一种藏兽药止泻散及其研制方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于藏兽药止泻散研制方法领域，尤其设及一种防治巧牛细菌性腹泻藏兽 药复方----止泻散及其研制方法。
【背景技术】
[0002] 巧牛细菌性腹泻病是一种对川西北畜牧业影响比较大的常见病，藏兽医主要结合 当地藏药资源优势选择单方药物或药物组合进行防治，同时兼顾对因治疗和对症治疗相结 合。本专利申请人根据藏兽药止泻散组方药物及其复方的抗菌活性，研发了一种防治巧牛 细菌性腹泻藏兽药复方----止泻散及其研制方法。
【发明内容】
[0003] 针对川西北巧牛细菌性腹泻病猎獄的实际情况，本发明的目的旨在提供一种藏兽 药止泻散及其研制方法。
[0004] 为此，本发明采用W下技术方案： 阳〇化]一种藏兽药止泻散，所述的止泻散组份为苦参、纤毛婆婆纳、松萝和独一味。
[0006] 一种藏兽药止泻散的研制方法，包括W下步骤：
[0007] 1)、采集苦参、纤毛婆婆纳、松萝和独一味四种药材；
[0008] 2)、将四种药材经切块或粉碎过筛后按一定比例加入75%乙醇浸泡一段时间后将 提取液浓缩、冷冻干燥成粉末备用；
[0009] 3)、组方药物稀释液的制备：将独一味、纤毛婆婆纳、松萝冻干粉分别按质量比例 为1:6用二甲基亚讽稀释，得药物浓度为0. 167g/mU苦参按1:2的比例用二甲基亚讽稀释 成浓度为0. 5g/mU最后将药物过滤除菌；
[0010] 4)、采用微量稀释法和纸片法评价止泻散及其组方药材对14种标准菌株的抗菌 活性；
[0011] 5)、采用Lg(34)正交设计优化四个组方药物的配伍组合，确定其最佳组合；
[0012] 6)、按药物浓度组距为0. 8的梯度设置不同剂量组，测定组方药物的LDs。。
[0013] 7)、止泻散散剂对布利丹沙口氏菌3733株复制细菌腹泻的治疗效果评价
[0014] 作为对上述技术方案的补充和完善，本发明还包括W下技术特征。
[0015] 步骤2)中将独一味和纤毛婆婆纳分别用中药粉碎机中粉碎，过40目筛后取 lOOOg，按1:10比例加入75%乙醇浸泡3天后将提取液浓缩、冷冻干燥成粉末备用；苦参切 成小块后放入瓶中加入75 %乙醇，常溫下浸提48小时，倒出浸提液后再浸提2次，浓缩提取 液，将提取物冷冻干燥成粉末备用；将松萝剪成小段，于45°C煎煮=次，将3次提取液混合 在一起，用纱布过滤，再用旋转蒸发仪于45°C、110巧m浓缩浸提液至原体积的1 %，冷冻干 燥后备用。将苦参切成小块后放入瓶中加入75%乙醇浸泡72小时后用旋转蒸发仪于50°C 将浸提液浓缩至无醇味，冷冻干燥至粉末后备用。
[0016] 使用本发明可W达到W下有益效果：本发明研制过程采用藏兽医和中兽医理论， 选择川西北常见藏药材纤毛婆婆纳、松萝、苦参和独一味为研究对象，采用微量稀释法和纸 片法分别对藏兽药止泻散组方药物及其复方进行抗菌活性评价，W期发明一种防治巧牛细 菌性腹泻藏兽药的研制方法，为防治川西北巧牛腹泻病提供研究资料和技术支持，并为藏 兽药的开发利用及产业化奠定基础。
【具体实施方式】
[0017] 实施例：
[0018] (1)组方药物的采集及鉴定：四种组方药材（除苦参采自四川省阿巧藏族弟族自 治州松潘县外，纤毛婆婆纳、松萝和独一味均采自四川省阿巧藏族弟族自治州红原县），经 西南民族大学生命科学与技术学院陈朝喜副教授鉴定为相应的药材。
