一种超氧化物歧化酶微囊粉及其配制方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种超氧化物歧化酶微囊粉及其配制方法，特别是涉及采用微囊技术 增加皮肤对超氧化物歧化酶的生物利用度等，属于医学美容、医药、及化妆品等行业领域。
【背景技术】
[0002] 超氧化物歧化酶Orgotein (Superoxide Dismutase，S0D)，是一种金属酶，含有铜 和锌两种离子。生物中，S0D催化使对抗体有关的超氧阴离子变成双氧水，随后被双氧水分 解，保护机体免受超氧阴离子的影响，是一种新型的抗氧化酶。
[0003] 超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase简称S0D)是一种新型酶制剂。它在生 物界的分布极广，几乎从动物到植物，甚至从人到单细胞生物，都有它的存在。S0D被视为生 命科技中最具神奇魔力的酶、人体内的垃圾清道夫。S0D是氧自由基的自然天敌，是机体内 氧自由基的头号杀手，是生命健康之本。
[0004] 超氧化物歧化酶（S0D)为自由基清除剂，是有效的抗老制剂。能清除具有毒性 而损坏细胞的超氧阴离子自由基（致人衰老物质），提高免疫力，使机体免受炎症、肿瘤的 侵犯，而延缓机体的衰老。
[0005] S0D在体外稳定性差，受温度、氧气等因素影响容易失活。常温下，S0D水溶液，其 活力半衰期只有6分钟。而干燥的S0D原料粉末，也需于-5°C的冰箱下保存，否则也很容易 失活。而且具有一定的免疫原性，这限制了其应用。
[0006] 针对S0D不稳定性，目前现有技术多采用冻干粉的形式。即在低温下（约4°C ) 配制SOD水溶液，加入乳糖或海藻糖对SOD进行保护。然后进行冷冻干燥，冻干粉进行真空 包装，并于低温下长期保存。现在技术的缺点如下：（1)对氧气敏感，必须真空情况下储存； (2)对光线敏感，光线可以加速S0D失活；（3)须低温情况下储存，才能确保产品的有效活 力；（4) S0D冻干粉，在配制成液体广品后，广品溶液很快失活失效。
[0007] 环糊精（Cyclodextrins，简称CD)，是一类由6、7、8个D-吡喃葡萄糖单元首尾相 连的环状化合物，环糊精及其衍生物大多具有如下特征：首先，它是一类半天然产物，较容 易得到；其次，化学性质稳定，可以选择性修饰生物大分子；第三，具有能够与模型底物结 合的空腔；第四，环糊精无毒，容易降解。
[0008] 羟丙基-β -环糊精（简写HP- β -CD)是在β -环糊精一定程度上引入相应的取 代基，得到的⑶衍生物既具有母体⑶的特点，又在一定程度上改善了 ⑶的理化 性能使得衍生物具有更好的包合选择性和更高的化学活性。
[0009] 经研究发现，ΗΡ-β-⑶与客体分子之间的相互作用及分子的识别过程是 HP- β -CD的应用研究的基础。HP- β -CD包合物可以改善客体分子的性能，使客体分子的应 用价值扩大。因此，HP-β -CD可以将客体分子转化成另一类复合物，复合物不仅具有客体分 子原有的特性，而且其性能更为优良。一般认为，ΗΡ-β-CD与客体分子形成包合物所涉及 的作用力包括（1) HP- β -CD腔内的疏水作用力，以及HP- β -CD与客体分子上疏水部位之间 的作用力；⑵HP-β-CD的羟丙基与客体分子上的极性基团之间的氢键作用；（3)HP-β-CD 环骨架的张力。
[0010] 本发明利用ΗΡ-β -⑶的以上特点，从分子水平上对ΗΡ-β -⑶包合S0D进行研究。 研究发现HP- β -⑶与S0D以1 : (0. 2~1)进行包合修饰后，使S0D的理化性质得到改善。 特别是产品稳定性上得到了彻底性的提高。并具有如下优点：
[0011] (1) S0D稳定性得到了极大的改善，大大延长了 S0D产品的有效期，达到了产品工 业化生产及应用的目的；
[0012] (2)提高了产品生物利用度；
