一种用于治疗骨关节疾病的苗药制剂及其制备方法和应用
【专利摘要】本发明公开了一种用于治疗骨关节疾病的苗药制剂，按照重量份数计，由以下原料药制成：当归1～7份、藏红花1～3份、川穹1～4份、杜仲1～3份和血滕1～3份。还公开了其制备方法。本发明提供的一种用于治疗骨关节疾病的苗药制剂，能够有效治疗骨关节疾病。本发明的用于治疗骨关节疾病的苗药制剂具有明显的降低IL－1β表达作用和降低TNF－α表达作用，从而抑制炎症反应，保护软骨组织。本发明的苗药制剂可以有效治疗颈椎病，疗效较好，具有补益肝肾，强筋壮骨，胜湿祛风，活血通络之功效。还可以有效抑制神经病理性疼痛。本发明的制备方法简单易操作，条件温和易控制，制备时间短，成本低，易于大规模生产。
【专利说明】
-种用于治疗骨关节疾病的苗药制剂及其制备方法和应用
技术领域
[0001 ]本发明设及一种王敷灵苗药制剂及其制备方法和应用，具体属于苗药技术领域。
【背景技术】
[0002] 在交通不便的年代，苗族人生活在山区要负重翻山越岭，常年在田里劳作，女人长 期埋头刺绣，造成很多颈、腰椎和膝关节不同程度损伤的病人。颈椎病是由于颈椎间盘退行 性变、颈椎骨质增生所引起的一系列临床症状的综合征。可发生于任何年龄，近年来不少年 轻人甚至中小学生也患上了此类疾病，而且发病年龄明显趋向年轻化。颈椎病是一种职业 病，发病率高，治疗时间长，治疗后极易复发。颈椎病由于慢性发展的特点，最初的颈肩僵 硬、胀痛、麻木等症状严重影响工作、生活，如不及时治疗，重则会发展为失眠、失聪甚至擁 痕，丧失生活的自理能力。
[0003] 骨性关节炎是一种中老年人常见的W软骨退行性变和继发骨质增生为主的慢性 退行性骨关节病，国内外骨性关节炎总患病率约15%，60岁W上达50%，而75岁W上人群中 80% W上患有骨性关节炎。骨关节疾病对人类的威胁正在迅速增加，然而长期W来，对于骨 关节疾病的研究及治疗，一直未能找到真正有效的方法。因此，研究一种用于治疗骨关节疾 病的苗药制剂，显得尤为必要。
【发明内容】
[0004] 为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种王敷灵苗药制剂及其制备方 法和应用，该制剂能够有效治疗骨关节疾病，制备方法简单。
[0005] 为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
[0006] -种王敷灵苗药制剂，按照重量份数计，由W下原料药制成：当归1~7份、藏红花1 ~3份、川寫1~4份、杜仲1~3份和血滕1~3份。
[0007] 进一步地，前述王敷灵苗药制剂，按照重量份数计，由W下原料药制成：当归4份、 藏红花2份、川寫3份、杜仲2份和血滕2份;所述制剂为外用制剂。
[000引前述王敷灵苗药制剂，是将药液滴于敷贴药垫上制得的贴剂。
[0009] -种王敷灵苗药制剂的制备方法，包括W下步骤:按重量比例称取当归，藏红花， 川寫，杜仲和血滕，分别用水洗净，阴干，切片;将切片的原料药混合后加入乙醇溶液，加热 回流提取1~3次，过滤，合并提取液得到药液，维持药液中乙醇的体积浓度，再将药液制做 成外用制剂即得。优选的，切片的原料药的厚度为0.1~1cm。
[0010] 前述王敷灵苗药制剂的制备方法，具体包括W下步骤:按重量比例称取当归，藏红 花，川寫，杜仲和血滕，分别用水洗净，阴干，切片;将切片的原料药混合后加入体积分数为 20 %~90 %的乙醇溶液，在20°C~95 °C加热回流提取1~3次，过滤，合并提取液得到药液， 维持药液中乙醇的体积浓度为40%~60%，再将药液制做成贴剂即得。维持药液中乙醇的 体积浓度为40%~60%，可W使得药效成分保持稳定，不易变质，从而保证疗效。
[0011] 前述王敷灵苗药制剂的制备方法中，取药液0.5~2mL滴于1~5cm2的敷帖药垫上， 即得贴剂。
