中药枳实乙醇提取物在制备消毒产品中的应用

1.本发明涉及中药枳实乙醇提取物在制备消毒产品中的应用。


背景技术：

2.近年来，简称“eskape”的多重耐药菌感染遍及全球各地，对各种结构类型的临床抗菌药物相继耐药，成为超级广谱耐药菌，严重威胁着人类公共健康和全球经济发展。而消毒产品在公共环境中的广泛应用，将更加加重了全球细菌耐药的发展，为此，消毒产品规定不允许添加有抗生素成分。为增强消毒产品的消毒效果和防止细菌很容易产生耐药，中药及其组分的抗菌抑菌效果、多靶点难耐药作用机制逐渐进入了公众的视野。由于中药来源于自然资源，安全无毒、且具有各种风香和气味，同时有协同增效和细菌不易产生耐药的特点，很适合作为消毒产品的主要组分加以利用，广泛应用于洗手液、免洗洗手液、沐浴乳和香皂等的制备。
3.2020版《中国药典》记载：中药枳实来源于芸香科植物酸橙citrus aurantium l.及其栽培变种或甜橙citrus sinensis osbeck的干燥幼果，采收时间为每年5～6月。枳实作为重要的中药理气药，具有破气消积、化痰散痞，用于积滞内停、腹痛便秘、痰浊气滞、胸脘痞满等。现代研究表明：枳实具有调节胃肠平滑肌、子宫平滑肌兴奋、抗消化性溃疡、强心、升压和收缩血管等作用，主要应用于休克、脏器下垂、消化不良、肠梗阻和手术后腹胀气等。同植物来源的酸橙citrus aurantium l.及其栽培变种的干燥未成熟果实为中药枳壳，均为中药的常用理气药，功效各有偏重。
4.如上所述，枳实的功效主要是调节机体功能等机能性疾病，并未用于治疗感染性疾病。关于枳实的抗菌作用报道很少，仅有的文献表明(枳实挥发油的化学成分分析及其抗菌活性的研究.中草药，2004，35(1)：20-22)：枳实挥发油在高浓度32.3mg/ml时有微弱的抗金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)作用，但对大肠杆菌(escherichia coli)无拮抗作用。另有文献报道(枳壳挥发油化学成分及抑菌活性的比较研究.中药与临床，2012，3(2)：25-27,31)：枳实和枳壳挥发油均有抗金黄色葡萄球菌和抗大肠杆菌作用，且最低抑菌浓度分别为36和4mg/ml。两者似乎有部分矛盾之处，但也可能因药材的不同造成。
5.目前尚未见有文献对枳实乙醇提取物的抗菌活性的报道，更未见将枳实先去除挥发油或脂溶性部位后的乙醇提取物在抗菌活性研究方面的报道。


技术实现要素：

6.本发明的目的就是提供中药枳实乙醇提取物在制备消毒产品中的应用。
7.本发明中所述枳实的植物来源为芸香科植物酸橙citrus aurantium l.及2020版《中国药典》所述的栽培变种、或甜橙citrus sinensis osbeck、香橼citrus wilsonii tanaka、枸橼poncirus trifoliata(l.)raf.的干燥幼果，采收时间为每年4～6月。其可由栽培种植后，于每年4～6月采收获得，也可直接从市场上购买获得。
8.本发明所述的枳实乙醇提取物，其制备流程可为：不同植物来源的枳实或枳实饮
片经粉碎后的粗粉，加入适量水，采用水蒸气蒸馏法，去除挥发油；然后将蒸馏后的水溶液滤尽，药渣再加入含水乙醇提取，提取液浓缩、干燥，制得本发明所述的枳实乙醇提取物。
9.本发明所述的枳实乙醇提取物，其制备流程也可为：不同植物来源的枳实或枳实饮片经粉碎后的粗粉，先采用乙酸乙酯提取，去除脂溶性成分(包括挥发油)后，药渣再加入含水乙醇提取，提取液浓缩、干燥，制得本发明所述的枳实乙醇提取物。
