一种用于宠物去泪痕的中药组合物及其制备方法与流程

1.本发明涉及动物医药技术领域，具体为一种用于宠物去泪痕的中药组合物及其制备方法。


背景技术：

2.随着人民生活水平的逐步提高，宠物犬做为养犬家庭中的重要一员，其福利待遇也越来越受到重视，并且，宠物主也越来越关心自家宠物犬的健康，其中极为关心的就是宠物犬的泪痕问题。泪痕的特征为棕褐色或粉色的泪痕斑点，并伴随产生不良气味，严重时甚至会导致皮肤溃烂等问题，主要形成原因是其眼眶周边的细菌滋生导致。目前国内关于泪痕的处理方法还是以药物治疗和手术治疗为主，其中，手术治疗不仅需要在特定的医院进行治疗，成本较高，并且存在一定的风险因素，因此不太容易被宠物主所接受；药物治疗特有的便捷性以及低成本，成为了宠物主处理泪痕的首要选择。
3.例如申请号为cn202010268416.7的中国发明专利公开了一种改善宠物犬泪痕的营养补充剂配方及其制备方法，由紫薯、紫苏、菊粉、牛至香酚、辛夷、车前子、菟丝子、低聚异麦芽糖、β-葡聚糖和甘露寡糖组成；该营养补充剂通过对原料进行特定配比混合，饲喂宠物犬后可以在一定程度上改善宠物犬过度流泪的现象，但是该营养补充剂不具有保肝护胆的作用，使得宠物在分泌胆汁减轻泪痕时会对肝胆造成重负荷，从而不利于肝胆的健康，无法从根源上治疗好宠物泪痕，而且，该营养补充剂的利用率较低，宠物食用后只有少部分会发挥作用，大部分会被排除体外，从而导致宠物主需要定期定量的对宠物进行为食，大大加重了宠物主的工作量，而且容易使宠物出现耐药性变差以及药物毒副作用的现象。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种用于宠物去泪痕的中药组合物及其制备方法，不仅可以持续对宠物的肝胆进行保护，从而达到持续高效率的预防和减轻宠物泪痕的作用，从根源上治疗好宠物泪痕，同时也使得中药组合物具有高利用率，实现了宠物的一次用药，长期有效的作用，有效延长了宠物的用药周期，以及可以避免宠物出现耐药性变差以及药物毒副作用的效果。
5.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
6.一种用于宠物去泪痕的中药组合物，所述用于宠物去泪痕的中药组合物由以下重量份数的原料制成：动物胆汁30-50份、决明子5-10份、山桑子10-20份、万寿菊5-15份、枸杞10-15份、杜仲叶15-20份、甘草1-5份、小米草3-7份、金银花8-12份。
7.作为本发明的进一步优选方案，所述动物胆汁选用鸡胆汁、鸭胆汁、鹅胆汁中至少一种。
8.一种用于宠物去泪痕的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
9.(1)将动物胆汁经回流提取，得到胆汁提取物，再对胆汁提取物进行处理，得到亲水胆汁酸；
5000r/min下离心3-5min，将得到的产物用乙醇反复洗涤后冷冻干燥40-50h，得到壳聚糖接枝的胆汁酸衍生物。
26.更进一步，所述醋酸溶液的浓度为1-2wt％；
27.所述调节反应体系，采用体积比为(7-8)：(2-(3)的乙醇/氨水混合溶液。
28.作为本发明的进一步优选方案，步骤(3)中，所述丝素蛋白与三元溶剂的用量比例为(10-20)g：(150-200)ml；
29.所述三元溶剂中，氯化钙、乙醇以及水的用量比例为(5-10)g：(30-50)ml：(100-150)ml；
30.所述海藻酸钠溶液的质量分数为0.5-1.0％；
31.所述共混液中，丝素蛋白和海藻酸钠的质量比为(60-90)：(10-40)；
32.所述药剂占共混液体积的20-30％。
33.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
