含有11种甘油三酯的薏苡仁油、制剂及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药学领域，具体而言，本发明涉及一种薏苡仁油、制剂、制备方法及其 在制备抗肿瘤或治疗炎症药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 薏该仁是禾本科薏该属植物薏该Coixlacryma-jobiL.varma-yuen(Roman.) Stapf的成熟干燥种仁，为利水渗湿药，很久以来为药食两用品种。现代研究发现薏苡仁具 有镇痛抗炎、免疫调节、抗溃疡、降血脂和减肥等药理作用。近年来，国内外学者通过TLC、 HPLC-MS、GC等方法对薏苡仁的化学成分进行了研究，发现其含有多种活性成分，主要包括 薏苡仁酯、甘油三酯类、脂肪酸类、内酰胺类、薏苡仁内酯、糖类、留醇类、三萜类等化合物。 其中，酯类是首先被发现的具有抗肿瘤活性的成分，也是报道最多最受关注的化学成分。虽 然目前在中国临床上以薏苡仁油为有效成分的康莱特注射剂已得到普遍应用，但其使用的 薏苡仁油成分较复杂，除含有甘油三酯成分外，还含有甘油一酯、甘油二酯以及脂肪酸酯 等，这必然会使实际生产过程中的质量控制和临床用药安全面临很大的挑战。
[0003] 本发明以薏苡仁粉为原料，采用超临界二氧化碳萃取、碱化、中性氧化铝和高岭土 纯化等步骤，得到了一种薏苡仁油有效部位；通过对其活性成分的分离与鉴定，确定了其组 成主要为十一种甘油三酯成分；并进一步对其进行理化常数的检测，确定了其最优酸值、碘 值、皂化值、折光率和相对密度等。采用本发明所述薏苡仁油用药，成分及组成确定，保证了 工业生产中各批次间的质量稳定性，也避免了因直接采用薏苡仁油入药而成分复杂不清导 致的毒副反应。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种从薏苡仁中提取的薏苡仁油，其特征在于：该薏苡仁 油中含有如下质量百分含量的11种甘油三酯类成分：三亚油酸甘油酯4. 87~6. 99%、 1-油酸-2, 3-二亚油酸甘油酯13. 00~18. 69 %、1-棕榈酸-2, 3-二亚油酸甘油酯5. 25~ 7. 54%、1，3-二油酸-2-亚油酸甘油酯13. 23~19. 02 %、1-棕榈酸-2-亚油酸-3-油酸 甘油酯10. 26~14. 75%、1，3-二棕榈酸-2-亚油酸甘油酯2. 28~3. 28%、三油酸甘油酯 14. 44~20. 76%、1-棕榈酸-2, 3-二油酸甘油酯8. 06~11. 58%、1-油酸-2-亚油酸-3-硬 脂酸甘油酯1.37~1.97%、1，3-二棕榈酸-2-油酸甘油酯1.52~2. 19%和1，2-二油 酸-3-硬脂酸甘油酯1. 29~1. 86%。
[0005] 优选的，上述11种甘油三酯成分的质量百分含量为：三亚油酸甘油酯 5. 47-6. 69%、1-油酸-2, 3-二亚油酸甘油酯14. 63~17. 88%、1-棕榈酸-2, 3-二亚油酸 甘油酯5. 9~7. 21 %、1，3-二油酸-2-亚油酸甘油酯14. 88~18. 19 %、1-棕榈酸-2-亚油 酸-3-油酸甘油酯11. 55~14. 11 %、1，3-二棕榈酸-2-亚油酸甘油酯2. 57~3. 14%、三油 酸甘油酯16. 25~19. 86 %、1-棕榈酸-2, 3-二油酸甘油酯9. 07~11. 08 %、1-油酸-2-亚 油酸-3-硬脂酸甘油酯1. 54~1. 88%、1，3-二棕榈酸-2-油酸甘油酯1. 71~2. 09 %和 1，2-二油酸-3-硬脂酸甘油酯1. 45~1. 78% ;
