一种采集小型有尾两栖动物血液的方法
【专利摘要】本发明公开了一种采集小型有尾两栖动物血液的方法，属于动物血液采集技术领域。该方法包括以下步骤：1)固定动物，打开围心腔，充分暴露心脏后剪断动脉干；2)在动脉干剪断处滴加抗凝剂，并用毛细管吸取从动脉干中流出的血液，至停止流出为止。本发明提供的血液采集方法能够实现小型有尾两栖动物的血液采集，克服了现有技术中心脏采血法采不到血或采血量不足的缺陷，能获得较多的血液量(如采集到70～80μL山溪鲵血液)，操作简便、快速。
【专利说明】
一种采集小型有尾两栖动物血液的方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种采集小型有尾两栖动物血液的方法，属于动物血液采集技术领域。【背景技术】
[0002]血液是动物体内一种极其重要的组织，具有多种多样的功能，如运输(氧气、营养和代谢产物)、体液调节、体温调节、防御等。血液学指标受多种因素的影响，如动物种类、生活环境、季节、健康状况、营养状况等的不同均会导致血液学指标的差异，因此血液指标被认为是一个能够反映动物对环境的适应状况、动物自身健康状况及营养状况的重要生理、 病理和毒理学指标。
[0003]现用的两栖动物血液采集方法多为心脏采血法，即将注射器针头扎入动物心脏后抽取血液。这种方法要求动物个体较大，心脏也较大，常用于两栖动物无尾目的蛙类。这些蛙类心脏重量多在〇.4g左右，针头扎入心脏后通过缓慢抽取可以采集到所需的血液。对于个体略小一点的蛙类动物也可采用将心脏剪破后收集血液的方法。
[0004]小型有尾两栖动物是指隶属两栖纲、有尾目的蝾螈类动物，它们个体较小，体长一般不超过30cm。这类动物的心脏多数仅有0.lg左右，直径0.3mm左右，现用的心脏采血法在这类动物中基本不适用，其存在的不足之处主要在于:个体小，心脏小，很难采集到血液，如对山溪鲵进行血液采集时，利用lmL注射器从心脏刺入后根本抽不出血液，而将心脏剪破后虽能采集到血液，但是血液量较少，通常只能采集到10?15此血液，尚不能满足血液学指标测定时对血液量的要求。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种采集小型有尾两栖动物血液的方法，该方法能获得较多的血液量，有效克服现有心脏采血法采血量不足的缺陷，且操作简便。
[0006]为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是:
[0007]—种采集小型有尾两栖动物血液的方法，包括以下步骤:
[0008]1)固定动物，打开围心腔，充分暴露心脏后剪断动脉干；
[0009]2)在动脉干剪断处滴加抗凝剂，并用毛细管吸取从动脉干中流出的血液，至停止流出为止。
[0010]步骤1)中在固定动物之前，需先将动物麻醉。麻醉剂可采用MS-222 (间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐)溶液。
[0011]步骤1)中固定动物的操作为:将动物置于解剖台上，背部朝下，腹面朝上，四肢拉直后用大头针固定在解剖台上。对于体型较小的有尾两栖动物，可利用泡沫板充当解剖台。
[0012]步骤1)中打开围心腔的操作为:动物固定后，用手术剪剪开腹腔，再沿腹中线向上剪，直至打开围心腔;将围心腔两侧的体壁拉开固定在解剖台上，充分暴露出心脏。
[0013]步骤1)中剪断动脉干的操作为:用手术剪将左右动脉干在动脉干与心脏的连接处剪断。
[0014]步骤2)中滴加抗凝剂的原因在于血液易凝固，在动脉干剪断处滴加抗凝剂可防止血液凝固。抗凝剂的种类较多，可选用肝素、水蛭素、柠檬酸钠、氟化钾等，具体可根据测定血液学指标的内容选择相应的抗凝剂。
[0015]步骤2)中毛细管可选用毛细玻璃管。加入抗凝剂后，立即用毛细玻璃管(如20此规格)吸取从动脉干中流出的血液，一根毛细玻璃管吸好后再换另外一根继续吸取，直到最后血液停止流出为止。
[0016]本发明的有益效果:[〇〇17]本发明提供的血液采集方法能够实现小型有尾两栖动物的血液采集，克服了现有技术中心脏采血法采不到血或采血量不足的缺陷，能获得较多的血液量(如采集到70?80y L山溪鲵血液)，操作简便、快速。【具体实施方式】
[0018]下述实施例仅对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
[0019]实施例1
[0020]本实施例中采集山溪鲵血液的方法，包括以下步骤:
[0021]1)麻醉动物:将体重16g的山溪鲵放于MS-222 (间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐)溶液 (浓度0.1%)中进行麻醉；[〇〇22]2)固定动物;将麻醉后的山溪鲵取出，放于泡沫板上(泡沫板大小40cmX 40cm)，背部朝下，腹面朝上，四肢拉直后用长度2cm左右的大头针插透四肢肌肉，然后插入泡沫板中， 将麻醉后的动物固定；[〇〇23]3)打开围心腔:动物固定后，用手术镊子提起腹面的皮肤，并用手术剪剪开腹腔，然后沿腹中线向上剪(头在上尾在下)，直到打开围心腔；[〇〇24]将围心腔两侧的体壁拉开，用长度2cm左右的大头针插透体壁并插入泡沫板中固定体壁，充分暴露出心脏；
[0025]4)剪断动脉干:心脏充分暴露后，用手术剪将左右动脉干在动脉干与心脏连接处将其剪断；
[0026]5)加抗凝剂:吸取一小滴含肝素钠的抗凝剂(浓度1%)，滴加到动脉干剪断处，以防止血液凝固；[〇〇27]6)用20yL的毛细玻璃管吸取从动脉干中流出的血液，一根毛细玻璃管吸好后再换另外一根继续吸取，直到最后血液停止流出为止，共采集到85yL血液。[〇〇28] 实施例2
[0029]本实施例中采集红瘰疣螈血液的方法，包括以下步骤:
[0030]1)麻醉动物:将体重1 lg的红瘰疣螈放于MS-222溶液(浓度0.1 % )中进行麻醉；
[0031]2)固定动物;将麻醉后的红瘰疣螈取出，放于泡沫板上(泡沫板大小40cmX 40cm)， 背部朝下，腹面朝上，四肢拉直后用长度2cm左右的大头针插透四肢肌肉，然后插入泡沫板中，将麻醉后的动物固定；[〇〇32]3)打开围心腔:动物固定后，用手术镊子提起腹面的皮肤，并用手术剪剪开腹腔，然后沿腹中线向上剪(头在上尾在下)，直到打开围心腔；
[0033]将围心腔两侧的体壁拉开，用长度2cm左右的大头针插透体壁并插入泡沫板中固定体壁，充分暴露出心脏；
[0034]4)剪断动脉干:心脏充分暴露后，用手术剪将左右动脉干在动脉干与心脏连接处将其剪断；
[0035]5)加抗凝剂:吸取一小滴含肝素钠的抗凝剂(浓度1%)，滴加到动脉干剪断处，以防止血液凝固；[〇〇36]6)用20yL的毛细玻璃管吸取从动脉干中流出的血液，一根毛细玻璃管吸好后再换另外一根继续吸取，直到最后血液停止流出为止，共采集到70yL血液。
【主权项】
1.一种采集小型有尾两栖动物血液的方法，其特征在于:包括以下步骤:1)固定动物，打开围心腔，充分暴露心脏后剪断动脉干；2)在动脉干剪断处滴加抗凝剂，并用毛细管吸取从动脉干中流出的血液，至停止流出 为止。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤1)中在固定动物之前，先将动物麻醉， 麻醉剂采用MS-222溶液。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤1)中固定动物的操作为:将动物置于 解剖台上，背部朝下，腹面朝上，四肢拉直后用大头针固定在解剖台上。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤1)中打开围心腔的操作为:动物固定 后，用手术剪剪开腹腔，再沿腹中线向上剪，直至打开围心腔;将围心腔两侧的体壁拉开固 定在解剖台上，充分暴露出心脏。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤1)中剪断动脉干的操作为:用手术剪 将左右动脉干在动脉干与心脏的连接处剪断。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述抗凝剂选自肝素、水蛭素、柠檬酸钠、氟化钾。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤2)中毛细管为毛细玻璃管。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于:加入抗凝剂后，立即用毛细玻璃管吸取从 动脉干中流出的血液，一根毛细玻璃管吸好后再换另外一根继续吸取，直到最后血液停止 流出为止。
【文档编号】A61D3/00GK105943062SQ201610390970
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年6月2日
【发明人】熊建利, 刘秀英, 张亚男, 孙原野, 闵遥
【申请人】河南科技大学