10.本发明所述的枳实乙醇提取物，其制备流程还可为：不同植物来源的枳实或枳实饮片粉碎后的粗粉，加入含水乙醇提取，提取液浓缩、干燥，制得本发明所述的枳实乙醇提取物。
11.本发明所述的枳实乙醇提取物，其制备过程的主要特征为提取时所用的溶剂为含水乙醇。
12.本发明所述的枳实乙醇提取物在提取时所用的含水乙醇，其所含乙醇的质量百分数为30～95％。
13.本发明所述枳实乙醇提取物可用于抗菌药物的制备，制备的抗菌药物可用于预防和治疗人的细菌感染，也可用于预防和治疗动物的细菌感染。细菌感染，可以是革兰氏阳性菌引起的，也可是革兰氏阴性菌引起的，包括但不限于金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。
14.本发明还提供了枳实乙醇提取物制备的抗菌药物制剂，其剂型优选颗粒剂和干浸膏剂。
15.本发明所述枳实乙醇提取物，经药敏试验测定，首次发现：上述经各种方法制备的枳实乙醇提取物具有明显的抗金黄色葡萄球菌和抗大肠杆菌作用，且非常显著地强于抗菌活性微弱的枳实挥发油、枳实乙酸乙酯提取物、枳实经水蒸汽蒸馏后的水提取物、实验浓度的阳性对照药庆大霉素；而枳实挥发油、枳实经水蒸汽蒸馏后的水提取物仅表现出对金黄色葡萄球菌的微弱拮抗活性，枳实水提取物则对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均未表现出拮抗活性。
16.本发明所述的枳实乙醇提取物不仅抗菌谱广，而且抗菌活性明显优于其挥发油、乙酸乙酯提取物、水提取物、枳实提取挥发油后的水提取物、实验浓度的阳性对照药庆大霉素。用含水乙醇提取制得本发明所述的枳实乙醇提取物，可用于消毒产品的制备，制备的消毒产品剂型优选洗手液、免洗洗手液、沐浴乳和香皂，可用于人的手部和体表消毒，以杀灭、抑制或减少人的手和体表附着的细菌，并显示良好的应用开发和市场前景。
具体实施方式
17.实施例1：
18.1.1枳实提取物的制备
19.取芸香科植物酸橙citrus aurantium l.的干燥幼果(枳实)和未成熟果实(枳壳)各1000g，采收时间依次分别为5月、7月。
20.将所取枳实粉碎成粗粉，取枳实粗粉100g加入1200ml纯水，置圆底烧瓶中，用挥发油提取器，采用水蒸气蒸馏法，提尽药材中所含的挥发油，得枳实挥发油(1)1.7g；提取后剩余物抽滤，滤液为水提取液，50℃下减压浓缩，冻干，得枳实水提取物(1)9.7g；药渣晾干，再依次加入乙醇质量百分数为95％的含水乙醇800ml、600ml分别回流提取两次，合并提取液，50℃下减压浓缩至无醇味，冻干，得枳实乙醇提取物(1)11.2g。
21.同时，称取上述枳实粗粉100g，依次用800ml、600ml乙酸乙酯回流提取两次，合并乙酸乙酯提取液，40℃下减压浓缩，50℃真空干燥，得枳实乙酸乙酯提取物(1)4.2g；药渣置通风橱中，挥尽残留乙酸乙酯后，依次加入乙醇质量百分数为95％的含水乙醇800ml、600ml分别回流提取两次，合并提取液，50℃下减压浓缩至无醇味，冻干，得枳实乙醇提取物(2)13.5g。
22.另外，称取上述枳实粗粉100g，置圆底烧瓶中，依次加入乙醇质量百分数为95％的含水乙醇800ml、600ml分别回流提取两次，合并提取液，50℃下减压浓缩至无醇味，冻干，得枳实乙醇提取物(3)15.7g。将适量干燥枳壳，粉碎成粗粉，称取枳壳粗粉100g，同法，用乙醇质量百分数为95％的含水乙醇回流提取两次，合并提取液，减压浓缩，冻干，得枳壳乙醇提取物(1)15.2g。
23.1.2抗菌活性测定
