一种用于利尿的中药泽泻组分的组合物及应用
【专利摘要】本发明涉及中药制备技术领域，具体涉及一种用于利尿的中药泽泻组分的组合物及应用，所述用于利尿的中药泽泻组分的组合物，包括如下重量份的泽泻组分组成：23?乙酰泽泻醇B为1.08?10.91份，泽泻醇B为0.22?6.41份，24?乙酰泽泻醇A为0.37?4.02份，泽泻醇A为0.17?1.41份和23?乙酰泽泻醇C为0.21?1.62份。本发明的有益效果在于：本发明的用于利尿的中药泽泻组分的组合物的配伍以中医学理论为指导，利用组分配伍的原则，组分配伍合理，从而解决了泽泻中三萜类成分纯化复杂，产率较低，不能较好的发挥泽泻利尿的功效的技术问题，减少用量，提高其利尿活性，为进一步开发出具有显著疗效的泽泻利尿组合新药奠定基础。
【专利说明】
一种用于利尿的中药泽泻组分的组合物及应用
技术领域
[0001] 本发明涉及中药制备技术领域，具体涉及一种用于利尿的中药泽泻组分的组合物 及应用。
【背景技术】
[0002] 泽泻（Alismatis Rhizoma)为泽泻科植物泽泻Alisma orientale(Sam. )Juzep.的 干燥块茎。性甘、淡，寒。归肾、膀胱经。泽泻自古以来都是利水渗湿的常用药，用于小便不 利，水肿胀满，泄泻尿少。通过对泽泻利尿活性不同部位筛选研究，表明泽泻中的泽泻三萜 类成分是其利尿活性的物质基础，并且泽泻的利尿作用可能与其内部构成比有关。
[0003] 中药组分配伍以中医学理论为指导，从临床出发，遵循传统方剂配伍理论与原则， 保持新模式配伍方剂的中医特色，通过严谨规划，针对有限适应证，以组效关系为基础，采 用现代药理学方法进行有效成分剂量的最佳配伍研究，最终确定组成和剂量，成为组分清 楚的现代复方。中药组分配伍实现的基本方法包括方剂组分配伍、单味药组分配伍、标准物 质组分配伍等。
[0004] 泽泻中三萜类成分纯化复杂，产率较低，不能较好的发挥泽泻利尿的功效，因此， 需对泽泻的利尿效应进行有效筛选优化，从而提高减少用量，提高其利尿活性。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是:提供一种用于利尿的中药泽泻组分的组合物及应 用。
[0006] 为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为:本发明提供的技术方案为提 供一种用于利尿的中药泽泻组分的组合物，包括如下重量份的泽泻组分组成:23_乙酰泽泻 醇B为1.08-10.91份，泽泻醇B为0.22-6.41份，24-乙酰泽泻醇A为0.37-4.02份，泽泻醇A为 0.17-1.41份和23-乙酰泽泻醇C为0.21-1.62份。
[0007] 优选的，上述用于利尿的中药泽泻组分的组合物，由以下重量份的泽泻组分组成： 7.4份23-乙酰泽泻醇B，4.4份泽泻醇B，2.0份24-乙酰泽泻醇A，1.4份泽泻醇A和1.1份23-乙 酰泽泻醇C。
[0008] 本发明的另一技术方案为提供一种上述用于利尿的中药泽泻组分的组合物在用 于制备利尿药物中的应用。
[0009] 本发明的又一技术方案为提供一种药物组合物，包括医药学上可接受的载体和治 疗有效量的上述用于利尿的中药泽泻组分的组合物。
[0010]优选的，上述的药物组合物中，所述药物组合物为片剂胶囊、滴丸或颗粒剂。
[0011]本发明的有益效果在于:本发明的用于利尿的中药泽泻组分的组合物的配伍以中 医学理论为指导，利用组分配伍的原则，组分配伍合理，从而解决了泽泻中三萜类成分纯化 复杂，产率较低，不能较好的发挥泽泻利尿的功效的技术问题，减少用量，提高其利尿活性， 为进一步开发出具有显著疗效的泽泻利尿组合新药奠定基础。
【附图说明】
[0012]图1为本发明【具体实施方式】的实施例2中的泽泻不同化学部位HPLC分析图；
[0013]图2为本发明【具体实施方式】的实施例2中的泽泻不同化学部位HPLC分析图。
【具体实施方式】
[0014] 为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附 图予以说明。
