专利名称：皮肤化妆品的制作方法
技术领域：
本发明涉及防止皮肤皱裂、皲裂等皮肤干燥以及皮肤老化的有效的皮肤化妆品。
以往，为了治疗刀伤、烧伤，防止皮肤皱裂、皲裂、溃烂、痔疮、皮肤老化等，以及为激活细胞及促进创伤治愈，常在皮肤化妆用品中加入透明质酸、尿囊素及其衍生物、去蛋白牛血、紫草浸膏、人参浸膏、胎盘浸膏(蛋白质、多糖类、提取浸膏、天然高分子等天然物中提取的各种原料)等细胞赋活促进剂来配合使用。
但是，这些含有药效成分的皮肤外用剂，针对上述目的效果并不十分明显。所以，期待着开发具有显著细胞激活作用的皮肤化妆用品。
在这种情况下，本发明者们对新型的皮肤化妆用品进行了各种研究，发现美国专利第4,118,506号中记载的肝病治疗药，英国专利公开第2,263,234号中记载的作为创伤治愈的促进剂，以公知的通式(I)表示的奥地利专利第644,978号中记载的化合物(式中， R1表示C数为1-10的烷基，R2表示C数1-10的烷基、C数2-6的链烯基或C数3-7的环烷基，X表示-O-或-NH-)具有细胞激活作用，做为预防皱裂、皲裂等皮肤干燥及皮肤老化的化妆品非常有效，从而完成了本发明。
即含有以本发明的通式(I)表示的化合物作为有效成分的皮肤化妆品，具有显著的表皮角化细胞增殖作用及改善由12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)引起的皮肤损害的作用，可有效改善皮肤皱裂、皲裂、溃烂、干燥及防止皮肤老化的作用。
TPA可以引发经斑、脱屑及增殖性表皮肥厚等皮肤损害，症状与表面活性剂引起的皮肤角化异常症状类似。
上述通式(I)中，作为C数1-10的烷基可以是直链的、也可以是支链的，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、异己基等；作为C数2-6的链烯基可以是乙烯基、烯丙基、2-丁烯基、3-戊烯基等，作为C数3-7的环烷基可以是环丙基、环戊基、环己基等，优选是异丙基。
通式(I)表示的典型化合物如表1所示，本发明不只限于此表的化合物。
表1 本发明中的皮肤化妆用品采用外用基质，如可制成乳液、霜剂、洗剂、粉剂、敷剂、美容液等使用。
另外，有效成分的含量在一般基质中为0.0001-20％，理想浓度0.05-5％，优选范围在0.01％-3％之间。
本发明的皮肤化妆品中，除含有上述必要成分外，通常在皮肤化妆品中还使用水性成分、二氧化钛、云母、滑石粉等粉末成分；聚氧乙烯单油酸酯、聚氧乙烯烷基醚等非离子表面活性剂；硬脂酰三甲基氯化铵等阳离子表面活性剂；棕榈酸钠、月桂酸钠、烷基硫酸三乙醇铵醚等阴离子表面活性剂；两性表面活性剂；透明质酸、粘多糖、甘油、1，3-丁二醇等保湿剂；辛醇、月桂醇、肉豆蔻醇、鲸蜡醇等高级醇；pH值调节剂；甲基纤维素、乙基纤维素、阿拉伯树胶、聚乙烯醇、蒙脱石等增粘剂；安息香酸、水杨酸、山梨酸、羟苯乙酯、羟苯丁酯、六氯酚等抗菌防腐剂；辛酸、月桂酸、亚油酸、亚麻酸等高级脂肪酸；香料；油剂；色素等皮肤化妆品中经常使用的成分，可按适当比例配合使用。
另外，本发明中的皮肤化妆品中，还可将维生素E、BHT(丁基化羟基甲苯)、BHA(丁基化苯甲醚)、生育酚、植酸等防氧化剂；水杨酸戊酯、肉桂酸辛酯、2，4-二羟基二苯甲酮等紫外线吸收剂；抗坏血酸衍生物、氢醌衍生物、吡酮类、牛胎盘提取物等增白剂；尿囊素及其衍生物、去蛋白牛血、曲酸及其衍生物、三磷酸腺甙、二磷酸腺甙、一磷酸腺甙、琥珀酸及其衍生物、紫草浸膏、人参浸膏、胎盘浸膏等细胞激活促进剂配合使用。
本发明实施例如下所示，但本发明不仅局限于此。另外，份表示重量单位。实施例1本发明的化合物 0.5份硬脂酸 0.8份聚氧乙烯单油酸酯(20E.O) 1.0份蜂蜡2.0份乙二胺四乙酸二钠0.02份膨润土 0.3份浓甘油 5.0份对羟基苯甲酸甲酯0.15份香料适量纯水剩余份按照常法调制成乳液。实施例2本发明化合物 0.1份硬脂醇 5.0份鲸蜡醇 5.0份中链硬脂酸三甘油酯 10.0份十四烷酸异丙酯 5.0份聚山梨酸酯60 4.0份脱水山梨糖醇单硬脂酸酯 1.0份对羟基苯甲酸甲酯 0.14份对羟基苯甲酸丙酯 0.06份二丁基羟基甲苯 0.02份精制水 剩余份按常法调制成霜剂。试验例1 对人的表皮角质化细胞增殖的促进作用。
