具有促胶原蛋白分泌和抗氧化活性的土沉香花提取物和应用的制作方法

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1.本发明属于化妆品和医药技术领域，具体涉及植物药技术领域，更具体地，涉及白木香花提取物pxs64，pxs64-1,pxs64-2，其具有促进胶原蛋白分泌活性和抗氧化活性，以及提取物的制备方法和应用。


背景技术：

2.随着生活水平的提高和医疗技术的发展，人们在满足基本的生活需求的同时，延缓衰老也成了人们新的追求。皮肤衰老是各种因素共同作用的结果，主要分为两种：一种是内源性老化，主要受遗传因素影响，是自然衰老的过程；另一种是受紫外线辐射、吸烟、引力、化学物等外在环境因素影响而引起的外源性老化。保持皮肤年轻，解决皮肤问题，恢复皮肤健康成了新的研究热点。皮肤中75％由胶原蛋白组成，皮肤的生长、修复和营养都离不开胶原蛋白，皮肤健康的两大关键保湿和抗皱都与胶原蛋白有关。抗皮肤衰老活性物质的作用效果包括清除自由基，提高细胞增殖速度，延缓细胞外基质的降解速度以及补充皮肤中的胶原蛋白，恢复、重建皮肤中的胶原蛋白层。目前常用的补充胶原蛋白方式如口服富含胶原蛋白食物，皮下注射和使用富含胶原蛋白的护肤品但其作用有限，时间周期长，容易引发过敏和感染且吸收效果局限。在护肤品中或药物中添加具有可刺激皮肤自身合成胶原蛋白的活性成分来达到补充胶原蛋白的目的成为抗衰老药物和护肤品研发的新热点。因此，找寻促进皮肤自身的胶原蛋白分泌的抗衰老天然产物成为了研究的新趋势。
3.白木香[aquilaria sinensis(lour.)spreng.]为瑞香科沉香属植物，又名土沉香，其含有树脂的心材，即为中药沉香。目前对白木香心材的研究比较广泛，而对于白木香花研究较少。迄今为止，现有技术中未见有白木香花具有促胶原蛋白分泌和抗氧化活性的报道，也未见有白木香花提取物pxs64、pxs64-1、pxs64-2及其活性作用的报道。