[0013] (3)提高了 S0D的活性，使S0D活力提高了 20 %~30% ;
[0014] (4)包合的S0D微囊，与细胞膜的双卵磷脂双分子层更容易结合，使有效成份S0D 更容易穿渗细胞膜，进入细胞深层，修复组织损伤；
[0015] (5)微囊技术可以减少刺激性及免疫原性，预防皮肤、机体发生过敏，增加了皮肤 舒适性；
[0016] (6)可延缓释放有效成份，达到高效长效目的。
【发明内容】
[0017] 本发明的目的在于提供一种S0D微囊粉的配制方法，利用ΗΡ-β -⑶的分子特点， 从分子水平上对HP- β -⑶包合S0D进行研究。研究发现包合剂羟丙基-β -环糊精与S0D 以进行包合修饰后，使SOD的理化性质得到改善。特别是产品稳定性上得到了彻底性的提 尚。
[0018] S0D微囊粉的具体配制方法为：
[0019] (1)室温下，将HP- β -⑶溶于纯化水中形成饱和溶液A ;
[0020] (2)室温下，称取与HP- β -CD1 : (0· 2~1)的SOD粉沫，溶解于纯化水中形成溶 液B ;
[0021] (3)室温下，边搅拌边将溶液B缓缓地加入溶液A中，后置于4°C下搅拌4小时形 成溶液C ;
[0022] (4)室温下，向溶液C中缓缓加入乳糖或海藻糖作为保护剂，然后用冷冻喷雾干燥 法干燥，即得HP- β -⑶包合的S0D微囊粉，室温保存。
[0023] 冻干后的S0D微囊粉由以下重量份组成：羟丙基-β -环糊精15~35份，超氧化 物歧化酶3~35份，乳糖或海藻糖20~40份。
[0024] 本发明具有如下优点：
[0025] (1) S0D稳定性得到了极大的改善，只需常温保存，且大大延长了 S0D产品的有效 期，达到了产品工业化生产及应用的目的；
[0026] (2)提尚了广品生物利用度；
[0027] (3)提高了 S0D的活性，使S0D活力提高了 20 %~30% ;
[0028] (4)包合的S0D微囊，与细胞膜的双卵磷脂双分子层更容易结合，使有效成份S0D 更容易穿渗细胞膜，进入细胞深层，修复组织损伤；
[0029] (5)微囊技术可以减少刺激性及免疫原性，预防皮肤、机体发生过敏，增加皮肤舒 适性；
[0030] (6)可延缓释放有效成份，达到高效长效目的。
【具体实施方式】
[0031] 实施例1 :S0D微囊干燥粉的配制
[0032] 1 :取HP- β -⑶7g溶于10g纯化水中，形成饱和溶液。再取S0D粉末1. 4g，用少量 纯化水溶解，搅拌下加入HP-β -CD饱和溶液中，搅拌均匀。放置在4°C下继续搅拌4小时。 加入乳糖4g，搅拌均匀，冷冻干燥，即得S0D微囊干燥粉。
[0033] 2 :取HP- β -⑶7g溶于10g纯化水中，形成饱和溶液。再取S0D粉末7g，用少量 纯化水溶解，搅拌下加入HP-β -CD饱和溶液中，搅拌均匀。放置在4°C下继续搅拌4小时。 加入海藻糖8g，搅拌均匀，冷冻干燥，即得S0D微囊干燥粉。
[0034] 说明：ΗΡ-β-⑶的用量，是根据其取代基类型不同而选择不同的用量，具体用 量以溶液饱和为准。高取代、中取代、低取代三种类型的溶解度依次为：70g/100ml水， 50g/100ml水，30g/100ml水；上述制备步骤除有温度操作说明外，其他均为室温下操作。
[0035] 实施例2 :S0D微囊干燥粉的活性对比验证
[0036] 发明人用邻苯三酚自氧化法研究了超氧化物歧化酶和ΗΡ-β -CD作用前后对邻苯 三酚自氧化反应的抑制作用及对包合后S0D稳定性进行了研究，通过实验数据可以证明： 1.包合后的S0D活性比未包合的S0D活性稍的提高。2 :包合后S0D可以在常温下保存两 年。
[0037] 发明人将包合前后的S0D粉末加入到了邻苯三酚自氧化体系中，通过邻苯三 酚体系在波长为325nm下吸光度的变化速率，算出S0D粉的活性。检测方法采用GB/ T5009. 171-2003保健食品中超氧化物歧化酶（S0D)活性的测定（第一法），样品成份如下 表：
