一种促进创面愈合的金丝桃提取物及其制备方法

1.本发明涉及中医药技术领域，尤其涉及一种促进创面愈合的金丝桃提取物及其制备方法。


背景技术：

2.皮肤覆盖全身表面，是人体最大的器官之一，约占体重的16％，由表皮和真皮紧密结合而成。皮肤披覆在人体表层，是直接与外界环境相接触的器官组织，具有保护、感觉、分泌、排泄、呼吸等功能。
3.人体的皮肤由于创伤或疾病等因素造成皮肤缺损时，常常伴随创面水分、电解质及蛋白质的丢失，且开放的创面还增加了感染机率。因此，早期有效的封闭创面可以减少并发症的发生。创面愈合是指由于致伤因子的作用造成组织缺失后，局部组织通过再生、修复、重建，进行修补的一系列病理生理过程。本质上是机体对各种有害因素作用所致的组织细胞损伤的一种固有的防御性、适应性反应。这种再生修复表现于丧失组织结构的恢复上，也能不同程度地恢复其功能。目前，各种原因导致的皮肤创伤及其愈合形成的疤痕依然会对人类的健康和生活质量造成很大影响。所以研制能够加速创面愈合、促进创伤局部毛囊、汗腺等附属器官新生，帮助创伤组织在结构和功能上得到双重修复的药物及其相应的制剂或者敷料是目前创伤治疗领域的难点和重点问题，具有非常重大的研究意义。
4.中药是我国的传统药物，其来源广泛，并且在治疗创伤中积累了丰富经验。金丝桃是一种中草药，根茎叶花果均可入药，抗抑郁、镇静、抗菌消炎、创伤收敛，尤其是抗病毒作用突出，能抗dn生理盐水、rn生理盐水病毒，可用于艾滋病的治疗。以金丝桃提取的金丝桃素已经贵若黄金，应用于美容医疗，但将其应用于促进创面愈合的研究较少。