[0006] 更优选的，上述11种甘油三酯成分的质量百分含量为：三亚油酸甘油酯5. 96~ 6. 20%、1-油酸-2, 3-二亚油酸甘油酯15. 93~16. 58%、1-棕榈酸-2, 3-二亚油酸甘油 酯6. 43~6. 69%、1，3-二油酸-2-亚油酸甘油酯16. 20~16. 87%、1-棕榈酸-2-亚油 酸-3-油酸甘油酯12. 57~13. 09 %、1，3-二棕榈酸-2-亚油酸甘油酯2. 79~2. 91 %、三油 酸甘油酯17. 69~18. 42 %、1-棕榈酸-2, 3-二油酸甘油酯9. 87~10. 27 %、1-油酸-2-亚 油酸-3-硬脂酸甘油酯1.68~1.74%、1，3-二棕榈酸-2-油酸甘油酯1.86~1.94%和 1，2-二油酸-3-硬脂酸甘油酯1. 58~1. 65%。
[0007] 上述含量均指甘油三酯化合物在薏苡仁油中的质量百分含量，以本发明所述方法 制备得到的薏苡仁油为原料，经过制备色谱分离得到11个甘油三酯单体化合物，称重、计 算而得。也可根据本领域常规分析方法得出。
[0008] 其中，所述薏苡仁油按脂肪油检测理化常数为：20°C时相对密度0. 917~0. 920， 20°C时折光率1. 471~1. 474,酸值〈0· 2,碘值102~106,皂化值188~195 ;
[0009] 本发明所述薏苡仁油可通过如下方法获得：
[0010] 超临界二氧化碳萃取：取薏苡仁粉碎成10目~50目，采用超临界0)2萃取器萃 取，将薏苡仁粉装入萃取釜，用夹套循环热水加热C02预热器、萃取釜和分离柱，使萃取温度 和分离温度分别达到33~45°C和30~45°C，保持一级解析釜和二级解析釜出口温度分别 为20~50°C和15~35°C;液态C02流量按所萃取薏苡仁粉末质量计，以2.51^~7.51^/ h*kg的流量经高压泵加压进入C02预热器，成为超临界状态下的流体，进入萃取釜，保持压 力19~23Mpa，萃取薏苡仁油；溶有薏苡仁油的C02流体进入分离柱，控制分离柱压力7~ lOMpa，分离得到薏苡仁油；从分离柱出来的C02气体先后进入一级、二级解析釜，分别保持 压力为5~7Mpa和4~6Mpa，弃去解析得到的水分等杂质，C02气体经冷凝器变成液态C02， 循环使用，连续萃取2~3h，得到薏苡仁油；
[0011] 精制：取超临界C02萃取得到的薏苡仁油，加入油重量51%的60°C~90°C石油醚， 再根据酸值，加入油重36%~56%的2%NaOH溶液，搅拌lOmin后，静置18~24h后，除 去下层皂脚，取上层用纯化水进行水洗，静置18~24h后，除去下层废水，取上层进行第二 次水洗，静置40~50h后，除去下层废水；取上层加入油重70 %~90 %丙酮破乳，静置2~ 4h后，除去下层废丙酮；取上层油溶液，加入油重3 %~8 %的经活化的中性氧化铝，搅拌 30min后，过滤；滤液加热后，加入油重2%~6%经活化的高岭土：活性炭=1:1的混合吸 附剂，搅拌，在40~50°C下保温30min，过滤；滤液减压回收溶剂后，再加纯化水进行水洗， 静置1~2h后，除去下层废水；上层油在充氮条件下，加热减压干燥，再加油重8%~12% 经活化的中性氧化铝，搅拌，置冷处静置，过滤，过滤后的油再经160~170°C减压干热灭菌 1~2h，冷却后经0. 2μm微孔滤膜过滤，分装于500ml玻璃输液瓶中，密封，即得；
[0012] 优选地，所述精制步骤为：
