用于疫苗接种的组合物的制作方法

专利名称:用于疫苗接种的组合物的制作方法
发明领域本发明涉及用于经皮递送至少一种免疫原的新型组合物和包括这些组合物的构建体，制备该组合物的方法以及产生免疫反应的方法，治疗或预防疾病状态的方法和免疫接种的方法以及免疫原在所述组合物中的用途。
发明背景对很多药物而言，诸如吸烟戒断治疗中的尼古丁、心绞痛治疗中的异山梨醇或硝酸甘油以及激素代替治疗中的雌二醇，经皮递送(TDD)是众所周知的、非常经济的、重要且引入注目的递送途径。经皮递送典型地包括针对药物通过角质层(horny layer)的经皮通道的药物递送，其经过皮肤的表皮和真皮或经过粘膜而进入患者的体循环。经皮递送可通过将药物暴露于患者的皮肤或粘膜来实施，以便持续释放药物。实际使用时，可将包括药物的TDD贴片粘附于皮肤表面。TDD递送还可通过将药物以乳膏剂、软膏剂、洗剂等施用于皮肤来实施。
经皮递送包括使用针对药物的载体，该载体优选但非必须地具有皮肤粘附特性。大量粘合剂系统(也被称为压力敏感粘合剂系统)已被广泛地使用，诸如硅酮，聚氨基甲酸酯，丙烯酸酯和聚异丁烯粘合剂。这些粘合剂一般是非吸收性的，其具有高度堵塞性和高度皮肤粘合性，由此可导致患者不顺应性。具有水吸收能力的其它粘合剂系统(其具有更佳的患者耐受性)，是诸如水胶体粘合剂，水凝胶粘合剂，交联的水凝胶粘合剂等。
美国专利序号4 367 732公开了一种水胶体粘合剂，其包括作为基质分子的苯乙烯-链烯烃-苯乙烯嵌段共聚物，其与多种树脂增粘剂和增塑剂混合，分散于水胶体中，以便用于皮肤屏障，其适用于例如绷带的目的。美国专利序号6 153 215公开了水胶体粘合剂用于将药物递送至皮肤或伤口的用途。
英国专利申请序号2 115 431公开了一种亲水性弹性体压力敏感粘合剂，其包括至少一种水不溶性、交联的聚合物作为基质和附加的增塑剂。该粘合剂可用于多种方面，诸如绷带和造口装置。WO 93/00076公开了一种用于药物的载体系统，其包括球状颗粒和任选的一种或多种生物粘合剂聚合物。
美国专利序号5 410 016公开了聚合的和交联的大分子的水凝胶，其包括具有可降解的单体或寡聚体延伸的亲水寡聚体，其可用于例如控释药物或形成粘合。美国专利序号6 410 645公开了形成凝胶的大分子，其包括至少四个共价连接的聚合嵌段。该大分子可交联而在组织表面上形成凝胶，其可用于多种医学用途，包括药物递送和组织覆盖。
迄今为止，本领域中极少有公开经皮递送用于免疫接种。而且，药物的经皮递送会受到多种不同参数的影响，其中包括要被递送的分子的大小。经皮递送通常仅用于大小小于1纳米的非常小的分子。例如，分子大小为约1.5-2纳米的胰岛素已被报道非常难于透过皮肤膜。
如果能够提供经皮免疫接种途径，将为非侵入性药物施用(例如提供肌内、皮内或皮下注射)提供重要的可选方案。所述注射具有多种缺陷。其可导致应激、疼痛和刺激，尤其是在重复注射的情况下，包括感染的危险-或耐受性差。此外，未经训练的或无执照人员无法实施注射。此外，当向管理机构申请注册疫苗时，对于用于侵入性施用的疫苗来说，关于无副作用所需要的描述文件明显地多于用于经皮施用的疫苗。
本文中的疫苗接种是这样的过程，通过该过程，将疫苗施用于个体，可在处于非病原性状态下的所述个体中导致免疫反应。
迄今为止已经公开的经皮免疫接种途径优选地包括如下步骤，其中(i)采用机械处理(刮除)去除皮肤的上层部分，即角质层和(ii)在施用疫苗前使皮肤湿润或可选地(iii)将疫苗吸附在纱布垫中，并用普通膏剂施用于皮肤，这些技术被进一步公开于例如“经皮免疫接种”，Glenn GM，Kenney RT.New Generation Vaccines，3rd Ed.Vol.(待出版)和“and inAdvances in vaccine deliverytranscutaneous immunization”，Glenn GM，Scharton-Kersten T，和Alving CR.Expert Opinion in Investigational Drugs.Vol.8(6)(1999)797-805，WO99/43350和US 2001/0006645 A1中。
WO 02/074325公开了一种用于经皮免疫接种的贴片，其包括压力敏感粘合剂层，置于压力敏感粘合剂层的和/或掺入压力敏感粘合剂层的免疫原性制剂的至少一种免疫学活性蛋白质和稳定剂。该制剂可包括具有佐剂活性的蛋白质。
WO 99/11247公开了一种用于经皮施用免疫原的组合物，其包括双相脂质载体的混悬物和包埋(inclusion)在双相脂质载体中的免疫原。
WO 00/07621公开了一种佐剂组合物，其包括甾醇和皂苷，其中佐剂的形式为ISCOM。该佐剂组合物适用于经皮给药。
本发明的一个目的是提供新型组合物和更佳的、更简便和安全的将包埋的免疫原经皮递送至个体的方法，由此避免与侵入性施用诸如注射相关的不良作用。
本发明的其它目的是提供这样的组合物和方法，其中递送提供使用递送系统来完成，所述递送系统为诸如PCT/DK02/00229中描述的Posintro或例如WO 98/36772，WO 92/06710和WO 98/56420中描述的ISCOMs。
已令人惊奇的发现，使用根据本发明的包埋载体和原理可介导增强的免疫原递送，且可作为免疫原的增效因子对沉于粘膜、角质层下或内皮细胞膜下的免疫活性细胞(通常被称为专门的抗原呈递细胞)发挥作用。由于施用的递送系统和/或佐剂可假定其微粒形状的平均大小为约5-50，例如最常见为10-40纳米(nm)或更大，故下述发现是意料之外的，即所述相对较大的颗粒能够表现出该增强特性。根据关于药物、激素和蛋白质递送的发现，一般可以预期大于1或数纳米的化合物不能透过所述细胞膜。
发明概述本发明第一方面涉及用于将至少一种免疫原经皮递送于个体的组合物，其包括a)所述至少一种免疫原b)包埋载体和c)PosIntro或ISCOM形式的免疫原递送系统。
在本发明中，术语经皮递送包括经过皮肤表面以及经过粘膜组织的递送。
本发明在第二方面涉及用于将至少一种免疫原经皮递送于个体的组合物，其包括a)所述至少一种免疫原b)压力敏感粘合剂形式的包埋载体和c)包括至少一种皂苷和至少一种甾醇的免疫原递送系统。
本发明所使用的术语包埋或包埋载体是指皮肤或粘膜的任何覆盖层，该覆盖层在倒置Paddington杯(British Pharmacopoeia 1993，附录1996，1943页)的实验室检测中，将水与该覆盖层接触，在37℃和环境相对湿度为15％时，能使水蒸发传送小于15000g/m2×24小时。实际应用中，将使用非常低的值，例如小于12.000g/m2×24小时，优选小于10.000g/m2×24小时，更优选小于6.000g/m2×24小时，或小于3.000g/m2×24小时，甚或更为优选小于1.000g/m2×24小时，或小于800g/m2×24小时，小于500g/m2×24小时，小于300g/m2×24小时或小于200g/m2×24小时。完全包埋是指通过所述时间测定的值小于100g/m2×24小时。
包埋可用任何形式的覆盖层(例如轻微或不能透过水的膜或箔材料)来实现。当用粘合剂将所述覆盖层固定于皮肤时，可达到最佳性能。
优选的粘合剂能够吸收水分并将其保持在基质中。这使得材料具有增加皮肤或粘膜中水分含量的能力。皮肤中水分水平的升高将增加药物透过的能力。这在现有技术中已经得到描述，参见例如Henning GjelstrupKristensenAlmen farmaci，Institut for Farmaci，Danmarks FarmaceutiskeHjskole，3.udgave(2000)，page 332-333。而在粘合剂制剂中进一步加入增强剂可增加药物的透过率。在粘膜递送的情况下，增强剂可不发挥任何作用，因为内皮层的透过阻力比皮肤中角质层的小。另一方面，即使是对于粘膜递送，也可适宜地加入增强剂。
可使用包括本发明的组合物的大量构建体。如附图中所述，其中
图1显示了简单的单片系统，其中疫苗被局部地或均匀地在载体中施用，此时载体是压力敏感粘合剂(2)，和其中所述粘合剂被层压至位于外面一侧的覆盖膜(1)和位于对侧的剥离衬层(3)。
图2显示了与图1非常相似的贮器系统，但其中包括疫苗的载体(2)被粘合剂边(4)所环绕。(1)是覆盖膜而(3)是剥离衬层。
图3显示了与图1的原理相同的层压控制系统，与之不同的是将薄控释屏蔽层(5)(优选多孔和压力敏感粘合剂)置于剥离衬层(3)和载体(2)之间。
图4显示了图2和图3之间的混合形式。在该系统中，用于疫苗的载体(2)通常应是液体(水)。
图5显示了一种系统，其中包括疫苗的载体(2)与意在单独用于将产品固定于人类组织的粘合剂(6)分离。通过轻压剥离衬层(3)的中心凹入区，可在从剥离衬层上除去以及随后使用之前即刻将载体(2)施加在粘合剂部分上。(1)是覆盖膜。