24.(1)实验菌株：金黄色葡萄球菌atcc 25923(staphylococcus aureus atcc25923)和大肠埃希氏菌atcc 25922(escherichia coli atcc 25922)源于美国典型培养物保藏中心；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mrsa 01(methicillin-resistant s.aureus 01)和大肠杆菌e.coli s002分别由中山大学附属第二医院和海南省人民医院提供。
25.(2)供试品溶液的制备：测试前，取上述提取物各0.512g，置2ml容量瓶中，其中水提取物用无菌纯水、乙醇提取物用80％含水乙醇，挥发油和乙酸乙酯提取物用乙酸乙酯溶解，定容，得各提取物的供试品溶液，测试时摇匀；另取庆大霉素适量，制备成32μg/ml的水溶液作为阳性对照溶液。
26.(3)培养基配制：称取酸水解酪蛋白17.5g，可溶性淀粉1.5g，牛肉浸膏3g，1000ml蒸馏水，用1mol/l naoh调节ph至7.2～7.4，分装至50ml锥形瓶中，121℃高压灭菌20min，得mhb培养基，置于超净工作台中冷却备用。在上述mhb培养基的配制过程中添加18.0g琼脂粉，同样操作灭菌后倒平板，即得mha培养基。
27.(4)菌液配制：在超净工作台中，将保存于斜面的菌株用mha平板活化，从平板中用接种针沾取菌种，接种于20ml mhb液体培养基中，置180r/min的摇床上，37℃培养4～6h至od
600
值约为0.60，即得菌悬液。
28.(5)测定方法：采用纸片法，测定枳实挥发油和枳实乙酸乙酯提取物的抗菌活性；采用打孔法，测定枳实水提取物和枳实乙醇提取物的抗菌活性。两方法的具体测定过程如下：(1)纸片法：在无菌条件下，取活化的菌悬液100μl于新鲜的mha培养基上均匀涂布，再取供试品溶液100μl，分5～6次间隔滴加至直径8mm的灭菌圆形纸片上，待溶剂挥干后，将含药纸片贴于平板上预设的位置，每样做三组平行，并用相应溶剂作空白对照，于37℃恒温培养箱中，培养24h后观察结果。(2)打孔法：在无菌条件下，取活化好的菌悬液100μl于新鲜的mha培养基上均匀涂布，用直径8mm的打孔器打孔，然后每孔加入100μl供试品溶液，每样做三组平行，并用相应溶剂作空白对照，于37℃恒温培养箱中，培养24h后观察结果。
29.(6)统计学分析：实验结果以表示，采用spss 11.0软件包进行方差分析，用t检验进行各组间的比较。
30.(7)测定结果：上述提取物的抗菌活性的测定结果见表1。
31.表1枳实各提取物的抗菌活性(n＝3)a[0032][0033]
注：a：纸片和打孔器的直径为8mm。
[0034]b：
**
：与乙酸乙酯提取物(1)对照，具有非常显著性差异(p＜0.01)；
##
：与挥发油(1)对照，具有非常显著性差异(p＜0.01)；
++
：与水提取物(1)对照，具有非常显著性差异(p＜0.01)；与32μg/ml的庆大霉素对照，具有非常显著性差异(p＜0.01)。
[0035]c：—：表示无抑菌圈。
[0036]