[0013] 取超临界C02萃取得到的薏苡仁油，加入油重量51%的60°C~90°C石油醚，再根 据酸值，加入油重36 %~56 %的2 %NaOH溶液，搅拌lOmin后，静置20h后，除去下层皂脚， 取上层用纯化水进行水洗，静置22h后，除去下层废水，取上层进行第二次水洗，静置46h 后，除去下层废水；取上层加入油重70%~90%丙酮破乳，静置3h后，除去下层废丙酮；取 上层油溶液，加入油重5%的经活化的中性氧化铝，搅拌30min后，过滤；滤液加热后，加入 油重4%经活化的高岭土：活性炭=1:1的混合吸附剂，搅拌，在40~50°C下保温30min， 过滤；滤液减压回收溶剂后，再加纯化水进行水洗，静置lh后，除去下层废水；上层油在充 氮条件下，加热减压干燥，再加油重10 %经活化的中性氧化铝，搅拌，置冷处静置，过滤，过 滤后的油再经160~170°C减压干热灭菌2h，冷却后经0. 2μm微孔滤膜过滤，分装于500ml 玻璃输液瓶中，密封，即得。
[0014] 本发明所述薏苡仁油为淡黄色的澄明液体，气微、味淡；其在石油醚或三氯甲烷中 极易溶解，在丙酮中易溶、在乙醇中微溶，在水中不溶。
[0015] 按照本发明所述方法制备得到的薏苡仁油，依照《中国药典》（2010年版）一 部附录方法进行检测，其理化常数均为：20°C时相对密度0. 917~0. 920, 20°C时折光率 1. 471~1. 474,酸值〈0. 2,碘值102~106,皂化值188~195。其中，药典所述酸值系指中 和脂肪、脂肪油或其他类似物质1克中含有的游离脂肪酸所需氢氧化钾的重量（毫克数）。 在油脂类产品的质量研究中，酸值是一个重要评价指标，就本申请所述薏苡仁油而言，其酸 值均小于0. 2,即通过对制备工艺中超临界萃取参数和碱化等纯化工艺的优化，制备得到的 薏苡仁油具有如下优点：一方面作为杂质的游离脂肪酸含量极低，成品质量较好；另一方 面富集了大量甘油二酯、甘油三酯类活性成分，纯度较高，并且其中甘油二酯和甘油三酯类 成分种类明确、含量稳定。除此之外，其它理化常数，如皂化值、碘值等，多批次样品测得该 值变化范围均较小，进一步说明本发明所述薏苡仁油的质量稳定、临床用药更安全。本发明 所述制备方法收率高、成本低、产品稳定，适于工业化生产，安全可控。
[0016] 本发明的又一目的在于提供一种含有薏苡仁油的药物制剂，具体包括本发明所述 薏苡仁油及一种或几种药学上可接受的载体。
[0017] 其中，所述药学上可接受的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、乳 化剂、粘合剂、润滑剂、吸收促进剂、表面活性剂、崩解剂、润滑剂或抗氧化剂，必要时还可以 加入香味剂、甜味剂、防腐剂或着色剂。
[0018] 所述药学上可接受的载体可以选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫 代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、大豆磷脂、维生素C、维生素E、EDTA二钠、EDTA 钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯 化钠、氯化钾、乳酸钠、羟苯乙酯溶液、苯甲酸、山梨酸钾、醋酸氯己定、木糖醇、麦芽糖、葡萄 糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻 酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二 醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙或硬脂酸镁。
[0019] 所述药物制剂可以是口服固体制剂、口服液体制剂或注射剂。
[0020] 优选的，