图6显示了水贮器系统。其中，包括疫苗的载体(2)是冻干的垫片，该垫片通过固定于剥离衬层(3)上而与支持性粘合剂(6)分离。所述衬层具有可破裂的位于中心的薄弱点(虚线)。此外，含水(7)的容器(8)被接合至或附着于剥离衬层(3)的上表面。通过挤压该构建体，在第一步中，载体将粘附于粘合剂(6)，而随着第二步中衬片中的薄弱点(虚线)(3)的破裂，使得水进入具有冻干载体的隔室，通过这样的过程将载体转变为凝胶。
图7显示了原理与图6相同的等效形式，与之不同的是包括水的隔室(7和8)被密封邻接于仍具有薄弱剥离衬层(3)的载体(2)而用于将水导入载体中。
图8进一步显示了原理与图6相同的等效形式，其中载体(2)被固定于支持粘合剂(6)上。膜(10)被密闭至剥离衬层(3)和包括水的隔室(8)的外膜，且将隔室与载体分开，形成了薄弱区而用于通过位于虚线处的外部压力来导致破裂。膜和剥离衬层(3)可以经过剥离衬层凹入区的同一层。
图9显示了用于上述图1至5中原理任一项的双组分包装。一个组分由膜(1)和在剥离衬层(3)上的粘合剂支持层(6)组成，而第二组分由囊袋(10)中的载体(2)组成。
图10显示了原理等效于图9的双组分，其中含水构建体如图6至图8。此时，囊袋材料(10)被密封在一起，在载体和含水容器之间形成如虚线所示的薄弱区，以便引导来自外部压力的破裂和水递送。
第三方面，本发明还提供了制备本发明的组合物的方法，包括通过分散或浸在载体溶液中或通过施加于其表面，而将免疫原和免疫原递送系统(其任选地包括在疫苗制剂中)导入包埋载体的基质中或其表面的步骤，和任选地对组合物灭菌和/或干燥和/或密封包装。
第四方面，本发明提供了包括本发明的组合物的构建体。
在其它方面中，本发明提供了在个体中产生免疫反应的方法，治疗或预防个体中疾病状态的方法以及免疫接种个体的方法，其中将本发明的组合物施用于所述个体。
最后，本发明提供了免疫原在制备用于所述免疫原经皮递送的组合物中的用途，所述组合物包括包埋载体。
发明详述本发明的组合物中的包埋载体优选为压力敏感粘合剂而更优选为吸收性压力敏感粘合剂。所述粘合剂尤其见于但不限于水胶体粘合剂、水凝胶粘合剂或交联的水凝胶。对这些粘合剂系统的进一步描述如下。
水胶体粘合剂水胶体粘合剂是一类在医疗装置中被广泛用于固定于人体的粘合剂。粘合剂是一种两相物质，其由粘合剂基质组成，其中包埋了所谓水胶体的亲水聚合物的吸附性颗粒。其原则非常灵活，这是因为颗粒水胶体的量和类型可根据预期应用而进行定制，基底粘合剂可具有攻击性或可易于除去，并可进一步负载适宜的增强剂。还有大量多种类型的粘合剂原料可用于水胶体粘合剂。所述粘合剂原料可以是化合物或混合物，其包括本领域技术人员众所周知的聚丙烯酸酯、聚异丁烯、含有苯乙烯末端嵌段的嵌段共聚物、聚氨基甲酸酯、聚乙酸乙烯酯等。
水凝胶粘合剂与水胶体粘合剂相反，水凝胶粘合剂是几乎完全的潮湿敏感性。这意味着在该粘合剂特性改变下，该粘合剂将持续吸收环境中存在的水分。具体而言，起始吸收将导致与潮湿表面的良好粘附。这对于其应用的多种目的来说是有害的。然而，对于单一应用和不需要携带重量而言，该粘合剂可以是良好的可选方式，即使是在潮湿环境中。
粘合剂可被分类为传统粘合剂，其中将常规的疏水性基质变为亲水性的。这可通过使用亲水聚合物的支架结构来实现，其确保粘合剂与亲水性增塑剂(如多价醇和增粘性亲水寡聚物)组合的充分粘合力。此外，在粘合剂中可导入某些物理上或化学上的交联，以改善材料的粘合力。该粘合剂特别适用于粘附在粘膜上。
水凝胶用于药物递送的粘合剂的第三个主要类别是基于水凝胶，优选但非必须是交联的。该类别在某些程度上对应于水凝胶粘合剂。然而，本质上，水凝胶的增塑剂唯一地或主要地为水，但其还可包括例如多元醇诸如甘油、聚乙二醇和聚丙二醇。而且，分子骨架优选是化学交联的。
水凝胶的骨架聚合物可基本上是任何亲水聚合物，优选所述聚合物可适合于交联。优选以下类别的聚合物，丙烯酸类如丙烯酸或异丁烯酸盐、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮的衍生物和其共聚物。然而，聚乙二醇和聚氧乙烯是在交联网络中通常使用的其它亲水聚合物。
水凝胶递送系统的优势在于经皮递送的化合物的高可溶性，且从水凝胶中导入皮肤中的高含水量可导致经皮透过的增加。其在当经皮递送的化合物为亲水化合物时应被考虑。
在本发明的一个实施方案中，免疫原和免疫原递送系统被分布在包埋载体中，且该分布优选是均质的。这示于图1中，其显示了“单片”系统。
在另一实施方案中，免疫原和免疫原递送系统还可被分布在包埋载体的表面上。这将更加有效，并能导致最大经皮递送，因为包埋将导致皮肤屏障功能的降低且包埋载体表面上的高浓度免疫原和免疫原递送系统可导致更为瞬时的免疫原递送。
由于本发明的组合物必须具有长时间的稳定性，故可优选将免疫原和免疫原递送系统与粘合剂材料分离，由此避免组合物中组分的交换。在该实施方案中，还可避免组合物中粘合剂残留，诸如增塑剂，并避免亲水性或疏水性免疫原/抗原扩散到整个粘合剂中。
在可克服稳定性问题的该实施方案中，免疫原和免疫原递送系统可被包埋在非粘合性载体中，例如干燥或冻干的亲水聚合物材料或在动物脂样组合物中，其可能在使用前即被活化。该活化可通过在系统中加入水溶液或其它适宜的溶剂/稀释剂而发生。该系统在任何情况下应通过覆盖层，优选压力敏感粘合剂而被固定于皮肤。由此，在另一优选的实施方案中，本发明的组合物包括非粘合性包埋载体和用于皮肤固定第二粘合剂，其与所述载体分离。
克服稳定性问题的另一方法可以是在疫苗载体和第二粘合剂之间放置屏蔽膜。
该组合物还可包括控速膜，优选多孔和压力敏感性材料，诸如网状膜、开放网状物等。屏蔽层可将整个系统与患者皮肤或粘膜分隔，如图3中所示。
包埋载体或用于皮肤固定第二粘合剂可构成为覆盖物，例如垫片、敷料或贴片，或任何本领域已知的其它常用覆盖物。
本发明的组合物还可包括用于经皮药物递送的增强剂。透过皮肤和粘膜所涉及的增强剂是能够促进药物或疫苗透过皮肤或粘膜的转运的化合物类型。对于皮肤而言，与透过相关的速率决定层是指角质层(strateumcorneum)，其是皮肤的最外层。无论药物或疫苗的靶点是在皮肤本身或是全身，都必须通过该层。这还提示出，当皮肤是选择的屏障时，将增强剂用于促进透过是尤为重要的。
用于经皮药物递送的典型增强剂是乙醇、醇胺、磷脂、脂肪酸、表面活性剂和多元醇。某些特别令人感兴趣的化合物是低分子量的聚乙二醇、丙二醇、月桂酸、油酸、甲基月桂酸酯、油酸乙酯、N-甲基-吡咯烷酮、己二酸二辛酯和甘油或其低分子量衍生物。对增强剂的需求应与所有存在的组分(即粘合剂基质或水凝胶和疫苗组分)相适应。
而在另一实施方案中，免疫原和免疫原递送系统彼此分离。
疫苗的施用和免疫接种本发明文中的免疫接种是这样的过程，通过该过程将疫苗施用于个体，可在非病原性状态下的所述个体中诱导免疫反应。
免疫原和抗原本发明的组合物可包括若干组分，但总有至少一种免疫原。优选地，该免疫原以如下方式进行选择，即诱导的免疫反应直接针对例如源于病原微生物的一种或多种抗原。然而，免疫反应针对的抗原可以是任何非微生物来源；所述抗原的实例是合成抗原，来源于所述个体的抗原或来源于任何物种的抗原。
优选地，诱导的免疫反应在所述个体中提供针对病原微生物的保护，所述抗原是所述病原微生物的一部分。优选地，诱导的生物保护可通过随后将所述治疗的个体暴露于所述病原微生物而发挥作用。然而，所述接受免疫接种的个体在施用疫苗之前已经感染了所述病原微生物。在该情况下，保护性免疫反应可立即具有功能性。
术语“诱导的免疫反应”意指保护性反应，其中所提供的免疫反应可以是完全保护，导致所述病原微生物的完全清除，但是包括可以是部分和仅降低所述病原微生物的繁殖。而且，由于术语“保护”仅涉及降低或消除由所述病原微生物导致的不健康状态，即根据本发明要治疗的病症和/或要预防的病症，故保护可不仅限于完全或部分清除所述病原体。所述作用模式的实例是保护性免疫反应，该免疫反应针对由所述病原微生物在感染所述个体期间产生的病原性组分。所述病原性组分的实例包括(但不限于)细菌毒素例如破伤风毒素。
在本发明中，免疫原是针对可在个体中引起免疫反应组分，或其中所述组分的产品可引起免疫反应的组分。为了获得免疫反应，需要在疫苗制剂中包括免疫原。
如本发明所使用的，抗原是可被免疫反应识别的组分，其片段可被免疫反应识别的组分，或所述组分的产品或所述组分的产品的片段可被免疫反应识别的组分。
本发明相关的免疫原或抗原是优选来源于与需要根据本发明进行治疗或预防的病症天然相关的组分的免疫原或抗原。因此，正常情况下细胞中不存在的，或不与要治疗的个体的细胞相关的，以及需要靶向以便治疗和预防特定病症的免疫原或抗原被认为是关于特定病症的免疫原或抗原。
优选地，免疫原或抗原是非来源于要被治疗的物种的免疫原或抗原。然而，在本发明特定的实施方案中，外源免疫原或外源抗原可来源于要被治疗的物种。在这些实施方案中，免疫原或抗原应在正常情况下不由所述个体细胞呈递或不与之相关。
在一个优选的实施方案中，免疫原和/或抗原并非来源于人类，以便当将其施用于人类时，免疫原或抗原不会作为自体免疫原而被识别。