由表1可知：枳实乙醇提取物(1)～(3)和枳实乙酸乙酯提取物(1)对革兰氏阴性菌的质控菌株大肠杆菌和革兰氏阳性菌的质控菌株金黄色葡萄球菌均显示抗菌活性；枳实挥发油(1)和枳实水提取物(1)对金黄色葡萄球菌显示一定的抗菌活性，但对大肠杆菌无抗菌活性；而枳壳乙醇提取物对金黄色葡球菌和大肠杆菌均无拮抗活性。经统计学分析表明：相对于枳实乙酸乙酯提取物(1)、枳实挥发油(1)和枳实水提取物(1)，枳实乙醇提取物(1)、(2)和(3)均具有非常显著性差异(p＜0.01)，同时也显著强于32μg/ml的庆大霉素(p＜0.01)。由此显示：按照上述方法制备的枳实乙醇提取物的抗菌活性明显强于枳实乙酸乙酯提取物、枳实挥发油和枳实水提取物，可用于消毒产品的制备，制备洗手液、免洗洗手液、沐浴乳和香皂等，以杀灭、抑制或减少人的手和体表附着的细菌，由此具有良好的应用和开发前景。
[0037]
1.3枳实乙醇提取物颗粒剂的制备
[0038]
(1)处方：上述项1.1所述枳实药材400g、乙醇(940ml)、赛比克305(9g)、羟乙基纤维素(12.5g)、三乙醇胺(6.0g)、橄榄油(62.5g)、香精(1.25g)、水(适量)。
[0039]
(2)枳实乙醇提取物的制备：400g枳实药材，置小型多功能提取罐中，加入4l纯水，提取挥发油，然后将挥发油提取后的水溶液放尽。随后，依次加入乙醇质量百分数为85％的含水乙醇3l和2.5l回流提取两次，合并提取液，50℃减压回收乙醇至相对密度为1.27(55℃)的稠膏83g。
[0040]
(3)免洗洗手液的制备：往水中加入羟乙基纤维素，搅拌均匀；再加入赛比克305，搅拌至乳白均匀状态；然后依次加入三乙醇胺、搅拌均匀，加入乙醇、搅拌至半透明均匀状态；加入橄榄油，搅拌均匀；最后，依次加入枳实乙醇提取物的稠膏、香精和适量水，搅拌均匀，即得枳实乙醇提取物的免洗洗手液。
[0041]
(4)外观与检查：免洗洗手液色泽均匀；取1ml本品，加入10ml水溶解所得溶液的ph为7.4；取本品3ml涂于手掌，搓擦后，30秒内挥干，无不适气味。
[0042]
(5)抗菌活性测定：按实施例1项下“1.2抗菌活性测定”所述的方法和程序，采用打孔法，对上述制备的枳实乙醇提取物免洗洗手液进行抗菌活性测定，结果表明：该洗手液有明显的抗菌活性，对实施例1项下“1.2抗菌活性测定”所述四株病原菌的抑菌圈为9.77～12.35mm，由此显示该免洗洗手液具有显著的抗菌效果。
[0043]
实施例2：
[0044]
取芸香科植物酸橙citrus aurantium l.的栽培变种代代花citrus aurantium
‘
daida’的干燥幼果(枳实)1000g，采收时间为4月。
[0045]
将所取枳实粉碎成粗粉，称取枳实粗粉100g加入1200ml纯水，置圆底烧瓶中，用挥发油提取器，采用水蒸气蒸馏法，提尽药材中所含的挥发油，得枳实挥发油(2)1.9g；提取挥发油后的剩余物过滤，滤液为水提取液，50℃下减压浓缩，冻干，得枳实水提取物(2)8.5g；药渣晾干，再依次加入乙醇质量百分数为50％的含水乙醇800ml、600ml分别回流提取两次，合并提取液，50℃下减压浓缩至无醇味，冻干，得枳实乙醇提取物(4)11.5g。
[0046]
同时，取上述枳实粗粉200g，置圆底烧瓶中，依次加入乙醇质量百分数为75％的含水乙醇1600ml、1200ml分别回流提取两次，合并提取液，50℃下减压浓缩至无醇味，冻干，得枳实乙醇提取物(5)29.1g。
[0047]
实施例3：
[0048]
取芸香科植物甜橙citrus sinensis osbeck的干燥幼果(枳实)和未成熟果实(枳壳)各1000g，采收时间依次分别为6月、7月。
[0049]
将所取枳实粉碎成粗粉，称取枳实粗粉100g加入1200ml纯水，置圆底烧瓶中，用挥发油提取器，采用水蒸气蒸馏法，提尽药材中所含的挥发油，得枳实挥发油(3)1.5g；挥发油提取后的剩余物过滤，滤液为水提取液，50℃下减压浓缩，冻干，得枳实水提取物(3)10.1g；药渣晾干，再依次加入乙醇质量百分数为30％的含水乙醇800ml、600ml分别回流提取两次，合并提取液，50℃下减压浓缩至无醇味，冻干，得枳实乙醇提取物(6)9.1g。
