一种基于响应面优化的亳菊总黄酮提取液的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种亳菊中总黄酮的提取方法，具体涉及一种基于响应面优化的亳菊 中总黄酮的提取方法。
【背景技术】
[0002] 养生保健酒已有数千年的历史，是中医药科学的重要组成部分。随着科学技术的 进步，从中药浸酒的传统工艺的基础上已发展到利用萃取、浸提和生物工程等现代化手段， 提取中药中的有效成分制成的功能性养生保健酒。
[0003] 作为亳州典型的地道药材和四大名菊之一的亳菊，其中的有效成分主要是黄酮类 物质，具有疏风散热、解暑明目、扩张冠状动脉、降低血压、预防高血脂、抗菌、抗病毒、抗炎、 抗衰老等功效。将亳菊的功能性成分与酒进行有效地融合，获得具有最佳营养配方和舒适 口感的亳菊保健酒意义重大，而将亳菊中的功能性成分尽可能多地提取出来，尤为重要。黄 酮类化合物由于具有广泛的药用活性，常被用来评价菊花提取物品质优劣的重要指标。
[0004]目前文献报道的菊花萃取方法有水煎法、酸碱浸提法、超声提取法和超临界萃取 法。水則、法的提取率较低，超声提取法和超临界萃取法等新型提取工艺因提取效率较尚而 受到广泛关注，但由于在生产中存在投资过大，操作繁琐等问题而限制了上述方法在工业 生产中的普及应用。而乙醇回流提取，具有无噪音、无污染、能耗低、提取率高等特点，属环 境友好的提取方法。
【发明内容】
[0005] 本发明是为克服现有技术的不足，提供一种以乙醇为提取溶剂的亳菊总黄酮提取 液的制备方法。
[0006] 本发明应用响应面设计软件对乙醇浓度、提取时间、提取次数三个因素进行响应 面条件优化，获得较优的提取方法。
[0007] 本发明解决技术问题，采用如下技术方案：
[0008] 本发明基于响应面优化的亳菊总黄酮提取液的制备方法，其特点在于按如下步骤 进行：
[0009] (1)将亳菊通过粉碎机粉碎成亳菊粗粉；
[0010] (2)在亳菊粗粉中加入50%~90%的乙醇以50°C~90°C的温度回流提取1~3 次，每次提取1~3. 5h，合并提取液；所述亳菊粗粉质量与回流提取所用乙醇总体积的比为 1:8 ~20g/mL;
[0011] (3)将提取液冷却、离心，所得上清液即为亳菊总黄酮提取液。
[0012] 优选的，本发明基于响应面优化的亳菊总黄酮提取液的制备方法是按如下步骤进 行：
[0013] (1)将亳菊通过粉碎机粉碎成亳菊粗粉；
[0014] (2)在亳菊粗粉中加入78%的乙醇以85°C的温度回流提取2次，合并提取液；第 一次回流提取时亳菊粗粉质量与所用乙醇体积的比为1: 7g/mL，提取时间为2h;第二次回 流提取时亳菊粗粉质量与所用乙醇体积的比为l:3g/mL，提取时间为I. 5h;
[0015] (3)将提取液冷却、离心，所得上清液即为亳菊总黄酮提取物。
[0016] 其中，步骤（3)所述离心是在15°C下、以8000r/min的速度离心lOmin。
[0017] 通过本发明的优化方法，最终得到的亳菊总黄酮提取液中总黄酮的含量为 0.1277g/L〇
[0018] 与现有技术相比，本发明的积极效果是：
[0019] 本发明的方法操作简单，所用溶剂为乙醇，廉价无毒，所得亳菊总黄酮提取液中总 黄酮含量达〇? 1277g/L。
[0020] 本发明通过响应面分析法对亳菊中总黄酮的提取工艺进行优化：首先利用单因素 实验设计考察乙醇浓度、料液比（亳菊粗粉质量（单位为g)与所用乙醇体积（单位为mL) 的比）、提取温度、提取时间、提取次数五个因素对黄酮提取量的影响。综合发现乙醇浓度、 提取时间、提取次数对黄酮提取量影响显著，再利用响应面实验设计考察上述3个因素，得 到亳菊中总黄酮的最佳提取条件。
【附图说明】
[0021] 图1为实施例2中提取数据的方差分析；
[0022] 图2为实施例2中提取数据的残差正态概率分布图；
