参芪抗过敏鼻炎颗粒及其制备方法

参芪抗过敏鼻炎颗粒及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及鼻炎药物技术领域，是一种参芪抗过敏鼻炎颗粒及其制备方法，该参芪抗过敏鼻炎颗粒的原料包括：党参、仙鹤草、金银花、黄芩、蒲公英、大青叶、黄芪、白芷、薄荷、细辛、乳糖；本发明的参芪抗过敏鼻炎颗粒采用中药制剂技术，具有一定的抗过敏和抗炎的作用，用于治疗急、慢性鼻炎和过敏性鼻炎，见效快，无刺激，无依赖性，药效持久，无需禁忌等为其用于治疗过敏性鼻炎提供了药理学依据，综合指标明显优于西药制剂，是一种有效作用于急、慢性鼻炎和过敏性鼻炎的中药制剂，具有广阔的发展前景和优势，对急、慢性鼻炎以及过敏性鼻炎的治疗将产生质的飞跃具有特殊重要意义。
【专利说明】
参苗抗过敏鼻炎颗粒及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及鼻炎药物技术领域，是一种参芪抗过敏鼻炎颗粒及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 鼻炎是常见多发病，临床上因其发病原因和病理改变以及临床表现等不同而分为 急性、慢性鼻炎及变应性鼻炎。
[0003]变应性鼻炎又称过敏性鼻炎，是发生在鼻黏膜的反应性疾病，其主要特点是鼻黏 膜反应性增高。近年来国内外发病率有增加趋势，可能与大气污染、空气中S0:浓度增加有 关。临床上有常年性和季节性鼻炎两型。
[0004] 过敏性鼻炎治疗一般有三种方法:第一种方法，避免接触变应原:如找到致敏的变 应原后，应尽量避免接触，虽然并非容易，但应经常吸尘减少室内尘土，室内应通风，晾晒被 褥，换掉地毯等，在花粉季节可带口罩;第二种方法，特异性脱敏疗法:用阳性反应变应原浸 液，以适宜浓度少量做皮下注射，逐渐增大浓度和剂量，经数月治疗后改为维持量。此疗法 可使患者体内产生特异性封闭抗体IgG，以阻断变应原与IgE结合，并能降低介质细胞敏感 性，以达到治疗目的。第三种方法，药物疗法:a抗组胺药，以往多用扑尔敏、非那根等组胺H， 受体拮抗剂，但因有嗜睡等副作用，目前多改用息斯敏、特非那丁、克敏能等新型抗组胺药 物，另外，立复汀鼻腔喷雾剂属局部用药，早晚各用药1次，效果较好;b肥大细胞稳定剂、色 甘酸钠喷鼻剂为鼻腔内局部用药，有阻止肥大细胞脱颗粒释放介质作用，酮替芬既可稳定 肥大细胞，又有抗组胺作用，但司乘人员宜慎用；c类固醇激素，长期用药易出现副作用，故 多主张用倍氯米松气雾剂喷雾，本药对肥大细胞、嗜碱细胞和黏膜炎性反应有显著抑制作 用;d大佛水鼻喷雾剂，属局部脱敏药，经鼻黏膜吸收后，能激发机体产生封闭抗体，以解除 鼻黏膜过敏状态。还有其他疗法:a降低鼻黏膜敏感性:对下鼻甲黏膜适当部位行冷冻、激 光、化学药物烧灼等，可降低鼻黏膜敏感性，b鼻内选择性神经切断术:包括翼管神经切断术 及筛前神经切断术等，虽有一定疗效，但因有副作用已不常使用。
[0005] 世界卫生组织的相关文件指出，目前治疗鼻炎的特殊疗法（如传统疗法、中药治 疗、针灸等)有逐渐增加的趋势，但这些治疗方法尚缺乏科学的临床证据，故迫切需要大中 医有效方药筛选方面根据用温阳补气法、寒热并用、清热法均取得良好临床疗效的临床现 象，可深入探讨临床处方用药的关键所在，有望筛选出中医治疗变应性鼻炎特色方药的可 能途径，但是，中药传统汤剂存在对临床疗效影响大、服用剂量大和携带不方便的问题。设 计合理、操作严谨的多靶点观察的临床与实验研究，对揭示中药作用机制，推动具有中医特 色的抗过敏中药走向世界会产生积极影响。

【发明内容】

[0006] 本发明提供了一种参芪抗过敏鼻炎颗粒及其制备方法，克服了上述现有技术之不 足，其能有效解决西药难以发挥理想的作用和中药传统汤剂对临床疗效影响大、服用剂量 大和携带不方便的问题。
[0007] 本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种参芪抗过敏鼻炎颗粒，其 原料按重量份数计包括:党参150份至170份、仙鹤草150份至170份、金银花150份至170份、 黄芩150份至170份、蒲公英150份至170份、大青叶150份至170份、黄芪300份至340份、白芷 300份至340份、薄荷150份至170份、细辛50份至60份、乳糖700份至750份。
[0008] 下面是对上述发明技术方案之一的进一步优化或/和改进：
[0009] 上述参芪抗过敏鼻炎颗粒按下述方法得到：第一步，将所需量的党参、仙鹤草、金 银花、黄芩、蒲公英、薄荷和细辛混合后得到六味药材，用重量为药材重量的8倍至12倍的水 对六味药材煎煮2次至4次，每次煎煮1.0 h至3. Oh，每次煎煮后分别得到煎液，将每次煎煮得 到的煎液过滤后进行合并得到水提混合液，将水提混合液进行减压浓缩至六味药材与水提 混合液的重量比为1:13后得到浓缩液，接着将浓缩液进行离心后，弃去浓缩液的下层沉淀、 保留浓缩液的上层清液，将上层清液减压浓缩至60°C下的相对密度为1.22至1.25,得到水 提清膏；