[0050]
同时，取上述枳实粗粉100g，置圆底烧瓶中，依次加入乙醇质量百分数为30％的含水乙醇800ml、600ml分别回流提取两次，合并提取液，50℃下减压浓缩至无醇味，冻干，得枳实乙醇提取物(7)16.1g。另外，将适量干燥枳壳，粉碎成粗粉，称取枳壳粗粉100g，同法，用乙醇质量百分数为30％的含水乙醇回流提取两次，合并提取液，减压浓缩，冻干，得枳壳乙醇提取物(2)14.7g。
[0051]
实施例4：
[0052]
取芸香科植物香橼citrus wilsonii tanaka的干燥幼果(枳实)1000g，采收时间为4月。
[0053]
将所取枳实粉碎成粗粉，称取枳实粗粉200g加入2000ml纯水，置圆底烧瓶中，用挥发油提取器，采用水蒸气蒸馏法，提尽药材中所含的挥发油，得枳实挥发油(4)3.9g；挥发油提取后的剩余物过滤，滤液为水提取液，50℃下减压浓缩，冻干，得枳实水提取物(4)18.5g；药渣晾干，再依次加入乙醇质量百分数为75％的含水乙醇800ml、600ml分别提取回流两次，合并提取液，50℃下减压浓缩至无醇味，冻干，得枳实乙醇提取物(8)23.8g。
[0054]
同时，取上述枳实粗粉100g，置圆底烧瓶中，依次用乙酸乙酯、乙醇质量百分数为
30％的含水乙醇、纯水回流提取两次，每次溶剂用量分别为800ml、600ml，合并各提取液，30～50℃下减压浓缩，干燥，分别得枳实乙酸乙酯提取物(2)5.2g、枳实乙醇提取物(9)13.3g、枳实水提取物(5)9.2g。
[0055]
实施例5：
[0056]
取芸香科植物枸橼poncirus trifoliata(l.)raf.的干燥幼果(枳实)1000g，采收时间为5月。
[0057]
将所取枳实粉碎成粗粉，称取枳实粗粉100g加入1000ml纯水，置圆底烧瓶中，用挥发油提取器，采用水蒸气蒸馏法，提尽药材中所含的挥发油，得枳实挥发油(5)1.7g；挥发油提取后的剩余物过滤，滤液为水提取液，50℃下减压浓缩，冻干，得枳实水提取物(6)10.2g；药渣晾干，再依次加入乙醇质量百分数为40％的含水乙醇800ml、600ml分别回流提取两次，合并提取液，50℃下减压浓缩至无醇味，冻干，得枳实乙醇提取物(10)10.4g。
[0058]
同时，取上述枳实粗粉100g，置圆底烧瓶中，依次加入乙醇质量百分数为50％的含水乙醇800ml、600ml分别回流提取两次，合并提取液，50℃下减压浓缩至无醇味，冻干，得枳实乙醇提取物(11)16.9g。
[0059]
实施例6：
[0060]
取从市场上购买的中药枳实饮片500g，粉碎成粗粉。称取粗粉100g加入1000ml纯水，置圆底烧瓶中，用挥发油提取器，采用水蒸气蒸馏法，提尽药材中所含的挥发油，得枳实挥发油(6)1.6g；挥发油提取后的剩余物过滤，滤液为水提取液，50℃下减压浓缩，冻干，得枳实水提取物(7)9.4g；药渣晾干，再依次加入乙醇质量百分数为80％的含水乙醇800ml、600ml分别回流提取两次，合并提取液，50℃下减压浓缩至无醇味，冻干，得枳实乙醇提取物(12)12.7g。
[0061]
同时，取上述枳实粗粉50g，置圆底烧瓶中，依次用乙酸乙酯、乙醇质量百分数为50％的含水乙醇、纯水回流提取两次，每次溶剂用量分别为400ml、300ml，合并各提取液，30～50℃下减压浓缩，干燥，分别得枳实乙酸乙酯提取物(3)2.4g、枳实乙醇提取物(13)7.4g、枳实水提取物(8)8.9g。