[0012] 前述王敷灵苗药制剂的制备方法中，敷贴药垫通过W下方法制备:将胶水均匀涂 布在无纺布上，加热挥发胶水中溶剂，再将消毒后的棉花贴到涂胶无纺布的中屯、区域，备 用;取质量分数为2%~10%的天竺葵色素水溶液0.5mL~1.5mL，均匀涂布到中屯、区域的棉 花上，随后再在棉花上面放置离型纸或离型膜即得。本发明敷贴药垫中加入了天竺葵色素， 使用时与药液结合，能更好地促进药液被机体吸收，从而产生更好的疗效。本发明贴剂贴穴 位具有更好的疗效。
[0013] 前述王敷灵苗药制剂的制备方法中，原料药混合后加入乙醇溶液时，按照质量比， 混合后原料药:乙醇溶液= 1:6~20。
[0014] 前述王敷灵苗药制剂的制备方法中，加热回流提取时间为每次0.化~化。
[0015] -种王敷灵苗药制剂在制备治疗骨关节疾病药物中的应用，特别是在制备治疗颈 椎病药物、制备治疗神经病理性疼痛药物或者制备治疗膝骨性关节炎药物中的应用。
[0016] 本发明王敷灵苗药制剂是一种可W用于治疗骨关节疾病的苗药制剂，是由当归， 藏红花，川寫，杜仲和血滕药材组成的复方制剂，能够有效治疗骨关节疾病，尤其是治疗膝 骨性关节炎、动力失衡颈椎病、腰5脊神经结扎引起的神经病理性疼痛等多种疾病。
[0017] 方中当归:补血，活血，调经止痛，藏红花:活血，桂疲，止痛。当归、藏红花二味药物 共为君药。川寫：活血行气，桂风止痛，为处方中臣药。杜仲:补益肝肾、强筋壮骨、调理冲任， 为处方中佐药。血滕:补血，活血，通络，为处方中使药。
[0018] 为了确保本发明制剂的科学、合理、有效，发明人进行了一系列实验。
[0019] 一、筛选实验
[0020] 1、提取时乙醇浓度的筛选
[0021] W处方中主药当归的药效成分阿魏酸和蔓本内醋，W及藏红花的药效成分径基黄 色素 A含量为评价指标，对不同乙醇浓度进行筛选，结果见表1。由表1可知，提取时，随着乙 醇浓度从10%上升到100%，阿魏酸、蔓本内醋和径基黄色素 A的含量有显著性差异;而乙醇 浓度从20%-90%，阿魏酸、蔓本内醋和径基黄色素 A的含量变化不大，无统计学差异，且明 显高于10%和100%，因此，本发明中原料药混合后加入体积分数为20%-90%的乙醇。
[0022] 表1不同乙醇浓度筛选结果表
[0023]
[0024] 2、提取溫度的筛选
[0025] W处方中主药当归的药效成分阿魏酸和蔓本内醋，W及藏红花的药效成分径基黄 色素 A含量为评价指标，对不同提取溫度进行筛选，结果见表2。由表2可知，随着提取溫度从 2(TC上升到95Γ，阿魏酸、蔓本内醋和径基黄色素 A的含量变化不大，无统计学差异，因此， 选择提取溫度20-95 °C。
[0026] 表2不同提取溫度筛选结果表
[0027]
[0028] ~3、提取次数的筛选 '
' '
[0029] W处方中主药当归的药效成分阿魏酸和蔓本内醋，W及藏红花的药效成分径基黄 色素 A含量为评价指标，对不同提取次数进行筛选，结果见表3。由表3可知，随着提取次数从 1次上升到3次，阿魏酸、蔓本内醋和径基黄色素 A的含量没有显著性差异，因此，提取次数1- 3次均能满足要求。
[0030] 表3不同提取次数筛选结果表
[0031] '[0032]~二、防治大鼠膝骨性关节炎实验
' '
[0033] 1材料与方法
[0034] 1.1实验动物
[0035] SD大鼠180只，雌雄各半，体重（200±20)g，SPF级，购自长沙天勤生物技术有限公 司，动物许可证号为：SCXK(湘）2014-0011。按照国际实验动物保健和使用指导原则对大鼠 进行饲养，即溫度为25 ± 2 °C，湿度为55 ± 5 %。
[0036] 1.2主要试剂与仪器
[0037] 木瓜蛋白酶（Sigama公司，P3250-5g);化ISA试剂盒（化-10、了^-日），加3日61〇公 司；Quant Reverse Transc;rip1:ase试剂盒，德国Qia-gen公司产品。DU 800分光光度计，美 国Beckman公司产品。