[0010]第二步，将所需量的大青叶、白芷、黄芪混合后得三味药材，用重量为三味药材重 量的10倍至14倍的60 %至80%乙醇回流提取三味药材2次至4次，每次1.0 h至2. Oh，每次乙 醇回流提取后分别得到醇提液，将每次乙醇回流提取后分别得到醇提液过滤后进行合并得 到醇提混合液，减压浓缩回收醇提混合液中的乙醇并将醇提混合液浓缩至60°C下的相对密 度为1.22至1.25,得到醇提清膏；
[0011] 第三步，合并水提清膏和醇提清膏，混合均匀后进行真空干燥并过筛得到浸膏粉， 浸膏粉的含水量不大于6 %;
[0012] 第四步，向浸膏粉中加入所需量的乳糖混合均匀后进行制粒得到本发明的参芪抗 过敏鼻炎颗粒。
[0013] 上述第一步中，待水煮沸后再投入六味药材;或/和，第一步中，将浓缩液在4000r/ min的转速条件下离心15min;或/和，第一步和第二步中，减压浓缩的压力为0.08MPa，减压 浓缩的温度为55°C至65°C。
[0014] 上述第三步中，合并水提清膏和醇提清膏，混合均匀后在压力为O.OSMPa、温度为 60°C条件下进行真空干燥并过100目筛得到浸膏粉。
[0015]上述第四步中，将参芪抗过敏鼻炎颗粒在温度为50°C条件下进行干燥至参芪抗过 敏鼻炎颗粒的含水量不大于6%。
[0016] 本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种参芪抗过敏鼻炎颗粒的制 备方法，按下述步骤进行:第一步，将所需量的党参、仙鹤草、金银花、黄芩、蒲公英、薄荷和 细辛混合后得到六味药材，用重量为药材重量的8倍至12倍的水对六味药材煎煮2次至4次， 每次煎煮1.0 h至3. Oh，每次煎煮后分别得到煎液，将每次煎煮得到的煎液过滤后进行合并 得到水提混合液，将水提混合液进行减压浓缩至六味药材与水提混合液的重量比为1:13后 得到浓缩液，接着将浓缩液进行离心后，弃去浓缩液的下层沉淀、保留浓缩液的上层清液， 将上层清液减压浓缩至60°C下的相对密度为1.22至1.25，得到水提清膏；
[0017] 第二步，将所需量的大青叶、白芷、黄芪混合后得三味药材，用重量为三味药材重 量的10倍至14倍的60 %至80%乙醇回流提取三味药材2次至4次，每次1.0 h至2. Oh，每次乙 醇回流提取后分别得到醇提液，将每次乙醇回流提取后分别得到醇提液过滤后进行合并得 到醇提混合液，减压浓缩回收醇提混合液中的乙醇并将醇提混合液浓缩至60°C下的相对密 度为1.22至1.25,得到醇提清膏；
[0018] 第三步，合并水提清膏和醇提清膏，混合均匀后进行真空干燥并过筛得到浸膏粉， 浸膏粉的含水量不大于6 %;
[0019] 第四步，向浸膏粉中加入所需量的乳糖混合均匀后进行制粒得到本发明的参芪抗 过敏鼻炎颗粒；
[0020] 其中，参苗抗过敏鼻炎颗粒，其原料按重量份数计包括:党参150份至170份、仙鹤 草150份至170份、金银花150份至170份、黄芩150份至170份、蒲公英150份至170份、大青叶 150份至170份、黄芪300份至340份、白芷300份至340份、薄荷150份至170份、细辛50份至60 份、乳糖700份至750份。
[0021] 下面是对上述发明技术方案之二的进一步优化或/和改进：
[0022]上述第一步中，待水煮沸后再投入六味药材;或/和，第一步中，将浓缩液在4000r/ min的转速条件下离心15min;或/和，第一步和第二步中，减压浓缩的压力为0.08MPa，减压 浓缩的温度为55°C至65°C。
[0023]上述第三步中，合并水提清膏和醇提清膏，混合均匀后在压力为O.OSMPa、温度为 60°C条件下进行真空干燥并过100目筛得到浸膏粉。
[0024]上述第四步中，将参芪抗过敏鼻炎颗粒在温度为50°C条件下进行干燥至参芪抗过 敏鼻炎颗粒的含水量不大于6%。
[0025] 本发明的参芪抗过敏鼻炎颗粒采用中药制剂技术，具有一定的抗过敏和抗炎的作 用，用于治疗急、慢性鼻炎和过敏性鼻炎，见效快，无刺激，无依赖性，药效持久，无需禁忌等 为其用于治疗过敏性鼻炎提供了药理学依据，综合指标明显优于西药制剂，是一种有效作 用于急、慢性鼻炎和过敏性鼻炎的中药制剂，具有广阔的发展前景和优势，对急、慢性鼻炎 以及过敏性鼻炎的治疗将产生质的飞跃具有特殊重要意义。
【附图说明】
[0026] 图1为本发明中参芪抗过敏鼻炎颗粒对变应性鼻炎大鼠鼻粘膜通透性的影响。
【具体实施方式】
[0027] 本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体 的实施方式。本发明中所提到各种化学试剂和化学用品如无特殊说明，均为现技术中公知 公用的化学试剂和化学用品;本发明中的百分数如没有特殊说明，均为质量百分数;本发明 中的水如没有特殊说明，为自来水或纯净水;本发明中的溶液若没有特殊说明，均为溶剂为 水的水溶液，例如，盐酸溶液即为盐酸水溶液;本发明中的常温一般指15 °C到25 °C的温度， 一般定义为25 °C。
[0028] 下面结合实施例对本发明作进一步描述：