[0019] (2)组方药物提取物和冻干粉的制备：将独一味和纤毛婆婆纳分别用中药粉碎机 中粉碎，过40目筛后取lOOOg，按1:10比例加入75%乙醇浸泡3天后将提取液浓缩、冷冻 干燥成粉末备用；苦参切成小块后放入瓶中加入75%乙醇，常溫下浸提48小时，倒出浸提 液后再浸提2次，浓缩提取液，将提取物冷冻干燥成粉末备用；将松萝剪成小段，于45°C煎 煮S次，将3次提取液混合在一起，用纱布过滤，再用旋转蒸发仪于45°C、110巧m浓缩浸提 液至原体积的1%，冷冻干燥后备用。将苦参切成小块后放入瓶中加入75%乙醇浸泡72 小时后用旋转蒸发仪于50°C将浸提液浓缩至无醇味，冷冻干燥至粉末后备用。
[0020] (3)组方药物的抗菌活性评价
[0021] ①组方药物稀释液的制备：组方药材的将独一味、纤毛婆婆纳、松萝冻干粉按1:6 的比例用二甲基亚讽稀释，得药物浓度为0. 167g/mL;苦参按1:2的比例稀释成浓度为 0. 5g/mL。最后将药物过滤除菌，备用。
[0022] ②实验菌株的选择：为保证抗菌活性评价的准确性和重现性，本专利项目选择14 种标准菌株进行研究，菌株包括维氏气单胞菌CGMCC3700、大肠杆菌ATCC25922、铜绿假单 胞杆菌CGMCCPa3、普通变形杆菌CGMCC1. 491、肺炎克雷伯氏菌CGMCC1. 1062、频疾志贺氏菌 CGMCC1. 1869、中间耶尔森氏菌CGMCC1. 6197、肠沙口氏菌肠亚种CGMCC1. 10754、粘质沙雷 氏菌CGMCC1. 4256、金黄色葡萄球菌ATCC25913、粪肠球菌ATCC25912、尿肠球菌ATCC35667、 阪崎肠杆菌CGMCC1. 6765、阴沟肠杆菌阴沟亚种CGMCC1. 2022。
[0023] ③微量稀释法测定组方药物抗菌效果
[0024] 实验步骤及结果判定参考标准美国临床实验室标准化委员会（NC化巧推荐的微 量肉汤稀释法操作程序进行。试验结果如表1所示：从表中可W看出，松萝和苦参对大多 数实验菌株的抗菌活性较强，而纤毛婆婆纳的抗菌活性最弱；其中松萝对CGMCC1. 1869、 ATCC35667XGMCC1. 6197和ATCC25912的抗菌活性比其他10种实验菌株强；与其他菌株的 MIC值相比，苦参对ATCC25913、CGMCC1. 1869、ATCC35667、CGMCC1. 6197 和ATCC25912 抗菌 活性较强。
[00巧]表1微量稀释法药敏试验结果（单位：mg/血）
[0026]
[0028] ④纸片法测定组方药物抗菌效果
[0029] 实验步骤及结果判定参考标准美国临床实验室标准化委员会（NC化巧推荐的纸 片法操作程序进行。试验结果如表2所示：从表中可W看出，除了CGMCC1. 1062外，针对同 一菌株，松萝和苦参对大多数菌株的抗菌活性比纤毛婆婆纳和独一味强；而对同一药物来 讲，其抗菌活性与稀释法的结果基本一致。
[0030] 表2纸片法药敏试验结果（单位：mm)
[0031]
[0033] (4)止泻散组方优化
[0034] 采用正交设计法对藏兽医止泻散组方进行优化，通过U(34)设计表对实验数据进 行分析，得到藏兽药止泻散的最优组方为：A化即3。
[0035] 表3止泻散组方配伍设计
[0036]
[0037] 妨止泻散散剂LD加测定
[0038] 按药物浓度组距为0. 8的梯度设置不同剂量组，采用改良寇氏法进行LDs。测定，评 价止泻散的毒性大小。试验结果测得LDs。=0.595g/血。
[0039] (6)止泻散散剂对布利丹沙口氏菌3733株复制细菌腹泻的治疗效果评价
[0040] 将布利丹3733菌液用生理盐水稀释至1XIO8CFlVmU按照0. 2ml/10g体重的量给 实验小鼠腹腔注射菌液，然后根据LDw设定高、中和低剂量组，分别按照0. 2ml/10g体重的 标准连续口服给药止泻散煎剂7天，重点观察小鼠的排便次数和腹泻情况等各种反应。同 时设立对照组，W生理盐水代替药物。在腹腔注射菌液后，各组小鼠均表现出腹泻症状，且 食欲降低。给药后，小鼠的腹泻情况如表4所示，从中可W看出，药物的止泻效果与剂量呈 现一定的量效关系；与对照组相比，各剂量组的止泻率均高于对照组，且差异性显著。
