一种治疗围绝经期综合征的药物组合物及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种治疗围绝经期综合征的药物组合物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.绝经是因卵巢功能停止导致永久性无月经的状态，围绝经期是指绝经前后的一段时期，包括从出现与绝经有关的临床特征（如月经开始不规律）起至绝经后1年。围绝经期综合征又称更年期综合征（perimenopausal syndrome），是指妇女绝经前后因卵巢功能衰退出现性激素波动或减少所致的一系列以自主神经系统功能紊乱为主，伴有神经心理症状的证候群，包括烦躁易怒、心悸失眠、阵发性烘热汗出、眩晕耳鸣、腰背酸楚、皮肤蚁行感、情志不宁等。这些围绝经期症状和生殖健康问题和由此引发的一系列慢性疾病（如骨质疏松、高血糖、高血脂等）对围绝经期妇女、绝经后妇女，甚至老年妇女的生活质量都会产生严重的影响。90%的女性可出现轻重不等的症状，对于处在窗口期的女性，有适应症无禁忌症的，可以考虑使用激素替代治疗。但长期激素治疗，尤其是结合雌激素和醋酸甲羟孕酮联合应用，可增加50到79岁围绝经期女性发生血栓、卒中、乳腺癌以及心脏病的风险。中医药在抗衰老方面具有悠久历史和显著优势。绝经前后出现的症状，中医称为“经断前后诸证”或“绝经前后诸证”，还可根据发病症状归于“不寐”、“脏躁”、“盗汗”等范畴。中医古籍中也有对绝经相关症状的论述，如《金匮要略》中云：“妇人脏躁，喜悲伤欲哭，像如神灵所作，数欠伸。”中医认为肾为先天之本，天癸之源，藏精而主生殖。肾气盛则天癸至，肾气衰则天癸竭。《素问
·
上古天真论篇》云:
ꢀ“
女子
……
七七任脉虚，太冲脉衰少，天癸竭。地道不通，故形坏而无子也。”可见中医认为肾虚、天癸竭是本病的发病基础，而主要病机是肾阴阳失调，并涉及心、肝、脾等脏腑。治疗上着重调理机体阴阳平衡，运用中医整体观念，进行辨证论治，临床常见证候类型包括肝肾阴虚证、肾虚肝郁证、心肾不交证、肾阴阳两虚证等，治法或滋养肝肾，或滋肾疏肝，或补肾宁心，或阴阳双补。


技术实现要素：

3.鉴于上述现有技术存在的缺陷，本发明的目的是提出一种治疗围绝经期综合征的药物组合物及其制备方法和应用，以克服现有技术中的不良副作用。
4.本发明的目的将通过以下技术方案得以实现：本发明的目的之一在于，提供一种治疗围绝经期综合征的药物组合物，按重量百分比计，含有5%～25%的哈蟆油和75%～95%的中草药粉；所述中草药粉由以下配比的原料药制成：柴胡5～30重量份，当归5～30重量份，白术5～30重量份，醋莪术5～30重量份。
5.本发明的另一个目的在于，提供一种治疗围绝经期综合征的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：步骤1、称取柴胡、当归、白术、醋莪术，加入5～20倍质量的水蒸馏提取2 h～8h，收集挥发油，挥发油加2～10倍质量β-cd，在50℃～60℃下，搅拌2h～8h，过滤，低温干燥，制得
β-cd包合物备用；药渣加热煮沸提取1h～3h，过滤，滤渣继续加入水，重复提取1～3遍，合并滤液，干燥后研磨成粉，与β-cd包合物均匀混合，得到所述中草药粉；步骤2、将哈蟆油喷入5%～20%（v/m）的75% 乙醇，闷6h～24h，50℃-60℃沸腾干燥，粉碎成哈蟆油细粉；步骤3、将75%～95%的步骤1制得的中草药粉和5%～25%的步骤2制得的哈蟆油细粉混合均匀，得到所述药物组合物。
6.本发明的另一个目的在于，提供一种治疗围绝经期综合征的药物组合物的剂型为口服剂型。
7.进一步的，所述口服剂型包括片剂、胶囊和丸剂。