将正常人的表皮角质化细胞(仓敷纺绩(株)制)在角质化细胞增殖培养基(＝K-GM，作为改进MCBD153的基本培养基，内含表皮生长因子、牛下垂体浸膏、胰岛素、氢化可的松、庆大霉素及两性霉素B，仓敷纺绩(株)制)中用二氧化碳保温箱(37℃，5％ CO2气相下)进行48小时前培养后，用磷酸缓冲生理盐水(PBS(-))洗净得到培养物，然后将0.01μm本发明的化合物2溶于二甲基亚砜(DM-SO)中。将该DMSO溶液加入到角质化细胞基础培养基(K-BM)中该DMSO的添加量为培养基的1％。用该培养基将上述得到的培养物进行进一步培养。在培养1天及5天后用血球计算板计数细胞量，与未给样的对照组(只添加0.1％的DMSO)相比较，基结果如
图1所示。
与给以0.1％DMSO组相比，在添加0.01μm本发明化合物培养1及5天后，对表皮角质化细胞增殖有明显的促进作用。试验例2处于对数增殖期的人的表皮角质化细胞对胸腺嘧淀脱氧核苷的吸收。
正常人的表皮角质化细胞在13穴培养盘(Costar，3512)中，用5×104cell/ml/mell播种，在用角质化细胞增殖培养基培养72小时的培养基中用ZuCi〔甲基-3H〕胸腺嘧啶脱氧核苷(NEN，spe-cific activity 20.0μCi/mmol)，在二氧化碳保温箱中(37℃，5％CO2的气相下)培养48小时。将本发明化合物2在DMSO中溶解配成0.001、0.01、0.1、1、10及100μM的溶液，添加至培养液中培养24小时。另外，添加含有本发明化合物的DMSO溶液配成的0.1％的培养液。培养结束后，分别加入10μ 1％的NaN3，以冰水冷却使反应停止。用含有1mM无标记的胸腺嘧啶脱氧核苷及0.01％NaN3的磷酸缓冲液(Phosphate Buffered Saline＝PBS)洗2次，用1.0mt NaOH溶解细胞。将细胞溶解液置于试管中，以0.2m 1N HCl中和，用冰水冷却后加入50％的三氯乙酸(TCA)溶液150μl，4℃下静置一夜使形成沉淀。通过离心(1500转，10分钟)除去上清液，用5％ TCA溶液洗2次，用0.2ml 0.2NNaOH将其再次溶解，用0.2ml0.2N HCl中和。然后，将0.2ml加入到装有4.0mt闪烁物质(Ready Proreint)的管形瓶中，用液体闪烁计数器计算其放射活性。将细胞内DNA的3H-胸腺嘧啶脱氧核苷的摄入量，以控制组(给以0.1％DMSO组)的细胞平均mg蛋白量(或每well)的计数值为100％时的比例来表示。另外，将该实验连续进行3次，结果如图2所示。
与给以0.1％DMSO组相比，由于添加了0.01μM本发明化合物，使胸腺嘧啶脱氧核苷的摄入量增加了43％，即使添加浓度为其10倍量的0.1μM，也只增加约30％。相反，分别给以浓度为0.001μM及1μM的本发明的化合物时，吸收无变化。给以浓度为10μM以上时，反而对增殖有抑制作用。试验例3对表皮角质化细胞增殖的影响将K-GM中浮游的表皮角质化细胞在12穴培养盘中(Costar，3512)按6×104cells/ml/well播种，在二氧化碳保温箱(37℃，5％CO2的气相)中进行48小时前培养。其后，用PBS(-)洗4次，用K-GM培养24、48或72小时后，然后分别加入0.1％溶有本发明化合物2的，浓度分别为0.001、0.01、0.1、1、10或100μM的DMSO溶液，以K-BM培养24小时。培养的最后2小时内，在每个74KBq/10μ/well中，分别加入3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(〔甲基1′，2′-3H〕-胸苷，Code TRK，565，Batch 59，Amensham)。培养结束后，用与试验例2同样的方法测定胸腺嘧啶脱氧核苷的放射性。在48小时的前培养后，每隔24小时用相位差显微镜(OLYM-PUS，IMT-2，Phase Contrast OLWCD 0.30)检查各培养盘。另外，在培养结束后用蛋白定量工具(Micro BCA ProteinAssay，Reagent，PIERCE)测定各盘内的总蛋白量，将总蛋白量不增加的最初观察时刻看作达到稳定状态。各试验进行3次，3H-胸苷的平均摄入值用dpm/well(mean±S.E)表示、蛋白量用μg/well(means±S.E)表示。另外，各组间平均值的统计学处理通过Stu-dent test来解释。结果如表2所示。