[0062]
另外，称取上述枳实粗粉100g，置圆底烧瓶中，依次加入乙醇质量百分数为50％的含水乙醇800ml、600ml分别回流提取两次，合并提取液，50℃下减压浓缩至无醇味，冻干，得枳实乙醇提取物(14)16.2g。
[0063]
实施例7：实施例2～6制得提取物的抗菌活性测定
[0064]
按实施例1项下“1.2抗菌活性测定”所述的方法和程序，分别对实施例2～6制备的枳实挥发油(2)～(6)、枳实水提取物(2)～(8)、枳实乙醇提取物(4)～(14)、枳壳乙醇提取物(2)、枳实乙酸乙酯提取物(2)和(3)的抗菌活性进行测定，结果见表3。
[0065]
表3枳实各提取物的抗菌活性(n＝3)a[0066][0067][0068]
注：a：纸片和打孔器的直径为8mm。
[0069]b：
**
：与枳实乙酸乙酯提取物(2)和(3)对照，具有非常显著性差异(p＜0.01)；
##
：与枳实挥发油(2)～(6)对照，具有非常显著性差异(p＜0.01)；
++
：与枳实水提取物(2)～(4)、(6)和(7)对照，具有非常显著性差异(p＜0.01)；与32μg/ml的庆大霉素对照，具有非常显著性差异(p＜0.01)。
[0070]c：—：表示无抑菌圈。
[0071]
由表3可知：所有的枳实乙醇提取物、枳实乙酸乙酯提取物对革兰氏阴性菌的质控菌株大肠杆菌和革兰氏阳性菌的质控菌株金黄色葡萄球菌均显示抗菌活性；所有的枳实挥发油、枳实提取挥发油后的水提取物(2)～(4)、(6)和(7)对金黄色葡萄球菌均显示一定的抗菌活性，但对大肠杆菌无抗菌活性；而枳壳乙醇提取物、枳实水提取物(5)和(8)对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均无拮抗活性。经统计学分析进一步显示：相对于所有的枳实乙酸乙酯提取物、枳实挥发油、枳实提取挥发油后的水提取物、枳实水提取物、庆大霉素，所有的枳实乙醇提取物均显示非常显著性差异(p＜0.01)。由此进一步表明：实施例2～6制备的枳实
乙醇提取物的抗菌活性明显强于枳实乙酸乙酯提取物、枳实挥发油、枳实提取挥发油后的水提取物、枳实水提取物和32μg/ml的庆大霉素。从而证实：枳实乙醇提取物在制备消毒产品中的应用方面具有良好的开发前景，可用于制备洗手液、免洗洗手液、沐浴乳和香皂等，以杀灭、抑制或减少人的手和体表附着的细菌。
[0072]
实施例8：枳实乙醇提取物洗手液的制备
[0073]
(1)处方：按实施例2中枳实乙醇提取物(5)的制备方法制备的枳实乙醇提取物(5％)、aos(8％)、aes(2％)、0.5％羧甲基纤维素钠水溶液(80％)、乙醇(1％)、丙二醇(4％)、甘油(5％)、柠檬酸(适量)、香精(适量)、纯水(适量)。
[0074]
(2)制备：将枳实乙醇提取物与丙二醇、甘油均匀混合，然后在搅拌下依次逐步加入0.5％羧甲基纤维素钠水溶液、aos、aes、乙醇、柠檬酸和香精，并根据需要补充适量纯水，混合均匀，即得枳实乙醇提取物洗手液。
[0075]
(4)外观与检查：洗手液色泽均匀；取1ml本品，加入10ml水溶解所得溶液的ph为7.4，无不适气味。
[0076]
(5)抗菌活性测定：按实施例1项下“1.2抗菌活性测定”所述的方法和程序，采用打孔法，对上述制备的枳实乙醇提取物洗手液进行抗菌活性测定，结果表明：该洗手液有明显的抗菌活性，对实施例1项下“1.2抗菌活性测定”所述四株病原菌的抑菌圈为10.25～14.16mm，由此显示该洗手液具有显著的抗菌效果。