[0029] 实施例1，该参苗抗过敏鼻炎颗粒，其原料按重量份数计包括:党参150份至170份、 仙鹤草150份至170份、金银花150份至170份、黄芩150份至170份、蒲公英150份至170份、大 青叶150份至170份、黄芪300份至340份、白芷300份至340份、薄荷150份至170份、细辛50份 至60份、乳糖700份至750份。
[0030] 实施例2,该参苗抗过敏鼻炎颗粒，其原料按重量份数计包括:党参150份或170份、 仙鹤草150份或170份、金银花150份或170份、黄芩150份或170份、蒲公英150份或170份、大 青叶150份或170份、黄芪300份或340份、白芷300份或340份、薄荷150份或170份、细辛50份 或60份、乳糖700份或750份。
[0031]实施例3,作为实施例1和实施例2的优化，该参芪抗过敏鼻炎颗粒按下述制备方法 得到:第一步，将所需量的党参、仙鹤草、金银花、黄苳、蒲公英、薄荷和细辛混合后得到六味 药材，用重量为药材重量的8倍至12倍的水对六味药材煎煮2次至4次，每次煎煮1.0 h至 3. Oh，每次煎煮后分别得到煎液，将每次煎煮得到的煎液过滤后进行合并得到水提混合液， 将水提混合液进行减压浓缩至六味药材与水提混合液的重量比为1:13后得到浓缩液，接着 将浓缩液进行离心后，弃去浓缩液的下层沉淀、保留浓缩液的上层清液，将上层清液减压浓 缩至60°C下的相对密度为1.22至1.25，得到水提清膏；
[0032]第二步，将所需量的大青叶、白芷、黄芪混合后得三味药材，用重量为三味药材重 量的10倍至14倍的60 %至80%乙醇回流提取三味药材2次至4次，每次1.0 h至2. Oh，每次乙 醇回流提取后分别得到醇提液，将每次乙醇回流提取后分别得到醇提液过滤后进行合并得 到醇提混合液，减压浓缩回收醇提混合液中的乙醇并将醇提混合液浓缩至60°C下的相对密 度为1.22至1.25,得到醇提清膏；
[0033]第三步，合并水提清膏和醇提清膏，混合均匀后进行真空干燥并过筛得到浸膏粉， 浸膏粉的含水量不大于6 %;
[0034] 第四步，向浸膏粉中加入所需量的乳糖混合均匀后进行制粒得到本发明的参芪抗 过敏鼻炎颗粒。
[0035] 实施例4,作为实施例3的优化，第一步中，待水煮沸后再投入六味药材。
[0036]实施例5,作为实施例3和实施例4的优化，第一步中，将浓缩液在4000r/min的转速 条件下离心15min。
[0037] 实施例6,作为实施例3、实施例4和实施例5的优化，第一步和第二步中，减压浓缩 的压力为〇.〇8MPa，减压浓缩的温度为55°C至65°C
[0038] 实施例7,作为实施例3、实施例4、实施例5和实施例6的优化，合并水提清膏和醇提 清膏，混合均匀后在压力为O.OSMPa、温度为60°C条件下进行真空干燥并过100目筛得到浸 膏粉。
[0039] 实施例8,作为实施例3、实施例5、实施例5、实施例6和实施例7的优化，将参芪抗过 敏鼻炎颗粒在温度为50°C条件下进行干燥至参芪抗过敏鼻炎颗粒的含水量不大于6%。
[0040] 实施例9，该参苗抗过敏鼻炎颗粒，其原料按重量份数计包括:党参150份、仙鹤草 150份、金银花150份、黄芩150份、蒲公英150份、大青叶150份、黄芪300份、白芷300份、薄荷 150份、细辛50份，乳糖700份。
[0041 ]实施例10，该参苗抗过敏鼻炎颗粒，其原料按重量份数计包括:党参160份、仙鹤草 160份、金银花160份、黄芩160份、蒲公英160份、大青叶160份、黄芪320份、白芷320份、薄荷 160份、细辛55份，乳糖720份。
[0042] 实施例11，该参苗抗过敏鼻炎颗粒，其原料按重量份数计包括:党参170份、仙鹤草 170份、金银花170份、黄芩170份、蒲公英170份、大青叶170份、黄芪340份、白芷340份、薄荷 170份、细辛60份，乳糖750份。
[0043] 实施例12,作为实施例9、实施例10和实施例11的优化，该参芪抗过敏鼻炎颗粒按 下述制备方法得到:第一步，将所需量的党参、仙鹤草、金银花、黄苳、蒲公英、薄荷和细辛混 合后得到六味药材，用重量为药材重量的8倍的水对六味药材煎煮2次，待水煮沸后再投入 六味药材，每次煎煮1.0 h，每次煎煮后分别得到煎液，将每次煎煮得到的煎液过滤后进行合 并得到水提混合液，将水提混合液进行减压浓缩至六味药材与水提混合液的重量比为1:13 后得到浓缩液，接着将浓缩液在4000r/min的转速条件下进行离心15min后，弃去浓缩液的 下层沉淀、保留浓缩液的上层清液，将上层清液减压浓缩至60°C下的相对密度为1.22至 1.25,得到水提清膏，减压浓缩的压力为O.OSMPa，减压浓缩的温度为55°C至65°C;
[0044] 第二步，将所需量的大青叶、白芷、黄芪混合后得三味药材，用重量为三味药材重 量10倍80%乙醇回流提取三味药材2次，每次l.Oh，每次乙醇回流提取后分别得到醇提液， 将每次乙醇回流提取后分别得到醇提液过滤后进行合并得到醇提混合液，减压浓缩回收醇 提混合液中的乙醇并将醇提混合液浓缩至60°C下的相对密度为1.22至1.25,得到醇提清 膏，减压浓缩的压力为0.0 SMPa，减压浓缩的温度为55°C ;
