专利名称：抗浮肿剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有有效成分组胺加免疫球蛋白的新型药物，详细的说本发明涉及含有有效成分组胺加免疫球蛋白的抗浮肿剂、浮肿形成抑制剂和血脑屏障的血管通透性亢进抑制剂。
免疫球蛋白和组胺的复合体作为组胺加免疫球蛋白制剂是已知的，由于其具有使变态反应患者或哮喘患者降低的组胺固定能力得以恢复的作用，作为非特异性减敏疗法剂可以用于支气管哮喘、变应性鼻炎、血管运动性鼻炎或荨麻疹、慢性湿疹、变应性皮炎等变态反应性皮肤病的治疗。另外，发现该药物有抑制组胺游离的作用，它没有作为对症疗法剂使用的抗组胺剂或肾上腺皮质激素等具有的副作用，作为安全性较高的药物得到了广泛的使用。〔《医疗药日本医药品集》(1996年10月版，日本医药情报中心编，药业时报社发行)的第463、464页〕。
另外，除上述之外还有报告指出组胺加免疫球蛋白具有抑制嗜酸性粒细胞增多的作用和免疫调节作用，以及组胺免疫加球蛋白即使口服给药也显示同样的药理作用(特开平7-53406号公报、特开平9-31311号公报等)。但是，在以前任何一篇文献中均没有关于组胺加免疫球蛋白具有抑制浮肿形成作用和抑制血脑屏障血管通透性亢进作用的记载。
本发明的目的在于提供一种副作用少、安全性高的新型抗浮肿剂、浮肿形成抑制剂和血脑屏障的血管通透性亢进抑制剂。
本发明者对上述组胺加免疫球蛋白继续进行了悉心的研究，结果发现本药物具有抑制浮肿形成的作用和抑制血脑屏障血管通透性亢进的作用。本发明提供一种含有有效成分组胺加免疫球蛋白的新型抗浮肿剂、浮肿形成抑制剂和血脑屏障血管通透性亢进抑制剂。
本发明药物组合物的有效成分组胺加球蛋白为组胺与免疫球蛋白的复合体，可以将免疫球蛋白成分与组胺成分适当混合制备而成。在本发明中使用的免疫球蛋白作为用于人的药品当然能够以人免疫球蛋白为原料使用，人免疫球蛋白可以由血清或胎盘血浆等采用常规方法制得。为了确保其作为药物的安全性，应当符合通常对血浆成分制剂制定的标准。例如，使用HBs抗原、HCV抗体及HIV抗体呈阴性的人血浆作为原料血浆并进行加热处理，可以避免混入肝炎病毒或艾滋病病毒等的危险性。加热处理一般用于病毒的惰性化，例如在血浆成分制剂中通常可以使用60℃-10小时液态加热处理、60℃-10小时蒸汽化加热处理、65℃-96小时干燥加热处理等。
在适用于人以外的场合，相应于作为对象的动物的种类，免疫球蛋白可以从人以外的动物制备后再使用。免疫球蛋白由IgG、IgA、IgM等种类组成，本发明的免疫球蛋白可以使用各种免疫球蛋白中的一种或数种。
组胺成分可以使用游离的组胺或其盐酸盐、磷酸盐、苦味酸盐等可药用盐。优选的组胺成分例如组胺二盐酸盐。
在制备本发明的药物组合物时，例如可以将免疫球蛋白1至200mg(优选5至50mg)和组胺成分0.01至2μg(优选0.05至0.5μg)适当溶解于生理盐水、蒸馏水等合适的溶剂中，搅拌、混合制得，可以通过冷冻或冷冻干燥保存。
以下给出本发明药物组合物的一个配方例，但本发明并不仅限于此。
本发明的药物组合物可以与适当的药用载体或稀释剂组合制成药物，可以采用本领域使用的常规方法配制成用于口服或非口服给药的固体、半固体或液体剂型。根据配方可以单独使用本发明药物组合物作为有效成分，也可以与其它药物活性成分制成复方制剂。