[0023] 图3为实施例2中预测值与实际值对应关系图；
[0024] 图4为实施例2中各因素的等高线分析，由左到右、由上到下分别为AB因素、BC因 素、AC因素和C因素的等尚线分析；
[0025] 图5为实施例2中响应面提取优化的优化组合。
【具体实施方式】
[0026] 以下提供本发明基于响应面优化的亳菊总黄酮提取液的制备方法的具体实施方 式。
[0027] 应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解， 在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些 等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0028] 下述实施例中所得亳菊总黄酮提取物中总黄酮含量测定方法如下：
[0029] (1)仪器与试药
[0030] 上海元夕仪器有限公司UV-9000分光光度计；芦丁对照品；水为超纯水，其它试剂 均为分析纯。
[0031] (2)检测条件
[0032]检测波长：510nm。
[0033] (3)对照品溶液的制备
[0034] 精密称取干燥至恒重的无水芦丁IOmg于50mL容量瓶内，加适量95%乙醇溶解并 定容，摇勾，得0. 200mg/mL芦丁对照母液。
[0035] (4)标准曲线的建立
[0036]精密量取芦丁对照母液 2.OmL，4.OmL，6.OmL，8.OmL，10.OmL，12.OmL，14.OmL， 16.OmL分别置于25mL容量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液lmL，混匀，放置6min，加10%硝酸铝 溶液lmL，摇勾，放置6min，加10 %氢氧化钠溶液10mL，用30 %乙醇定容至刻度，摇勾，静置。 15min后，测试510nm下的吸光度值。以不含芦丁的空白溶液作参比。以吸光度为纵坐标， 芦丁对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程为：Y= 0. 0850X-0. 0006。相关 系数为0.9972。
[0037] (5)含量测定
[0038] 吸取提取液10mL，用提取时的乙醇浓度溶解并定容至50mL，摇匀，得待测液。吸取 3mL待测液于25mL容量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液lmL，混匀，放置6min，加10%硝酸铝溶 液lmL，摇匀，放置6min，加10%氢氧化钠溶液10mL，用30%乙醇定容至刻度，摇匀，静置。 15min后，测试510nm下的吸光度值。以不含提取液的空白溶液作参比。结合标准曲线，即 获得提取液中总黄酮的含量。
[0039] 实施例1
[0040] 本实施例根据本发明提供的方法，选用不同条件进行亳菊中总黄酮的提取优化。
[0041] 1、乙醇浓度对亳菊总黄酮提取液中总黄酮含量的影响
[0042] 称取IOg亳菊粗粉，用IOOmL浓度分别为50 %，60 %，70 %，80 %，90 %的乙醇溶液 作为浸提溶剂，在70°C下回流提取2h，所得提取液冷却后在15°C下、以8000r/min的速度离 心lOmin，获得相应亳菊总黄酮提取液。按上述方法测定所得提取液的吸光度及总黄酮含 量，如表1所示。可以看出，当乙醇浓度为80%时，提取液中总黄酮的含量最大。
[0043]表1不同乙醇浓度下所得亳菊总黄酮提取液的吸光度和总黄酮含量
[0046] 2、料液比对亳菊总黄酮提取液中总黄酮含量的影响~
[0047]称取IOg亳菊粗粉，分别用 80mL，100mL，120mL，140mL，160mL，180mL，200mL(即料 液比分别为1:8、1:10、1:12、1:14、1:16、1:18、1:20)浓度为80 %的乙醇溶液作为浸提溶 剂