[0045] 第三步，合并水提清膏和醇提清膏，混合均匀后在压力为O.OSMPa、温度为60°C条 件下进行真空干燥并过筛得到浸膏粉，浸膏粉的含水量不大于6% ;
[0046] 第四步，向浸膏粉中加入所需量的乳糖混合均匀后进行制粒，得到本发明的参芪 抗过敏鼻炎颗粒并在温度为50°C条件下进行干燥至含水量不大于6%。
[0047] 实施例13,作为实施例9、实施例10和实施例11的优化，该参芪抗过敏鼻炎颗粒按 下述制备方法得到:第一步，将所需量的党参、仙鹤草、金银花、黄苳、蒲公英、薄荷和细辛混 合后得到六味药材，用重量为药材重量的10倍的水对六味药材煎煮3次，待水煮沸后再投入 六味药材，每次煎煮2. Oh，每次煎煮后分别得到煎液，将每次煎煮得到的煎液过滤后进行合 并得到水提混合液，将水提混合液进行减压浓缩至六味药材与水提混合液的重量比为1:13 后得到浓缩液，接着将浓缩液在4000r/min的转速条件下进行离心15min后，弃去浓缩液的 下层沉淀、保留浓缩液的上层清液，将上层清液减压浓缩至60°C下的相对密度为1.22至 1.25，得到水提清膏，减压浓缩的压力为0.0 SMPa，减压浓缩的温度为60°C ;
[0048] 第二步，将所需量的大青叶、白芷、黄芪混合后得三味药材，用重量为三味药材重 量的12倍的70%乙醇回流提取三味药材3次，每次1.5h，每次乙醇回流提取后分别得到醇提 液，将每次乙醇回流提取后分别得到醇提液过滤后进行合并得到醇提混合液，减压浓缩回 收醇提混合液中的乙醇并将醇提混合液浓缩至60°C下的相对密度为1.22至1.25,得到醇提 清膏，减压浓缩的压力为〇. OSMPa，减压浓缩的温度为60°C ;
[0049] 第三步，合并水提清膏和醇提清膏，混合均匀后在压力为O.OSMPa、温度为60°C条 件下进行真空干燥并过筛得到浸膏粉，浸膏粉的含水量不大于6% ;
[0050] 第四步，向浸膏粉中加入所需量的乳糖混合均匀后进行制粒，得到本发明的参芪 抗过敏鼻炎颗粒并在温度为50°C条件下进行干燥至含水量不大于6%。
[0051 ]实施例14，作为实施例9、实施例10和实施例11的优化，该参芪抗过敏鼻炎颗粒按 下述制备方法得到:第一步，将所需量的党参、仙鹤草、金银花、黄苳、蒲公英、薄荷和细辛混 合后得到六味药材，用重量为药材重量的12倍的水对六味药材煎煮4次，待水煮沸后再投入 六味药材，每次煎煮3. Oh，每次煎煮后分别得到煎液，将每次煎煮得到的煎液过滤后进行合 并得到水提混合液，将水提混合液进行减压浓缩至六味药材与水提混合液的重量比为1:13 后得到浓缩液，接着将浓缩液在4000r/min的转速条件下进行离心15min后，弃去浓缩液的 下层沉淀、保留浓缩液的上层清液，将上层清液减压浓缩至60°C下的相对密度为I. 22至 1.25,得到水提清膏，减压浓缩的压力为O.OSMPa，减压浓缩的温度为55°C至65°C;
[0052] 第二步，将所需量的大青叶、白芷、黄芪混合后得三味药材，用重量为三味药材重 量14倍60%乙醇回流提取三味药材4次，每次2.0h，每次乙醇回流提取后分别得到醇提液， 将每次乙醇回流提取后分别得到醇提液过滤后进行合并得到醇提混合液，减压浓缩回收醇 提混合液中的乙醇并将醇提混合液浓缩至60°C下的相对密度为1.22至1.25,得到醇提清 膏，减压浓缩的压力为0.0 SMPa，减压浓缩的温度为65°C ;
[0053] 第三步，合并水提清膏和醇提清膏，混合均匀后在压力为O.OSMPa、温度为60°C条 件下进行真空干燥并过筛得到浸膏粉，浸膏粉的含水量不大于6% ;
[0054]第四步，向浸膏粉中加入所需量的乳糖混合均匀后进行制粒，得到本发明的参芪 抗过敏鼻炎颗粒并在温度为50°C条件下进行干燥至含水量不大于6%。
[0055] 将根据本发明上述实施例得到的参芪抗过敏鼻炎颗粒进行如下的药效学试验：
[0056] 实验一、参苗抗过敏鼻炎颗粒体外抗炎活性评价
[0057] 1.实验目的
[0058]炎症反应是常见的一种病理生理过程，参与多种疾病的发生与发展。炎症反应是 一种复杂的防御反应，由多种细胞因子参与，如丁即-€[、几-1、11^-6、正^丫、61?^、勵等。诱 发炎症的因素有很多，包括生物毒素、物理刺激、化学刺激、外伤刺激等。在免疫反应发生过 程中，巨噬细胞扮演着重要的角色，许多细胞因子即来源于活化的巨噬细胞，其中，N0、TNF-a、IL-6为评价炎症反应发生较敏感的指标，本实验为在体外模拟炎症发生过程，采用脂多 糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)模型，采用ELISA方法检测化合物对细胞分泌的 TNF-α的抑制作用。
[0059] 适当的免疫反应可以清除病原体，维持机体健康，过当的免疫反应会对身体造成 伤害，炎症就是过当的机体免疫反应造成。免疫稳态对防护自身反应也很重要，当淋巴细胞 受体发育多样化时就会引发自身免疫反应。提取大鼠淋巴细胞，用刀豆蛋白A(ConA)和脂多 糖(Ips)刺激淋巴细胞，评价参芪抗过敏鼻炎颗粒的抑制淋巴细胞增殖作用。
