一种玫瑰发酵原浆及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体设及一种玫瑰发酵原浆及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 玫瑰，菩薇科菩薇属落叶丛生灌木。玫瑰花有很高的经济价值，一般用来提炼精油 和色素。玫瑰花成分复杂，含有多酪类、黄酬类等多种化学成分。运些化学成分有减少和消 除自由基、抗氧化活性、抗血栓、抗癌、抗炎、抑菌、免疫调节作用、降血脂和预防屯、脏病等生 理活性。我国玫瑰资源丰富，为开发应用玫瑰提供有利条件。随着玫瑰栽培业迅速发展及 应用范围拓宽，对玫瑰营养成分及在医疗保健作用方面研究也逐步深入。对玫瑰活性物质 的提取工艺也不断完善，但是提取方法主要W闪式提取法、水提法为主。
[0003] 现有的玫瑰活性物提取最常采用的是水提法：玫瑰干品粉碎后加去离子水，调抑 后揽拌浸提一段时间，离屯、后取上清液浓缩，最后使用乙醇沉淀，干燥后粉碎得到产物。但 是该方法在提取过程中引入有机物，不仅破坏环境，且在应用的过程中存在潜在的安全隐 患。
【发明内容】
[0004] 本发明的一个目的是提供一种玫瑰发酵原浆及其制备方法。 阳〇化]本发明提供的玫瑰发酵原浆的制备方法，包括如下步骤：将玫瑰干粉、水和发酵菌 混合得到初始体系，并对初始体系进行发酵培养，得到玫瑰发酵原浆化妆品。
[0006] 上述制备方法中，所述发酵菌、所述玫瑰干粉和水的配比为（15-25)ml: (7-15)g: 350g，具体可为15ml:12g:350g，所述发酵菌的菌菌液浓度为105-108CFU/ml。
[0007] 所述发酵培养的溫度为25-38°C，具体可为35°C，时间为24-3化，具体可为2地。
[0008] 所述发酵菌可为酵母菌，具体可为己氏酵母菌Saccharomycespastorianus，ATCC 编号为28827。
[0009] 所述发酵菌具体可W其培养液或悬浮液的形式存在，所述发酵菌的培养液或悬浮 液的抑值为6. 5-7. 5。
[0010] 所述玫瑰干粉取自玫瑰花干花蕾，所述玫瑰干粉的目数为20-50目，具体可为30 目，可将玫瑰花干花蕾经粉碎机粉碎、过筛后得到。
[0011] 上述制备方法中，还包括对所述发酵培养后所得发酵液依次进行灭菌、离屯、、取上 清液的步骤，即得到玫瑰发酵原浆。
[0012] 其中，所述灭菌的条件如下：灭菌溫度为115-12rc(具体可为115°C)，灭菌时间 为 15-25min(具体可为 20min)。
[0013] 所述离屯、的条件如下：离屯、转速为3800-4200r/min(具体可为4000r/min)、离屯、 时间为15-30min(具体可为20min)，离屯、半径为9cm。
[0014] 本发明所制备得到的玫瑰发酵原浆也属于本发明的保护范围。
[0015] 本发明所制备得到的玫瑰发酵原浆在制备具有下述至少一种功能的化妆品中的 应用或在直接作为具有下述至少一种功能的化妆品中的应用：
[0016] 1)美白；2)抗衰老；3)清除DPPH自由基；4)抑制酪氨酸酶。
[0017] 上述应用中，所述化妆品具体可为面膜、精华液或爽肤水中的任一种。
[0018] 通过实验证明：本发明制备的玫瑰发酵原浆化妆品不含任何化学成分，可W直接 作为面膜或精华液或爽肤水的成品使用，比现有市面上的其他产品更加天然，不会给肌肤 造成任何负作用；与普通提取方法相比，本发明获得小成分多肤，易于让皮肤充分吸收。
[0019] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0020] (1)本发明采用己氏酵母对玫瑰进行发酵，保留了植物的全部功效成分及其活性， 避免了提取方法造成的活性成分流失；
[0021] (2)本发明所采用的发酵法，在对玫瑰有效成分提取过程中，不添加任何有机试 剂，发酵溫度和发酵抑溫和，植物活性成分结构不被破坏，保持植物的天然活性，同时，节 约生产成本，而且最大化的简化了生产步骤，使该发酵技术能够实现大量生产、工业化生 产，并能够充分保证产品质量的稳定性；
[0022] (3)本发明提供的玫瑰发酵原浆化妆品中不添加香精等对化学成分，确保产品对 人体的安全性。
[002引 （4)本发明提供的玫瑰发酵原浆中富含的蛋白质、多糖、黄酬等物质，与发酵滤液 中的益生菌发酵产物成分具有协同作用，从而具有显著地抗氧化、抗衰老及美白作用。
【附图说明】
[0024] 图1为实施例2中玫瑰发酵原浆的活性多肤分子量分布HPLC图谱。
[0025] 图2为实施例2中不同浓度的玫瑰发酵原浆（溶剂为去离子水）与DPPH自由基 清除率的关系曲线。
[0026] 图3为实施例2中10%的玫瑰发酵原浆（溶剂为去离子水）和1 %的熊果巧对酪 氨酸酶的抑制率的对比图。