在本发明的一个实施方案中，免疫原和/或抗原包括多肽或肽，例如免疫原和/或抗原可基本上由或由多肽或肽组成。免疫原或抗原还可包括一种以上的不同多肽和/或肽，诸如2种、例如3种、诸如4种、例如5种、诸如6种、例如7种、诸如8种、例如9、诸如10、诸如大于10种不同多肽。
在本发明的某些实施方案中，免疫原和/或抗原包括或基本上由生物体组成，优选是微生物体或部分生物体，优选是微生物体，由此免疫原或抗原可包括非常大量的不同多肽，诸如大于100，诸如大于500，诸如大于1000，诸如大于2500。
本发明中还包括免疫原或抗原可基本上由或由一种或多种多肽和/或肽组成。
为了引发免疫反应或产生免疫反应，多肽可被处理为片段，而多肽的片段可以是由免疫反应事实上识别的化合物。
根据本发明使用的多肽可进一步包括翻译后修饰，诸如，例如磷酸化、乙酰化、甲基化、糖基化或任何其它翻译后修饰。具体而言，在本发明的一个实施方案中，免疫原和/或抗原可包括葡萄糖基化多肽和/或肽。
在本发明一个优选的实施方案中，免疫原和/或抗原包括脂肽，诸如化学性连接于脂质部分的肽或多肽，例如免疫原和/或抗原可基本上由或由化学性连接于脂质部分的肽或多肽组成。
在本发明的另一实施方案中，免疫原或抗原包括核酸序列，例如免疫原或抗原可基本上由或由核酸序列组成。免疫原或抗原可包括多于一种不同的核酸序列，诸如2种、例如3种、诸如4种、例如5种、诸如6种、例如7种、诸如8种、例如9、诸如10、例如多于10种不同的核酸序列。在某些实施方案中，免疫原或抗原可基本上由或由一种或多种核酸序列组成。
优选地，核酸序列可编码多肽和/或肽。当核酸序列编码多肽和/或肽时，优选地，多肽和/或肽和/或其片段构成被免疫反应识别的化合物。
因此，可出现下述情况i)核酸序列被靶向靶细胞ii)核酸序列被靶细胞内在化iii)靶细胞中生成多肽和/或肽iv)在细胞表面上呈现多肽和/或肽和/或其片段。
优选地，免疫原中所包括的或由免疫原中包括的核酸序列编码的多肽和/或肽对人体来说是外源性的。优选地，抗原中所包括的或由抗原中包括的核酸序列编码的多肽和/或肽对人体来说是外源性的。
而在本发明的另一实施方案中，免疫原和/或抗原包括多糖和/或寡糖。多糖和寡糖包括至少两个单糖，其可以是相同的或不同的。寡糖的经验式为(CH2O)n，大小范围为三糖(n＝3)至庚糖(n＝7)。本发明范围内的多糖还可以是分支多糖。
在本发明一个优选的实施方案中，免疫原或抗原来源于病毒。在本发明另一优选的实施方案中，免疫原或抗原来源于细菌。而在本发明另一优选的实施方案中，免疫原或抗原来源于寄生虫。在本发明另一优选的实施方案中，免疫原或抗原来源于真菌。然而，免疫原或抗原还可包括选自病毒、细菌、真菌和寄生虫的一种或多种免疫原和/或抗原的混合物。
免疫原和/或抗原例如可以是减毒病毒、减毒细菌、减毒真菌或减毒寄生虫。可选地，免疫原或抗原可以是选自病毒、细菌、真菌和寄生虫的灭活或被杀死的微生物。其混合物也包括在本发明的范围内。
减毒例如可以是通过以下方法实现的，在非天然宿主中培养数代后或在诱变后或通过重组DNA技术对微生物进行操作后选择丧失病原性的突变体。本领域技术人员所已知其它任何适宜方法也可用于减毒。
微生物的灭活和/或杀死可通过多种方法实现，例如热灭活，辐射，化学灭活或本领域技术人员所已知其它任何方法。
免疫原或抗原可进一步包括选择以下的微生物的仅仅一部分病毒、细菌和寄生虫。例如，所述部分可以是病毒衣壳、病毒颗粒或细菌连接或酵母细胞膜。可选地，免疫原或抗原可仅包括已来源于病毒、细菌、真菌和寄生虫的一种或多种分子，诸如多肽、肽或核酸序列。
而且，免疫原或抗原可包括分子，例如多肽、肽或核酸序列，其仅包括病毒性、细菌性、真菌性和寄生虫性来源的多肽、肽或核酸序列的片段。所述分子可包括多于一个片段。所述分子还可以是嵌合的，诸如，其还包括非来源于病毒、细菌、真菌和/或寄生虫的，或来源于另一病毒、细菌、真菌和/或寄生虫的片段。
此外，来源于病毒、细菌、真菌和寄生虫的多肽、肽或核酸序列可以是已被操作的，例如采用重组DNA技术，诸如为非天然存在分子，而是其衍生物或突变体的多肽、肽或核酸序列。突变体包括如下突变体，其包括根据分子特性的氨基酸或核酸的置换、缺失和/或添加。
根据本发明的病毒例如可选自腺伴随病毒、腺病毒、鸟传染性支气管炎病毒、杆状病毒、禽痘病毒、猴痘病毒、Avi痘病毒、冠状病毒、细胞巨化病毒、瘟热病毒、肠道病毒、EB病毒、猫白血病病毒、黄病毒、口蹄病病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、疱疹种病毒、单纯疱疹病毒、流感病毒、HIV-1、HIV-2、HTLV 1、流感A和B病毒、库京病毒、拉沙热病毒、LCMV(淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒)、慢病毒、麻疹病毒(Measles)、门戈病毒、麻疹病毒(Morbillivirus)、粘病毒、乳头瘤病毒、腮腺炎病毒、副流行性感冒、副粘病毒、细小病毒、Poko病毒、脊髓灰质炎病毒、多瘤肿瘤病毒、伪狂犬病病毒、狂犬病病毒、呼肠病毒、呼吸道合胞病毒、反转录病毒、鼻病毒、牛疫病毒、轮状病毒、塞姆利基森林病毒、仙台病毒、猿猴病毒40、辛德比斯病毒、SV5、蜱生脑炎病毒、披盖病毒(风疹、黄热病、登革热)、常见正痘病毒、委内瑞拉马脑脊髓炎病毒和疱口腔炎病毒。
优选地，病毒选自流感病毒、疱疹病毒、麻疹病毒(Morbiliviruse)、粘液和副粘液病毒、黄病毒、乳头瘤病毒和肝炎病毒。
根据本发明的细菌例如可选自氧化木糖无色杆菌、醋酸钙不动杆菌，优选硝酸盐阴性不动杆菌、溶血性不动杆菌、产碱性不动杆菌和鲁氏不动杆菌、以色列放线菌、亲水性气单胞菌、产碱杆菌属，优选粪产碱杆菌、臭味产碱菌、反硝化产碱菌、亚利桑那沙门菌、炭疽杆菌、蜡样芽胞杆菌、脆弱拟杆菌、产黑素拟杆菌、百日咳杆菌、博氏疏螺旋体、回归热螺旋体、布鲁氏杆菌属，优选流产布鲁氏杆菌、猪流产布氏杆菌、羊流产布氏杆菌、犬布鲁氏菌、肉芽肿鞘杆菌、胚胎弯曲杆菌肠某种、胚胎弯曲杆菌空肠亚种、衣原体属，优选鹦鹉热衣原体、沙眼衣原体、青紫色素杆菌、柠檬酸细菌属，优选弗罗因德氏枸橼酸杆菌、差异柠檬酸杆菌、肉毒梭状芽胞杆菌、产气荚膜梭状芽胞杆菌、艰难梭状芽胞杆菌、破伤风梭状芽胞杆菌白喉棒状杆菌、棒状杆菌，优选溃疡棒状杆菌、溶血棒状杆菌和假结核棒状杆菌、伯纳特氏立克次氏体、迟钝爱德华菌、啮蚀艾肯氏菌、肠道细菌属，优选阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、哈夫尼亚肠杆菌(也称为蜂房哈夫尼菌)和聚团肠杆菌、猪红斑丹毒丝菌、大肠杆菌、脑膜脓毒性黄杆菌、土拉热弗朗西丝氏菌、具核梭杆菌、阴道加德菌、杜克雷氏嗜血杆菌、流感嗜血杆菌、缠绕杆菌属，克雷伯氏菌属，优选肺炎克雷伯氏杆菌、臭鼻克雷白氏杆菌、鼻硬结克雷伯氏杆菌、军团杆菌属、问号钩端螺旋体、单核细胞增多性李司忒氏菌、摩拉克氏菌属，优选结膜炎摩拉克氏菌和奥斯陆摩拉克菌、鸟分枝杆菌、麻风分枝杆菌、结核分支杆菌、支原体属，优选肺炎支原体、淋病双球菌、脑膜炎双球菌、诺卡氏菌属，优选星形诺卡菌和巴西诺卡菌、溶血性巴斯德氏菌、出血败血性巴斯德氏菌、大消化球菌、类志贺氏毗邻单胞菌、肺炎球菌、变形菌属，优选奇异变形菌、普通变形杆菌、雷氏变形菌、摩氏变形菌(也分别称为雷氏普罗威登斯菌和摩根氏菌)、普罗威登斯菌属，优选产碱普罗威登斯菌、斯氏普罗威登斯菌和雷氏普罗威登斯菌(也称为雷氏变形菌)、绿脓假单胞菌、绿脓假单胞菌、类鼻疽假单胞菌、立克次氏体、汉氏巴尔通氏体、沙门氏菌属，优选肠炎沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、德比沙门氏菌，最优选的沙门氏菌DT104型沙门氏菌属，优选Salmonella marcescens、志贺氏痢疾菌、弗氏志贺氏菌、波伊德志贺氏菌和索氏志贺氏菌、小螺菌、金黄色化脓性葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生性葡萄球菌、念珠状链杆菌、链球菌属，优选粪链球菌、粪链球菌(Streptococcus faecium)和坚忍链球菌、无乳链球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌、品他病密螺旋体、梅毒螺旋体、细弱密螺旋体，优选密螺旋体、尿素分解尿素原体、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌和鼠疫耶尔森氏菌。
根据本发明的寄生虫例如可以选自疟原虫(镰状疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫)、血吸虫、锥虫、利什曼原虫、丝状线虫、滴虫、肉孢子虫、绦虫(牛肉绦虫、猪肉绦虫)、利什曼原虫、鼠弓形体、旋毛虫(旋毛线虫)或球虫(艾美球虫属)。