[0060] 肥大细胞脱颗粒是机体的一种防御反应，也是速发型变态反应和炎症等病理反应 的基础，在变态反应中，肥大细胞是变应性反应的祀细胞，受到抗原攻击，脱颗粒，释放组 胺、类胰蛋白酶、氨基己糖苷酶。肥大细胞很难实现传代培养，传代细胞的遗传稳定性不 高，不能用于实验研究，RBL-2H3是大鼠的嗜碱性白血病细胞，与肥大细胞有较为相似的特 征，并且细胞表面有IgE抗体，可以发生脱颗粒反应，并且可以在体外稳定遗传，所以常作为 肥大细胞的替代模型进行实验研究。由于类胰蛋白酶只存在肥大细胞而不存在于嗜碱性粒 细胞中，因此组胺、氨基己糖苷酶是RBL-2H3细胞脱颗粒的重要评价指标。本实验以C48/ 80为脱颗粒刺激剂，以细胞上清中的β_氨基己糖苷酶为评价指标，采用底物显色法对参芪 抗过敏鼻炎颗粒的药效进行评价。
[0061 ] 2.实验材料
[0062] 2.1药品与试剂
[0063] 1)药物:受试药物:根据本发明上述实施例得到的参芪抗过敏鼻炎颗粒（SQBYKL， 规格:6g)，溶于DMSO，中药阳性药辛芩颗粒(XQKL，规格:20g，国药准字：15112305)
[0064] 2)刺激剂:脂多糖(LPS Escherichia Coli 055:B5)购自sigma;刀豆蛋白A(ConA) 购自 sigma ;C48/80(货号:C2313)购自 sigma;氨基己糖(货号:3459-18-5)购自 sigma;
[0065] 3)试剂盒：小鼠 TNF-aELISA检测试剂盒（货号：88-7324-22)购自ebioscience公司
[0066] 4)其他:PBS，胰酶
[0067] 2.2实验用材料及仪器
[0068] 细胞培养瓶，96孔底透细胞培养板，细胞刮
[0069] 2.3实验用细胞
[0070] 分别选用小鼠巨噬细胞RAW264.7，小鼠肥大细胞RBL-2H3，大鼠原代淋巴细胞进行 实验。
[0071] 3.实验方法
[0072] 3.1参芪抗过敏鼻炎颗粒对RAW264.7分泌TNF-a的影响(对炎性因子的影响）
[0073] 细胞培养至对数生长期后进行实验，受试药及阳性对照药提前孵育细胞Ih后接入 刺激剂LPS诱导RAW264.7细胞活化。24h后收集细胞上清液，El i sa方法检测药物对RAW264.7 细胞分泌TNF-α的抑制作用，考察根据本发明上述实施例得到的参芪抗过敏鼻炎颗粒对炎 性因子分泌的影响。
[0074] 3.2参芪抗过敏鼻炎颗粒对淋巴细胞增殖的影响
[0075]按照大鼠淋巴细胞提取试剂盒的要求，取大鼠脾脏提取T淋巴细胞和B淋巴细胞， 提取的淋巴细胞正常培养至对数生长期后进行实验。首先受试药物及阳性药与细胞孵育6h 后用ConA和LPS分别刺激T、B淋巴细胞增殖，72h后用MTS法检测药物抑制淋巴增殖的活性。 考察根据本发明上述实施例得到的参芪抗过敏鼻炎颗粒对T、B淋巴细胞增殖的影响。
[0076] 3.3参芪抗过敏鼻炎颗粒对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响
[0077] RBL-2H3细胞是基于肥大细胞生物学作用专门构建的具有细胞脱颗粒作用的细胞 系，该细胞在化合物C48/80刺激下会发生脱颗粒反应，释放大量β-氨基己糖苷酶，采用底物 显色法检测β-氨基己糖苷酶的含量，评价药物抑制肥大细胞增殖的活性。本实验RBL-2H3细 胞铺板培养至对数生长期后开始实验，同时加入受试药及阳性药、刺激剂C48/80，l小时后 收集上清液，检测氨基己糖苷酶的含量，观察受试药物对肥大细胞脱颗粒的作用。
[0078] 4.统计方法
[0079] 实验数据以?土SEM表示，多组比较采用单因素方差分析进行结果统计。
[0080] 5.实验结果
[0081 ] 5.1参苗抗过敏鼻炎颗粒对炎性因子的影响
[0082]本研究采用单核巨噬细胞系RAW264.7细胞评价了参芪抗过敏鼻炎颗粒体外抗炎 作用，结果见表1，结果显示参芪抗过敏鼻炎颗粒对单核巨噬细胞炎性因子TNF-α的分泌具 有明显的抑制作用，与模型组比较具有显著性差异。阳性对照药辛芩颗粒也具有很好的抑 制炎性因子分泌的作用。具体结果如表1所示。
[0083] 5.2参芪抗过敏鼻炎颗粒对淋巴细胞增殖的影响
[0084]淋巴细胞的过度增殖是发生特发性过敏反应的基础之一。本实验通过分离大鼠脾 脏Τ、Β淋巴细胞，考察了参芪抗过敏鼻炎颗粒对Τ、Β淋巴细胞增殖的作用，结果显示，参芪抗 过敏鼻炎颗粒对大鼠来源的T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖均具有明显的抑制作用。阳性药 辛芩颗粒对T淋巴细胞的增殖有明显的抑制作用，但对B淋巴细胞的增殖没有抑制作用。具 体结果如表2所示。
[0085] 5.3参芪抗过敏鼻炎颗粒对肥大细胞脱颗粒的作用
[0086]肥大细胞脱颗粒是速发型变态反应和炎症等病理反应的基础，在变态反应中，肥 大细胞是变应性反应的靶细胞，受到抗原攻击，脱颗粒，释放组胺、类胰蛋白酶、氨基己糖 苷酶。本实验考察了参芪抗过敏鼻炎颗粒对细胞脱颗粒作用的影响，结果显示，参芪抗过敏 鼻炎颗粒可以明显抑制RBL-2H3细胞的脱颗粒作用，且这种抑制作用具有剂量依赖性。阳性 药辛芩颗粒也具有一定的抑制肥大细胞脱颗粒作用。具体结果如表3所示。