【具体实施方式】
[0027] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0028] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0029] 下述实施例中的液体培养基由溶质和溶剂组成，溶剂为水，溶质及其在液体培养 基中的浓度为：葡萄糖20g/L，蛋白腺20g/L，酵母膏lOg/L，抑值为7. 0。
[0030] 下述实施例中的YTO培养基由溶质和溶剂组成，溶剂为水，溶质及其在液体培养 基中的浓度为：酵母提取物1% (质量分数），膜蛋白腺2% (质量分数），葡萄糖2% (质 量分数），抑值为7.0。
[0031] 下述实施例中的玫瑰干花来自市面销售。
[0032] 下述实施例中的己氏酵母Saccharomycespastorianus的ATCC编号为28827,可 从ATCC获得。
[0033] 下述实施例中所用的玫瑰发酵原浆为对发酵培养后所得发酵液依次进行灭菌、离 屯、后所得到的上清液。
[0034]实施例1、一种玫瑰发酵原浆及其制备方法： 阳0对 1、菌种的活化：
[0036] 挑取己氏酵母（Saccharomycespastorianus)菌落一环于液体培养基中，放入摇 床中将菌种活化，得到活化后己氏酵母菌液。
[0037] 2、菌种的纯化：
[0038] 将步骤1得到的活化后的菌液梯度稀释铺板，W便获取单菌落，得到纯化后己氏 酵母。
[0039] 3、菌种的扩大培养：
[0040] 将步骤2得到的纯化后的菌种接种到YTO培养基（抑值为7. 0)中，在25°C的摇床 中培养，当0D值=0. 5-1. 0时，得到发酵菌菌液（菌种处在对数期，浓度为105-108CFU/ml)。
[0041] 4、玫瑰发酵原浆的获得：
[0042] 将步骤3得到的发酵菌菌液15ml接种到12g的玫瑰花干粉和350g的水中，得到 发酵体系（发酵体系中菌种总量和玫瑰、水的配比为15ml:12g:350g);将发酵体系于35°C 摇床中发酵24h，得到发酵产物；将发酵产物于115°C下灭菌20min，使菌失活，得到灭菌后 的发酵产物；将灭菌后的发酵产物于4000r/min、离屯、半径为9cm的条件下离屯、20min，弃沉 淀，收集上清液，即为玫瑰发酵原浆。
[0043] 实施例2、玫瑰发酵原浆在作为化妆品中的应用：
[0044] 一、玫瑰发酵原浆化妆品的性质：
[0045] 将实施例1所制备得到的玫瑰发酵原浆外观为粘稠液体、颜色为淡黄色至栋黄 色。抑值5. 2-6. 8,粘度200-500CP，可溶性固含物含量1. 5-5. 0%，菌落总数小于50CFU/ ml,无致病菌检出。根据化妆品卫生标准GB7916-87,化妆品细菌总数不高于lOOOCFU/ml， 所W此发酵提取物符合化妆品质量要求。
[0046] 对该玫瑰发酵原浆进行成分分析，蛋白质检测方法参照GB5009. 5-2010;粗多糖 检测方法参照GB/T5009. 8-2008;黄酬检测方法参照GB/T5009. 124-2003;总酪检测方法 参照GB/T8313-2008,所得结果如下：
[0047] 本发明制得的玫瑰发酵原浆含蛋白质7. 91g/kg、粗多糖12. 97g/kg、总黄酬 0. 25g/kg(W芦下计）、总酪 0. 85g/kg。
[0048] 二、玫瑰发酵原浆的安全性检测：
[0049] 人体斑贴试验主要是用于检测化妆品终产品或原料的刺激性。本发明对实施例1 获得的玫瑰发酵原浆进行人体封闭式斑贴试验，旨在对其潜在皮肤刺激性进行评估。 阳化0] 1、试验对象：
[0051] 选择合适的志愿者30人，年龄范围在18-60岁随机选择。
[0052] 2、试验方法：
[0053] 若为固体样品或半固体的样品，则称取0.020g-0.025g置于斑试器中备用；若是 液体样品，则量取0. 〇25mL-〇. 2血滴加于滤纸片上，再将滤纸片置于斑试器内。本发明采用 后者，每个样品均设置空白对照，在对照斑试器孔内加入与样品等量的样品溶剂，如蒸馈水 或橄揽油，本发明采用蒸馈水。
[0054] 试验部位选为人体背部，利用无刺激性的胶带将斑试器固定贴敷于受试者背部。 测试周期持续2地。为了试验结果的准确、可信和科学，在测试期间志愿者按照要求，不能摘 掉斑试器，亦不可使受试部位接触水。24h后去除斑试器，静置30min后，等待压痕消失，观 察皮肤的反应。如果试验结果为阴性，则需要在斑贴试验后24h和4化分别再观察一次。 阳化5] 3、试验结果：
[0056] 斑贴试验结果如表1所示：
[0057] 其中，=阴性反应； 阳05引一级不良反应："± "=可疑反应：仅有微弱红斑；