8.本发明的另一个目的在于，提供一种药物组合物在治疗围绝经期综合征中的应用。
9.本发明的突出效果为：本发明来源于临床经验方，是以中国传统医药学理论为依据，博采历代医家精华，结合现代研究成果，针对更年期综合征立法组方，精心设计而成的纯中药制剂。该药具有补肾益精，疏肝理气，和血祛浊功效，用于围绝经期综合征（肾虚肝郁证），见围绝经期烦躁易怒、焦虑失眠、烘热汗出、胸闷心悸、头晕耳鸣、五心烦热、阴道干涩、性欲下降等，舌红少苔或舌暗苔薄、脉弦细或细涩等症。
10.本发明的组方由哈蟆油，柴胡，当归，白术、醋莪术组成，是在本研究小组既往的药物组合物坤泰口服液/胶囊的基础上发展而来的。原方坤泰用于治疗围绝经期综合征（肾虚血瘀证）包含两种药材：哈蟆油和（生）莪术，用于治疗围绝经期综合征，特别是对于肾虚血瘀证的治疗效果最佳。但原组方简单，不能很好地缓解围绝经期的其他多种症状，如烦躁易怒、焦虑失眠、不思饮食等；同时，原有的超临界提取方法虽然可以缩减提取时间，但其工艺成本很高，不利于实现工业化生产。经临床使用经验总结，我们将生莪术替换为醋莪术，减少其可能毒性,并增加其提取挥发油含量，同时加减选用中医经典名方逍遥丸中的主药柴胡，当归，白术，采用分别提取挥发油后制备β-cd包合物和水提物，再与哈蟆油细粉混合后制成胶囊，更完整地保留了全部有效物质，针对多个症状起效，用于治疗围绝经期综合征（肾虚肝郁证）取得了显著效果。
11.哈蟆油为蛙科动物中国林蛙rana temporaria chensinensis david雌蛙的输卵管，经采制干燥而得，其性平，味甘、咸， 入肺、肾经，具有补益肾精、润肺养阴之功效。化学研究表明其含有大量蛋白质、氨基酸、脂肪酸及微量雌二醇(e2) 、孕酣(p)等激素类物质;现代药理研究表明哈蟆油具有抗衰老、抗疲劳、提高免疫力和应激性能、促进性成熟、抗脂质过氧化、抑制血小板聚集及改善血脂等作用。作为该方君药，哈蟆油补肾益精，充骨填髓，固先天之本，改善绝经期妇女临床诸症；臣药柴胡、当归疏肝解郁，理气和血；佐以白术健脾祛湿，醋莪术疏通血脉，消积祛浊，针对绝经期容易出现的其他症状起效。既能补益肾精，固护元气、提高机体免疫力和雌激素水平，又能疏通气血，协调脏腑功能。全方补而不滞，疏而不损，攻补兼施，标本同治，共奏补肾益精，疏肝理气，和血祛浊之功效。
12.本发明的一种治疗围绝经期综合征的药物组合物，能补肾益精，疏肝理气，和血祛浊，可用于治疗女性由于进入围绝经期或卵巢功能下降导致的围绝经期综合征（肾虚肝郁证），疗效显著，无毒副作用，且制备方法简便，适合工业化生产。
具体实施方式
13.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
14.哈蟆油为蛙科动物中国林蛙rana temporaria chensinensis david雌蛙的输卵管，经采制干燥而得。具有补肾益精，养阴润肺之功效。
15.柴胡为伞形科植物柴胡bupleurum chinense dc.或狭叶柴胡bupleurum scocrzonerifolium willd．的干燥根。和解表里，理气疏肝。
16.当归为伞形科植物当归angelica sinensis（oliv.）diels的干燥根。具有补血活血，调经止痛，润肠通便之功效。具有健脾益气，燥湿利水功效。
17.白术为菊科植物白术atractylodes macrocephala koldz．的干燥根茎，可健脾益气，燥湿利水。
18.醋莪术为姜科植物醋莪术curcuma phaeocaulis val．、广西醋莪术curcuma kwangsiensis s.g.lee et c.f.liang的干燥根茎。具有行气破血，消积止痛的功效。