技术实现要素：

5.为解决上述问题，本发明提供了一种促进创面愈合的金丝桃提取物及其制备方法，所述促进创面愈合的金丝桃提取物制备方法如下：
6.(1)将新鲜的金丝桃枝条烘干；
7.(2)取烘干后的金丝桃枝条于破碎机中粉碎并过30目筛，得到金丝桃粉末；
8.(3)称取金丝桃粉末于容器中并加双蒸水浸泡，然后将混合物连续加热后进行超声处理；
9.(4)超声处理完成后，将混合物进行离心处理，得到提取液，将提取液用抽滤机抽滤2次，合并滤液；
10.(5)将离心后的金丝桃粉末按照步骤(3)、步骤(4)所述方法重复提取2次，合并滤液；
11.(6)将滤液浓缩，制成流浸膏状，即得金丝桃浓缩提取物；
12.(7)将金丝桃提取物装入无菌瓶中，高压灭菌30min，密封，即得促进创面愈合的金丝桃提取物。
13.进一步地，所述步骤(1)中，烘干温度为65℃，烘干时间为6-8h。
14.进一步地，所述步骤(3)中金丝桃粉末与双蒸水的重量比为1:10-20，浸泡时间为1-3h，浸泡过程中每30min搅拌一次。
15.进一步地，所述步骤(3)中金丝桃粉末与双蒸水的重量比为1:10。
16.进一步地，所述步骤(3)中连续加热温度为70℃-85℃，超声处理温度为70℃-85℃，超声频率为300w。
17.进一步地，所述步骤(3)中超声处理温度为70℃。
18.进一步地，所述步骤(6)中所述浓缩方式为旋转蒸发，浓缩温度为70℃，转速为50-60rpm。
19.进一步地，所述步骤(7)中的灭菌方式为高压灭菌，灭菌温度为121℃，灭菌时间为30min。
20.本发明还提供了一种根据上述方法制备而成的促进创面愈合的金丝桃提取物。
21.本发明所述促进创面愈合的金丝桃提取物可用于制备促进创面愈合的药物。
22.与现有技术相比，本发明的有益技术效果：
23.(1)本发明的促进创面愈合的金丝桃提取物具有促皮肤创面愈合，防肿防痛、防感染、消肿止痛、祛瘀生肌、通经活络、健康皮肤组织等多种功能；
24.(2)本发明的促进创面愈合的金丝桃提取物安全性高、效果好、稳定性好，对人体健康无任何毒副作用；
25.(3)本发明促进创面愈合的金丝桃提取物的原料来源广泛、易于收集且制备工艺简单、流程短、效率高，易于批量加工生产，具有良好的工业化前景和较高的经济价值。
附图说明
26.下面结合附图说明对本发明作进一步说明。
27.图1为各组创面愈合情况；
28.图2为各组术后21天he染色结果；
29.图3为不同时间各处理组的愈合率；
30.图4为不同处理组创口愈合时间；
31.图5为本发明促进创面愈合的金丝桃提取物制备流程图。
具体实施方式
32.以下结合实施例对本发明提供的技术方案进行进一步说明。
33.实施例1
34.一种促进创面愈合的金丝桃提取物的制备方法，步骤如下：
35.(1)采摘新鲜的金丝桃枝条，放入电热鼓风干燥箱里在65℃下烘干8h；
36.(2)取烘干后的金丝桃枝条于破碎机中粉碎过30目筛；
37.(3)称取500g金丝桃粉末于容器中并加5l的双蒸水，加水浸泡1h，每30min搅拌一次，将混合物85℃连续加热、在70℃、300w的条件下超声处理30min；
38.(4)离心，倒出提取液，用抽滤机抽滤2次，得滤液；
39.(5)将离心后的金丝桃粉末按照步骤(3)、步骤(4)所述方法重复提取2次，合并滤
液；
40.(6)用旋转蒸发仪70℃，转速60rpm下浓缩提取滤液，制成流浸膏状，得金丝桃浓缩提取物；
41.(7)将金丝桃提取物装入无菌瓶中，121℃下高压灭菌30min，密封，即得促进创面愈合的金丝桃提取物。
42.测试例1
43.一.实验方法
44.1.模型制作与分组
45.1.1.兔背部创面模型制作
46.取健康新西兰兔10只，以戊巴比妥钠35mg/kg耳缘静脉注射麻醉，背部用脱毛机脱毛，以酒精消毒皮肤后用外科方法剪去直径约1.8cm促进创面愈合的金丝桃提取物的圆形全层皮肤，深达肌膜，造成全皮层缺损创伤模型。
47.1.2分组
48.每只兔子背部皮肤均有3个创面，分别为生理盐水组、云南白药组(每次涂抹约0.5g)和促进创面愈合的金丝桃提取物(每次涂抹约0.5g)。敷药后所有伤口均用凡士林油纱敷盖，再用干纱布包扎，每天一更换。
49.2.观察指标
50.2.1.创面大体观察
51.肉眼观察新西兰免在术后7d、14d、21d创面是否红肿、渗出、有无脓性分泌物、创面面积、创周皮肤组织的收缩及创缘新生等基本情况。
52.2.2.创面愈合时间
53.三组创面手术当天至创面完全上皮化为愈合时间。
54.2.3.创面愈合率
55.将10只新西兰兔分别于创面制备时0d、7d、14d、21d固定，用透明薄膜覆盖创面并进行描记，用记号笔沿创缘画膜，再将透明膜敷贴在网格纸上进行网格计数，测量各组创面实际面积，计算出不同时间点各组创面愈合率。
56.创面愈合率(％)＝(原始创面面积-未愈合创面面积)/原始创面面积
×
100％
57.2.4.组织标本的采集与处理