34.本发明中提供的中药组合物包括动物胆汁、决明子、山桑子、万寿菊、枸杞、杜仲叶、甘草、小米草、金银花；其中，利用动物胆汁作为原料，经回流提取后得到胆汁提取物，再以胆汁提取物作为原料，以对甲苯磺酸作为催化剂，依次经酯化、乙酰化以及碱水解后得到亲水胆汁酸，该胆汁酸具有很好的水溶性，有利于动物的快速吸收，可以直接减免肝脏合成胆汁酸的任务，起到帮助肝脏减负，让肝脏多休息的作用，并且还能够有效的促进肝脏分泌大量稀薄的胆汁，帮助肝脏将多虑的有害病菌、重金属、自身代谢废物等随胆汁排出，为肝细胞提供安全健康的内环境，直接保护肝细胞免受毒素的侵扰，起到保护肝胆的作用；同时，通过对动物体外补充胆汁酸，可以促进动物体的胆汁分泌，从而促进胆红素的排泄，从根本上减轻宠物的泪痕；同时，采用超临界二氧化碳萃取技术，对决明子、山桑子、万寿菊、枸杞、杜仲叶、甘草、小米草、金银花进行萃取，决明子、山桑子、万寿菊、枸杞中提取得到的植物提取物可以通过保护细胞膜，清除氧自由基抑制脂质过氧化而对肝细胞起到保护作用，提高了宠物肝胆的健康程度，从而有利于宠物在分泌胆汁减轻泪痕时不会对肝胆造成重负荷；同时，通过杜仲叶、甘草、小米草、金银花提取得到得提取物具有很好的抗菌消炎的作用，可以减轻重宠物眼部炎症的发生，从而减少眼泪的流出量，使得宠物眼眶周围不会过于潮湿，从而减少眼眶周边细菌的滋生，从而进一步达到预防和减轻宠物泪痕的作用。
35.本发明中，为了进一步提高中药组合物对肝胆的保护作用，以壳聚糖作为原料，将亲水胆汁酸通过酰胺键与壳聚糖主链相连接，在胆汁酸上接入多糖，可以有效的抑制ast和alt的产生，增强抗氧化作用，同时还可以可以活化肝脏机能，修复肝细胞，从而进一步增强保肝作用；同时，接入多糖后，利用壳聚糖的抗菌作用，可以赋予聚糖接枝的胆汁酸衍生物具有很好的抑菌性能，可以减轻重宠物眼部炎症的发生，从而使得中药组合物在预防和减轻宠物泪痕方面的作用效果得到显著提升。
36.同时，本发明中，为了提高中药组合物的利用效率，以丝素蛋白和海藻酸钠作为原料制得高孔隙率载体，并通过该载体对药剂进行负载，该载体不仅具有良好的生物相容性，而且可以实现药剂保持一定浓度的持续释放，从而可以持续对宠物的肝胆进行保护，从而达到持续高效率的预防和减轻宠物泪痕的作用，同时也使得中药组合物具有高利用率，实现了宠物的一次用药，长期有效的作用，有效延长了宠物的用药周期，以及可以避免宠物出现耐药性变差以及药物毒副作用的效果。
具体实施方式
37.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
38.实施例1
39.一种用于宠物去泪痕的中药组合物，其中，用于宠物去泪痕的中药组合物由以下重量份数的原料制成：鸡胆汁30份、决明子5份、山桑子10份、万寿菊5份、枸杞10份、杜仲叶15份、甘草1份、小米草3份、金银花8份。
40.一种用于宠物去泪痕的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
41.(1)将鸡胆汁经回流提取，得到胆汁提取物，再对胆汁提取物进行处理，得到亲水胆汁酸；
42.(2)以壳聚糖和亲水胆汁酸作为原料，合成出壳聚糖接枝的胆汁酸衍生物，备用，将决明子、山桑子、万寿菊、枸杞、杜仲叶、甘草、小米草、金银花粉碎后，得到中药粉末，采用超临界二氧化碳萃取技术进行萃取，得到中药提取液，将壳聚糖接枝的胆汁酸衍生物加入到中药提取液中，混匀后得到药剂；
43.(3)将10g丝素蛋白在150ml氯化钙、乙醇和水组成的三元溶剂中溶解，氯化钙、乙醇以及水的用量比例为5g：30ml：100ml，完全溶解后在去离子水中透析，得到丝素溶液，将丝素溶液和质量分数为0.5％的海藻酸钠溶液混匀，得到共混液，控制丝素蛋白和海藻酸钠的质量比为60：40，然后将药剂加入到共混液中，控制药剂占共混液体积的20％，注入模具中，通过300w超声处理凝胶化后，得到复合水凝胶，经冷冻干燥后研磨成粉末，即可完成药物制备。