19.实施例1本实施例的一种药物组合物的制备方法，包括如下步骤：1、中草药粉的制备方法称取柴胡30重量份，当归15重量份，白术5重量份，醋莪术5重量份，加入10倍质量的水蒸馏提取5h，收集挥发油，由挥发油加2倍质量β-环糊精（β-cd），在50～60℃下，搅拌2h，过滤，低温干燥，制成β-cd包合物备用；药渣加热煮沸提取1h，过滤，滤渣继续加入水，重复提取2遍，合并滤液，干燥后研磨成粉，与β-cd包合物按比例均匀混合后得到中草药粉。
20.2、哈蟆油喷入5%（v/m）的75% 乙醇，闷6小时，50-60℃沸腾干燥，粉碎成哈蟆油细粉。
21.3、取15%的哈蟆油细粉和85%的中草药粉混合均匀，即得药物组合物。
22.实施例2本实施例的一种药物组合物的制备方法，包括如下步骤：1、中草药粉的制备方法称取柴胡5重量份，当归5重量份，白术30重量份，醋莪术15重量份，加入5倍质量的水蒸馏提取2h，收集挥发油，由挥发油加5倍质量β-环糊精（β-cd），在50～60℃下，搅拌5h，过滤，低温干燥，制成β-cd包合物备用；药渣加热煮沸提取1.5h，过滤，滤渣继续加入水，重复提取1遍，合并滤液，干燥后研磨成粉。与β-cd包合物按比例均匀混合后得到中草药粉。
23.2、哈蟆油喷入20%（v/m）的75% 乙醇，闷12小时，50-60℃沸腾干燥，粉碎成哈蟆油细粉。
24.3、取5%的哈蟆油细粉和95%的中草药粉混合均匀，即得药物组合物。
25.实施例3本实施例的一种药物组合物的制备方法，包括如下步骤：1、中草药粉的制备方法称取柴胡10重量份，当归30重量份，白术15重量份，醋莪术30重量份，加入20倍质量的水蒸馏提取8h，收集挥发油，由挥发油加10倍质量β-环糊精（β-cd），在50～60℃下，搅拌8h，过滤，低温干燥，制成β-cd包合物备用；药渣加热煮沸提取3h，过滤，滤渣继续加入水，
重复提取3遍，合并滤液，干燥后研磨成粉。与β-cd包合物按比例均匀混合后得到中草药粉。
26.2、哈蟆油喷入15%（v/m）的75% 乙醇，闷24小时，50-60℃沸腾干燥，粉碎成哈蟆油细粉。
27.3、取25%的哈蟆油细粉和975%的中草药粉混合均匀，即得药物组合物。
28.本发明的药物组合物胶囊的制备方法：将本发明的药物组合物按配方量置于高速混合制粒机中，混合均匀；均匀滴浆75％的酒精制粒，开动搅拌浆、飞刀，制得湿润、粒度均匀软材；将制粒后的颗粒平铺于托盘中，置烘箱中干燥，温度控制在55℃
±
5℃，水分≤6％时停止；将烘干后的颗粒过16目筛整粒；将整粒后的颗粒均匀填充满胶囊，即得本发明的药物组合物胶囊。
29.本发明的药物组合物片剂的制备方法：往本发明的药物组合物中加0.5％质量的硬脂酸镁，压片9mm浅凹冲压片芯（片重0.2g），再用11mm冲浅凹冲压瓜尔胶衣0.08g，即得片剂。
30.实施例1-3所得药物组合物的用法用量：成人（以70kg为例）每次服用本发明的药物组合物合原药材10～50g，连续服用30天，停药休息10天后重复疗程。至少使用2个疗程。
31.实验例1、主要药效学实验采用围绝经期经典去势模型，研究药物对围绝经期主要病理机制（雌激素降低、激素紊乱、性器官萎缩等）的作用。
32.对于双侧卵巢切除的去势sd雌性大鼠（绝经期模型），随机分为实验组（分高、低剂量组）、阳性药对照组、模型组和假手术组每组6只。模型组和假手术组灌服植物油，实验组分别灌服含实施例1的药物组合物高、低剂量（0.6g/kg、0.3g/kg）的植物油溶液，阳性药对照组选择坤泰胶囊中剂量组（1.6g/kg），连续4周。实验结束后麻醉大鼠并取血，分离血清，采用试剂盒检测激素含量；分离子宫称重、计算子宫指数；分离阴道组织，采用石蜡包埋切片，观察阴道组织病理变化。