58.于术后21d随机抽取两只新西兰兔，用10％水合氯醛麻醉，在无菌操作条件下切取免背部创面肉芽组织及周边皮肤组织，切口均超过创面边缘约0.3cm金丝桃提取物，垂直于兔背部皮肤表面，深至肌层。将取得的皮肤组织立即放入4％多聚甲醛固定，固定24h后放入组织自动脱水机中脱水，脱水后再石蜡包埋，每块组织标本需连续切取三张厚度为4μm的石蜡切片保存在4℃冰箱内备用。
59.1)取其中一张组织蜡片，放入45℃温水中进行展平、捞片、烘干，再放入90℃烘箱进行除蜡约15min。
60.2)再依次放入二甲苯ⅰ与二甲苯ⅱ各5min
→
无水乙醇1-2min
→
95％乙醇1-2min
→
85％乙醇1-2min
→
蒸馏水洗2min。
61.3)滴加gill改良苏木素染色5min左右
→
自来水冲洗
→
75％盐酸酒精分10s
→
自来水冲洗
→
温水(50-60℃)返蓝5min
→
自来水冲洗10min
→
95％乙醇1min
→
1％酸化伊红酒精
液染2-10s
→
自来水冲洗。
62.4)95％乙醇l min
→
90％乙醇l min
→
100％酒精l min
→
二甲苯ⅰ1min
→
二甲苯ⅱ1min
→
中性树胶封片。
63.5)he染色后观察:组织切片经he染色后在光镜(10或20倍)下观察组织炎症反应、毛细血管与成纤维细胞及上皮细胞等增生情况。
64.3.数据处理
65.采用统计软件excel及spss 23.0分析，计量资料用均数
±
标准差(x
±
s)表示，多组间数值比较用单因素方差分析，以p《0.05和p《0.01为差异有统计学意义。
66.如图1所示，术后7天，生理盐水、云南白药、金丝桃提取物三组皮肤创面均结痂，无红肿、无渗液、无明显感染等情况发生，但创面收缩及创缘新生上皮生长不明显，三组区别不大；术后14天，云南白药、金丝桃提取物两组创面干燥无感染，创面逐渐变小，创面收缩及创缘新生上皮生长明显，生理盐水组部分创面有些许红肿、渗液产生，创缘新生上皮生长较少，创面收缩较前明显，但不如云南白药、金丝桃提取物组；术后21天，云南白药、金丝桃提取物两组创面几乎完全被新生上皮覆盖，只有部分结痂创面残留，生理盐水组创面明显缩小，部分创面组织被薄且易破的新生上皮所覆盖，但创面愈合明显较云南白药、金丝桃提取物两组差。
67.如图2所示，云南白药与金丝桃提取物组新生表皮细胞几乎覆盖创面，大部分成纤维细胞已转化为纤维细胞，细胞间有大量胶原纤维形成，且金丝桃提取物组胶原纤维排列紧密有序，而生理盐水组成纤维细胞增殖尚较活跃，纤维细胞少，可见新生血管组织，未完全上皮化。
68.表1金丝桃提取物对兔创面愈合率(％)的影响
69.组别生理盐水云南白药金丝桃提取物7天19.15
±
1.4525.87
±
2.3928.98
±
2.9214天50.64
±
4.7965.46
±
5.64
*
68.22
±
7.02
**
21天86.93
±
8.4394.09
±
2.95
*
94.53
±
3.67
*
70.注：与生理盐水组相比，“**”为差异极显著(p﹤0.01)，“*”为差异显著(p﹤0.05)。
71.如表1所示，三组创面经处理后面积随术后时间延长而逐渐缩小，实验研究结果显示术后7d、14d、21d，生理盐水组创面愈合面积百分比分别为19.15
±
1.45％、50.64
±
4.79％、86.93
±
8.43％；云南白药组创面愈合面积百分比分别为25.87
±
2.93％、65.46
±
5.64％、94.09
±
2.95％；金丝桃提取物组创面愈合面积百分比分别为28.98
±
2.92％、68.22
±
7.02％、94.53
±
3.67％。统计结果显示，术后7d，三组创面愈合率比较差异无统计学意义(p》0.05)，术后14d、21d，云南白药、金丝桃提取物两组的创面愈合率均高于生理盐水组，差异有统计学意义(*，p《0.05，**，p《0.01)。
72.表2金丝桃提取物对兔创面愈合时间的影响
73.组别愈合时间(x
±
s)生理盐水29.63
±
2.13云南白药27.25
±
1.49*金丝桃提取物26.88
±
2.42*
74.注：与生理盐水组相比，“*”为差异显著(p﹤0.05)。
75.如表2所示，生理盐水组创面愈合时间为29.63
±
2.13d，愈合时间最长达33d；云南白药组创面愈合时间为27.25
±
1.49d；金丝桃提取物组创面愈合时间为26.88
±
2.42d，愈合时间最短的为24d；由此可知云南白药、金丝桃提取物两组促进创面愈合的速度较生理盐水组快(见表1)，且差异具有统计学意义(*，p《0.05，**，p《0.01)。
76.本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处。综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。