[0015] 本发明最关键的构思在于:本发明的23-乙酰泽泻醇B、泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A、 泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇C是泽泻利尿作用的主要药效成分，并且其在比例7.4:4.4: 2.0: 1.4:1.1的时候利尿效果最佳。
[0016] 实施例1
[0017] 一种用于利尿的中药泽泻组分的组合物，包括如下重量份的泽泻组分组成：23_乙 酰泽泻醇B为1.08份，泽泻醇B为0.22份，24-乙酰泽泻醇A为0.37份，泽泻醇A为0.17份和23-乙酰泽泻醇C为0.21份。
[0018] -种用于利尿的中药泽泻组分的组合物，包括如下重量份的泽泻组分组成:7.4份 23-乙酰泽泻醇B，4.4份泽泻醇B，2.0份24-乙酰泽泻醇A和1.4份泽泻醇A和1.1份23-乙酰泽 泻醇C。
[0019] 一种用于利尿的中药泽泻组分的组合物，包括如下重量份的泽泻组分组成：23_乙 酰泽泻醇B为10.91份，泽泻醇B为6.41份，24-乙酰泽泻醇A为4.02份，泽泻醇A为1.41份和 23-乙酰泽泻醇C为1.62份。
[0020] -种药物组合物，包括医药学上可接受的载体和治疗有效量的上述用于利尿的中 药泽泻组分的组合物。所述药物组合物可为片剂胶囊、滴丸或颗粒剂。
[0021] 上述泽泻组分的制备：
[0022] 泽泻提取物的制备：采用85%乙醇10、8倍量回流提取2次，每次提取lh。浓缩过 D101大孔吸附树脂，先用水洗脱4BV，再用40%乙醇以洗脱6BV除去非萜类成分、富集泽泻三 萜用80%乙醇洗脱8BV，减压回收至浸膏即得。
[0023] 取适量泽泻提取物经色谱分离纯化，分别接收23-乙酰泽泻醇C，泽泻醇A，24_乙酰 泽泻醇A，泽泻醇B 23-乙酰泽泻醇B的馏分，获得23-乙酰泽泻醇B、泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇 A、泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇C5种单体，纯度经HPLC验证达98.5 %。
[0024] 实施例2本发明用于利尿的中药泽泻组分的组合物的分析
[0025] 采用大鼠代谢笼法研究泽泻的利尿作用，包括泽泻利尿活性部位筛选、利尿药效 的组分优化和验证3个步骤。在筛选出三萜类成分是其利尿药效物质基础上，遵循组分配伍 研究设计，采用均匀设计法，以尿量为主要药效指标，进一步研究泽泻主要三萜组分配伍的 利尿作用。
[0026] (1)泽泻利尿活性部位筛选
[0027] 1、药品制备
[0028] a、氢氯噻嗪药液制备：取氢氯噻嗪(HCTZ)片5片（规格25mgX100)研磨成细粉，用 2%吐温-80配制成浓度为0.5mg · ml/1药液，备用。
[0029] b、泽泻水溶性部位的制备：称取泽泻粉末(60目）70g，6倍量水回流提取3次，合并 提取液，减压浓缩用2%吐温-80制成200mg · ml/1 (换算成生药材量），即得。
[0030] C、泽泻脂溶性部位的制备:称取泽泻粉末(40目）70g，依次用6倍量石油醚、乙酸乙 酯、正丁醇各超声提取3次，每次lh。分别将石油醚提取液、乙酸乙酯提取液、正丁醇提取液 进行抽滤，减压浓缩至溶剂被完全回收。将所得浸膏分别用2%吐温-80制成100mg.ml/ 1(换 算成生药材量)溶液，即得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0031] 2、泽泻不同部位利尿活性筛选
[0032] SD大鼠适应性喂养一周。实验前禁食12h，每只大鼠按20mL · kg<灌服生理盐水，收 集2h尿液，选用尿量达灌服量的40%以上水负荷者为合格动物。筛选出水负荷尿量合格的 48只动物，随机分为正常对照组、水提物组（100mg · mL-4、石油醚部位组（100mg · mL-4、乙 酸乙酯部位组（l〇〇mg · mL-〇、正丁醇部位组（100mg · mL-4和氢氯噻嗪组(0.5mg · mL-每 组8只，模型筛选完30min后按10mL · kg"1体重分别灌胃相应剂量药物溶液(相当于生药2g · kg-1体重），立即放入代谢笼内（每笼1只）。连续收集6h。记录各组每只动物的尿量，计算每组 6h总排尿量。结果见表1:泽泻不同极性部位对水负荷大鼠的排尿影响（?±χ，雄性，n = 8)。