免疫原和/或抗原还可来源于选自新型隐球菌、白念珠菌、烟曲霉和球孢子菌的真菌。
然而，免疫原和/或抗原也可能来源于任何动物，包括例如脊椎动物。例如免疫原和/或抗原可包括组分来源于或基本上由选自卵清蛋白、钥孔虫戚血兰蛋白和抹香鲸肌球蛋白的蛋白组成。其它实例包括，但不限于，来源于蜂和蛇毒的免疫原和/或抗原，和由吸血动物，尤其是昆虫产生的生物活性例如抑制凝血的组分。
一个实施方案中的免疫原和/或抗原可包括与载体分子连接的半抗原，例如免疫原和/或抗原可基本上由或由与载体分子连接的半抗原组成。可选地，免疫原和/或抗原的产品可包括或可基本上由或由与载体分子连接的半抗原组成。半抗原是小型化学确定的化合物，其经过与载体分子结合而具有免疫原性，然而单独时仅具有微弱免疫原性，半抗原的实例是(但不限于)与蛋白质载体连接的细菌细胞壁组分，例如细菌毒素或去毒的细菌毒素。
另一实施方案中的免疫原和/或抗原可以是多价免疫原和/或抗原。多价抗原和/或免疫原例如可选自T非依赖型2抗原、合成聚合物和多聚肽抗原。然而，免疫原和/或抗原还可以是本领域技术人员已知的任何其它多价抗原和/或免疫原。
优选地，免疫原和/或抗原包括能够由MHC分子呈递的肽，例如外源免疫原和/或外源抗原可基本上由或由能够由MHC分子呈递的肽组成。可选地，免疫原和/或抗原的产品包括能够由MHC分子呈递的肽，例如免疫原和/或抗原的产品可基本上由或由能够由MHC分子呈递的肽组成。
能够由MHC分子呈递的肽可以是本领域技术人员已知的任何肽。所述肽的优选实例如以下数据库所示“MHC结合肽的MHCPEP-A数据库(v.1.3)”，Brusic编译(V.Brusic，G.Rudy，A.P.Kyne和L.C.Harrison；MHCPEP，MHC结合肽的数据库1997更新；Nucleic Acids Research，1998，Vol.26，No.1，pp.368-371)。
此外，抗原和/或免疫原可包括两种或多种上述免疫原和抗原的混合物。
优选地，抗原可被针对免疫原而生成的免疫反应识别。由此，抗原和免疫原优选彼此相似。
更优选地，它们彼此相似从而它们包括这样的化合物，其单独或与其它分子一起能够与相同的相互作用分子相关。可选地，它们包括组分，其中组分的片段单独或与一种或多种其它分子一起能够与相同的相互作用分子相关。本文中相互作用分子优选是免疫系统的组分。例如，相互作用分子选自抗体和和T细胞受体。
在本发明的一个实施方案中，抗原和免疫原是相同的，即意味着免疫原和抗原是同一的。在本发明的另一实施方案中，抗原是免疫原的片段。而在本发明的另一实施方案中，免疫原是抗原的片段。在本发明的其它实施方案中，抗原模拟免疫原。
免疫反应针对免疫原和/或抗原的免疫反应在对治疗的个体施用根据本发明的组合物或疫苗制剂之前即可存在于个体中。例如，所述免疫反应可在所述个体感染后产生。由此，根据本发明的方法包括增强现存免疫反应的方法和/或偏移现存免疫反应的方法，按照现有或将来的作用模式(例如细胞性对体液性反应)，组合物(例如抗体类型，抗体亚型等)，特异性(例如识别新的或不同的免疫原和/或抗原的亚部分)和/或亲和力。
然而，在很多情况下，在对治疗的个体施用根据本发明的组合物或疫苗制剂之前，个体并不存在针对免疫原和/或抗原的免疫。由此，根据本发明的方法包括在个体中产生针对免疫原和/或抗原的免疫反应的方法。
优选地，该方法包括如下步骤i)用免疫原免疫个体；和ii)在所述个体中产生针对免疫原的免疫反应。
在优选的实施方案中，免疫原被施用于个体，被所述个体的细胞内在化，在所述细胞中进行处理并呈现在所述细胞的表面上。
免疫原性决定子表示能够引起免疫反应(包括特异性抗体反应)的任何物质。由此，在本文所使用的这些术语的含义之下，任何抗原性决定子也是免疫原性决定子，但并非所有免疫原性决定子都是抗原性决定子。免疫原可包括于本文所述的疫苗制剂中。
根据本发明的免疫反应(通常被称为炎性反应)可由治疗的个体的免疫系统的任何组分进行介导。
免疫系统可表现出特异性和非特异性的免疫性(Klein，J.，等，Immunology(2nd)，Blackwell Science Inc.，Boston(1997))。
一般地，B和T淋巴细胞(其细胞表面呈现针对特定抗原的特异性受体)产生特异性免疫。免疫系统对不同抗原的反应的两种方式如下1)体液介导的免疫，其包括B细胞刺激和抗体或免疫球蛋白的产生[抗体反应产生还包括其它细胞，例如抗原呈递细胞(APCs；包括巨噬细胞)，和辅助T细胞(Th1和Th2)]，和2)细胞介导的免疫(CMI)，其包括T细胞(包括细胞毒性T淋巴细胞(CTLs))，但CTL反应产生中还包括其它细胞(例如，Th1和/或Th2细胞和APCs)。
非特异性免疫包括多种细胞和机制，其中包括诸如由巨噬细胞或粒细胞的吞噬作用(外源颗粒或抗原的内吞)，和天然杀伤(NK)细胞活性。
非特异性免疫依赖于进化得不是很高等的机制(例如，吞噬作用，其是一种重要的宿主防御机制)且不会表现出特异性和记忆(特异性免疫反应的标志)的获得性特性。非特异性免疫对脊椎动物系统来说是更为先天的。此外，非特异性免疫中包括的细胞以重要的方式与B和T细胞发生相互作用以产生免疫反应。
特异性和非特异性免疫之间的关键性区别在于B和T细胞的特异性。这些细胞主要在用特异性抗原激活后获得其反应性且具有在未来发生暴露于该特异性抗原的事件时表现出记忆的机制。结果，免疫接种(包括特异性和记忆)是针对有害病原体进行保护的有效方式。
细胞介导的可以是细胞溶解过程或包括细胞溶解过程。然而，优选地，根据本发明的细胞毒性和/或炎性反应由细胞毒性T细胞介导。所述细胞毒性T细胞优选表达T细胞受体，其与根据本发明的抗原或抗原片段或抗原产品或抗原产品片段相关。
然而，细胞毒性和/或炎性反应也可由天然杀伤细胞介导。此外，细胞毒性和/或炎性反应例如可由中性粒细胞介导，或细胞毒性和/或炎性反应可由嗜酸性粒细胞介导。
而且，细胞毒性和/或炎性反应可由抗体依赖细胞介导的细胞毒性(ADCC)机制介导。所述机制优选包括与根据本发明的抗原或抗原片段或抗原产品或抗原产品片段相关的抗体。
在本发明的一个实施方案中，细胞毒性和/或炎性反应可由先天免疫系统介导。例如，细胞毒性和/或炎性反应可由补体级联反应介导。例如，细胞毒性和/或炎性反应可由抗体的调理作用过程介导。例如，细胞毒性和/或炎性反应可由补体系统的一种或多种组分的调理作用过程介导。
特别地，细胞毒性和/或炎性反应可由靶细胞细胞性表面上的抗体的调理作用通过经典补体途径而介导，或细胞毒性和/或炎性反应可由补体因子的活化(补体旁路)而直接起动。
一种或两种补体途径被活化后，可形成终末膜攻击复合体，靶细胞可被所述复合物溶解和清除。在本发明一个优选的实施方案中，细胞溶解过程可由膜攻击复合体的形成而导致。
根据本发明的可激活补体途径的抗体，例如可以是选自IgG1、IgG2、IgG3和IgM抗体同种型的抗体。
抗体依赖细胞介导的细胞毒性(ADCC)机制可包括补体途径以外的其它抗细胞性效应子。例如与靶细胞结合的抗体可引导嗜酸性粒细胞针对靶细胞的细胞溶解作用。在该实施方案中，抗体优选是IgE。
此外，细胞毒性和/或炎性反应可由本文上述两种或多种机制的组合进行介导。例如，其可由选自细胞毒性T细胞、天然杀伤细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、抗体依赖细胞介导的细胞毒性和细胞溶解机制的两种或多种而进行介导。
免疫原递送系统根据本发明的免疫原递送系统可以是能够被靶向个体的靶细胞的任何免疫原递送靶向系统，其中靶细胞是需要靶向的和/或需要清除的。本领域技术人员已知大量不同的免疫原递送系统，根据具体需要可选自适宜的免疫原递送靶向系统。
在优选的实施方案中，免疫原和免疫原递送系统被包括在疫苗制剂中。本领域技术人员已知的任何疫苗制剂均可被用于本发明的相关内容中。
在本发明的一个实施方案中，免疫原递送系统是阳离子性ISCOM。
Posintros或ISCOMS例如可以是未决WO专利申请号PCT/DK02/00229所述的任何化合物，该专利申请由此全文引入作为参考。
本发明范围内的PosIntros是复合物，其包括i)至少一种第一甾醇和/或至少一种第二甾醇，其中至少一种第二甾醇能够通过选自静电作用和疏水作用的相互作用方式而接触外源抗原，优选核酸，其中至少一种第一甾醇和/或至少一种第二甾醇能够与至少一种第一皂苷和/或至少一种第二皂苷形成复合物，和ii)至少一种第一皂苷和/或至少一种第二皂苷，其中至少一种第二皂苷能够通过选自静电作用和疏水作用的相互作用方式而接触遗传决定子，其中至少一种第一皂苷和/或至少一种第二皂苷能够与至少一种第一甾醇和/或至少一种第二甾醇形成复合物，和任选地iii)至少一种用于通过选自静电作用和疏水作用的相互作用方式接触遗传决定子的接触基团，条件是复合物中不存在第二甾醇时，至少存在一种接触基团，以及进一步任选地i)至少一种亲脂部分。