[0087] 6.结论
[0088] 通过以上实验研究，得出以下结论：
[0089] 1)根据本发明上述实施例得到的参芪抗过敏鼻炎颗粒能够抑制单核巨噬细胞对 炎性因子的分泌，说明参芪抗过敏鼻炎颗粒具有一定的抗炎作用；
[0090] 2)根据本发明上述实施例得到的参芪抗过敏鼻炎颗粒具有明显抑制T淋巴细胞和 B淋巴细胞增殖的作用；
[0091] 3)根据本发明上述实施例得到的参芪抗过敏鼻炎颗粒能够明显抑制RBL-2H3细胞 对β-氨基己糖苷酶的分泌作用，说明参芪抗过敏鼻炎颗粒具有抑制肥大细胞的脱颗粒作 用。
[0092] 实验二、参芪抗过敏鼻炎颗粒治疗变应性鼻炎药效学评价
[0093] 1.实验目的
[0094] 变应性鼻炎(allergic rhinitis，AR)又叫过敏性鼻炎，属于I型超敏反应，即速发 型超敏反应。其发病机制为：当特异性的机体接触致敏原（变应原）后，机体内产生相应的 IgE型抗体，IgE抗体的Fc段与肥大细胞以及嗜碱性粒细胞表面的Fc受体结合。当机体再次 接触相同致敏原后，致敏原与效应细胞(肥大细胞或嗜碱性粒细胞)表面的两个IgE的Fab段 同时发生特异性结合，发生桥联反应，触发效应细胞脱颗粒并释放组胺等生物活性物质，这 些生物活性介质介导的鼻粘膜组织中大量炎性介质、免疫活性细胞及细胞因子浸润，从而 导致了鼻粘膜的慢性炎症反应性疾病的发生。
[0095]目前普遍认为气道-黏膜-血液系统中Thl/Th2细胞失衡是AR发生的主要免疫机 制。AR发生过程中，Th2反应呈现明显活跃状态，Thl则受到抑制，活化的Th2细胞将诱导B细 胞转化为浆细胞，进而大量释放IgE，从而介导超敏反应，即AR的发生。
[0096] 本实验通过建立大鼠变应性鼻炎模型，通过考察大鼠打喷嚏、挠鼻反应，血清中 Thl和Th2细胞特异性因子的含量，以及鼻粘膜的通透性评价参芪抗过敏鼻炎颗粒对变应性 鼻炎的作用效果。选用目前临床一线抗过敏药物开瑞坦为化学阳性药，辛芩颗粒为中药阳 性药。
[0097] 2.实验材料
[0098] 2.1、药品与试剂
[0099]受试药物：根据本发明上述实施例得到的参芪抗过敏鼻炎颗粒（SQBYKL，规格： 6g)，临用前配制，溶剂为DL水；化学阳性药开瑞坦片（Loratadine，规格IOmg，国药准字 H10970410)，购有限公司，临用前配制，溶剂为DL;中药阳性药辛芩颗粒(XQKL，规格:20g，国 药准字：15112305 )，购自浙江普洛康裕天然药物有限公司，临用前配制，溶剂为DL水；制造 大鼠变应鼻炎性模型用鸡卵清蛋白〇VA(Albumin chicken egg gradell规格：10g，货号： A5503，批号:9006-59-1 )，购自sigma;氧化铝三联四防稀释液(规格100mL)购自哈药集团生 物制药有限公司；生理盐水:购自四川科伦药业股份有限公司；伊文思蓝:购自梯希爱化成 工业发展有限公司；水合氯醛购自国药集团化学试剂有限公司。
[0100] 2.2、实验用材料及仪器
[0101] 2ml注射器;大鼠灌胃针。
[0102] 2.3、实验动物
[0103] Wistar大鼠130只，雄性，体重180~200g，购自北京维通利华生物科技股份有限公 司，许可证编号：SCXK(京）2012-0001 star大鼠饲养于塑料笼内。饲养室温度20~25 °C， 相对湿度40-70%，光照12h暗/明交替，自由进食、饮水
[0104] 3、实验方法
[0105] 3.1、造模方法
[0106] 1)基础致敏:每只wistar大鼠腹腔Iml注射0.3 %的OVA AL(0H)3溶液，隔天一次， 共7次；
[0107] 2)强化致敏:基础致敏结束后第二天开始强化致敏，每只鼠滴鼻致敏，每侧鼻孔20 μL 5%的OVA生理盐水溶液，每天一次，共7次；
[0108] 3)反应阶段:3天，不做任何处理；
[0109] 4)每只鼠每侧鼻孔20μ1 5%的OVA生理盐水溶液滴鼻激发，观察滴鼻后IOmin内鼠 抓鼻子、打喷嚏的次数，按照评分标准进行评分，评分不小于5分即为造模成功；
[0110] 5)药物治疗阶段:将造模成功的鼠随机分组，给药7次，在给药的第3，6天和给药结 束后的第一天分别滴鼻激发，进行行为学观察。
[0111] 3.2、实验动物分组
[0112] 动物适应性饲养后进行变应性鼻炎造模实验，造模结束后随机分为空白对照组、 模型组、化学阳性药组、中药阳性药组、参芪抗过敏鼻炎颗粒低、中、高剂量组。每组18只动 物。
[0113] 3.3、剂量设置
[0114] 受试药以及阳性药的给药剂量设置遵循人和大鼠体表面积折算的等效剂量比值 (参照魏伟教授等主编的《药理实验方法学》第四版附表），将用于人的等效剂量换算成大鼠 等效剂量，参芪抗过敏鼻炎颗粒的折算用于大鼠的剂量确定为中剂量，低和高剂量与中剂 量为3倍关系设置给药剂量。转换的小鼠给药剂量如下：
[0115]化学阳性药(开瑞坦）：0.9mg/kg，溶剂为双蒸水，
[0116] 中药阳性药(XQKL) :5.4g/kg，溶剂为双蒸水，
[0117] 低-SQBYKL组:0 · 9g/kg，溶剂为双蒸水，