技术实现要素：

[0004]
本发明的目的是提供白木香花即土沉香花提取物pxs64、pxs64-1、pxs64-2，其制备方法，和其在制备抗氧化、抗衰老药物或护肤品中的应用。
[0005]
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
[0006]
具有促胶原蛋白分泌和抗氧化活性的白木香花提取物，所述的白木香花提取物为pxs64，pxs64-1和pxs64-2，其是由下述方法制备得到的：
[0007]
(1)白木香花干燥的花，粉碎后用蒸馏水，60℃水浴超声提取30min，重复3次，合并过滤，回收溶剂，得浸膏即pxs64；
[0008]
(2)取上述步骤(1)制备得到的pxs64白木香花提取物，加入适量的纯水溶解后过大孔树脂，分别用纯水和30％乙醇洗脱，回收溶剂，得到纯水部分pxs64-1和30％乙醇洗脱部分pxs64-2。
[0009]
根据所述的具有促胶原蛋白分泌抑制活性的白木香花提取物，其中所述的白木香花提取物是由步骤(1)所得的粗提物pxs64，步骤(2)所得的精提物pxs64-1和pxs64-2。
[0010]
其中所述的白木香花提取物是由步骤(1)所得的粗提物pxs64。
[0011]
本发明同时提供了一种药物组合物，其含有治疗有效量的白木香花提取物任一或其任意组合，以及药学上可接受的载体。
[0012]
并提供了一种抗衰老护肤品，其有效成分中包括白木香花提取物任其一或其任意组合。
[0013]
根据所述的抗衰老护肤品，其中所述的抗衰老护肤品为化妆水、爽肤水、乳液、霜膏、洁面霜。
[0014]
此外，本发明还提供了一种制备白木香花提取物的方法，该方法包括下述步骤：
[0015]
(1)白木香花干燥的花，粉碎后用蒸馏水，60℃水浴超声提取30min，重复3次，合并过滤，回收溶剂，得浸膏即pxs64；
[0016]
(2)取上述步骤(1)制备得到的pxs64白木香花提取物，加入适量的纯水溶解后过大孔树脂，分别用纯水和30％乙醇洗脱，回收溶剂，得到纯水部分pxs64-1和30％乙醇洗脱部分pxs64-2。
[0017]
本发明另外还提供了所述的白木香花提取物或药物组合物在制备抗氧化、抗衰老的药物中的应用。
[0018]
以及，所述的白木香花提取物或药物组合物在制备抗衰老护肤品中的应用。
[0019]
具体还提供了白木香花提取物或药物组合物在制备化妆水、爽肤水、乳液、霜膏、洁面霜中的应用。
[0020]
本发明将干燥的白木香花用溶剂提取和优化，制备得到pxs64，pxs64-1和pxs64-2。pxs64，pxs64-1和pxs64-2的促胶原蛋白分泌实验表明，pxs64，pxs64-1和pxs64-2均具有一定的促胶原蛋白分泌活性。pxs64的dpph自由基清除实验表明，pxs64具有一定的抗氧化活性。pxs64，pxs64-1和pxs64-2提供了新的制备抗氧化、抗衰老化妆品的原料。
[0021]
与现有技术相比，本发明具有下述的优益效果：首次提供了白木香提取物pxs64、pxs64-1，pxs64-2；首次对白木香花提取物开展了促胶原蛋白分泌和dpph自由基清除作用评价。活性评价结果显示白木香花提取物pxs64，pxs64-1和pxs64-2具有促胶原蛋白分泌活性；白木香花提取物pxs64具有抗氧化活性。同时，本发明的白木香提取物pxs64、pxs64-1，pxs64-2为其在制备抗氧化、抗衰老药物或护肤品中的应用提供了可行性。
[0022]
本发明所述的白木香花及其提取物为原料制备抗氧化、抗衰老药物以及制备抗衰老化妆品，是在现有技术的基础上，采用中药制剂常规方法制备成任何药用的制剂。例如，将白木香花提取物制成散剂冲服；将提取物制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂；将提取制成化妆水、爽肤水、乳液、霜膏、洁面霜，但这并不限制本发明的保护范围。
具体实施方式：
[0023]
下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。
[0024]
实施例1：
[0025]
pxs64的制备。
[0026]
取白木香[aquilaria sinensis(lour.)spreng.]干燥的花样品50.0g，粉碎后用蒸馏水乙醇(0.5l)，60℃水浴超声提取30min，重复三次，过滤合并，滤液60℃减压回收溶
剂，得浸膏(编号pxs64)10.5g。
[0027]
实施例2：
[0028]
pxs64-1，pxs64-2的制备。
[0029]
取白木香[aquilaria sinensis(lour.)spreng.]干燥的花水提物(pxs64)9.4g，水溶解后过大孔树脂经过纯水和30％乙醇依次洗脱后，分别减压回收溶剂得到纯水洗脱部分浸膏(编号pxs64-1)7.0g和30％乙醇洗脱部分浸膏(编号pxs64-2)2.4g。
[0030]
实施例3：
[0031]
pxs64，pxs64-1和pxs64-2的促胶原蛋白分泌实验。
[0032]
1、实验细胞
[0033]
人成纤维细胞(hff)购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。
[0034]
2、实验试剂
[0035]