在一个优选的实施方案中，根据本发明的Posintros可采用微粒结构，其形式为与已知的免疫刺激复合物(iscom)相似的笼状基质。除iscom结构外，甾醇和皂苷间的相互作用已被报道可导致多种不同的结构形式，包括例如晶格、蜂窝、杆和无定形颗粒的形式，所有这些结构形式均包括于本发明的范围内。
在一个实施方案中，免疫原递送系统包括脂质体。本发明意义上的脂质体一般是两亲化合物(包括亲脂部分)的球状或球型集簇体或聚集体，其通常是一种或多种同心层的形式，例如，单层、双层或多层。其还可被优选地作为本文中的脂质载体。脂质体可由，例如，离子性脂质和/或非离子性脂质制备。由非离子性脂质制备的脂质体可被优选地作为聚乙二醇脂肪酸脂体(niosomes)。由阳离子脂质或阴离子脂质制成的(至少部分)脂质体可被优选地作为共螯合物。
脂质体可例如按照Lipford和Wagner(1994)，Vaccine，vol.12，no.1，p.73-80中所述进行制备，该文件引入此处作为参考。适用于制备本发明的脂质体组合物的一般脂质体制备技术已被公开于，例如美国专利序号4,728,578、4,728,575、4,737,323、4,533,254、4,162,282、4,310,505和4,921,706；英国专利申请GB 2193095A；国际专利申请序号PCT/US85/01161和PCT/US89/05040；Mayer等，Biochimica et BiophysicaActa，858161-168(1986)；Hope等，Biochimica et Biophysica Acta，81255-65(1985)；Mayhew等，Methods in Enzymology，14964-77(1987)；Mayhew等，Biochimica et Biophysica Acta，755169-74(1984)；Cheng等，Investigative Radiology，2247-55(1987)；以及Liposome Technology，Gregoriadis，G.，ed.，Vol.l，pp.29-31，51-67 and 79-108(CRC PressInc.，BocaRaton，Fla.1984)中，上述各文件的公开内容由此引入此处作为参考。
由此，脂质体组合物可采用多种常规脂质体制备技术中的任一项进行制备，所述技术对本领域技术人员来说是很明显的，其包括，例如，溶剂透析，弗氏挤压、挤压(有或无冻融)、反相蒸发法、单纯冻融、声裂法、鳌合物透析、匀浆化、溶剂浸润、微乳化、自发形成、溶剂蒸发、溶剂透析、弗氏细胞压碎技术、受控去污剂透析，及其它，每种均包括制备多种形式的组合物。参见例如，Madden等，Chemistry and Physics ofLipids，5337-46(1990)，其公开内容由此引入此处作为参考。
WO申请号PCT/US89/05040(提交于1989年11月8日)中公开了适宜的冻融技术，该申请的内容由此全文引入此处作为参考。包括冻融技术的方法优选用于制备脂质体。脂质体的制备可在诸如盐水溶液、磷酸盐缓冲水溶液或无菌水的溶液中进行。脂质体还可通过多种方法制备，包括摇动或涡旋，其可通过如下方法实现，例如，通过使用进机械性摇动装置，诸如Wig-L Bug.TM.(Crescent Dental，Lyons，III.)，Mixomat(DegussaAG Frankfurt，Germany)，Capmix(Espe Fabrik Pharmazeutischer PraeparateGMBH&Co.，Seefeld，Oberay Germany)，Silamat Plus(Vivadent，Lechtenstein)或Vibros(Quayle Dental，Sussex，England)。还可使用常规微乳化设备，诸如Microfluidizer.TM.(Microfluidics，Woburn，Mass.)。
在本发明的一个实施方案中，免疫原递送系统包括生物可降解的微球。在另一实施方案中，免疫原递送系统包括胶囊化系统。在一个优选的实施方案中，免疫原递送系统包括共螯合物。而在另一实施方案中，免疫原递送系统包括毫微粒。而在其它实施方案中，免疫原递送系统包括水凝胶。而在其它实施方案中，免疫原递送系统包括微晶体。
组合物和疫苗制剂可包括一种以上免疫原或抗原，诸如2种、诸如3种、诸如4、诸如5种、诸如大于5种不同抗原。免疫原和抗原可选自上述免疫原和抗原。
根据本发明的组合物可常规地包括无毒的药学上可接受的载体和赋形剂。药学上可接受的赋形剂可包括佐剂、穿透佐剂、乳化剂、抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、湿润剂、螯合剂、胶凝剂等，且均可根据常规药学实践，以药物制剂领域技术人员所理解的方式进行选择。
优选地，根据本发明的组合物和疫苗制剂进一步包括佐剂。根据本发明的疫苗制剂可进一步包括载体。载体或佐剂可以是本领域已知的任何载体或佐剂包括其功能等效物。功能等效的载体在相似条件下使用时能够以基本上相同的立体构型呈递的相同抗原。功能等效的佐剂在相似条件下使用时对组合物功效的增加相似。
优选地，所述制剂包括有效的、无毒的佐剂，该佐剂应能增强和/或调节包括抗原决定簇的免疫原决定基的免疫原性，所述抗原决定簇包括由一类优选佐剂代表的半抗原决定簇，此外，所述佐剂优选还能引发更早期、更有效的或时间更长的免疫反应。所述佐剂还可在免疫原供应受限或制备昂贵的情况下应用。
本发明包括的佐剂可根据其来源进行分组，可以是矿物的、细菌的、植物的、合成的，或宿主产品。该分类中的第一组是矿物佐剂，诸如铝化合物。用铝盐沉淀的抗原或与完成的铝化合物混合或吸附于完成的铝化合物的抗原已被广泛用于增加动物和人类中的免疫反应。铝粒子已在免疫后7日的兔局部淋巴结中得到证实，其另一主要功能是将抗原引导至淋巴结自身中包括T细胞的区域。佐剂效能已被证实与引流淋巴结密切相关。很多研究已经证实抗原与铝盐一起施用可导致体液免疫增加，而细胞介导的免疫仅轻微增加，如通过迟发型超敏反应所检测的。氢氧化铝也已被证实可激活补体途径。该机制可在局部炎性反应以及免疫球蛋白生成和B细胞记忆中发挥作用。而且，氢氧化铝可保护抗原免于快速分解代谢。主要因为其优良的安全记录，铝化合物是目前唯一用于人类的佐剂。
另一大类佐剂是细菌来源的佐剂。细菌来源的佐剂可被纯化和合成(例如胞壁酰二肽，脂质A)且宿主介导子(mediator)已被克隆(白细胞介素1和2)。近十年来，在细菌来源的活性组分的某些佐剂的化学纯化方面已经取得限制性进展百日咳博德特氏菌、结核分枝杆菌、脂多糖、弗氏完全佐剂(FCA)和弗氏不完全佐剂(Difco Laboratories，Detroit，Mich.)和Merck佐剂65(Merck and Company，Inc.，Rahway，N.J.)。其它适用于本发明的佐剂是Titermax经典佐剂(SIGMA-ALDRICH)、ISCOMS、QuilA、ALUN(参见US 58767和5,554,372)、脂质A衍生物、霍乱毒素衍生物、HSP衍生物、LPS衍生物、合成肽基质、GMDP和其它佐剂以及与免疫刺激剂的组合(US 5,876,735)。
百日咳博德特氏菌是本发明中感兴趣的佐剂，这是因为其具有通过作用于T淋巴细胞群而调节细胞介导的免疫的能力。对于脂多糖和弗氏完全佐剂而言，佐剂活性部分已得到被鉴定和合成，这可以进行结构功能关系的研究。其也被考虑包含在根据本发明的免疫原性组合物中。
脂多糖和其多种衍生物(包括脂质A)已被证实是与脂质体或其它脂质乳剂组合的有效佐剂。但尚未确定释放可制备出毒性充分低而可普遍用于人类的衍生物。弗氏完全佐剂是大多数试验研究中的标准物。
在疫苗制剂中加入矿物油以便保护抗原免于快速代谢。
多种其它类型的物质可用作根据本发明的免疫原性组合物中的佐剂。其包括植物产品诸如皂苷，动物产品诸如壳多糖和多种合成化学物。
本发明的佐剂，还可按其作用机制进行分类。该分类法必然在某种程度上是随意的，因为大多数佐剂表现出多于一种机制的功能。佐剂可通过抗原定位和递送而发挥作用，和通过直接作用于构成免疫系统的细胞，诸如巨噬细胞和淋巴细胞。佐剂根据本发明增强免疫反应的另一机制是通过生成抗原库。这可以促成铝化合物、油乳剂、脂质体和合成化合物的佐剂活性。脂多糖和胞壁酰二肽的佐剂活性主要通过巨噬细胞的活化来介导，而百日咳博德特氏菌作用于巨噬细胞和淋巴细胞。US5,554,372中公开了，当被掺入根据本发明的免疫原性组合物中时，可使用的佐剂的其它实例。
在一个优选的实施方案中，根据本发明的佐剂选自铝化合物、弗氏不完全佐剂、Titermax经典佐剂和油乳剂。
本发明还提供了一个实施方案，其中组合物或疫苗制剂还包括载体。载体可独立地以佐剂存在。抗原和载体的结合和/或共施用的目的可以是例如增加抗原的分子量，以便增加抗原的活性或免疫原性、赋予抗原稳定性，增强其决定子的生物活性，或增加其血清半衰期。载体蛋白可以是包括适用于呈递抗原的蛋白的任何常规载体。常规的载体蛋白包括，但不限于钥孔虫戚血兰蛋白、血清蛋白诸如转铁蛋白、牛血清白蛋白或人血清白蛋白、卵清蛋白、免疫球蛋白或激素，诸如胰岛素。