[0077]
实施例9：枳实乙醇提取物沐浴乳的制备
[0078]
(1)处方：实施例3所述枳实药材(1000g)、椰油基-葡糖苷磺基琥珀酸酯二钠(200g)、月桂醇聚醚磺基琥珀酸酯二钠(140g)、椰油酰甘氨酸钠(190g)、氯化钠(80g)、椰油酸甘油酯类(120g)、peg-160脱水山梨醇三异硬脂酸酯(90g)、羟乙基纤维素(5g)、柠檬酸(7g)、聚季铵盐-47(70g)、dmdm乙内酰脲(12g)、peg-20甘油月桂酸酯(140g)，迷迭香精油(10g)、香精(适量)、纯净水(适量)。
[0079]
(2)制备：1000g枳实药材，置小型多功能提取罐中，加入10l纯水，提取挥发油，然后挥发油提取后的水溶液放尽。随后，依次加入乙醇质量百分数为80％的含水乙醇8l和6l回流提取两次，合并提取液，50℃减压回收乙醇至相对密度为1.25(50℃)的稠膏192g。将稠膏与处方中的椰油基-葡糖苷磺基琥珀酸酯二钠、月桂醇聚醚磺基琥珀酸酯二钠、椰油酰甘氨酸钠、氯化钠、椰油酸甘油酯类、peg-160脱水山梨醇三异硬脂酸酯、羟乙基纤维素、聚季铵盐-47、dmdm乙内酰脲、peg-20甘油月桂酸酯混合，搅拌混匀，再在搅拌下加入柠檬酸水溶液调节ph，混合均匀，即得枳实乙醇提取物沐浴乳。
[0080]
(3)外观与检查：沐浴乳的色泽均匀，肤感良好；取0.5g沐浴乳，加入20ml水溶解所得溶液的ph为7.3，香味适宜。
[0081]
(4)抗菌活性测定：按实施例1项下“1.2抗菌活性测定”所述的方法和程序，采用打孔法，对上述制备的枳实乙醇提取物沐浴乳进行抗菌活性测定，结果表明：该沐浴乳具有明显的抗菌活性，对实施例1项下“1.2抗菌活性测定”所述四株病原菌的抑菌圈为9.53～12.27mm，由此显示该沐浴乳具有显著的抗菌效果。
[0082]
实施例10：枳实乙醇提取物香皂的制备
[0083]
(1)处方：实施例4所述枳实药材500g，植物油(1000g)，30％氢氧化钠3200ml，95％乙醇1000ml，迷迭香精油(20ml)，氯化钠(适量)。
[0084]
(2)枳实乙醇提取物的制备：500g枳实药材，置小型多功能提取罐中，加入5l纯水，提取挥发油，然后挥发油提取后的水溶液放尽。随后，依次加入乙醇质量百分数为90％的含水乙醇4l和3l回流提取两次，合并提取液，50℃减压回收乙醇至相对密度为1.26(55℃)的稠膏112g。
[0085]
(3)香皂的制备：1)将30％氢氧化钠3200ml置锅中，加热至70℃，保温5min分钟左右，搅拌下加入1000g植物油，混匀、反应，再加入95％乙醇600ml加速反应，当取混合液加入水中无油滴时，反应完成。2)将95％乙醇600ml、枳实乙醇提取物稠膏分别预热至60℃后，与迷迭香精油20ml搅拌下混合，然后搅拌下一起加入至植物油与碱的反应混合物中，搅拌混匀，冷却，加入预热的饱和食盐水盐析。3)抽滤，将皂体放入模具中晾干成型，得枳实乙醇提取物香皂。
[0086]
(3)外观与检查：香皂外观平整光滑，色泽一致，无皱缩、飞边、裂隙、变形及空心；取0.2g香皂，加入10ml水溶解所得溶液的ph为7.6，起泡现象良好，肥皂香味适宜，温和不刺激。
[0087]
(4)抗菌活性测定：按实施例1项下“1.2抗菌活性测定”所述的方法和程序，采用打孔法，对上述制备的枳实乙醇提取物香皂进行抗菌活性测定，结果表明：该香皂具有明显的抗菌活性，对实施例1项下“1.2抗菌活性测定”所述四株病原菌的抑菌圈为11.75～15.38mm，由此显示该香皂具有显著的抗菌效果。