[0021] 所述口服固体制剂选自胶囊剂、片剂、滴丸、颗粒剂、浓缩丸中的一种；所述口服液 体制剂选自水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或是一种在使用前可用水或其 它适宜的载体复配的干燥产品；所述注射剂选自纳米混悬剂、脂质体、乳剂、冻干粉针剂和 水针剂中的一种。
[0022] 更优选的，
[0023] 所述注射剂包括如下成分：本发明所述薏苡仁油50~350g，注射用大豆磷脂或 可供注射用大豆磷脂10~40g，注射用甘油或可供注射用甘油15~50g，注射用水加至 1000ml〇
[0024] 其可通过如下方法制备：
[0025] 称取处方配制量的注射用大豆磷脂或可供注射用大豆磷脂，加适量的注射用水 后，用高剪切分散乳化机分散至无块状及颗粒状固体，加入按配方量称取的注射用甘油或 可供注射用甘油，并加注射用水至规定量，搅拌均匀备用；
[0026] 另称取薏苡仁油，将称取的油酯与水相分别加热至60~70°C后，置高压均质机进 行高压乳化，乳化时均质机低压为5~12MPa，高压为25~50MPa，再循环均质3~6遍， 至2μm以下颗粒应不少于95 %，5μm以上颗粒不得检出，必要时用NaOH或HC1调节pH至 4. 8~8. 5,优选6. 8~L0,最优选为6. 8;
[0027] 将制得均匀乳剂氮气加压通过小于等于3μm的微孔滤芯过滤器过滤，充氮灌装 灭菌，冷却即得。
[0028] 所述胶囊剂包括如下成分：薏苡仁油200~800g，抗氧化剂和/或乳化剂0. 20~ 0. 60g，制成 1000 粒。
[0029] 其可通过如下方法制备：
[0030] 胶液配制：按重量比为1:0. 6~1. 2:0. 3~0. 8:0. 0001~0. 01称取适量明胶、纯 化水、甘油和防腐剂；依次将甘油、纯化水、防腐剂（选自10%羟苯乙酯溶液、苯甲酸、山梨 酸钾和醋酸氯己定中的一种）加入化胶罐内，加热至70°C~90°C后，再加入明胶不断搅拌、 抽真空，直至明胶完全溶解，将胶液过滤，在56~62°C下存放，备用；
[0031] 药液配制：将配方量的薏苡仁油、抗氧化剂和/或乳化剂（抗氧化剂为维生素E， 乳化剂为吐温80)加入配料罐内，不断搅拌，直至混合均匀；
[0032] 压胶囊：根据胶囊大小选择合适的压丸模具，在15~30°C、相对湿度小于35%条 件下进行压丸定型后干燥，剔除大小丸，再用95%药用乙醇洗丸后，继续干燥至含水量小于 12%，目检剔除不合格胶囊，印字，包装即得。
[0033] 本发明通过药效实验表明，所述药物组合物及其制剂对多种人肿瘤细胞株均有不 同程度的抑制作用，可作为治疗肿瘤疾病药物。
[0034] 因此，本发明的目的还在于提供一种上述药物组合物、药物制剂在制备抗肿瘤药 物中的应用。
[0035] 其中，所述肿瘤是指早期、中期或晚期的肺癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌或 乳腺癌。
[0036] 以下通过实验数据说明本发明所述组合物及其制剂在抗肿瘤方面的有益效果。
[0037] -、体外MTT法测定薏苡仁油及其制剂对8种人肿瘤细胞株的抑制作用
[0038] 1、实验材料及配制
[0039] (1)细胞株：PANC_1 (人胰腺癌细胞）、SK0V3 (人卵巢癌细胞）、MCF_7 (人乳腺癌细 胞）、Bcap-37 (人乳腺癌细胞）、SMMC-7721 (人肝癌细胞）、H印G-2 (人肝癌细胞）、A549 (人 肺癌细胞）、H460 (人肺癌细胞），上述细胞株由上海医药工业研究药理评价研究中心保存， 传代维持。
[0040] (2)01^1完全培养基：添加10%新生牛血清（6四0)81^)、双抗。
[0041] (3)0. 25%胰蛋白酶溶液（Trypsin):购