44.其中，上述胆汁提取物的具体提取方法如下：
45.将20g鸡胆汁置于容器中，加入100ml石油醚，在50℃下加热回流2h，抽滤取滤渣，重复3次，将滤液置于容器中，加入相当于滤液8倍体积的甲醇，在78℃下加热回流1h，抽滤取滤液，再加入1g蒙脱石，在78℃下加热回流2h，抽滤取滤液，重复3次，将所得滤液旋蒸至液固比为3，在-4℃下进行结晶，得到胆汁提取物。
46.其中，上述胆汁提取物的处理方法如下：
47.(1)将1g胆汁提取物加入到50ml无水甲醇中，加热至50℃，搅拌使其完全溶解，然后再加入0.1g对甲苯磺酸，回流2h，然后旋蒸出甲醇，得到产物，备用；
48.(2)称取1g上述备用产物置于容器中，加入20ml二氯甲烷、3.5ml三乙胺，在室温搅拌下，逐滴加入1.2g乙酸酐，再加入20mgn，n-二甲基吡啶，反应7h，旋蒸出二氯甲烷，得到中间体产物，将1g中间体产物溶解于70ml四氢呋喃中，再加入1.1g三苯基膦和0.8g对硝基苯甲酸，缓慢加入0.2g偶氮二甲酸二异丙酯，在氮气条件下室温搅拌20h，旋蒸出有机溶剂，将有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到粗品；
49.(3)将1g上述粗品溶于20ml甲醇中，再加入20ml浓度为3wt％的氢氧化钠溶液，室温下反应1h，加入浓度为5wt％的盐酸溶液调节ph值为3，经旋蒸甲醇、乙酸乙酯萃取、饱和氯化钠溶液洗涤以及无水硫酸钠干燥即可。
50.其中，上述壳聚糖接枝的胆汁酸衍生物的制备方法如下：
51.(1)称取1g壳聚糖置于容器中，加入20ml浓度为1wt％的醋酸溶液，常温下搅拌30min至体系呈清亮状态，再缓慢滴加45ml无水乙醇，再称取8g亲水胆汁酸，溶于30ml乙醇中，然后缓慢滴加到上述清亮体系中，再称取0.6g1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐溶于6ml乙醇中，再缓慢滴加入体系中，在室温下搅拌反应20h；
52.(2)待反应结束后，用体积比为7：3的乙醇/氨水混合溶液调节反应体系的ph值为7.5，加入足量乙醇后在3500r/min下离心3min，将得到的产物用乙醇反复洗涤后冷冻干燥40h，得到壳聚糖接枝的胆汁酸衍生物。
53.实施例2
54.一种用于宠物去泪痕的中药组合物，其中，用于宠物去泪痕的中药组合物由以下重量份数的原料制成：鸭胆汁40份、决明子7份、山桑子15份、万寿菊10份、枸杞13份、杜仲叶18份、甘草3份、小米草5份、金银花10份。
55.一种用于宠物去泪痕的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
56.(1)将鸭胆汁经回流提取，得到胆汁提取物，再对胆汁提取物进行处理，得到亲水胆汁酸；
57.(2)以壳聚糖和亲水胆汁酸作为原料，合成出壳聚糖接枝的胆汁酸衍生物，备用，将决明子、山桑子、万寿菊、枸杞、杜仲叶、甘草、小米草、金银花粉碎后，得到中药粉末，采用超临界二氧化碳萃取技术进行萃取，得到中药提取液，将壳聚糖接枝的胆汁酸衍生物加入到中药提取液中，混匀后得到药剂；
58.(3)将15g丝素蛋白在180ml氯化钙、乙醇和水组成的三元溶剂中溶解，氯化钙、乙醇以及水的用量比例为8g：40ml：130ml，完全溶解后在去离子水中透析，得到丝素溶液，将丝素溶液和质量分数为0.8％的海藻酸钠溶液混匀，得到共混液，控制丝素蛋白和海藻酸钠的质量比为70：30，然后将药剂加入到共混液中，控制药剂占共混液体积的25％，注入模具中，通过400w超声处理凝胶化后，得到复合水凝胶，经冷冻干燥后研磨成粉末，即可完成药物制备。