[0038] 1.3动物分组、模型制备及给药
[0039] 180只SD大鼠分为本发明苗药高剂量组、本发明苗药中剂量组、本发明苗药低剂量 组、阳性对照组、空白对照组及模型组，各30只。制备大鼠膝骨性关节炎模型：无菌条件下， 腔水合氯醒麻醉下于双膝关节腔内注射浓度为4 %的木瓜蛋白酶溶液0.2mL，每2d注射1次， 共注射2周。
[0040] 1.4实验动物给药及处理
[0041] 模型制备成功后，每只大鼠按体重贴患处/穴位给药，根据人鼠换算出服药量，每 日2次。空白组用正常大鼠给予蒸馈水贴患处/穴位;模型组用大鼠膝骨性关节炎模型大鼠 给予蒸馈水贴患处/穴位;本发明苗药高剂量组、本发明苗药中剂量组、本发明苗药低剂量 组分别于大鼠膝骨性关节炎模型大鼠患处贴剂量为0.5血、0.25mL、0.125mL的本发明苗药。 阳性对照组剂量为〇.25mL。治疗W2周为1个疗程，6组大鼠分别于模型制作成功给药后14d、 28d、42d分批处理。腹腔麻醉后抽取关节腔灌洗液，置于-80°C保存，后取出双膝关节置于 10%甲醒溶液中保存，待观察与检测。
[0042] 1.5观察指标与方法
[0043] (1)-般情况观察:包括动物毛发光泽度、食量、体重、活动度、步态、精神状况。
[0044] (2)血液流变学测定:动物麻醉后，采用腹腔静脉取血，急送血液流变学测定。
[0045] (3)组织病理学检测：取双侧膝关节，沿中屯、矢状面剖成两半，置于10%甲醒溶液 中1周，经邸TA-2化(pH7.4)脱巧2个月，脱巧后进行常规皿染色。二甲苯透明后石蜡包埋， 肥染色切片观察滑膜，软骨面和细胞结构。
[0046] (4)化-10和TNF-a测定：采用酶联免疫吸附（enzyme-1 inked immunosorbent- assay，ELISA)方法。
[0047] 1.6统计学处理
[004引采用SPSS17.0统计软件进行分析，实验数据均W均数±标准差（占：8 )表示，组间 差异采用两样本均数比较的t检验，WP<0.05为差异有统计学意义。
[0049] 蛹果
[(X)加]2.1动物造模后一般情况观察
[0051]注射木瓜蛋白酶第1天后均出现精神异常，如烦躁或萎靡，反应迟纯，双下肢胀活 动不利。1周后动物体重出现显著差异，本发明苗药组大鼠体重大于其他各组。8周后本发明 苗药组大鼠膝关节肿胀程度及活动度优于其他组。大体解剖发现模型组大鼠膝关节疲血明 显，本发明苗药组大鼠疲血表现较轻。
[0化2] 2.2血液流变学结果
[0化3]用药后30d、60d、90d每组分别处死10只，腹腔静脉取血随机取6个样本测血流变。 ①全血高切比较结果见表4:早期、中期和晚期本发明苗药高剂量组、本发明苗药中剂量组、 本发明苗药低剂量组均可降低全血高切，且效果优于阳性对照组。说明本发明苗药在SD大 鼠膝骨性关节炎各期均有降低全血高切的治疗效果。②血浆黏度比较结果见表5。早期、中 期和晚期本发明苗药高剂量组、本发明苗药中剂量组、本发明苗药低剂量组均可降低血浆 黏度，且效果优于阳性对照组好。表明本发明苗药可降低血浆黏度。③红细胞变形指数比较 结果见表6。早期、中期和晚期本发明苗药高剂量组、本发明苗药中剂量组、本发明苗药低剂 量组均可升高红细胞变形指数，且优于阳性对照组。综上结果表明本发明苗药可改善局部 血液循环。
[0054]表4SD大鼠膝骨性关节炎造模本发明苗药治疗后全血高切的比较
[ο化5]
[0化6] 注:*与模型组比较，Ρ<0.05
[0057]表5SD大鼠膝骨性关节炎造模本发明苗药治疗后血浆黏度的比较 [0化引
[0060] 注:*与模型组比较，Ρ<0.05
[0061] 表6SD大鼠膝骨性关节炎造模本发明苗药治疗后红细胞变形指数的比较
[0062]
[0063] 注与模型组比较，Ρ<0.05
[0064] 2.3组织病理学观察