表2<
P＜0.001，***P＜0.001对应各培养时间的0.1％DMSO对照组将未处理组及给以0.1％ DMSO的对照组培养72小时，在显微镜下观察其达到融合状态后，可判定如表2所示的培养72h＋26h后的蛋白量与培养48h＋26h后的蛋白量没有差别。在72h＋26h组中即使添加本发明的皮肤化妆品，也不会促进3H-胸苷的摄入量显著增加。由此可知本发明中化合物对达到融合状态的表皮角质化细胞的增殖无明显促进作用。一般体外实验到达融合状态时，所有侧面均被其它细胞所包围的细胞，丧失运动功能进入G。期，增殖暂时停止。相反变形细胞等其它细胞接触时，不会受到损害，且运动方向不变，同时其分裂能力也不随细胞密度的增加而降低。所以癌细胞不是单层的而是呈块状的，可持续增殖至数倍于正常细胞的细胞密度。如添加本化合物，虽然处于对数增殖期的表皮角质化细胞开始增殖(表2的24h＋26h)，成为融合状态，但在增殖密度的依存调节起作用时，不会将其弄乱，所以可推知本化合物并不是无秩序地促进表皮角质化细胞的增殖。试验例4将雄性C3H小鼠的背部剃毛，每周2次共4次，将溶解在70％乙醇中的TPA(1mM)按0.1ml/每小鼠的比例涂抹，使产生红斑、脱屑及增殖性表皮增厚。将本发明的化合物2溶解在70％乙醇中配成浓度为1％(w/v)，按0.1ml/每小鼠的比例涂抹，每周涂抹6天，在涂药12天及15天后观察皮肤外观，结果为涂抹本发明皮肤化妆品的组与未投药的对照组相比，有减轻红斑、脱屑等程度的倾向。另外，从组织学上也可观察到表皮肥厚的程度减轻。
本发明的皮肤化妆品，有促进细胞激活作用，其特征是在细胞增殖过程中有时以促进增殖的形态起作用，但对于处于稳定状态的细胞不起作用。另外，在细胞开始异常增殖、分化时对其起抑制作用。本皮肤化妆品具有，在对皮肤有修复的必要时起促进作用，在皮肤出现异常反应时起抑制作用的特性。作为改善皱裂、皲裂、溃烂等皮肤干燥及防止皮肤老化等的预防及治疗剂非常有用。
际图简单说明图1.表示培养天数与细胞数量之间的关系图。
图2.表示本发明化合物2的添加浓度与向细胞内的DNA内摄入3H-胸腺嘧啶脱氧核苷的量(％)的关系图。
权利要求
1.皮肤化妆品，其特征为具有以通式(I)所表示的化合物作为有效成分。 (式中，R1表示C数1-10的烷基，R2表示C数1-10的烷基、C数2-6的链烯基或C数3-7的环烷基，X表示-O-或-NH-)。
2.权利要求1中记载的皮肤化妆品，其中R1及R2表示C数1-5的烷基，X为-O-。
3.权利要求2中记载的皮肤化妆品，其中R1及R2为异丙基。
4.权利要求1中记载的皮肤化妆品，其特征在于对表皮角质化细胞有增殖作用及对由12-)-十四烷酰佛波醇-(3-乙酸酯引起的皮肤损害作用有改善效果。
5.权利要求1中记载的皮肤化妆品，可用于改善皮肤皱裂、皲裂、溃烂等皮肤干燥及预防皮肤老化。
6.权利要求1中记载的皮肤化妆品，含有0.0001-20％的作为有效成分的以通式(I)表示的化合物。
7.以通式(I)表示的化合物作为皮肤化妆品的用途。
8.权利要求7中记载的皮肤化妆品，具有对表皮角质化细胞的增殖作用及改善由12-O-十四烷酰沸波醇-13-乙酸酯引起的皮肤损害作用。
全文摘要
本发明的目的在于提供一种以通式(I)表示的化合物作为有效成分的新的皮肤化妆品。本发明的另一个目的在于提供为改善皮肤皱裂、皲裂、溃烂等皮肤干燥及预防皮肤老化而使用上述通式(I)表示的化合物的方法。
文档编号A61K8/00GK1140053SQ9510991
公开日1997年1月15日 申请日期1995年7月10日 优先权日1994年1月19日
发明者织田康孝, 古贺裕康, 古濑纯孝 申请人:日本农药株式会社