59.其中，上述胆汁提取物的具体提取方法如下：
60.将25g动物胆汁置于容器中，加入120ml石油醚，在55℃下加热回流2.5h，抽滤取滤渣，重复4次，将滤液置于容器中，加入相当于滤液9倍体积的甲醇，在80℃下加热回流1.5h，抽滤取滤液，再加入3g蒙脱石，在80℃下加热回流2.5h，抽滤取滤液，重复4次，将所得滤液旋蒸至液固比为3.5，在-2℃下进行结晶，得到胆汁提取物。
61.其中，上述胆汁提取物的处理方法如下：
62.(1)将3g胆汁提取物加入到70ml无水甲醇中，加热至52℃，搅拌使其完全溶解，然后再加入0.2g对甲苯磺酸，回流3h，然后旋蒸出甲醇，得到产物，备用；
63.(2)称取3g上述备用产物置于容器中，加入25ml二氯甲烷、3.9ml三乙胺，在室温搅拌下，逐滴加入1.5g乙酸酐，再加入30mgn，n-二甲基吡啶，反应8h，旋蒸出二氯甲烷，得到中间体产物，将2g中间体产物溶解于80ml四氢呋喃中，再加入1.3g三苯基膦和1g对硝基苯甲酸，缓慢加入0.3g偶氮二甲酸二异丙酯，在氮气条件下室温搅拌23h，旋蒸出有机溶剂，将有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到粗品；
64.(3)将2g上述粗品溶于35ml甲醇中，再加入25ml浓度为4wt％的氢氧化钠溶液，室温下反应2h，加入浓度为7wt％的盐酸溶液调节ph值为3.5，经旋蒸甲醇、乙酸乙酯萃取、饱
和氯化钠溶液洗涤以及无水硫酸钠干燥即可。
65.其中，上述壳聚糖接枝的胆汁酸衍生物的制备方法如下：
66.(1)称取2g壳聚糖置于容器中，加入25ml浓度为1.5wt％的醋酸溶液，常温下搅拌40min至体系呈清亮状态，再缓慢滴加50ml无水乙醇，再称取10g亲水胆汁酸，溶于40ml乙醇中，然后缓慢滴加到上述清亮体系中，再称取0.7g1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐溶于8ml乙醇中，再缓慢滴加入体系中，在室温下搅拌反应25h；
67.(2)待反应结束后，用体积比为8：2的乙醇/氨水混合溶液调节反应体系的ph值为8，加入足量乙醇后在4000r/min下离心5min，将得到的产物用乙醇反复洗涤后冷冻干燥45h，得到壳聚糖接枝的胆汁酸衍生物。
68.实施例3
69.一种用于宠物去泪痕的中药组合物，其中，用于宠物去泪痕的中药组合物由以下重量份数的原料制成：鹅胆汁50份、决明子10份、山桑子20份、万寿菊15份、枸杞15份、杜仲叶20份、甘草5份、小米草7份、金银花12份。
70.一种用于宠物去泪痕的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
71.(1)将鹅胆汁经回流提取，得到胆汁提取物，再对胆汁提取物进行处理，得到亲水胆汁酸；
72.(2)以壳聚糖和亲水胆汁酸作为原料，合成出壳聚糖接枝的胆汁酸衍生物，备用，将决明子、山桑子、万寿菊、枸杞、杜仲叶、甘草、小米草、金银花粉碎后，得到中药粉末，采用超临界二氧化碳萃取技术进行萃取，得到中药提取液，将壳聚糖接枝的胆汁酸衍生物加入到中药提取液中，混匀后得到药剂；
73.(3)将20g丝素蛋白在200ml氯化钙、乙醇和水组成的三元溶剂中溶解，氯化钙、乙醇以及水的用量比例为10g：50ml：150ml，完全溶解后在去离子水中透析，得到丝素溶液，将丝素溶液和质量分数为1.0％的海藻酸钠溶液混匀，得到共混液，控制丝素蛋白和海藻酸钠的质量比为90：10，然后将药剂加入到共混液中，控制药剂占共混液体积的30％，注入模具中，通过500w超声处理凝胶化后，得到复合水凝胶，经冷冻干燥后研磨成粉末，即可完成药物制备。
74.其中，上述胆汁提取物的具体提取方法如下：