[0033] 表 1
[0034]
[0035] 注：与正常对照组相比，林P〈0 · 01
[0036] 3、泽泻不同化学部位的成分分析
[0037]取泽泻不同部位灌胃给药样品l.OmL到5mL容量瓶，加乙腈至刻度定容后，摇匀， 12000rpm离心，过滤0.22μπι滤膜，精密吸取20yL进样HPLC分析，色谱条件如下：采用 Ultimate XB-C18色谱柱（4.6mmX 150mm，5μηι)，流动相为乙腈(A)-水(B)，梯度洗脱（0~ 5min，35-35%A;5~20min，35~55%A;20~35min，55~65%A;35~45min，65~75%A;45~ 55min，75~85%A;55~65min，85~85%A)，流速lmL · min-S检测波长为208nm、245nm，柱温 30度，经过与三萜标品比对，可知，利尿活性部位乙酸乙酯和正丁醇部位中的萜类成分含量 较高，尤其乙酸乙酯部位，三萜类含量最高，并且其中最主要的三萜类成分为23-乙酰泽泻 醇C、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B，见图1和图2，图1为泽泻不同化 学部位HPLC分析图；（208nm)图2泽泻不同化学部位HPLC分析图；（245nm) 〇 [0038] 4、三萜类成分的利尿作用进一步验证
[0039] a、泽泻三萜提取物的制备：采用85%乙醇10、8倍量回流提取2次，每次提取lh。浓 缩过D101大孔吸附树脂，先用水洗脱4BV，再用40%乙醇以洗脱6BV除去非萜类成分、富集泽 泻三萜用80%乙醇洗脱8BV，减压回收至浸膏即得，取泽泻三萜浸膏适量，精密称定，用2% 吐温-80配制成浓度50mg · mL-\100 mg · mL-\200mg · mL-1(换算成生药材量）的灌胃液备 用。
[0040] b、泽泻5个主要三萜制备:取适量泽泻提取物采用在高压制备液相色谱仪进行分 离，分别接收23-乙酰泽泻醇C，泽泻醇A，24-乙酰泽泻醇A，泽泻醇B23-乙酰泽泻醇B的馏分。 其他馏分用旋转蒸发仪去除溶剂后，得扣除5个三萜成分后的残留提取物，将5种三萜的组 合物和制备残留物(缺少5个色谱峰)换算成生药量100mg · ml/1的灌胃液备用。
[0041] C、三萜类成分的利尿作用:对泽泻三萜提取物、5种三萜的组合物和制备残留物进 行采用"2泽泻不同部位利尿活性筛选"下相同的水负荷大鼠模型进行验证，计算每组6h总 排尿量。结果见表2(泽泻提取物对水负荷大鼠的排尿影响（^土、雄性，n = 8))。从中可以看 出泽泻发挥利尿功效作用的主要是其三萜类成分，并且其主要利尿组分是5种主要三萜类 成分:23-乙酰泽泻醇C、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B，残留提取物 组利尿活性不明显。
[0042] 表 2
[0043]
[0044] 注:与正常对照组相比，#P〈0.01
[0045] (2)利尿药效的组分优化
[0046] 丨、药品制备
[0047] a、泽泻组分给药样品制备:泽泻三萜提取物经色谱分离纯化，获得23-乙酰泽泻醇 B、泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇C5种单体，纯度经HPLC验证达 98.5%以上，分别精密称取各单体粉末适量，用2%吐温-80,配制成如表3(5因素 8水平的均 匀设计实验）中8组不同浓度的灌胃液。设计出5因素8水平的均匀设计，以大鼠尿量为药效 指标优化出最佳利尿组合。
[0048] b、氢氯噻嗪药液制备：取氢氯噻嗪(HCTZ)片5片（规格25mgX100)研磨成细粉，用 2%吐温-80配制成浓度为0.511^.1111/1药液，备用。
[0049]表 3
[0050]