[0118] 中-SQBYKL组:2 · 7g/kg，溶剂为双蒸水，
[0119] 高-SQBYKL组:8 · lg/kg，溶剂为双蒸水。
[0120] 3.4、给药方式
[0121] 大鼠分别给予不同剂量的受试药物及阳性药物(造模结束后给药七次），给药方式 为灌胃给药，容量为0.2ml/10g，模型组动物给予等量DL水。
[0122] 3.5、实验方法
[0123] 行为学观察:滴鼻激发，观察各组别动物挠鼻和大喷嚏次数变化；
[0124] Thl/Th2相关血清因子检测：10%水合氯醛麻醉大鼠（0.3ml/100g)腹主动脉取血， 室温静置2h后、4 °C过夜，4 °C 3000rpm离心10min收集血清，-20 °C保存;检测血清中的IL-4， IFN-gama，IgE 含量；
[0125] 鼻粘膜通透性检测：10%水合氯醛麻醉大鼠（0.3ml/100g)后，切开颈部皮肤，暴露 气管，在气管上切开两个相距〇.5cm的小口，向着心脏方向的小口插入聚乙烯管，保证鼠正 常呼吸，从另外一个孔插入连接蠕动栗的聚乙烯管，并插入鼻腔，用做灌流;手术结束后，尾 静脉注射1 %伊文思蓝Iml，并用37°C 1 %OVA生理盐水溶液灌流鼻腔，每15min收集一次灌流 液，共收集9个时间点，通过检测伊文思蓝含量，评价鼻粘膜的通透性。
[0126] 4.统计方法
[0127] 实验数据以? 士 SEM表示，多组比较采用单因素方差分析进行结果统计。
[0128] 5.、实验结果
[0129] 5.1、参芪抗过敏鼻炎颗粒对变应性鼻炎大鼠模型的药效学观察
[0130] 本实验建立大鼠变应性鼻炎模型，通过观察大鼠挠鼻和大喷嚏次数，评价了参芪 抗过敏鼻炎颗粒对变应性鼻炎的药效学作用。结果发现，与模型组比较，参芪抗过敏鼻炎颗 粒各剂量组均具有明显的抑制大鼠挠鼻和打喷嚏次数的作用，说明该受试药对变应性鼻炎 有一定的治疗作用。中药和化药阳性药均具有很好的抑制大鼠挠鼻和打喷嚏次数的作用。 具体结果如表4所示。
[0131] 5.2、参芪抗过敏鼻炎颗粒对变应性鼻炎大鼠模型的Thl/Th2变化的影响
[0132] IFN-γ和IL-4分别是Thl细胞和Th2特异性的分泌因子，变应性鼻炎发生时Thl/ Th2比例失衡，Th2细胞分化数量远远大于Thl细胞分化。IgE则是介导超敏反应的重要介质。 本实验通过检测变应性鼻炎大鼠血清中IFN- γ和IL-4的含量变化，评价参芪抗过敏鼻炎颗 粒对Thl和Th2平衡的影响。结果显示，参芪抗过敏鼻炎颗粒可以明显降低变应性鼻炎大鼠 模型血清中IL-4的含量，说明受试药能够抑制T细胞向Th2细胞的分化，同时增加了血清中 IFN- γ含量，说明参苗抗过敏鼻炎颗粒能够促进T细胞向Thl方向分化。参苗抗过敏鼻炎颗 粒还明显降低了模型大鼠血清中IgE的含量。中药和化学阳性药均明显降低血清中IL-4的 含量和提高了 IFN- γ。具体结果如表5所示。
[0133] 5.3参芪抗过敏鼻炎颗粒对变应性鼻炎大鼠鼻粘膜通透性的影响
[0134] 鼻粘膜通透性是反映变应性鼻炎严重程度的重要评价指标，本研究通过检测不同 时间点鼻腔灌流液中伊文思蓝的浓度，评价参芪抗过敏鼻炎颗粒对大鼠鼻粘膜的通透性的 影响。结果显示，参芪抗过敏鼻炎颗粒具有明显的改善变应性鼻炎大鼠鼻腔粘膜通透性的 作用。中药和化药阳性药也具有很好的作用。具体结果如表6和图1所示，图1中，实验数据以 X 士 SEI表示，###Ρ〈〇.001￥8空白组，乍〈0.05、，〈0.01、##叩〈0.001￥8模型组。
[0135] 6.结论
[0136] 通过以上实验研究，得出参芪抗过敏鼻炎颗粒对变应性鼻炎有很好的治疗作用， 主要表现在明显降低了变应性鼻炎大鼠挠鼻和打喷嚏的次数，改善了大鼠鼻腔粘膜的通透 性。这种作用可能是与通过改善大鼠体内Thl/Th2比例失衡有关系。
[0137] 本发明的参芪抗过敏鼻炎颗粒采用中药制剂技术，具有一定的抗过敏和抗炎的作 用，用于治疗急、慢性鼻炎和过敏性鼻炎，见效快，无刺激，无依赖性，药效持久，无需禁忌等 为其用于治疗过敏性鼻炎提供了药理学依据，综合指标明显优于西药制剂，是一种有效作 用于急、慢性鼻炎和过敏性鼻炎的中药制剂，具有广阔的发展前景和优势，对急、慢性鼻炎 以及过敏性鼻炎的治疗将产生质的飞跃具有特殊重要意义。
[0138] 以上技术特征构成了本发明的实施例，其具有较强的适应性和实施效果，可根据 实际需要增减非必要的技术特征，来满足不同情况的需求。
[0139] 表1.参芪抗过敏鼻炎颗粒对RAW264.7细胞分泌TNF-α的抑制作用
[0144] 注:实验数据以：士 SEM表示，###p〈0.OOlvs空白，**P〈0.01、***P〈0.OOlvs模型。
[0145] 表3.参芪抗过敏鼻炎颗粒对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响

【主权项】