注射剂优选使用注射用蒸馏水或生理盐水等制成等渗溶液后制得的制剂。另外，配制成制剂时除本发明药物组合物之外还可以适当加入溶解辅助剂、等渗剂、稳定剂、缓冲剂、防腐剂等添加剂，例如可以使用柠檬酸、苯甲酸钠、甘氨酸、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、磷酸盐、抗坏血酸钠、氯化钠、碳酸氢钠等。另外，本发明药物组合物也可以制成使用时再溶解的注射剂，可以将干燥粉末填充在小瓶中，或将溶液型药物制剂注入到小瓶中后冷冻干燥制得。这种场合下，除上述添加剂之外必要时还可以加入葡萄糖、甘露醇、山梨醇等赋形剂等。
制成口服给药用制剂时，可以直接或与合适的添加剂适当组合制成片剂、散剂、颗粒剂或胶囊剂，其中所述合适的添加剂例如乳糖、甘露糖醇、玉米淀粉、马铃薯淀粉、柠檬酸钙等常用赋形剂，以及结晶纤维素、羟丙基纤维素等纤维素衍生物，阿拉伯胶、玉米淀粉、明胶等粘合剂，玉米淀粉、马铃著淀粉、羧甲基纤维素钙等崩解剂，滑石粉、硬脂酸镁等润滑剂，其它增量剂、润湿剂、稳定剂、缓冲剂、防腐剂、香料等。另外，本发明药物组合物也可以制成使用时再用蒸馏水溶解的口服液，可以通过将组胺加免疫球蛋白溶液填充到小瓶等后冷冻干燥制得，在制成制剂的时候，必要时还可以加入上述各种添加剂。相应于患者的状态和疾病的种类，也可以适当制成上述以外的适当剂型进行治疗，例如吸入剂、气雾剂、软膏、滴眼剂、栓剂等。
本发明药物组合物优选的给药量最好是根据疾病的种类、疾病发展程度、患者的年龄·性别、剂型、给药方法、给药时间等适当设定。例如为了能够得到注射剂所预期的效果，对于一般的成人通常可以1至300mg(优选5至150mg)1周1次乃至数次皮下给药，但本发明并不受其特别限定。
本发明药物组合物的优选方式如下所述。
(1)含有有效成分组胺加免疫球蛋白的抗浮肿剂。
(2)含有有效成分组胺加免疫球蛋白的浮肿形成抑制剂。
(3)含有有效成分组胺加免疫球蛋白的血脑屏障血管通透性亢进抑制剂。
(4)如上述(1)～(3)所述的药物组合物，免疫球蛋白成分与组胺成分的比例是相对于免疫球蛋白成分1～200mg组胺成分为0.01～2μg。
(5)如上述(1)～(3)所述的药物组合物，免疫球蛋白成分与组胺成分的比例是相对于免疫成分5～50mg组胺成分为0.05～0.5μg。
(6)如上述(1)～(5)所述的药物组合物，免疫球蛋白成分与组胺成分的比例是相对于免疫球蛋白成分12.0mg组胺成分为0.15μg。
(7)如上述(1)～(6)所述的药物组合物，免疫球蛋白为人免疫球蛋白。
(8)如上述(1)～(7)所述的药物组合物，组胺成分为组胺二盐酸盐。
(9)如上述(1)～(8)所述的药物组合物，该药物组合物为注射剂。
以下结合实施例更具体的说明本发明，但本发明并不受其任何限定。实施例下面列出本发明药物组合物制备方法的一个例子。另外，由于在以下的药理试验中使用大鼠作为试验动物，因而用大鼠免疫球蛋白代替人免疫球蛋白。也就是说，将大鼠免疫球蛋白和组胺二盐酸盐按照下述比例溶解于生理盐水，在室温下搅拌2小时后冷冻干燥，在使用时用生理盐水溶解后皮下给药。〔本发明化合物〕 〔大鼠免疫球蛋白量〕 〔组胺二盐酸盐量〕HG505.3mg 0.10μgHG7512.0mg 0.15μgHG9028.8mg 0.30μg由于制得的HG50、HG75和HG90在下述任何药理试验中均具有显著作用，作为代表例给出HG75得到的结果。实施例药理试验按照下述进行。1)试验动物由チャ-ルスリバ-ジャパン购入Lewis大鼠(6～10周龄，雌性，SPF)。在室温22±2℃、湿度55±10％、1日12小时(上午8点～下午8点)人工照明的动物室预备饲养5日，用健康正常的动物进行实验。