75.将30g动物胆汁置于容器中，加入150ml石油醚，在60℃下加热回流3h，抽滤取滤渣，重复5次，将滤液置于容器中，加入相当于滤液10倍体积的甲醇，在83℃下加热回流2h，抽滤取滤液，再加入5g蒙脱石，在83℃下加热回流3h，抽滤取滤液，重复5次，将所得滤液旋蒸至液固比为4，在0℃下进行结晶，得到胆汁提取物。
76.其中，上述胆汁提取物的处理方法如下：
77.(1)将5g胆汁提取物加入到100ml无水甲醇中，加热至55℃，搅拌使其完全溶解，然后再加入0.3g对甲苯磺酸，回流5h，然后旋蒸出甲醇，得到产物，备用；
78.(2)称取5g上述备用产物置于容器中，加入30ml二氯甲烷、4.3ml三乙胺，在室温搅拌下，逐滴加入1.8g乙酸酐，再加入40mgn，n-二甲基吡啶，反应10h，旋蒸出二氯甲烷，得到中间体产物，将3g中间体产物溶解于100ml四氢呋喃中，再加入1.5g三苯基膦和1.2g对硝基苯甲酸，缓慢加入0.5g偶氮二甲酸二异丙酯，在氮气条件下室温搅拌25h，旋蒸出有机溶剂，将有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到粗品；
79.(3)将3g上述粗品溶于50ml甲醇中，再加入30ml浓度为5wt％的氢氧化钠溶液，室温下反应3h，加入浓度为8wt％的盐酸溶液调节ph值为4，经旋蒸甲醇、乙酸乙酯萃取、饱和氯化钠溶液洗涤以及无水硫酸钠干燥即可。
80.其中，上述壳聚糖接枝的胆汁酸衍生物的制备方法如下：
81.(1)称取3g壳聚糖置于容器中，加入30ml浓度为2wt％的醋酸溶液，常温下搅拌50min至体系呈清亮状态，再缓慢滴加55ml无水乙醇，再称取13g亲水胆汁酸，溶于50ml乙醇中，然后缓慢滴加到上述清亮体系中，再称取0.8g1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐溶于10ml乙醇中，再缓慢滴加入体系中，在室温下搅拌反应30h；
82.(2)待反应结束后，用体积比为8：2的乙醇/氨水混合溶液调节反应体系的ph值为8.5，加入足量乙醇后在5000r/min下离心5min，将得到的产物用乙醇反复洗涤后冷冻干燥50h，得到壳聚糖接枝的胆汁酸衍生物。
83.对比例1：本对比例与实施例1基本相同，不同之处在于，中药组合物的制备步骤(1)中，未对胆汁提取物进行处理。
84.对比例2：本对比例与实施例1基本相同，不同之处在于，中药组合物的制备步骤(2)中，直接将亲水胆汁酸加入到中药提取液中。
85.对比例3：本对比例与实施例1基本相同，不同之处在于，省略中药组合物的制备步骤(3)。
86.性能检测与效果评价：
87.通过联动当地宠物医院和宠物店，选取20只体重4kg左右，均有一定泪痕问题的白色比熊犬，随机分成4组，每组5只犬进行试验。实验过程中，宠物犬自由采食和饮水，分别饲喂市售普通的犬粮，同时，分别使用实施例1-3和对比例1-3提供的中药组合物对宠物犬进行投喂，每日一次，每次的使用量为10g/kg。每周进行一次schirmer泪液试验(stt)测试，并观察泪痕变化情况，时间时长为4周。
88.表1试验犬试验期内泪液量对比
[0089][0090][0091]
表2试验犬试验期内泪痕感官变化对比
[0092][0093][0094]
由表1和表2可知，经过4周的中药组合物的投喂，使用本发明所提供的中药组合物进行投喂后，试验犬的泪液量逐步恢复到正常水平(犬泪液量正常值为15
±
5mm/min),眼眶周边的湿润毛发逐步变干，减少了微生物滋生的必要条件，从而其泪痕产生的难闻气味也逐步减少，直至消失，说明本发明中的中药组合物，确实具有很好的预防、减轻以及治疗宠物泪痕的效果。
[0095]
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。