33.结果如表1所示：与假手术组比较，模型大鼠血清e2水平明显降低（p《0.01），lh、fsh水平明显升高（p《0.01，p《0.01），说明造模成功。实施例1的药物组合物高、低剂量（0.6g/kg、0.15g/kg）均能显著提高模型大鼠血清e2水平 (p 《0.05)，且与阳性药对照组相比作用更明显(p 《0.01, p 《0.05)。该药物组合物的高、低剂量组均可降低模型大鼠lh、fsh水平（p《0.01或《0.05），比阳性药组作用更明显。
34.表1 各组大鼠血清激素含量变化（
±
s，n=6）
与假手术组比δ p＜0.01,δδ p＜0.01；与模型组比* p＜0.05, ** p＜0.01；与阳性组比# p＜0.05, ## p＜0.01对去势大鼠子宫重量的影响（表2）：与假手术组比较，去卵巢后大鼠子宫重量及系数明显降低（p＜0.01），高、低剂量组子宫重量和系数均明显增加（p＜0.01, p＜0.01），与阳性对照组比较也显著升高（p＜0.01, p＜0.05）。
35.大鼠阴道组织he染色结果显示：模型组大鼠阴道壁显著萎缩，黏膜上皮层次减少；高、低剂量给药组大鼠阴道壁比模型组不同比例增厚，粘膜上皮层次显著增加，固有层组织疏松；阳性药作用效果不明显。
36.表2 各组大鼠体重和子宫指数变化（
±
s，n=6）与假手术组比δ p＜0.01,δδ p＜0.01；与模型组比* p＜0.05, ** p＜0.01；与阳性组比# p＜0.05, ## p＜0.01这一研究显示，该实施例的药物能升高围绝经期经典模型动物的雌激素水平，调节体内紊乱的激素水平，恢复萎缩的子宫和阴道病理改变；与阳性药比较，多项指标有显著改善，尤其调节激素水平和对阴道病理改变作用更为明显。
37.、对虚证小鼠耐寒能力和免疫器官的影响采用经典虚症小鼠模型，研究药物对围绝经期肾虚导致免疫力下降的作用。
38.取昆明小鼠雌雄各半，随机分为正常对照组、模型组、实施例2的药物组合物高、低剂量组（0.9g/kg、0.45g/kg），阳性药对照组选择坤泰胶囊中剂量组（2.3g/kg），每组8只。正常对照组及模型组每日灌胃等量生理盐水，各给药组按表3剂量给药，在给药同时除正常对照组外，其余各组肌注氢化可的松25mg/kg/d，连续21天。实验期每3 天称体重一次，按体重调节给药剂量，末次给药后1小时，将小鼠置-20℃冰室观察其耐寒能力，动物死亡后取胸腺、脾脏称重并计算脏器指数。
39.结果如表3所示：与正常对照组比较，模型组动物抗寒能力明显下降（p＜0.01），胸腺和脾脏重量也明显减轻（p＜0.01, p＜0.01），出现肢冷、拱背、竖毛 等“阳虚”症状。实施例2的药物组合物高、低剂量组（1.0g/kg、0.5g/kg）能明显增加模型动物耐寒能力（p＜0.01, p＜0.05），并能增加胸腺指数（p＜0.01, p＜0.05）和脾脏指数（p＜0.01, p＜0.05）。
40.表3 各组小鼠死亡时间及胸腺、脾脏指数（
±
s，n=8）
与正常组比δ p＜0.01,δδ p＜0.01；与模型组比* p＜0.05, ** p＜0.01；与阳性组比# p＜0.05, ## p＜0.01这一研究显示，对于围绝经期出现的肾虚“虚症”小鼠模型，该实施例的药物能显著提高其免疫器官指数，使小鼠更为强壮，耐寒能力显著增加；与阳性药比较，指标有显著改善。
41.、对肝郁小鼠肝损伤的作用采用经典拘束应激小鼠模型，研究药物对围绝经期肝气郁结、肝功能受损等症状的作用。
42.将40只雄性昆明小鼠随机分为5组，空白对照组、模型组，实施例3的药物组合物高、低剂量组（0.9g/kg、0.45g/kg），阳性药对照组选择坤泰胶囊中剂量组（2.3g/kg），每组8只。除空白对照组外，小鼠放置于特制的拘束管中进行一次性拘束应激（18 h），拘束时间为当日15: 00至次日9: 00，拘束期间禁食禁水；空白对照组小鼠在此期间不拘束，禁食禁水。造模结束后，所有小鼠通过4% 水合氯醛麻醉，取全血和肝脏，用于后续实验。试剂盒检测血清中ast的水平，mda试剂盒检测小鼠肝脏组织中mda的含量，液相-质谱联用的方法小鼠肝脏组织gsh含量的测定。