根据本发明的组合物或疫苗制剂还可包括生物活性组分。生物活性组分可以是能够直接或间接影响个体的免疫反应的任何组分。优选地，生物活性组分选自细胞因子和趋化因子。
细胞因子可以是例如选自IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21、IFN-γ、IFN-α、GM-CSF、C-CSF。本发明的组合物可用多种方式进行制备。
对于粘合剂的单片使用，可将任选地包括在疫苗制剂中的免疫原和免疫原递送系统导入粘合剂的基质中，以便在其于粘合剂基质中混合前，通过将该分散体喷雾在特定水胶体上形成均质分布。在喷雾期间，应混混合和搅拌水胶体颗粒以确保免疫原及其递送系统的平均分布。在第二步中，在相对低的温度下，将水胶体混合至热塑性融合的粘合剂中，而在第三步中，通过常规覆盖技术，以优选的厚度覆盖最终混合物。
关于水胶体粘合剂，从所述均质分布免疫原或疫苗组分中的释放率非常低。对于包括均质分布的免疫原/免疫原递送系统或疫苗组分的交联的水凝胶，释放率较快。当免疫原递送系统是PosIntros，即纳米微粒时，优选将其施用于粘合剂的表面。这优选由水分散系完成，并导致具有PosIntros不均匀分布的均质材料。具有高含量PosIntros的表面被预计为物质的释放侧。
在其它实施方案中，免疫原递送系统和免疫原以干燥状态使用。其可通过单纯地干燥和冻干这些组分而获得。但是，优选地，过程辅助剂如亲水聚合物被用于获得更好的堆积性能。所述辅助剂可以是多糖和纤维素材料或合成聚合物如聚乙烯吡咯烷酮和聚乙烯醇，但并不限于这些材料。溶液干燥根据过程的类型可导致脆性垫片或多孔结构。通过加入增塑剂和/或用于经皮药物递送的适宜增强剂可获得更好的特性。免疫原和递送系统还可浸入多孔交联的材料中并在第二步中干燥。
最终产物通常是无菌的。这提示可根据所选择的灭菌方法选择密封包装方法。优选的灭菌方法是β或γ辐射。然而，对应水凝胶可采用高压灭菌，而对于水胶体和水凝胶粘合剂在使用环氧乙烷灭菌或等离子灭菌。高压灭菌是唯一不适用于冻干的或其它基于亲水聚合物的干片(drypads)的方法。
在一个实施方案中，本发明的构建体包括一种以上隔室，而在另一实施方案中，包括至少两个隔室，其中第一隔室包括冻干垫片，其包括免疫原和免疫原递送系统，而第二隔室包括水溶液。
膜和剥离衬层为了实际使用，本发明的构建体应包括覆盖膜和/或剥离衬层。包含免疫原或疫苗组分的覆盖膜，例如贴片、垫片或敷料在不与组织接触的一侧包括屏蔽层。所述屏蔽层可以是类似聚氨基甲酸酯、聚乙烯、聚酰胺、聚酯、聚乙烯醇等的聚合材料的薄膜，但并不限于此。该屏蔽层可以是金属箔或薄陶瓷。由此，对本发明来说，屏蔽膜的选择并不严格。所述屏蔽层的典型必要条件应是柔性和舒适性，为此原因，聚合物膜是优选的。
为了保护贴片的对侧，基于例如硅酮等的剥离衬层应是优选的，但也可使用其它材料。其可基于纸片或塑料膜。关于交联的水凝胶，塑料膜是有效的且通常不需要硅化处理。
其它薄膜(根据本发明适用的于例如包括两个组分的构建体或包含含有水的隔室的构建体)对本领域技术人员来说是很常见的；优选使用来自塑料的多层屏蔽膜。
通过本发明的组合物治疗的病症或预防的病症是个体的疾病状态，其中疾病过程可在所述个体中特异性诱导免疫反应后，经由所述个体自身的免疫系统，通过致病因子的识别而被降低或消除。
典型地，病症是(但不限于)有病原微生物感染所述个体而导致的疾病。
实施例实施例1制备疫苗(免疫原/免疫原递送系统)(实验性破伤风疫苗)Mega 10(N-癸酰基-N-甲基葡胺)购自Sigma-Aldrich，St.Louis，MO，并以20％储备溶液进行使用。将胆固醇，DC-胆固醇(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)和磷脂酰胆碱(Epikuron 200S，Lucas Meyer Gmbh，Germany)溶于20％Mega 10中，各组分浓度为1％w/v，然后保存于-20℃。Quil A皂苷获自Superfos Biosector，Frederikssund，Denmark。将Quil A溶于Milli-Q水中(15mg/ml)，过滤灭菌，然后保存于-20℃溶液中备用。
通过将Quil A，胆固醇/DC-胆固醇和磷脂酰胆碱与破伤风毒素(ListBiological Laboratories，Inc.)组合来制备Tetanus-PosIntroTM。在35℃下搅拌4小时以形成PosIntroTM微粒，然后用磷酸盐缓冲盐水(pH 7.2)在Slide-A-Lyzer盒(Pierce，Rockford，IL)或透析袋(Visking，London，UK)中透析，MW截止值为10,000。Quil A的反应混合液的浓度为1.1mg/ml，而胆固醇，DC-胆固醇和磷脂酰胆碱的浓度为0.03％w/v。除非另有所述，Mega 10的终浓度为4％w/v。根据实验，反应混合液中破伤风毒素的浓度为0.1-0.5mg/ml。
实施例2Tetanus-PosIntroTM的纯化通过磷酸盐缓冲盐水(PBS)中25％(w/v)的蔗糖(pH 7.2)来产生蔗糖梯度。用4.5ml蔗糖溶液注满PolyallomerTM离心管(规格13×51mm，Beckmann Instruments)，然后保存于-20℃。通过使用需要数量的试管使其在4℃下(典型地过夜)缓慢溶解，由此产生梯度。置于室温下至少1小时，使梯度平衡，然后以0.5ml或更少的体积施用Tetanus-PosIntroTM-制剂。在Beckmann Instruments SW55Ti型离心机中，于20℃，以50,000rpm离心3小时。通过二极管阵列UV检测器(Perkin Elmer)收集完整的微粒，并于210nm进行监测。
纯化的Tetanus-PosIntroTM微粒首先用磷酸盐缓冲盐水(pH7.2)在Slide-A-Lyzer盒(Pierce，Rockford，IL)中进行透析，以便除去蔗糖。采用Slide-A-Lyzer Concentrating SolutionTM(Pierce，Rockford，IL)通过反渗透进一步浓缩疫苗制剂。所选择的液体免疫制剂包括破伤风毒素，该毒素被包埋在大小为35-50nm的PosIntroTM微粒中，如透射电子显微术所示。破伤风毒素的浓度为4.2mg/ml，而Quil A的浓度为12mg/ml。
实施例3氨基酸分析获自Waters Corporation的Pico-Tag System被用于测定PosIntroTM微粒的蛋白质含量。采用6N HCl和酚，在Pico-Tag工作站上在150℃下实施水解1小时，然后用异硫氰酸苯酯，根据(PITC)Pico-Tag操作规程进行衍生化。为了获得定量检测，通过用1∶1的二氯甲烷(DCM)和乙腈(ACN)在室温下处理10分钟来裂解PosIntroTM构建体，然后将溶剂/稀释剂在真空中蒸发干燥。
实施例4水胶体粘合剂作为疫苗(免疫原和递送系统)的载体水胶体载体的制备如下将45g增粘树脂(Arkon P90，Arakawa)在140℃下加入曲拐型(Z-blade)搅拌器中。混合5分钟后，加入32.5g嵌段共聚物Styrene-Isoprene高弹体(Kraton TR 1107，Shell)和5g己二酸二辛酯。10分钟后，再加入7g己二酸二辛酯，将混合液进行混合直至均质化。最后加入30g羟基甲基纤维素(Aquasorb，Hercules)。在涂覆于硅酮纸上的聚氨基甲酸酯膜(30μm)上，用热融涂覆层，以0.5mm的厚度对混合液进行涂覆。
在干燥前，将按实施例所述制备的疫苗溶液(疫苗等价于0.100mg/cm2)平坦地施加于粘合剂表面的15mm的圆形面积上，然后用剥离衬层层压。最终，由粘合剂模截出圆片形的贴片，其中心具有疫苗区，直径为30mm。
将贴片独立包装，并用电子束辐射灭菌。
实施例5水胶体粘合剂作为疫苗的载体。
除了己二酸二辛酯按以下进行替换外水胶体粘合剂按实施例4中所述进行制备己二酸酯的第一次加入被10g石蜡油替换，而第二次被15g石蜡油替换。均质块在被层压为离型纸的聚氨基甲酸酯膜上以400μm的厚度进行热融涂覆。按实施例1中所述制备的疫苗溶液，将其平坦地喷涂在粘合剂开放表面的10mm的圆形面积上，其量等于0.100mg/cm2。
干燥后，剥离衬层被层压至开放表面上，从层压体上以30mm的大小模切出最终的贴片，其中心具有疫苗区。最后，包装贴片，并用30kGyγ辐射灭菌。
实施例6交联的水凝胶作为疫苗的载体将聚乙烯吡咯烷酮(Plasdone K 120，ISP)15g，聚乙二醇5g和脱矿物质80g的均质化混合液注入盘中，层厚为0.5mm。将开放结构的非织造型聚酯置于该层的顶部，加入另一层0.5mm的均质混合液。最后，将30μm厚的聚氨基甲酸酯薄膜层置于构建体的顶层。然后以30kGy对盘进行β放射处理，以进行交联。