[0051] 2、利尿实验
[0052] SD大鼠适应性喂养一周。实验前禁食12h，每只大鼠按20mL · kg-1灌胃生理盐水，收 集2h尿量，选用尿量达灌胃量的40%以上水负荷者为合格动物。筛选出水负荷尿量合格的 72只动物，随机分为空白对照组、氢氯噻嗪组、均匀设计1-8(N1-N8)泽泻基质空白组(不含 23-乙酰泽泻醇B，泽泻醇B，24-乙酰泽泻醇A，泽泻醇和23-乙酰泽泻醇C)，每组8只。各组动 物禁食12h(不禁水）后，按20mL · kg^1给予生理盐水，形成盐水负荷模型。挤压膀胱排尽余 尿，按20mL · kg"1分别灌胃相应的药液，空白对照组给予等量的2%吐温-80。给药后，将大鼠 立刻置于代谢笼内，每lh记录1次累积尿量，记录6h，计算6h总尿量。
[0053] 3、统计学方法
[0054] 计量资料以表示，采用SPSS18.0软件对实验数据进行分析;组间比较采用单 因素方差分析。P〈〇. 05有统计学意义。
[0055] 4、结果
[0056] 通过DPS(14.5)设计均匀设计表，该均匀设计表的中心化偏差⑶=0.3267，开展5 因素8水平的均匀设计实验(见表4-5因素8水平的均匀设计实验）。通过DPS软件对数据进行 偏最小二阶乘回归分析分析，得到回归方程
[0057] y = 8.6111-0.004854x1-0.004885x2-0.02631x3-0.0178x4-0.028279x5 + 0. ΟΟΟΟΟδχι X X2+0. 〇〇〇〇65χι X X3+0 . 〇〇〇〇21χι X X4+0 . 〇〇〇〇26χι X X5+0.000033x2 X X3+ 0 · 000054x2 X X4+0 · 000043x2 X X5+0 · 000121x3 X X4+0 · 000338x3 X X5+0 · 000174x4 X X5。
[0058] 其中xl: 23-乙酰泽泻醇B; x2:泽泻醇B; x3:24乙酰泽泻醇A; x4:泽泻醇A; x5:23-乙 酰泽泻醇C。方程相关系数R2 = 0.9558。
[0059] 经计算软件给出的最优组合23-乙酰泽泻醇B:泽泻醇B: 24-乙酰泽泻醇A:泽泻醇 A:23-乙酰泽泻醇C(7.4:4.4:2.0:1.4:l.lmg · kg-〇
[0060] 表 4
[0061]
[0063] 注:*与空白组相比？〈0.05，#与空白组相比？〈0.01。
[0064] (3)利尿药效的组分优化验证
[0065] 对软件给出的最优组合23-乙酰泽泻醇B:泽泻醇B:24-乙酰泽泻醇A:泽泻醇A:23-乙酰泽泻醇C(7.4:4.4:2.0:1.4:1. lmg · kg-1)进行同样模型的大鼠利尿活性验证，按照表5 最优组合及验证结果中各浓度进行3次验证，结果该方程可信度较高，且预测的最优组合与 尿量期望值接近。
[0066] 表 5
[0067]
[0068] 注与空白组相比P〈0.01。
[0069] 实施例3本发明用于利尿的中药泽泻组分的组合物的制备及验证
[0070] 1、物品
[0071] 1.1试药
[0072] 泽泻购于福建省建瓯市GAP生产基地，氢氯噻嗪(批号A120804,山西云鹏制药有限 公司），吐温_80(批号20120320,天津市福晨化学试剂厂）。
[0073] 1.2仪器
[0074] RE-2000旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；大鼠代谢笼（意大利TECNIPLAST公 司）；BS-3000A系列电子天平(上海友声衡器有限公司）；YP202N分析天平(上海精密科学仪 器有限公司）；HC-9885电解质分析仪(深圳市航创医疗设备有限公司）。
[0075] 1.3实验动物
[0076]清洁级雄性SD大鼠100只，体重240~260g，（由上海斯莱克公司提供，合格证为： SCXK(沪）2012-0002 )。
[0077] 2、方法
[0078] 2.1供试品制备