2)组胺加免疫球蛋白的制备与给药将正常大鼠血清分离出的大鼠免疫球蛋白(コ-ン组分II和III)和组胺二盐酸盐溶解于生理盐水，使其最终浓度分别达到26.6mg/mL和0.333μg/mL，在23℃搅拌2小时，作为HG75使用。从免疫日或细胞植入日开始每隔1日在大鼠背部皮下给药。对照大鼠按照同样的时间表投给生理盐水。3)被动实验性变应性脑脊髓炎(pEAE)的诱导方法将豚鼠髓磷脂碱性肽(GP-MBP68-84)溶液(400μg/mL)与等体积的完全佐剂(H37Ra)混合，制成乳剂，其中豚鼠髓磷脂碱性肽含有相当于髓磷脂碱性蛋白质(MBP)诱发脑脊髓炎部分的合成肽(MBP68-84)。在用乙醚麻醉的Lewis大鼠左后肢脚蹠皮下投给该乳剂0.1mL。10～14日后由大鼠无菌的取出脾脏，制备细胞浮游液。使用0.75％氯化铵/17mM Tris-盐酸(pH＝7.65)溶液，除去红细胞。离心分离后，使脾脏细胞浮游在RPMI-1640培养基中，用台盼蓝溶液(0.4％)测定活细胞浓度。用含有灭能胎牛血清(7％)的培养基(含有10mMヘペス缓冲液、20mML-谷氨酸、50μg/mL青霉素、50u/mL链霉素、5×10-6M2-巯基乙醇的RPMI-1640)将细胞浓度调节为2×106个/10mL，在2μg/mL刀豆素A存在条件下，将2×107个/10mL在培养皿中，37℃、5％CO2条件下培养3日。培养后回收细胞，离心洗涤3次。滤除凝集块，用台盼蓝溶液(0.4％)测定细胞浓度，用生理盐水调节为4×107个/mL。用X线照射装置(MBR-1520R日立生产)对Lewis大鼠进行800rad的X线照射后，将2×107个/0.5mL细胞植入尾静脉。4)实验性变应性脑脊髓炎(EAE)临床症状的判断基准大鼠临床症状使用判断基准值(0-5)记分进行评价。2～5的各临床症状部分发病时，采用减去0.5得到的值。另外，对临床症状的评价使用观察者不清楚药物投给组合的盲检法。判断值 临床症状0 正常0.5尾部轻度下垂0.75 尾部中度下垂1 尾巴的保持能力消失2 活动性降低3 一侧后肢麻痹4 两侧后肢麻痹5 两侧后肢麻痹，并伴有失禁5)血管通透性与浮肿的测定细胞植入一定时间后，将伊凡斯蓝溶液(用生理盐水调节到2％)按照1mL/100g体重的比例于静脉内给药。2小时后，用250mL生理盐水回流后取出脊髓，测定湿重量。在90℃将脊髓干燥24小时后，测定干重量。由湿重量减去干重量得到的值为水分含量。
为了定量漏出到中枢神经内的伊凡斯蓝的量，在脊髓组织中加入1N的氢氧化钠0.5mL，充分搅拌后在37℃条件下培养18小时。然后，加入0.6N磷酸-丙酮缓冲液(5∶13)4.5mL，充分搅拌。用滤纸除去不溶物，测定滤液的吸光度(OD620nm)。为了作出标准曲线，制备加有0.3125μg～10μg的伊凡斯蓝的标准溶液，从该标准曲线计算出各试样中伊凡斯蓝的量。6)统计处理脊髓内的伊凡斯蓝量与水分含量用平均值±标准差表示，进行多重比较检验(Scheffe’s检验)，求出与发病对照组的显著性差异。试验结果如下所示。7)EAE伴有的血管通透性的经时变化为了明确EAE发病与血脑屏障(BBB)血管通透性亢进的关系，从细胞植入日开始经时地在静脉内投给伊凡斯蓝，在一定时间内测定向脊髓移行的量。对于细胞植入第3天的大鼠(平均临床分数0)，向脊髓移行的伊凡斯蓝的量与未进行细胞植入的对照组相比没有变化。细胞植入第4天EAE开始发病(平均临床分数0.7)，向脊髓内移行的伊凡斯蓝的量与对照组相比显著(p＜0.05)增加。第5天的平均临床分数为3.0，这时向脊髓内移行的伊凡斯蓝的量与第4天相同，与对照组相比显著(p＜0.05)增加。