[0039] S0D样液：包合前S0D粉末，配制成理论活性为1000U/ml。
[0040] 包合S0D样液：包合后S0D粉末，配制成理论活性为1000U/ml (按包合前活性换算 的理论活性）。
[0041] 实验结果为：
[0043] 通过实验结果我们可以看出，未包合的SOD液，在配制理论值为lOOOU/ml进行检 测时，发现实际活性只有923U/ml，活性下降了 7. 7%。造成这种现场的原因在于S0D对配 制条件过于敏感，配制过程中的温度、pH值、配制时间、光照强度等等外界条件均对S0D活 性造成了影响，使S0D活性下降。而包合后的S0D微囊粉末，实际检测结果为1246U/ml，比 理论活性上升了 24. 6%，说明了 HP-β -⑶包合后的S0D活性不但不下降，还有了增敏的作 用。
[0044] 实施例2 :S0D微囊干燥粉的稳定性验证
[0045] 发明人还对包合前后的S0D粉末进行了稳定性考察。分别活性一样的，包合前和 包合后的S0D粉，于30°C，湿度75%的环境下进行储存。于7天，15天，1个月，2个月，3个 月、4个月进行取样，检测S0D活性（单位：U/g)。其结果如下：
[0047] 从实验数据我们可以看出，常温下，包合前的S0D粉很快失活，三个月后产品活性 为零。而用HP-β-⑶包合后的S0D在六个月内活性下降不明显，几乎无统计学差异。以六 个月下降比例计算，四年内总下降值不超过10%，可满足产品工业生产上产品有效期要求。 [0048] 上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受所述实施例的 限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化， 均应为等效的置换方式，均包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种超氧化物歧化酶微囊粉，其特征在于由下列重量份的原料组成：包合剂15~35 份、超氧化物歧化酶3~35份和保护剂20~40份，且具体配制方法为： (1) 将包合剂溶于纯化水中形成饱和溶液A; (2) 称取与包合剂一定比例超氧化物歧化酶粉，溶解于纯化水中形成溶液B; (3) 边搅拌边将溶液B缓缓加入溶液A中，4°C下继续搅拌4小时后形成溶液C; (4) 向溶液C中加入保护剂，搅拌均匀后冻干，即制得超氧化物歧化酶微囊粉。2. 根据权利要求1所述的超氧化物歧化酶微囊粉及配制方法，其特征还在于所述包 合剂为羟丙基-β-环糊精，保护剂为乳糖或海藻糖，包合剂与超氧化物歧化酶的质量比为 1 : 0· 2 ~1 : 1〇3. 根据权利要求1所述的超氧化物歧化酶微囊粉及配制方法，其特征还在于制备步骤 (4)所述"冻干"具体为冷冻喷雾干燥法，且所有配制步骤中除有温度要求外，其余均在室温 环境下操作。
【专利摘要】本发明公开了一种超氧化物歧化酶微囊粉及其配制方法，超氧化物歧化酶微囊粉由下列重量份的原料组成：羟丙基-β-环糊精15～35份、超氧化物歧化酶3～35份、乳糖或海藻糖20～40份。将与羟丙基-β-环糊精以1：(0.2～1)重量比的超氧化物歧化酶加入到羟丙基-β-环糊精饱和溶液中混匀，后加入乳糖或海藻糖作为保护剂，混匀冻干后即得。本发明制备的超氧化物歧化酶微囊分其SOD活性、稳定性等得到了明显的提高，从而增加了其生物利用度。
【IPC分类】A61K38/44, A61K8/66, A61K47/48, A61Q19/08, A61K8/73, A61P39/06
【公开号】CN105288652
【申请号】CN201510753861
【发明人】钱捷豪, 陆贵平, 谢伟, 王刚平, 钟小凡, 黄子杰
【申请人】珠海市雅莎生物科技有限公司
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年10月30日