交联后，从盘上取下构建体，并倒置。在与聚氨基甲酸酯薄膜相对的新顶部表面上，以0.050mg/cm2的浓度喷涂按照实施例1制备的疫苗层。
将完成的构建体模切为贴片，包装于金属载体层压膜的密封包装内。
实施例7交联的水凝胶作为疫苗的载体在PVP K 90(Plasdone)，丙三醇和水以20/15/65比例的均质混合物中进一步加入1.0部分的乙氧基化(4)季戊四醇四丙烯酸酯(获自Sartomer)和交联的光敏引发剂(Darocure 1173，获自CIBA)，其量为0.5％。在混合物中进一步加入，按实施例1中所述制备的疫苗，对应于按干重计的0.05％。
将混合物以1mm的厚度涂覆在聚乙烯薄膜(屏蔽膜)上，在涂覆层的顶部层压厚度为25μm的聚氨基甲酸酯膜。覆盖的和层压的材料在下面的步骤中用紫外光(Fusion UV Systems，Inc)处理60秒。
将层压板模切为贴片，并包装。
实施例8冻干的交联水凝胶作为疫苗的载体在标准实验室装置中，将按实施例4制备的贴片冷冻(-40℃)和冻干(24小时)。将得到的多孔垫片置于水胶体粘合剂中心，该中心不含如实施例1的疫苗，留出至少5mm的无粘合剂周边。所述贴片应位于用聚氨基甲酸酯膜覆盖的一个外侧表面，而在另一侧为剥离衬层。
将该片独立包装于气密袋中，并用β辐射灭菌。
实施例9冻干纤维素衍生物作为疫苗的载体将按实施例1中所述制备的疫苗(0.025％)与5％羟乙基纤维素的水溶液(Natrosol 250M，pharm，Hercules Inc)和0.5％PEG 300以及0.1％丙三醇混合。将得到的混合物注入直径为15mm的孔中，层厚为0.5mm。将孔和注入物的支架移至冰箱中(-20℃)，冷冻后(24小时)，将支架移至冷冻干燥器中冷冻干燥。
将孔的垫片移至基于水胶体粘合剂的模切粘合剂贴片的中心，如实施例8所示。该粘合剂具有不含粘合剂的0.5cm的外部边缘。最后，将剥离衬层置于贴片的顶部。
将该贴片包装于气密袋中，并用β辐射灭菌。使用时，中心垫片用水湿润，以增强疫苗的释放。
实施例10冻干纤维素衍生物作为与水容器包装的疫苗的载体将如实施例9中所述的贴片包装在具有两个隔室的构建体中。第一隔室隔室包括具有剥离衬层的贴片，但在此情况下，剥离衬层不覆盖具有包括疫苗的冻干垫片的中心区域。第二隔室是水的容器。该两个隔室被密封在一起，密封方式为分离覆膜包括位于隔室间的可破的按压部。当水隔室由于按压部被破坏而受到压力时，水将分散至冻干垫片中。
密封应在使用贴片前被破坏。
实施例11水凝胶粘合剂作为疫苗载体水凝胶粘合剂的制备如下。将100g PVP K-90溶于400g乙醇中。于加热下，在溶液中进一步加入20g丙二醇和60g普通干燥的马铃薯淀粉和另外的40g水。当混合物呈现均质化时，将其以1mm层厚在涂覆聚乙烯醇(50μm)的膜背层。所得膜为300μm。
在第二步中，将按实施例1中所述制备的疫苗以相应于0.05mg/cm2的浓度进行喷雾。将产品干燥，并模切成片。
实施例12水凝胶粘合剂作为疫苗载体根据热融混合原则制备水凝胶粘合剂。将30g PVP K 25，4，0gPVA(来自Du Pont de Nemours & Co的Elvanol HV)和36g丙三醇在曲拐型搅拌器中，在100℃下混合。当化合物呈现均质时，进一步加入30g脱矿质水。在离型纸和50μm聚乙烯薄膜之间，将最终的混合物压为300μm的厚度。
实施例13水凝胶粘合剂作为疫苗载体在75g 0.1M柠檬酸/柠檬酸盐缓冲液pH 6.0中混合20g聚乙烯吡咯烷酮(PVP K90)与4g聚乙二醇二甲基丙烯酸1000(PEG-DMA 1000)(交联剂)和1g重硫酸过氧化钠(NaPS)(光敏引发剂)。丙二醇可被用作增塑剂(参见以下组合物表)。
将聚合物溶液分散于适宜的模体中，其中厚度可以在0.5-5mm厚度间改变。如果需要背层，在将聚合物溶液分散于覆盖模体底部的背衬膜上。
然后将聚合物溶液在紫外光下处理。在单紫外线灯下，对水凝胶进行紫外线处理(规格200W/cm，微波动力的“D”光谱型灯，传送速度为0.4m/min)。得到片状水凝胶，具有所需直径的水凝胶可从其中切出。
表1水凝胶组合物和尺寸
*30μm厚的聚氨基甲酸酯膜将最终的粘合剂喷雾在具有按实施例1中所述制备的疫苗的粘合剂侧，喷雾水平为0.05mg/cm2。干燥材料，施以新剥离衬层，然后制备贴片。
实施例14PosIntro透过角质层的荧光显微术成像在征得患者同意后，从接受缩乳术的37岁女性取得人类皮肤(得到地方伦理委员会的批准)。采用活检穿孔器将该皮肤切成8mm活检片。将各外植体置于细胞培养物中琼脂糖凝胶中直径8mm的孔中，共12孔。吖啶染色的Posintro颗粒(10μl，300μg/ml)被小心地以球形微滴而施用于表皮层的顶部(角质层)。将外植体培养3日，37℃，5％CO2，具有Dulbecco改进的Eagle培养基(DMEM)和10％FCS的气液界面。将活检样品在OCT(TissueTek)中冷冻固定，然后在低温切片仪(Leica，Germany)中切成4μM的切片。采用UMWIB2宽带干扰屏障滤器，在Olympus B×60荧光显微镜中检测荧光信号(绿色)。
图11A显示了Posintro颗粒的施用位点的切片(100×)。基底膜用线表示。
图11B显示的与图11相同(200×)。箭头表示荧光密度较高的区域，其可能归因于朗格汉斯细胞。
图11C显示了对照切片，其来自于图11A和B的相同玻片，但远离PosIntro颗粒的施用位点。上面的线表示角质层的开始而下面的线表示基底膜。
实施例15PosIntro导向表皮中朗格汉斯细胞的成像按上述重复实验，朗格汉斯细胞通过TRITC标记的CD1a抗体(Dako，Denmark)进行成像。如图12中所示，朗格汉斯细胞在表皮中的位置与Posintro累积的区域非常良好的相关。
图12A显示了吖啶染色的Posintro颗粒透过角质层。更强烈的染色区域用箭头指示。
图12B显示了与图12A相同的切片，其中TRITC-CD1a指示朗格汉斯细胞的存在位点，如图12A中箭头所示。
实施例16采用共聚焦显微术对PosIntro透过角质层的成像孵育1日后，将置于上皮侧的具有荧光标记的PosIntros的外植体在冰冷异戊烷中于干冰上于99％乙醇内冷冻固定。将冷冻的外植体切片，然后将其在冷冻模中包埋在O.C.T.化合物中(TissueTek，Sakura)。
将外植体冷冻切为20μm厚的切片，用第一小鼠抗人胶原IVa.b.(DAKO，M0785)标记基底膜，4℃过夜。次日早晨，用第二Alexa Flour488山羊抗小鼠a.b(Molecular Probes，A-11001)实施第二标记。最后，用Meyers酸性苏木素对玻片染色1分钟。
用备有488nm和543nm激光的Zeis LSM 310共焦显微镜对切片进行显微镜下评估。以488nm激光激发用Alexa Flour 488第二标记的基底膜和吖啶橙标记的Posintros。以采用543nm激光的透射非共焦图像来收集苏木素对照。
所有共聚焦图像均以20-30μm冷冻切片的表面底部的8-15μm单光学切面进行收集，其中采用40×干物镜，平均×2，乘8，采用自动亮度和对比度以及另外的手动对比增强。每一图像均代表两个共焦单光学切面与一个透射非共焦图像的合并。
图13A显示了皮肤活检组织与吖啶PosIntro一起孵育24小时后的共聚焦显微镜成像(40×)。通过FITC标记的胶原IV抗体来指示基底膜的存在。
图13B所显示的与图13A相同，但为80×，显示出角质层的透过和Posintro颗粒聚集物穿过表皮的分布。
图13C显示了无吖啶PosIntro的如图13A和B中活检组织。
实施例17GFP-PosIntro转染成纤维细胞培养物将L929成纤维细胞铺于2孔分室玻片中(Nunc，Roskilde，Denmark)，然后在包含90％Dulbecco氏改良Eagles培养基和10％胎牛血清的培养基中生长。在包含2,5μg/ml GFP质粒(gW1Z)和10μg/ml DC-PosIntro的无血清转染培养基(Optimem-1，Gibco BRL，nitrogen，UK)中，对半融合细胞转染3小时。单独用GFP质粒或用GFP质粒和10μg/ml脂转染试剂(Gibco，Invitrogen，UK)转染对照培养物。在用荧光显微镜评估前，将转染的细胞培养24小时。
如图14所示，在用DC-PosIntro和GFP质粒转染后，得到明亮荧光表达GFP的培养物。转染率为约1％(与之相比，脂转染试剂转染的培养物为10-20％)。然而，用DC-PosIntro转染后的细胞表观远比用脂转染试剂处理的培养物的健康。
实施例18经皮乙型肝炎表面抗原疫苗接种。
三只兔子接受Poslintro制备的重组乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。免疫接种三周后，通过基于bioMerieux，Vidas HBs抗原在体外诊断系统中修饰的竞争测定法，对静脉血样品检测HBsAg特异性抗体。