但是，在EAE症状减轻的第7天(平均临床分数1.0)以及症状消失的第11天与对照组相比伊凡斯蓝的量没有显著变化。8)本发明药物组合物对EAE伴有的血管通透性亢进的抑制效果由于pEAE发病前BBB血管通透性亢进，暗示发病与血管通透性有关。为了考察本发明药物组合物对该血管通透性亢进的效果，从细胞植入日开始隔日1次在大鼠背部皮下投给HG75(150mg/kg)，给药3次。将2％伊凡斯蓝溶液按照0.1mL/100g的比例于静脉内投给细胞植入后第5天的大鼠。2小时后，用生理盐水400mL从心脏进行血液回流，除去末梢血中的伊凡斯蓝。将脊髓全部摘除，提取所含的伊凡斯蓝，进行定量。结果的一个例子如
图1所示。如图1所示，与没有诱发EAE的大鼠(MBP未给药组)相比，诱发了EAE的对照组大鼠的伊凡斯蓝量增加到约6倍，确认具有显著性差异(p＜0.001)。另一方面，投给本发明药物组合物的大鼠的伊凡斯蓝的量与未诱发EAE的大鼠相同，与发病对照组相比具有显著(p＜0.001)抑制效果。9)本发明药物组合物对EAE伴有的浮肿形成的抑制效果以从细胞植入第5天摘出的脊髓的湿重量减去干燥24小时后的干重量得到的水分含量作为浮肿的指标，考察本发明药物组合物(150mg/kg)的效果。结果的一个例子如图2所示。如图2所示，与未诱发EAE的大鼠相比，诱发了EAE的对照组大鼠的脊髓内水分含量显著(p＜0.05)增加。另一方面，对于投给本发明药物组合物的大鼠，水分含量降低到来诱发EAE的水平，与发病组相比显著(p＜0.05)降低。
由图1可知本发明药物组合物可以抑制血脑屏障的效果通透性亢进。另外，由图2可知本发明药物组合物可以抑制浮肿形成。在脱髓病变形成最初期的变化中，血脑屏障的异常是很重要的。已经明确在中枢神经系统中，血脑屏障原本是脑血管内皮细胞。正常情况下，BBB紧密结合，内皮细胞自身的小孔少，由于具有与其它部位的血管内皮细胞不同的特殊结构，可以防止血管内的物质轻易向脑实质内移行。但是，对于浮肿的病例等，确认急性期的血管内皮通透性亢进。因此，本发明药物组合物作为血脑屏障血管通透性亢进抑制剂、以及抗浮肿剂或浮肿形成抑制剂是有效的。
已知本发明药物组合物的有效成分组胺加免疫球蛋白副作用发生频率低，因此本发明药物组合物作为安全性高的新型抗浮肿剂、浮肿形成抑制剂和血脑屏障血管通透性亢进抑制剂其有用性很高。
附图的简要说明图1表示本发明药物组合物对EAE伴有的血脑屏障血管通透性亢进的抑制效果结果的一例。
图2表示本发明药物组合物对EAE伴有的浮肿形成的抑制效果结果的一例。
权利要求
1.抗浮肿剂，含有有效成分组胺加免疫球蛋白。
2.浮肿形成抑制剂，含有有效成分组胺加免疫球蛋白。
3.血脑屏障的血管通透性亢进抑制剂，含有有效成分组胺加免疫球蛋白。
全文摘要
提供一种副作用少、安全性高的新型抗浮肿剂、浮肿形成抑制剂和血脑屏障血管通透性亢进抑制剂。本发明提供一种含有有效成分组胺加免疫球蛋白的新型抗浮肿剂、浮肿形成抑制剂和血脑屏障血管通透性亢进抑制剂。已知本发明药物组合物可以抑制血脑屏障的血管通透性亢进,还可以抑制浮肿形成。已知本发明药物组合物的有效成分组胺加免疫球蛋白副作用发生频率低,因此本发明药物组合物作为安全性高的新型抗浮肿剂、浮肿形成抑制剂和血脑屏障血管通透性亢进抑制剂是有用的。
文档编号A61K39/395GK1254597SQ9912348
公开日2000年5月31日 申请日期1999年11月12日 优先权日1998年11月13日
发明者内木充 申请人:日本脏器制药株式会社