[0065] 图1是组织病理学切片图。肉眼观察:模型组大鼠膝关节有明显的关节软骨溃瘍、 脱失，关节腔内有淡黄色炎性液体;本发明苗药低、中、高剂量组大鼠关节面光滑，接近空白 组，关节液量少清亮。皿染色:造模后30d，本发明苗药（图1 (a))关节软骨欠光滑，但软骨细 胞分布均匀，排列整齐，各层次清晰，无明显细胞簇集现象，潮线完整;模型组病理切片（图1 (b))上呈典型的软骨受损，软骨面不光滑，部分软骨脱失，软骨细胞排列素乱。造模后60d， 本发明苗药组（图1(c))软骨面平整光滑，滑膜无明显增厚;模型组（图1(d))部分软骨面出 现大片缺失，伴有滑膜炎，滑膜增厚，软骨坏死，软骨下骨硬化。造模后90d，本发明苗药组 (图1(e))软骨面尚光滑，无明显溃瘍、缺失;模型组(图1(f))关节软骨表面坏死，溃瘍形成， 部分缺失，软骨下骨质硬化，偶见股骨囊肿及骨寶生成。
[0066] 2.4关节液中比_10、了肥_曰含量的表达
[0067] 本发明苗药组IL-Ιβ表达明显降低，与模型组比较差异有统计学意义（见表7)。证 明本发明苗药组具有明显的降低IL-Ιβ表达作用，从而抑制炎症反应。本发明苗药组TNF-a 表达明显降低，与模型组比较差异有统计学意义(见表7)。证明本发明苗药组具有明显的降 低TNF-a表达作用，从而抑制炎症反应，保护软骨组织。
[0068] 表7SD大鼠膝骨性关节炎造模本发明苗药治疗后各组关节液中IL-Ιβ和TNF-a表达
[0069]
[0070] 注:*与模型组比较，P<0.05
[0071] Ξ、动力失衡颈椎病模型大鼠实验
[0072] 1实验材料
[0073] 1.1 动物
[0074] SD雄大鼠，SPF级，购自长沙天勤生物技术有限公司，动物许可证号为：SCXK(湘） 2014-0011〇
[0075] 1.2 仪器
[0076] X线机，由北京万东集团生产，型号:新东方1000型。
[0077] 2方法与结果 [007引 2.1造模
[00巧]选取80~lOOg SD雄大鼠80只饲养Ξ月后(体重为350-400g)准备进行手术造模。 用10 %水合氯醒3.5mL/kg腹腔注射麻醉后于颈后部备皮，严格无菌操作，后正中切口长约2 ~3cm，切开皮肤、下皮层，严格止血，然后切断颈阔肌，头、颈、梟最长肌，颈骼肋肌和头半棘 肌，并切除l.OcmW免断端愈合，逐层缝合。假手术组除不切断肌肉群外，其余操作同上。
[0080] 2.2分组与给药
[0081] 造模10周后将成活的60只大鼠（80只中，手术后死亡20只）按体重随机分成6组:假 手术组、模型对照组、颈复康颗粒组（2.33g/kg，临床用量的7倍）、本发明苗药高剂量组 (1.12g/kg，临床用量的14倍）、中剂量组(0.56g/kg，临床用量的7倍）、低剂量组(0.28g/kg， 临床用量的3.5倍），每组10只。各组均为贴患处/穴位，给药体积为lOmL/kg，模型组和假手 术组给予同体积蒸馈水。给药4周后进行指标检测。
[00剧 2.3检测指标
[0083] 2.3.1斜板运动功能
[0084] 将大鼠身体纵轴和斜板纵轴一致，斜板每升高5°，大鼠能停留10s，记录斜板与水 平面的最大夹角。斜板实验评价的运动功能W斜板的角度来衡量，角度越低，动力失衡颈椎 病越严重。
[0085] 2.3.2X线片评分
[0086] 用10%水合氯醒3.5mL/kg腹腔注射麻醉后分别摄颈椎的正、侧位X光片。评分标准 如下①颈椎生理弯曲（0-3分）：生理弯曲存在(0分），生理弯曲轻度僵硬（1分)生理弯曲丧失 (2分），生理弯曲完全丧失并有反屈(3分）。②椎体前后缘骨寶(0-3分）：无(0分），轻度增生 (1分），中度增生（2分），重度增生(3分）。③椎间隙狭窄（0-3分）：正常(0分），轻度狭窄（1 分），中度狭窄（2分），重度狭窄（3分）。④钩椎关节及关节突关节(0 - 3分）：正常(0分），模糊 不清（1分），轻度增生硬化(2分），明显增生硬化(3分）。动力失衡型线影像评分越高，动力失 衡颈椎病越严重。