1. 一种参苗抗过敏鼻炎颗粒，其特征在于原料按重量份数计包括:党参150份至170份、 仙鹤草150份至170份、金银花150份至170份、黄芩150份至170份、蒲公英150份至170份、大 青叶150份至170份、黄芪300份至340份、白芷300份至340份、薄荷150份至170份、细辛50份 至60份、乳糖700份至750份。2. 根据权利要求1所述的参芪抗过敏鼻炎颗粒，其特征在于按下述方法得到：第一步， 将所需量的党参、仙鹤草、金银花、黄芩、蒲公英、薄荷和细辛混合后得到六味药材，用重量 为药材重量的8倍至12倍的水对六味药材煎煮2次至4次，每次煎煮1. Oh至3. Oh，每次煎煮后 分别得到煎液，将每次煎煮得到的煎液过滤后进行合并得到水提混合液，将水提混合液进 行减压浓缩至六味药材与水提混合液的重量比为1:13后得到浓缩液，接着将浓缩液进行离 心后，弃去浓缩液的下层沉淀、保留浓缩液的上层清液，将上层清液减压浓缩至60°C下的相 对密度为1.22至1.25，得到水提清膏； 第二步，将所需量的大青叶、白芷、黄芪混合后得三味药材，用重量为三味药材重量的 10倍至14倍的60 %至80 %乙醇回流提取三味药材2次至4次，每次1. Oh至2. Oh，每次乙醇回 流提取后分别得到醇提液，将每次乙醇回流提取后分别得到醇提液过滤后进行合并得到醇 提混合液，减压浓缩回收醇提混合液中的乙醇并将醇提混合液浓缩至60°C下的相对密度为 1.22至1.25,得到醇提清膏； 第三步，合并水提清膏和醇提清膏，混合均匀后进行真空干燥并过筛得到浸膏粉，浸膏 粉的含水量不大于6 %; 第四步，向浸膏粉中加入所需量的乳糖混合均匀后进行制粒得到本发明的参芪抗过敏 鼻炎颗粒。3. 根据权利要求2所述的参芪抗过敏鼻炎颗粒，其特征在于第一步中，待水煮沸后再投 入六味药材;或/和，第一步中，将浓缩液在4000r/min的转速条件下离心15min;或/和，第一 步和第二步中，减压浓缩的压力为〇.〇8MPa，减压浓缩的温度为55°C至65°C。4. 根据权利要求2或3所述的参芪抗过敏鼻炎颗粒，其特征在于第三步中，合并水提清 膏和醇提清膏，混合均匀后在压力为〇.〇8MPa、温度为60°C条件下进行真空干燥并过100目 筛得到浸膏粉。5. 根据权利要求2或3或4所述的参芪抗过敏鼻炎颗粒，其特征在于第四步中，将参芪抗 过敏鼻炎颗粒在温度为50°C条件下进行干燥至参芪抗过敏鼻炎颗粒的含水量不大于6%。6. -种根据权利要求1所述的参芪抗过敏鼻炎颗粒的制备方法，其特征在于按下述步 骤进行:第一步，将所需量的党参、仙鹤草、金银花、黄芩、蒲公英、薄荷和细辛混合后得到六 味药材，用重量为药材重量的8倍至12倍的水对六味药材煎煮2次至4次，每次煎煮1. Oh至 3. Oh，每次煎煮后分别得到煎液，将每次煎煮得到的煎液过滤后进行合并得到水提混合液， 将水提混合液进行减压浓缩至六味药材与水提混合液的重量比为1:13后得到浓缩液，接着 将浓缩液进行离心后，弃去浓缩液的下层沉淀、保留浓缩液的上层清液，将上层清液减压浓 缩至60°C下的相对密度为1.22至1.25，得到水提清膏； 第二步，将所需量的大青叶、白芷、黄芪混合后得三味药材，用重量为三味药材重量的 10倍至14倍的60 %至80 %乙醇回流提取三味药材2次至4次，每次1. Oh至2. Oh，每次乙醇回 流提取后分别得到醇提液，将每次乙醇回流提取后分别得到醇提液过滤后进行合并得到醇 提混合液，减压浓缩回收醇提混合液中的乙醇并将醇提混合液浓缩至60°C下的相对密度为 1.22至1.25,得到醇提清膏； 第三步，合并水提清膏和醇提清膏，混合均匀后进行真空干燥并过筛得到浸膏粉，浸膏 粉的含水量不大于6 %; 第四步，向浸膏粉中加入所需量的乳糖混合均匀后进行制粒得到本发明的参芪抗过敏 鼻炎颗粒。7. 根据权利要求6所述的参芪抗过敏鼻炎颗粒的制备方法，其特征在于第一步中，待水 煮沸后再投入六味药材;或/和，第一步中，将浓缩液在4000r/min的转速条件下离心15min; 或/和，第一步和第二步中，减压浓缩的压力为〇. 〇8MPa，减压浓缩的温度为55°C至65°C。8. 根据权利要求6或7所述的参芪抗过敏鼻炎颗粒的制备方法，其特征在于第三步中， 合并水提清膏和醇提清膏，混合均匀后在压力为〇. 〇8MPa、温度为60°C条件下进行真空干燥 并过100目筛得到浸膏粉。9. 根据权利要求6或7所述的参芪抗过敏鼻炎颗粒的制备方法，其特征在于第四步中， 将参芪抗过敏鼻炎颗粒在温度为50°C条件下进行干燥至参芪抗过敏鼻炎颗粒的含水量不 大于6%。10. 根据权利要求8所述的参芪抗过敏鼻炎颗粒的制备方法，其特征在于第四步中，将 参芪抗过敏鼻炎颗粒在温度为50°C条件下进行干燥至参芪抗过敏鼻炎颗粒的含水量不大 于6% 〇
【文档编号】A61K36/855GK106074883SQ201610641611
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年8月5日 公开号201610641611.3, CN 106074883 A, CN 106074883A, CN 201610641611, CN-A-106074883, CN106074883 A, CN106074883A, CN201610641611, CN201610641611.3
【发明人】王豪鹏
【申请人】王豪鹏