重组HBs抗原获自Aldevron，USA。通过采用与美国临时申请序列号60/308,609中所述相似的方法，将抗原包埋在Posintro中。然而，在包埋前，将HBs抗原与棕榈酸以5∶1的摩尔比率偶联。每只动物接受30μg抗原，所述抗原已被分为按照实施例13制备的三个水凝胶2贴片，其厚度为2mm和直径为1cm。
免疫接种后24小时，对动物充分去毛，清洗免疫接种位点。将免疫接种贴片置于每一动物后背的三个不同的位置，并用另外的层Comfeel透明敷料(Coloplast，Denmark)支持。仅可能长地使贴片在位点上留置24小时，但由于动物的活动，在此期间，贴片会部分从皮肤上脱落。
免疫接种三周，取静脉血样，检测特异性针对HBsAg的抗体滴度。通过将连续稀释的兔血清与恒定量的重组HBsAg在正常人血浆(S1标准，获自bioMerieux，Vidas HBs抗原试剂盒)中混合来检测抗体。10分钟后检测化合物，bioMerieux(Vidas系统中HBs抗原诊断试剂盒)孵育。抗体滴度以稀释度的最高点给出，其中HBsAg的检测水平与加入正常阴性血清相比降至小于50％。所有动物在免疫接种前，对特异性针对HBsAg的抗体均检测为阴性。
表2
表2乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的滴度。抗体滴度按血清的最高稀释度(100倍稀释度)给出，此时HBs抗原的特异性检测被抑制至少50％。试验值是任意单位，最大值为1.14。
实施例19经皮破伤风疫苗接种兔子组(5只动物)接受经皮破伤风疫苗，所述疫苗分别是用皂苷制备或包埋在Posintro颗粒中的(如实施例2只所述)以及如实施例13给出尺寸的水凝胶2贴片。在免疫接种后3周，通过ELISA检测血样，并测定抗体滴度。图15中显示了按最高稀释度(5倍)的滴度，此时吸光度倍降至低于50倍稀释度时滴度的50％。
权利要求
1.一种将至少一种免疫原经皮递药于个体的组合物，其包括a)所述至少一种免疫原b)包埋载体和c)Posintro或ISCOM形式的免疫原递药系统。
2.根据权利要求
1的组合物，其中包埋载体是压力敏感粘合剂。
3.一种将至少一种免疫原经皮递药于个体的组合物，其包括a)所述至少一种免疫原b)压力敏感粘合剂形式的包埋载体和c)包括至少一种皂苷和至少一种甾醇的免疫原递药系统。
4.根据权利要求
1-3任一项的组合物，其中经皮递药包括经过皮肤表面或经过粘膜组织的递药。
5.根据权利要求
1-4任一项的组合物，其中包埋载体是吸收性压力敏感粘合剂。
6.根据权利要求
1-5任一项的组合物，其中包埋载体是水胶体粘合剂。
7.根据权利要求
1-5任一项的组合物，其中包埋载体是水凝胶粘合剂。
8.根据权利要求
1-5任一项的组合物，其中包埋载体是交联的水凝胶粘合剂。
9.根据权利要求
1-8任一项的组合物，其中免疫原和免疫原递药系统优选均质地分布在包埋载体中。
10.根据权利要求
1-8任一项的组合物，其中免疫原和免疫原递药系统分布在包埋载体的表面上。
11.根据权利要求
1的组合物，其中包埋载体是非粘合性包埋载体，并进一步包括第二粘合剂，其与载体分离，以用于皮肤固定。
12.根据权利要求
11的组合物，其中包埋载体被干燥或冷冻干燥，并包括含有亲水聚合物物质或动物脂肪样组合物的载体。
13.根据权利要求
1-12任一项的组合物，其中包埋载体或第二粘合剂是覆盖层，诸如垫片、贴片、敷料等。
14.根据权利要求
12或13任一项的组合物，其进一步包括水或其它适宜溶剂/稀释剂的贮器。
15.根据权利要求
14的组合物，其中水贮器可被破裂，而水或溶剂/稀释剂可被吸收至包埋载体中。
16.根据权利要求
1-15任一项的组合物，其进一步包括速率控制膜。
17.根据权利要求
1-16任一项的组合物，其中免疫原和/或免疫原递药系统彼此分离。
18.根据权利要求
1-17任一项的组合物，其进一步包括用于经皮递药的增强剂。
19.根据权利要求
1-18任一项的组合物，其中至少一种免疫原以如下方式选择，即诱导的免疫反应针对一种或多种抗原。
20.根据权利要19的组合物，其中所述一种或多种抗原来源于微生物，优选病原微生物，诸如病毒、细菌、寄生虫和/或真菌，或来源于非微生物性生物体，例如来源于动物，诸如脊椎动物。
21.根据权利要求
19或20任一项的组合物，其中免疫原和/或抗原来源于病毒。
22.根据权利要求
21的组合物，其中所述一种或多种抗原是合成抗原、来源于所述个体的抗原或来源于任何物种的抗原。
23.根据权利要求
19或20任一项的组合物，其中所述诱导的免疫反应为所述个体提供抵抗病原微生物的保护，所述抗原或多个抗原是所述病原微生物的一部分。
24.根据权利要求
19-20或23任一项的组合物，其中所述诱导的免疫反应可通过随后将个体暴露于所述病原微生物而发挥作用。
25.根据权利要求
19-20或23-24任一项的组合物，其中所述诱导的免疫反应针对由所述病原微生物在所述个体感染期间产生的病原性成分，例如细菌毒素，诸如破伤风毒素。
26.根据权利要求
1-25任一项的组合物，其中免疫原和/或抗原包括或由以下组成i)一种或多种相同或不同的多肽和/或肽，其中多肽和/或肽任选地包括翻译后修饰，ii)一种或多种相同或不同的脂肽，诸如与脂质基团化学连接的多肽和/或肽，iii)一种或多种相同或不同的核酸序列或多个序列，其可编码多肽和/或肽，或iv)一种或多种相同或不同的多糖和/或寡糖，或其组合，其中免疫原和/或抗原可被进一步处理为片段。
27.根据权利要求
1-26任一项的组合物，其中免疫原和免疫原递药系统被包括在疫苗制剂中。
28.根据权利要求
3的组合物，其中免疫原递药系统是PosIntro或ISCOM。
29.根据权利要求
1-28任一项的组合物，其中免疫原递药系统是一种复合物，该复合物包括i)至少一种第一甾醇和/或至少一种第二甾醇，其中至少一种第二甾醇能够通过选自静电作用和疏水作用的相互作用方式接触外源蛋白质，优选核酸，其中至少一种第一甾醇和/或至少一种第二甾醇能够与至少一种第一皂苷和/或至少一种第二皂苷形成复合物，和ii)至少一种第一皂苷和/或至少一种第二皂苷，其中至少一种第二皂苷能够通过选自静电作用和疏水作用的相互作用方式接触遗传决定子，其中至少一种第一皂苷和/或至少一种第二皂苷能够与至少一种第一甾醇和/或至少一种第二甾醇形成复合物，和任选地iii)至少一种通过选自静电作用和疏水作用的相互作用方式而用于接触遗传决定子的接触基团，条件是在复合物中不存在第二甾醇时存在至少一种接触基团和进一步任选地iv)至少一种亲脂部分。
30.制备根据权利要求
1-29任一项的组合物的方法，包括如下步骤，将被任选地包括在疫苗制剂中的免疫原和免疫原递药系统，通过在载体溶液中分散或浸泡或通过施加于其表面而导入包埋载体的基质中或其表面上，和任选地对组合物灭菌和/或干燥和/或密封包装。
31.根据权利要求
30的方法，其进一步包括在导入载体前，对免疫原和免疫原递药系统的干燥或冻干步骤。
32.根据权利要求
30或31任一项的方法，其进一步包括添加一种或多种用于经皮递药的增强剂和/或一种或多种增塑剂的步骤。
33.包括根据权利要求
1-29任一项的组合物的构建体。
34.根据权利要求
33的构建体，其含有一种或多种隔室。
35.根据权利要求
33或34任一项的构建体，其包括至少两种隔室，其中第一隔室包括冻干的垫片，其包括免疫原和免疫原递药系统，而第二隔室包括水或其它适宜的溶剂/稀释剂。
36.根据权利要求
33-35任一项的构建体，其包括至少两种分离的组分。
37.在个体中产生免疫反应的方法，其中将根据权利要求
1-29任一项的组合物施用于所述个体。
38.治疗或预防个体中疾病状态，例如由病原微生物感染所述个体而导致的疾病的方法，其中将根据权利要求
1-29任一项的组合物施用于所述个体。
39.用于对个体免疫接种的方法，其中将根据权利要求
1-29任一项的组合物施用于所述个体。
40.免疫原用于制备包括包埋载体的组合物的用途，所述组合物用于所述免疫原的经皮递送。
专利摘要
本发明提供了将至少一种免疫原经皮递药于个体的新型组合物，所述组合物包括(a)所述至少一种免疫原(b)包埋载体和(c)形式为PosIntro或阳离子ISCOM或包括至少一种皂苷的免疫原递药系统，以及制备该组合物的方法。本发明还提供了包括这些组合物的构建体。所述组合物和构建体可被用于产生免疫反应的方法，治疗或预防疾病状态的方法和免疫接种的方法。包埋载体是，例如压力敏感粘合剂，诸如水胶体粘合剂或水凝胶粘合剂，其可以是交联的，或包埋载体可以是非粘合性的。
文档编号A61L15/16GKCN1735432SQ200380104811
公开日2006年2月15日 申请日期2003年10月2日
发明者N·S·柯克比, P·B·萨米尔森 申请人:诺迪克疫苗科技公司, 科洛普拉斯特公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan