用于预防和/或治疗寄生虫病的甲壳素或其衍生物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及预防和/或治疗人和动物中的寄生虫病，尤其是隐孢子虫病的领域。
【背景技术】
[0002] 隐孢子虫病是一种与原生动物隐孢子虫（Cryptosporidium)有关的疾病，由于死 亡和生长延迟的增加、其产生的兽医护理和治疗的成本以及管理患病动物的工作时间的增 加，其在家畜中具有非常明显的负面经济后果。
[0003] 隐孢子虫病也影响人且可在免疫抑制患者尤其是患有HIV的患者和新生儿中具 有严重的后果。与隐孢子虫病有关的主要临床体征是急性腹泻。与腹泻有关的其他临床体 征尤其是脱水、极度虚弱、食欲不振和绞痛。这些各种临床体征可以导致死亡，尤其是幼小 动物的死亡。
[0004] 常山酮是在法国具有销售许可的用于预防和/或治疗牛犊的隐孢子虫病的唯一 药物。
[0005] 然而，不仅常山酮的功效是不完全的，而且它具有某种毒性，且已报道 了隐孢子对该化合物耐药的风险（参见Silverlas等，Preventive Veterinary Medicine, 2009, 91:73-84)。
[0006] 此外，没有注册用于治疗小山羊和羔羊的隐孢子虫病的任何药物。
[0007] 在人类中，硝唑尼特和巴龙霉素已用于治疗隐孢子虫病。然而，迄今为止，这些分 子仅在某些国家具有销售许可。例如，它们在法国不具有销售许可。
[0008] 因此，不存在真正满意的用于预防和/或治疗隐孢子虫病的解决方案。
[0009] 甲壳质和壳聚糖是生物相容、可生物降解、无毒的化合物，其特征在于带强负 电荷。甲壳质和壳聚糖用于众多非常不同的应用中，从食品加工到水处理，且包括分析 技术、化妆品行业和医学领域（参见Shahidi等，Trends in Food Science&Technolo gy， 1999, 10:37-51)〇
[0010] 由于其抗菌和抗真菌性质，甲壳质和壳聚糖尤其用作防腐剂和制备保护性食品薄 膜。
[0011] 在医学领域，壳聚糖例如用作疫苗佐剂、止血剂、抗凝血剂、抗血栓形成剂、用于产 生组织（皮肤、骨、软骨、肝、神经、血管）的基质、用于促进烧伤愈合和用于治疗烧伤的试 剂、用于输送、固定和包封分子的支架，例如用于控释药物。
[0012] 例 如，Alvarez 等(European Journal of Pharmaceutical Sciences，2012, 47:215-227)测试了包含二氯尼特糠酸酯和环化糊精的络合物作为药物的 基于壳聚糖和聚乙稀醇的微球对于被微小隐孢子虫（C.parvum)感染的肠内细胞的体外作 用。作者指出微球体外附着至肠内细胞可以抑制微小隐孢子虫附着至肠内细胞并作为药物 释放系统。然而，没有阐明体内施用后这些微球附着肠内细胞的能力。
[0013] 因此，真实需要用于预防和/或治疗寄生虫病，尤其是隐孢子虫病的替代方案。优 选地，这些替代方案几乎没有或没有毒性作用，基于天然来源的化合物，其在人和/或动物 中的无害是已知的，且制备和使用是简单的。
[0014] 发明简沐
[0015] 本发明总体上基于阐明，完全原型（original)的甲壳质或甲壳质衍生物用作唯 一的活性成分可以有效预防和/或治疗寄生虫病。
[0016] 本文中术语"寄生虫病"意欲指与原生动物有关的疾病，例如就隐孢子虫病来说与 隐孢子虫有关。
[0017] 本发明的主题尤其是甲壳质或甲壳质衍生物用作预防和/或治疗隐孢子虫病的 唯一的活性成分。
[0018] 本发明也涉及组合作为活性成分的甲壳质和/或甲壳质衍生物和一种或多种其 他天然来源的化合物的原型组合物，用于治疗和/或预防寄生虫病尤其是隐孢子虫病。
[0019] 根据本发明的原型组合物尤其可以降低幼小动物的死亡率和/或减少腹泻。
[0020] 此外，这些组合物具有仅包含天然来源的化合物的优点，所述天然来源的化合物 以推荐的剂量使用在人和/或动物中已知是无害的。
[0021] 因此这些原型组合物几乎没有或没有毒性作用。
[0022] 制备这些组合物的方法是易于进行的，仅需要简单混合各种化合物。
[0023] 这些原型组合物还具有能够整合入食品组合物中的优点，不管它们是固体或液 体。
[0024] 因此本发明的第一个主题涉及一种组合物，包含：
[0025] -至少一种主剂，选自甲壳质或甲壳质衍生物，和
[0026] -作为次要试剂的用于刺激免疫力的试剂和/或抗寄生虫剂。
[0027] 甲壳质衍生物优选选自壳聚糖、N-乙酰氨基葡糖或葡糖胺。
[0028] 优选的主剂是壳聚糖和N-乙酰氨基葡糖。
[0029] 用于刺激免疫力的试剂优选选自酵母壳（yeast hulls)、酵母提取物、硒、微生物、 或其组合。
[0030] 抗寄生虫剂选自精油、活性炭、月桂酸、或其组合。
[0031] 优选的抗寄生虫剂包含精油。
[0032] 所述组合物可以是食品组合物、食品增补剂或药物组合物。
[0033] 本发明的第二个主题涉及如上定义的组合物用作药物。
[0034] 本发明的第三个主题涉及甲壳质、甲壳质衍生物或如上定义的组合物用作尤其在 人或动物中预防和/或治疗寄生虫病优选隐孢子虫病的药物。
[0035] 本发明的某些优选的实施方式的更加详细的说明如下。
[0036] 发明详沐
[0037] 如之前所指出，本发明涉及基于甲壳质和/或甲壳质衍生物的组合物，所述甲壳 质和/或甲壳质衍生物用作活性成分且在本文中称为主剂（base agents)。
[0038] 这些组合物还可以包含其他化合物，优选天然来源的化合物，在本文中称为次要 试剂（secondary agents) 〇
[0039] 次要试剂选自用于刺激免疫力的试剂和抗寄生虫剂。
[0040] 因此本发明的主题是一种组合物，包含：
[0041]-至少一种主剂，选自甲壳质或甲壳质衍生物，和
[0042] -用于刺激免疫力的试剂和/或抗寄生虫剂。
[0043] 甲壳质是可以在例如节肢动物的外骨骼、头足类动物的内骨骼和真菌的细胞壁中 发现的组分。
[0044] 甲壳质是主要由通过β (1-4)键彼此连接的N-乙酰氨基葡糖单体组成的直链多 糖。
[0045] 甲壳质通常借助于包括对甲壳纲动物的外皮或壳脱蛋白和任选的脱矿质的步骤， 通常随后脱色步骤的方法获得。
[0046] 脱蛋白步骤通常是碱性处理步骤（例如用氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾或 磷酸钠）。
[0047] 脱矿质步骤通常是酸性处理步骤（例如用盐酸、硝酸、硫酸、乙酸或甲酸）。
[0048] 脱色步骤例如通过用氧化剂处理来进行。
[0049] 甲壳质的乙酰化度（DA)大于50%。
[0050] 乙酰化度是100个单体的N-乙酰氨基葡糖单元的平均数。
[0051] 也可以使用脱乙酰化度（DDA)，其等于100-DA(作为百分比）。
[0052] 术语"甲壳质衍生物"意欲指可以从甲壳质获得、尤其借助于一种或多种水解、脱 乙酰、羧甲基化、琥珀酰化或酸化步骤获得的任何化合物。
[0053] 甲壳质衍生物的一个实例是壳聚糖。
[0054] 壳聚糖是由随机分布且通过β (1-4)键彼此连接的葡糖胺单体和N-乙酰基葡糖 胺单体组成的直链多糖。
[0055] 壳聚糖的乙酰化度（DA)小于50%。
[0056] 用于本发明组合物的壳聚糖优选的乙酰化度为小于40%，更优选小于30%，甚至 更优选小于20%，例如小于或等于10%。
[0057] 壳聚糖可通过将甲壳质化学脱乙酰（例如通过在浓缩氢氧化钠溶液中处理）、热 化学脱乙酰或酶促脱乙酰而获得。
[0058] 由此获得的壳聚糖通常在酸性水溶液（尤其在pH低于6)中不溶。
[0059] 可以使用本领域技术人员众所周知的方法使得壳聚糖溶于酸性水溶液（尤其在 pH低于6)。
[0060] 例如，可溶性壳聚糖可通过用盐酸处理而获得。
[0061] 本发明组合物可以包含可溶性壳聚糖和/或不溶性壳聚糖。
[0062] 因此，在本发明的上下文中，壳聚糖的不溶性或可溶性通过测量其在酸性水溶液 (尤其是pH低于6)中的溶解度来确定。
[0063] 在优选的本发明组合物中，所使用的壳聚糖是可溶性壳聚糖。
[0064] 壳聚糖衍生物的另一个实例是N-乙酰氨基葡糖，又名N-乙酰基-D-葡糖胺或 NAG0
[0065] N-乙酰氨基葡糖例如通过将甲壳质或壳聚糖完全水解，例如通过酶促或酸水解， 或通过葡糖胺的N-乙酰化来获得。
[0066] 甲壳质衍生物的又一个实例是葡糖胺，又名D-葡糖胺。
[0067] 葡糖胺例如通过将壳聚糖完全水解，例如通过酶促或酸水解来获得。
[0068] 本发明的主题尤其是如上定义的组合物，其特征在于甲壳质衍生物选自壳聚糖、 N-乙酰氨基葡糖或葡糖胺。
[0069] 优选用于本发明组合物的甲壳质衍生物是壳聚糖和N-乙酰氨基葡糖。
[0070] 根据本发明的优选的组合物包含单一主剂。
[0071] 当组合物仅包含一种主剂时，所述主剂优选是壳聚糖或N-乙酰氨基葡糖，更优选 壳聚糖。
[0072] 在一个有利的实施方式中，本发明组合物包含至少两种主剂。
[0073] 例如，本发明的另一个优选组合物可以包含两种主剂。
[0074] 当本发明组合物包含两种主剂时，这两种主剂优选是壳聚糖和N-乙酰氨基葡糖。
[0075] 在本发明的另一个实施方式中，组合物包含至少三种主剂，例如三种主剂、四种主 剂或更多。
[0076] 根据本发明的优选组合物包含作为主剂的壳聚糖和任选的N-乙酰氨基葡糖。
[0077] 用于刺激免疫力的试剂优选是天然来源的化合物或天然来源的化合物的组合。
[0078] 因此本发明的主题尤其是如上定义的组合物，其特征在于用于刺激免疫力的试剂 选自酵母壳、酵母提取物、硒、微生物、或其组合。
[0079] 用于刺激免疫力的试剂例如可以包含以下的组合：
[0080] -酵母壳和酵母提取物，
[0081] -酵母壳和硒，
[0082] -酵母壳和微生物，
[0083] -酵母提取物和硒，
[0084] -酵