dmem(高糖)培养基、pbs、hank平衡盐溶液(hank's balanced salt solution,hbss)、青链霉素和胎牛血清(fbs)购自hyclone公司；0.25％胰酶(含edta)购自gibico公司；阳性对照转移生长因子β(transforming growth factor beta,tgf-β)购自peprotech公司；胶原蛋白elisa试剂盒购自takara公司；mts试剂购自promega公司。
[0036]
3、实验方法
[0037]
96孔细胞培养板上，将第26代hff细胞与待测化合物混合，设置不含药物的空白对照和tgf-β阳性对照；37℃，5％co2培养3天，收取细胞培养上清，存于-80℃；加入mts，采用mts比色法检测490nm的od值；按胶原蛋白elisa试剂盒中提供的方法检测胶原蛋白的分泌，酶标仪测定od值，检测波长为450nm。计算得到胶原蛋白分泌增加率。
[0038]
胶原蛋白分泌增加率(％)＝(实验孔od
450 nm
/细胞存活率/空白孔od
450nm-1)
×
100％。
[0039]
4、实验结果
[0040]
表1.pxs64对成纤维细胞胶原蛋白分泌的促进作用及细胞毒性作用
[0041][0042]
表2.pxs64-1和pxs64-2对成纤维细胞胶原蛋白分泌的促进作用及细胞毒性作用
[0043][0044]
实施例4：
[0045]
pxs64的体外抗氧化作用(dpph清除实验)。
[0046]
1、实验材料
[0047]
dpph、水溶性维生素e(trolox)均购自sigma公司。
[0048]
2、实验方法
[0049]
体外抗氧化作用采用dpph自由基清除实验，将待测样品与dpph(终浓度为100μm)混合反应，设定3个重复孔，同时设置不含药物的空白对照和水溶性维生素e(trolox)阳性对照孔，30℃，1h，酶标仪测定od值，检测波长为515nm，计算得到抗氧化率。
[0050]
抗氧化率(％)＝(1
–
样品孔od
515nm
/实验对照孔od
515nm
)
×
100％
[0051]
3、实验结果
[0052]
体外抗氧化活性测试结果见表1。结果显示pxs64具有dpph自由基清除活性，在浓度为100μg/ml时，其抗氧化率为55.3％。
[0053]
表3 pxs64对dpph自由基的清除作用
[0054][0055]
制剂实施例：
[0056]
在以下制剂实施例中，选择常规试剂，并按照现有常规方法进行制剂制备，本应用例仅体现本发明所述提取物制备成不同的制剂，对具体试剂和操作不作具体限定。
[0057]
1.将pxs64，pxs64-1和/或pxs64-2用dmso溶解后，按常规方法加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液，所述注射液的浓度为0.5～5mg/ml。
[0058]
2.将pxs64，pxs64-1和/或pxs64-2用dmso溶解后，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使其溶解，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封，得粉针剂。
[0059]
3.将pxs64，pxs64-1和/或pxs64-2按其与赋形剂质量比为9:1的比例加入赋形剂，制成粉剂。
[0060]
4.将pxs64，pxs64-1和/或pxs64-2按其与赋形剂质量比为5:1的比例加入赋形剂，制粒压片。
[0061]
5.将pxs64，pxs64-1和/或pxs64-2按常规口服液制备方法制成口服液。
[0062]
6.将pxs64，pxs64-1和/或pxs64-2按其与赋形剂质量比为5:1的比例加入赋形剂，制成胶囊。
[0063]
7.将pxs64，pxs64-1和/或pxs64-2按其与赋形剂质量比为5:1的比例加入赋形剂，制成颗粒剂。
[0064]
8.pxs64，pxs64-1和pxs64-2的化妆品制剂：
[0065]
(1)含有pxs64，pxs64-1和/或pxs64-2的美白霜配方(w％)：
[0066][0067]
按常规制作化妆品的方法制得本发明上述配方的化妆品。
[0068]
(2)含有pxs64，pxs64-1和/或pxs64-2的乳剂配方(w％)：
[0069][0070][0071]
按常规制作化妆品的方法制得本发明上述配方的化妆品。
[0072]
(3)按化妆品领域常规制备方法，制得以pxs64，pxs64-1和/或pxs64-2为有效成分的化妆水、爽肤水、乳液、霜膏、洁面霜。
[0073]
(4)化妆水：
[0074]
水相：聚丙烯酸钠0.35克，甘油4克，1，3-丁二醇2.5克，金缕梅提取液2.5克，维生素b5 0.5克，熊果甘0.5克，edta-na2 50mg；去离子水，适量，加至100ml。制备方法：将聚丙烯酸钠0.3克溶入70ml水中，搅拌，充分溶胀。缓缓加入处方中其余成分，不停搅拌；然后加入0.2％的pxs64，pxs64-1和/或pxs64-2，搅拌使其成匀质。去离子水加至100ml，包装即可。
[0075]
(5)修复霜：
[0076]
处方：甘油6克，卡波姆1.5克，三乙醇胺1.5克，丙二醇6克，尼伯金乙酯0.2克，丹参酮提取物1.2克，pxs64、pxs64-1和/或pxs64-2，去离子水适量，加至总重量为100克。制备方法：取卡波姆于适量去离子水中，搅匀，静置过夜，使其充分溶胀后，加入甘油后，用三乙胺调节ph值，使凝胶基质粘稠性增加。另取处方量的丹参酮提取物、丙二醇及去离子水，混合均匀。再将卡波姆凝胶例入，加入0.5％pxs64、pxs64-1和/或pxs64-2，尼伯金乙酯，合并搅拌至均匀细腻，加蒸镏水至足量，研磨均匀，即可。