
[0042]
末次给药后禁食不禁水24h，大鼠称体重后10％水合氯醛(0.3ml/kg)麻醉，腹主动脉取血，取血清备用，开胸取出心脏，去除大血管和心外膜脂肪组织，用生理盐水清洗，吸干后称左心室重量，计算左心室重量指数(左心室重量/体重)。
[0043]
取血清，按照elisa试剂盒说明，用酶标仪测定血清中i型胶原的含量。另外，心脏组织用冰生理盐水冲洗后，取150mg左心室心肌组织用碱水解法，按照试剂盒说明在550nm波长处用分光光度法测定心肌组织羟脯氨酸的含量。以上指标的检测结果参见表1。
[0044]
表1本发明中药组合物对心肌纤维化大鼠的各项指标影响
[0045][0046]
与正常组比较
#
p＜0.05，
#
p＜0.01；
[0047]
与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01。
[0048]
通过表1的试验结果可以看出，模型组血清中i型胶原含量、心肌组织羟脯氨酸的含量以及左心室指数明显高于对照组。本发明采用异丙肾上腺素诱发大鼠心肌纤维化模型，表现为左室指数升高，左心室羟脯氨酸含量增加，血清中i型胶原含量增高，表明心肌纤维化模型成立。
[0049]
中药组合物对心肌纤维化大鼠病理改变结果见图1。图1显示，模型组大鼠心肌细
胞变性坏死，间质炎细胞浸润伴纤维组织增生；给药本发明中药组合物后，病变明显改善。本发明中药组合物能改善心肌纤维化和重构。
[0050]
灌胃本发明中药组合物的中药各组的血清中i型胶原含量、心肌组织羟脯氨酸的含量、左心室指数均显著降低，与模型对照组相比具有显著性差异或极显著性差异，这说明，本发明的中药组合物可通过抑制异丙肾上腺素诱导的i型胶原合成的增加，从而抑制大鼠心肌纤维化的形成和发展。
[0051]
实施例2本发明中药组合物对shr大鼠心肌纤维化的作用
[0052]
本发明应用自发性高血压大鼠(shr)作为实验动物模型，是按下列文献(kuijpers m h m,jong w d.spontaneous hypertension in the fawn-hooded rat:a cardiovascular disease model[j].j hypertens suppl,1986,4(3):41-4.)方法进行的。该方法提出fawn-hooded rat能在5周龄即可出现自发性高血压，随着年龄增长而增高，在1岁龄时可达180-240mmhg，并伴随着心脏、肾脏、肝脏、脾脏等器官的重量增加，组织病理学可见心肌纤维化以及心肌梗死等改变。以后曾有很多学者把shr应用于高血压导致心肌纤维化的研究中，如文献(barone f c,campbell w g,nelson a h,et al.carvedilol prevents severe hypertensive cardiomyopathy and remodeling[j].journal of hypertension,1998,16(6):871.，以及huikeshoven m,wal a cv d,tukkie r,et al.the old spontaneously hypertensive rat as a model for transmyocardial laser revascularisation research[j].lasers in medical ence,2003,18(1):12-18.)。故自发行高血压大鼠是研究高血压导致心肌纤维化的一个很可靠的模型。
[0053]
32只，12周龄雄性shr大鼠随机分成4组，每组8只：
[0054]
中药低剂量组：120mg/kg川蛭通络胶囊；
[0055]
中药高剂量组：240mg/kg川蛭通络胶囊；
[0056]
阳性药组，给予卡托普利35mg/kg；
[0057]
shr空白对照组，给予等体积的蒸馏水。
[0058]
各组均通过灌胃给药28天，实验结束，称量体重及测血压后处死。
[0059]
心肌胶原形态学的观察及定量分析
[0060]
在心肌冠状沟下约1mm处，取左心室心肌横切面。用boum’s液固定，石蜡包埋，制片，切片厚约6μm。苦味酸天狼星红染色法使胶原特殊染色，心肌细胞呈黄色，胶原呈红色。采用光学显微镜测定，每个心肌切面内膜和外膜各取固定上下左右四个视野，用计算机图像分析，通过灰度调节区别胶原和非胶原成分，测量心肌切片的胶原容积分数(cvf＝心肌胶原面积/所测视野面积)。心肌小动脉为小动脉周围胶原和小动脉面积之比。
[0061]
结果
[0062]
本发明中药组合物对shr大鼠心肌纤维化的作用
[0063]
各组大鼠在用药后的心内、外膜以及小动脉心肌胶原容积分数见表2。
[0064]
与空白对照组比较，本发明中药组合物各组心室内、外膜及心肌小动脉周围的胶原均有减少(p＜0.05)，本发明中药组合物低、高剂量组对shr大鼠的心肌纤维均有显著的抑制作用。
[0065]
表2本发明中药组合物对shr心内、外膜以及小动脉心肌胶原容积分数的影响
[0066][0067][0068]
与空白组比较
#
p＜0.05，
##
p＜0.01。
[0069]
结论：本实验表明直接给予自发性高血压诱发心肌纤维化的大鼠模型实验，证明本发明中药组合物，具有抗心肌纤维化的作用。
[0070]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。