[0087] 2.4实验结果
[008引 2.4.1斜板运动功能
[0089] 斜板运动功能测试结果如表8所示。
[0090] 表8各组斜板运动结果（X + S )
[0091]
[0092] 注:与假手术组比较ΔΔΡ<0.01，与模型对照组比较冲<0.05, * *P<0.01。
[0093] 2.4.2影像学评分
[0094] 影像学评分结果如表9所示。
[0095] 表9各组X线片评分（x±s )
[0096]
[0097] 注:与假手术组比较ΔΡ<0.05，ΔΔΡ<0.01;与模型对照组比较巧<0.05, *大P <0.01。
[009引四、抑制腰5脊神经结扎引起的神经病理性疼痛
[0099] 1材料和方法
[0100] 1.1实验动物及分组
[0101] 实验共使用60只雄性SD大鼠，体质量150~170g，清洁级标准，购自长沙天勤生物 技术有限公司，动物许可证号为:SCXK(湘)2014-0011。动物分笼饲养，自由饮食，隔日更换 垫料。室溫保持在20~25°C，湿度50%~80 %，12:12h白天一黑夜循环照明。所有实验步骤 都尽量减轻动物的痛苦并按照有关实验动物的使用原则操作。所有大鼠分为6组，前3组分 别给予10,30,90mg/kg本发明苗药，第4组为对照组，给予溶剂，第5组为lOOmg/kg阳性对照 药连续给药组，第6组为溶剂对照组。
[0102] 1.2实验方法
[0103] 采用经典的腰5脊神经结扎加切断模型，具体方法如下。给予lOOmL/L水合氯醒 (3.5Ml/kg，i.p.)麻醉后，实验大鼠经备皮、消毒，分离左侧L5脊神经，用3-0医缝合线结扎 并切断，逐层缝合切口。
[0104] 采用50%机械刺激撤足阔值检测病理性疼痛是否出现。为了消除屯、理因素对测试 结果的影响，在撤足阔值的基础值测定前1周，每日将大鼠放置于测试装置内不少于20min， 直至大鼠搔抓、直立、行走等活动完全停止，处于安静状态时为止。监测装置为透明有机玻 璃箱（18X25 X 18cm)，箱底由金属网制成（网格为0.8X0.8cm)，通过网孔用von化巧hair 可W对大鼠足底部皮肤施加机械性刺激。至大鼠体质量在(230±20)g时开始采用化-Down 方法，每天检测1次50%机械性撤足阔值(g)，W获得基础值。2~3天后行腰5脊神经切断术， 术后第4天开始新的测试，50%机械刺激撤足阔值显著下降者为模型成功。
[0105] 将成功模型鼠分为本发明苗药组与溶剂对照组，本发明苗药组连续7d于每天早上 9:00贴患处/穴位给予本发明苗药，溶剂对照组贴患处/穴位给予生理盐水。给药后化测试 50%机械刺激撤足阔值，测试于停药后继续进行，直至大鼠50%机械刺激撤足阔值恢复至 术后水平。
[0106] 撤足阳性反应的判定:①测试时化ir垂直，微弯，在大鼠足屯、部停留的6~8s内，出 现快速撤足为阳性反应;②撤离化ir刺激作用的瞬间大鼠出现撤足，亦为阳性反应;③在刺 激期间大鼠行走，为可疑反应，待大鼠安静后重新检测。
[0107] 1.3统计方法
[0108] 所有行为学测试结果均采用非参数检验进行分析。同一组大鼠不同测试时间点的 数据先用化iedman AN0NA检验差异，然后再用两组相关数据的秩和检验分析。用SPSS 10.0 (SPSS Inc,USA)进行统计学分析，所有数据用均数+标准误(Mean+ SE)表示，P<0.05认为 有统计学意义。
[0109] 2 结果
[0110] 2.1-次性贴患处/穴位本发明苗药对机械性痛超敏的抑制作用
[0111] 量效实验结果显示：在3.75mg/kg、7.5mg/kg、15mg/kg、30mg/kg和60mg/kg实验组 中，30mg/kg剂量组开始有显著效果。本实验W30mg/kg为中间剂量，将模型成功大鼠随机分 为本发明苗药不同剂量组（lOmg/kg、30mg/kg和90mg/kg)、溶剂对照组和阳性对照组(加己 喷下lOOmg/kg)，每组10只。采用贴患处/穴位给药，给药后分别于化、3h、化和化测试大鼠 50%机械刺激撤足阔值。
[0112] -次性贴患处/穴位lOmg/kg本发明苗药不能抑制机械性痛超敏，它与对照组没有 差异，大鼠的机械刺激撤足阔值一直维持术后状态（图2)。贴患处/穴位30mg/kg本发明苗药 于给药后化已经有显著效果(Mann-Whitney U test，P<0.05)，作用维持化W上，到化基本 恢复至术后水平（图3)D90mg/kg的本发明苗药作用与lOOmg/kg的加己喷下作用相似（图4)。 阳性药加己喷下lOOmg/kg作用在化时已经起效，药效能维持化W上（图5)。一次性贴患处/ 穴位本发明苗药大于30mg/kg时，可部分缓解机械性痛超敏，30mg/kg与90mg/kg作用没有明 显差异，且运种作用与加己喷下对机械性痛超敏的作用不同。
[0113] 2.2连续7天采用本发明苗药灌胃对痛超敏的作用
[0114] 连续7天灌胃给予本发明苗药与对照组相比有明显的抑制机械性痛超敏的作用 (Mann-Whitney U test，P<0.05)，运种作用可维持到给药后4d。说明药物作用有一定的累 积效应，但每次给药后本发明苗药对大鼠机械性痛超敏的抑制作用相互之间没有明显统计 学差异(Wilcoxon test，P>0.05)，停药后运种趋势消失，体现出药物在体内自然消退的过 程(图6)。
[0115] 本发明的有益之处在于:本发明提供的一种王敷灵苗药制剂，能够有效治疗骨关 节疾病，尤其是治疗膝骨性关节炎、动力失衡颈椎病、腰5脊神经结扎引起的神经病理性疼 痛等多种疾病。本发明的苗药制剂具有明显的降低IL-Ιβ表达作用和降低TNF-a表达作 用，从而抑制炎症反应，保护软骨组织。本发明的苗药制剂可W有效治疗颈椎病，疗效较好， 具有补益肝肾，强筋壮骨，胜湿桂风，活血通络之功效。还可W有效抑制神经病理性疼痛。本 发明的制备方法简单易操作，条件溫和易控制，制备时间短，成本低，易于大规模生产。本发 明王敷灵苗药制剂能够用于制备治疗骨关节疾病的药物，特别是用于制备治疗颈椎病的药 物、制备治疗神经病理性疼痛的药物或者制备治疗膝骨性关节炎的药物。
【附图说明】
[0116] 图1是本发明的组织病理学切片图；
[0117] 图2是本发明苗药lOmg/kg剂量组与溶剂对照组对模型鼠50 %机械刺激撤足阔值 的影响图；
[011引图3是本发明苗药30mg/kg剂量组与溶剂对照组对模型鼠50 %机械刺激撤足阔值 的影响图；
[0119] 图4是本发明苗药90mg/kg剂量组与溶剂对照组对模型鼠50 %机械刺激撤足阔值 的影响图；
[0120] 图5是加己喷下lOOmg/kg阳性对照组与溶剂对照组对模型鼠50 %机械刺激撤足阔 值的影响图；
[0121] 图6是连续7天给予本发明苗药30mg/kg对机械性痛超敏的作用图；
[0122] 图中附图标记的含义：图1: (a)本发明苗药组第30天病理切片（10X10)，（b)模型 组第30天病理切片（10 X 10)，（C)本发明苗药组第60天病理切片（10 X 10)，（d)模型组第60 天病理切片（10X10)，（e)本发明苗药组第90天病理切片（10X10)，（f)模型组第90天病理 切片（10X10);图2~图5中：a-本发明苗药1 Omg/kg剂量组，b-本发明苗药30mg/kg剂量组， C-本发明苗药90mg/kg剂量组，d-加己喷下100mg/kg，e-溶剂对照组，1)P<0.05,2)P< 0.01，3化<0.001;图6:1冲<0.05,2化<0.01，6-本发明苗药30111邑/1^剂量组，6-溶剂对照 组。
【具体实施方式】
[0123] W下结合具体实施例对本发明作进一步的介绍。
[0124] 本发明中试剂采用市售产品。
[0125] 实施例1
[01%] -种王敷灵苗药制剂，按照重量份数计，由W下原料药制成：当归1份、藏红花1份、 川寫1份、杜仲1份和血滕1份。按重量比例称取当归，藏红花，川寫，杜仲和血滕，分别用水洗 净，阴干，切片;将切片的原料药混合后加入体积分数为20%的乙醇溶液，按照质量比，混合 后原料药：乙醇溶液=1:6;在20°C加热回流提取3次，每次提取化，过滤，合并提取液得到药 液，维持药液中乙醇的体积浓度为40%，取药液0.5mL滴于1cm2的敷帖药垫上，即得贴剂。敷 帖药垫采用市售产品。
[0127] 实施例2
[0128] -种王敷灵苗药制剂，按照重量份数计，由W下原料药制成：当归7份、藏红花3份、 川寫4份、杜仲3份和血滕3份。按重量比例称取当归，藏红花，川寫，杜仲和血滕，分别用水洗 净，阴干，切片;将切片的原料药混合后加入体积分数为90%的乙醇溶液，按照质量比，混合 后原料药：乙醇溶液=1:20;在95°C加热回流提取1次，每次提取0.化，过滤，合并提取液得 到药液，维持药液中乙醇的体积浓度为60%，取药液2mL滴于5cm2的敷帖药垫上，即得贴剂。 敷帖药垫采用市售产品。
[0129] 实施例3
[0130] -种王敷灵苗药制剂，按照重量份数计，由W下原料药制成：当归4份、藏红花2份、 川寫3份、杜仲2份和血滕2份。按重量比例称取当归，藏红花，川寫，杜仲和血滕，分别用水洗 净，阴干，切片，其中，切片的原料药厚度为0.5cm;将切片的原料药混合后加入体积分数为 60%的乙醇溶液，按照质量比，混合后原料药：乙醇溶液= 1:12;在60°C加热回流提取2次， 每次提取化，过滤，合并提取液得到药液，维持药液中乙醇的体积浓度为50%，取药液ImL滴 于3cm2的敷帖药垫上，即得贴剂。
[0131] 其中，敷贴药垫通过W下方法制备:将胶水均匀涂布在无纺布上，加热挥发胶水中 溶剂，再将消毒后的棉花贴到涂胶无纺布的中屯、区域，备用;取质量分数为10%的天竺葵色 素水溶液〇.5mL，均匀涂布到中屯、区域的棉花上，随后再在棉花上面放置离型纸即得。
[0132] 实施例4
[0133] -种王敷灵苗药制剂，按照重量份数计，由W下原料药制成：当归2份、藏红花2.5 份、川寫2份、杜仲1.5份和血滕2份。按重量比例称取当归，藏红花，川寫，杜仲和血滕，分别 用水洗净，阴干，切片，其中，切片的原料药厚度为0.1cm;将切片的原料药混合后加入体积 分数为75 %的乙醇溶液，分别按照质量比，混合后原料药：乙醇溶液=1:16和混合后原料 药:乙醇溶液=1:10,在80°C加热回流提取2次，每次提取化，过滤，合并提取液得到药液，维 持药液中乙醇的体积浓度为45~50%，取药液0.5~2mL滴于1~5cm2的敷帖药垫上，即得贴 剂。
[0134] 其中，敷贴药垫通过W下方法制备:将胶水均匀涂布在无纺布上，加热挥发胶水中 溶剂，再将消毒后的棉花贴到涂胶无纺布的中屯、区域，备用；取质量分数为2%的天竺葵色 素水溶液1.5mL，均匀涂布到中屯、区域的棉花上，随后再在棉花上面放置离型膜即得。
[0135] 实施例5
[0136] -种王敷灵苗药制剂，按照重量份数计，由W下原料药制成：当归6份、藏红花1.5 份、川寫3.5份、杜仲2.5份和血滕1.5份。按重量比例称取当归，藏红花，川寫，杜仲和血滕， 分别用水洗净，阴干，切片，其中，切片的原料药厚度为1cm;将切片的原料药混合后分别加 入体积分数为40 %、50 %、80 %的乙醇溶液，按照质量比，混合后原料药:40 %乙醇溶液=1: 9、混合后原料药:50 %乙醇溶液=1:18和混合后原料药:80 %乙醇溶液=1:14，在40°C加热 回流提取3次，每次提取2.化，过滤，合并提取液得到药液，维持药液中乙醇的体积浓度为55 ~60%，取药液0.5~2mL滴于1~5cm%敷帖药垫上，即得贴剂。