43.结果如表4所示：与空白对照组相比，拘束应激小鼠血清ast值显著上升（p 《 0.01），肝脏组织中mda水平上升（p 《 0.05），gsh的水平明显降低（p 《 0.05）。与模型组比较，实施例3的药物组合物高（1.0g/kg、0.5g/kg）血清中的ast的水平显著降低升高（p 《 0.05），gsh显著增加（p 《 0.05，p 《 0.05）。高、低剂量组肝脏组织中磷脂过氧化产物mda的水平均显著降低（p 《 0.05，p 《 0.05），而阳性药对照组对于血清ast的作用不明显（p＞0.05），对肝组织中的mda和gsh具有一定调节作用，统计没有显著性差异。
44.表4 各组小鼠肝脏ast、mda和gsh结果（
±
s，n=8）
与空白组比δ p＜0.01,δδ p＜0.01；与模型组比* p＜0.05, ** p＜0.01；与阳性组比# p＜0.05, ## p＜0.01这一研究显示：采用经典拘束应激小鼠模型，研究药物对围绝经期最常见的肝气郁结、肝功能受损等症状的作用，该实施例的药物能显著改善因拘束应激导致的肝郁症状，降低受损的肝功能指标，降低肝脏脂质过氧化水平，减少肝脏炎症。阳性药在本实验中未显示与模型组的显著性差异，效果不佳。4、镇静催眠作用采用围绝经期去势小鼠复合戊巴比妥钠模型，研究药物对围绝经期焦虑和失眠等症状的作用。
45.对于双侧卵巢切除的去势昆明雌性小鼠，随机分为实验组（分高、低剂量组）、阳性药对照组、模型组和假手术组。实验前禁食12h，模型组和假手术组灌服植物油，实验组分别灌服含实施例1的药物组合物高、低剂量（0.9g/kg、0.45g/kg）的植物油溶液，阳性药对照组选择坤泰胶囊中剂量组（2.3g/kg）。给药30min后将各组小鼠分别放入活动箱中适应12min，记录10min内各组小鼠的自发活动情况。实验时保持室内安静，室温恒定。继续灌胃7天，于末次给药后50 min，分别腹腔注射阈剂量戊巴比妥钠(50 mg/kg)，以每鼠从翻正反射消失至恢复的时间作为睡眠持续时间，作出比较。
46.结果如表5所示：与假手术对照组比较，模型组小鼠自发活动次数显著增加（p 《 0.01），睡眠时间显著减少（p 《 0.05）；实施例1的药物组合物高、低剂量均能显著减少模型小鼠的活动次数（p 《 0.01，p 《 0.01），延长小鼠巴比妥钠睡眠时间（p 《 0.01，p 《 0.05），具有一定的镇静催眠、抗焦虑的作用。阳性对照组与空白组相比小鼠镇静时间显著增加（p﹤0.01）。
47.表5 各组小鼠自发活动和睡眠时间结果（mean
±
sd，n=8）
与假手术组比δ p＜0.01,δδ p＜0.01；与模型组比* p＜0.05, ** p＜0.01；与阳性组比# p＜0.05, ## p＜0.01这一研究显示：针对围绝经期最常出现的焦虑和失眠等情况，该实施例药物能显著缓解其焦虑症状，降低焦躁不安的症状，减少自发活动；同时，能够显著增加模型小鼠的睡眠时间，比阳性药效果显著增强。
48.综上所述，本发明的药物组合物能显著升高去势大鼠雌激素水平，调节体内多种激素水平，缓解性器官萎缩，修复模型组阴道粘膜层；增强机体免疫力；缓解肝气郁结，焦虑抑郁情绪并显著改善睡眠；可针对围绝经期综合征肾虚肝郁证的多个症状起到有效治疗作用。
49.以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。