[0041] 表4止泻散止泻效果统计
[0042]
[0043]W上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技 术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明 本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，运些 变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及 其等效物界定。
【主权项】
1. 一种藏兽药止泻散，其特征在于：所述的止泻散组份为苦参、纤毛婆婆纳、松萝和独 一味。2. -种藏兽药止泻散的研制方法，包括以下步骤： 1) 、采集和炮制苦参、纤毛婆婆纳、松萝和独一味四种药材； 2) 、将四种药材经切块或粉碎过筛后按一定比例加入75%乙醇浸泡一 段时间后将提取液浓缩、冷冻干燥成粉末备用； 3) 、组方药物稀释液的制备：将独一味、纤毛婆婆纳和松萝冻干粉分别按质量比例为 1:6用二甲基亚砜稀释，得药物浓度为0. 167g/mL，苦参按1:2的比例用二甲基亚砜稀释成 浓度为〇. 5g/mL，最后将药物过滤除菌； 4) 、采用微量稀释法和纸片法评价止泻散及其组方药材对14种标准菌株的抗菌活性； 5) 、采用L9(34)正交设计优化四个组方药物的配伍组合，确定其最佳组合； 6) 、按药物浓度组距为0. 8的梯度设置不同剂量组，测定组方药物的LD5。。3. 根据权利要求2所述的一藏兽药止泻散的研制方法，其特征在于：步骤2)中将独一 味和纤毛婆婆纳分别用中药粉碎机中粉碎，过40目筛后取1000g，按1:10比例加入75%乙 醇浸泡3天后将提取液浓缩、冷冻干燥成粉末备用；苦参切成小块后放入瓶中加入75%乙 醇，常温下浸提48小时，倒出浸提液后再浸提2次，浓缩提取液，将提取物冷冻干燥成粉末 备用；将松萝剪成小段，于45°C煎煮三次，将3次提取液混合在一起，用纱布过滤，再用旋转 蒸发仪于45°C、1lOrpm浓缩浸提液至原体积的1 %，冷冻干燥后备用。将苦参切成小块后放 入瓶中加入75%乙醇浸泡72小时后用旋转蒸发仪于50°C将浸提液浓缩至无醇味，冷冻干 燥至粉末后备用。
【专利摘要】一种藏兽药止泻散及其研制方法，属于藏兽药止泻散研制方法领域。本发明研制方法包括以下步骤：采集苦参、纤毛婆婆纳、松萝和独一味四种药材；将四种药材经切块或粉碎过筛后按一定比例加入75％乙醇浸泡一段时间后将提取液浓缩、冷冻干燥成粉末备用；组方药物稀释液：将独一味、纤毛婆婆纳、松萝冻干粉分别按质量比例为1:6用二甲基亚砜稀释，得药物浓度为0.167g/mL，苦参按1:2的比例用二甲基亚砜稀释成浓度为0.5g/mL，最后将药物过滤除菌；选择多种一定数量的标准菌株用微量稀释法和纸片法评价其抗菌活性；采用L9(34)正交设计优化四个组方药物的配伍组合，确定其最佳组合；按药物浓度组距为0.8的梯度设置不同剂量组，测定组方药物的LD50。
【IPC分类】A61P31/04, A61K36/80, A61K9/14, A61P1/12
【公开号】CN105343289
【申请号】CN201510867397
【发明人】陈朝喜, 汤承
【申请人】西南民族大学
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年12月1日