[0079]泽泻三萜提取物的制备:采用85%乙醇10、8倍量回流提取2次，每次提取lh。浓缩 过D101大孔吸附树脂，先用水洗脱4BV，再用40%乙醇以洗脱6BV除去非萜类成分、富集泽泻 三萜用80%乙醇洗脱8BV，减压回收至浸膏即得，取泽泻三萜浸膏适量，精密称定，用2%吐 温-80配制成浓度50mg · mL-\100 mg · mL-\200mg · mL-1(换算成生药材量)的灌胃液备用。
[0080] 2.2泽泻5个主要三萜制备:取适量泽泻提取物经色谱分离纯化，分别接收23-乙酰 泽泻醇C，泽泻醇A，24-乙酰泽泻醇A，泽泻醇B 23-乙酰泽泻醇B的馏分，获得23-乙酰泽泻醇 B、泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇C5种单体，纯度经HPLC验证达 98.5%。其他馏分用旋转蒸发仪去除溶剂后，得扣除5个三萜成分后的残留提取物作为泽泻 基质，按生药量l〇〇mg · ml/1配制成灌胃液备用。23-乙酰泽泻醇B:泽泻醇B:24-乙酰泽泻醇 A:泽泻醇A: 23-乙酰泽泻醇C(7.4:4.4:2.0:1.4:1. lmg · kg-1)组合制成灌胃液备用。
[0081] 2.3利尿实验
[0082] SD大鼠适应性喂养一周。实验前禁食12h，每只大鼠按20mL · kg<灌胃生理盐水，收 集2h尿量，选用尿量达灌胃量的40%以上水负荷者为合格动物。筛选出水负荷尿量合格的 72只动物，随机分为空白对照组、氢氯噻嗪组、均匀设计1-8(N1-N8)泽泻基质空白组(不含 23-乙酰泽泻醇B，泽泻醇B，24-乙酰泽泻醇A，泽泻醇和23-乙酰泽泻醇C)，每组8只。各组动 物禁食12h(不禁水）后，按20mL · kg^1给予生理盐水，形成盐水负荷模型。挤压膀胱排尽余 尿，按20mL · kg"1分别灌胃相应的药液，空白对照组给予等量的2%吐温-80。给药后，将大鼠 立刻置于代谢笼内，每lh记录1次累积尿量，记录6h，计算6h总尿量。
[0083] 表6泽泻组分混合利尿结果
[0084]
[0086] 注：*与空白组相比P〈0.05，**与空白组相比P〈0.01，*P〈0.05，**P〈0.01， significantly different Compared with controls。
[0087] 综上所述，本发明的23-乙酰泽泻醇B、泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇A、23-乙 酰泽泻醇C是泽泻利尿作用的主要药效成分，并且其在比例7.4:4.4:2.0:1.4:1.1的时候利 尿效果最佳。
[0088] 以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发 明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括 在本发明的专利保护范围内。
【主权项】
1. 一种用于利尿的中药泽泻组分的组合物，其特征在于，包括如下重量份的泽泻组分 组成：23-乙酰泽泻醇B为1.08-10.91份，泽泻醇B为0.22-6.41份，24-乙酰泽泻醇A为0.37-4.02份，泽泻醇A为0.17-1.41份和23-乙酰泽泻醇C为0.21-1.62份。2. 根据权利要求1所述用于利尿的中药泽泻组分的组合物，其特征在于，由以下重量份 的泽泻组分组成:7.4份23-乙酰泽泻醇B，4.4份泽泻醇B，2.0份24-乙酰泽泻醇A，1.4份泽泻 醇A和1.1份23-乙酰泽泻醇C。3. 权利要求1或2任一项所述用于利尿的中药泽泻组分的组合物在用于制备利尿药物 中的应用。4. 一种药物组合物，其特征在于，包括医药学上可接受的载体和治疗有效量的权利要 求1或2任一项所述用于利尿的中药泽泻组分的组合物。5. 根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为片剂胶囊、滴丸 或颗粒剂。
【文档编号】A61P7/10GK105832749SQ201610268323
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年4月27日
【发明人】吴水生, 许文, 赵万里, 张雪, 黄小强, 李小艳
【申请人】福建中医药大学