[0137] 其中，敷贴药垫通过W下方法制备:将胶水均匀涂布在无纺布上，加热挥发胶水中 溶剂，再将消毒后的棉花贴到涂胶无纺布的中屯、区域，备用；取质量分数为5%的天竺葵色 素水溶液ImL，均匀涂布到中屯、区域的棉花上，随后再在棉花上面放置离型纸或离型膜即 得。
[013引实施例6
[0139] -种王敷灵苗药制剂，按照重量份数计，由W下原料药制成：当归3份、藏红花2份、 川寫4份、杜仲1份和血滕2份。按重量比例称取当归，藏红花，川寫，杜仲和血滕，分别用水洗 净，阴干，切片;将切片的原料药混合后加入体积分数为50%的乙醇溶液，按照质量比，混合 后原料药:乙醇溶液=1:8;在35°C加热回流提取3次，每次提取2.化，过滤，合并提取液得到 药液，维持药液中乙醇的体积浓度为45%，再将药液制做成外用制剂(如擦剂、涂剂或洗剂） 即得。
[0140] 实施例1~6中的王敷灵苗药制剂可W作为治疗骨关节疾病的药物，特别是可W作 为治疗颈椎病的药物、作为治疗神经病理性疼痛的药物或者作为治疗膝骨性关节炎的药 物。
【主权项】
1. 一种用于治疗骨关节疾病的苗药制剂，其特征在于:按照重量份数计，由以下原料药 制成:当归1~7份、藏红花1~3份、川穹1~4份、杜仲1~3份和血滕1~3份。2. 根据权利要求1所述的用于治疗骨关节疾病的苗药制剂，其特征在于:按照重量份数 计，由以下原料药制成：当归4份、藏红花2份、川穹3份、杜仲2份和血滕2份;所述制剂为外用 制剂。3. 根据权利要求1或2所述的用于治疗骨关节疾病的苗药制剂，其特征在于:所述制剂 是将药液滴于敷贴药垫上制得的贴剂。4. 一种如权利要求2所述的用于治疗骨关节疾病的苗药制剂的制备方法，其特征在于： 包括以下步骤：按重量比例称取当归，藏红花，川穹，杜仲和血滕，分别用水洗净，阴干，切 片;将切片的原料药混合后加入乙醇溶液，加热回流提取1~3次，过滤，合并提取液得到药 液，维持药液中乙醇的体积浓度，再将药液制做成外用制剂即得。5. 根据权利要求4所述的用于治疗骨关节疾病的苗药制剂的制备方法，其特征在于:包 括以下步骤:按重量比例称取当归，藏红花，川穹，杜仲和血滕，分别用水洗净，阴干，切片； 将切片的原料药混合后加入体积分数为20 %~90 %的乙醇溶液，在20 °C~95 °C加热回流提 取1~3次，过滤，合并提取液得到药液，维持药液中乙醇的体积浓度为40 %~60 %，再将药 液制做成贴剂即得。6. 根据权利要求4或5所述的用于治疗骨关节疾病的苗药制剂的制备方法，其特征在 于:取药液0.5~2mL滴于1~5 cm2的敷帖药垫上，即得贴剂。7. 根据权利要求6所述的用于治疗骨关节疾病的苗药制剂的制备方法，其特征在于:所 述敷贴药垫通过以下方法制备:将胶水均匀涂布在无纺布上，加热挥发胶水中溶剂，再将消 毒后的棉花贴到涂胶无纺布的中心区域，备用;取质量分数为2%~10%的天竺葵色素水溶 液0.5mL~1.5mL，均匀涂布到中心区域的棉花上，随后再在棉花上面放置离型纸或离型膜 即得。8. 根据权利要求4或5所述的用于治疗骨关节疾病的苗药制剂的制备方法，其特征在 于:原料药混合后加入乙醇溶液时，按照质量比，混合后原料药:乙醇溶液=1:6~20。9. 根据权利要求4或5所述的用于治疗骨关节疾病的苗药制剂的制备方法，其特征在 于:所述加热回流提取时间为每次0.5h~3h。10. 如权利要求1-3任一项所述的用于治疗骨关节疾病的苗药制剂在制备治疗骨关节 疾病药物中的应用，特别是在制备治疗颈椎病药物、制备治疗神经病理性疼痛药物或者制 备治疗膝骨性关节炎药物中的应用。
【文档编号】A61P19/08GK105998435SQ201610515021
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年7月4日
【发明人】王福宁, 汪浩, 秦春耀
【申请人】王福宁, 汪浩, 秦春耀