专利名称：具有修改的等电点的抗体的制作方法
技术领域：
本发明总体上涉及用于改变抗体的等电点，并且在一些情况下产生改善的血浆药物代谢动力学(例如增加的体内血清半衰期)的组合物和方法。
背景技术：
抗体是结合特异性抗原的免疫蛋白。在大多数哺乳动物(包括人类和小鼠)中，抗体由成对的重多肽链和轻多肽链构建而成。每条链均由单个免疫球蛋白(Ig)结构域组成，并且因此通用术语免疫球蛋白被用于所述蛋白质。每条链均由两个相异的区组成，这两个相异的区被称为可变区和恒定区。轻链可变区和重链可变区示出抗体之间明显的序列多样性，并且负责结合靶标抗原。恒定区示出较小的序列多样性，并且负责结合许多天然蛋白质以便引出重要的生物化学事件。在人体中，存在五种不同类别的抗体，所述抗体包括IgA (其包括子类别IgAl和IgA2)、IgD、IgE、IgG (其包括子类别IgGl、IgG2、IgG3以及IgG4)以及IgM。这些抗体类别之间的区别性特征是它们的恒定区，尽管在V区可能存在较细微的差异。IgG抗体是主要由两条重链和两条轻链组成的四聚体蛋白质。IgG重链主要由四个免疫球蛋白结构域组成，这四个结构域以VH-CH1-CH2-CH3的顺序从N末端连接至C末端，分别指重链可变结构域、重链恒定结构域1、重链恒定结构域2以及重链恒定结构域3(又称为VH-C Y1-C Y 2-C Y 3,分别指重链可变结构域、恒定Y I结构域、恒定Y 2结构域以及恒定Y 3结构域)。IgG轻链主要由两个免疫球蛋白结构域组成，这两个结构域以VL-CL的顺序从N末端连接至C末端,分别指轻链可变结构域和轻链恒定结构域。抗体具有在一至三周范围内的体内血清半衰期。这种有利的特性是因为由于全长分子的大尺寸而引起的对肾脏过滤的阻止作用，和抗体Fe区与新生儿Fe受体FcRn的相互作用。结合至FcRn使被内吞的抗体从内涵体循环反回到血流中(Raghavan等，1996,AnnuRev Cell Dev Bioll2 :181-220 ;Ghetie 等，2000，Annu Rev Imm unoll8 :739_766，这两篇参考文献是以引用的方式全部并入)。抗体的其它特性可以决定它的体内清除率(例如稳定性和半衰期)。除了抗体结合至FcRn受体之外，有助于清除和半衰期的其它因素是血清聚集、血清中的酶促降解、导致通过免疫系统清除的抗体的固有免疫原性、抗原介导的摄取、FcR(非FcRn)介导的摄取以及非血清分布(例如在不同的组织隔室中)。最近已经提出，具有较低等电点的具有可变区的抗体还可以具有较长的血清半衰期(Igawa等，2010PEDS. 23(5) =385- 392 ;美国公布2011/0076275，所述参考文献均以引用的方式全部并入)。然而，这种结果的机制仍然未充分理解，并且事实上，作者已经提出对可变区进行工程改造是对Fe区进行工程改造的一个替代。此外，抗体与抗体的可变区不同。这样，必须在不明显影响结合亲和性的情况下改变各可变区。因此，本申请解释了电荷状态对抗体药物代谢动力学的影响，并且在恒定区中提供了新型的经过工程改造的变异体以提高血清半衰期。发明简述待解决的问题因此，待解决的一个问题是通过改变恒定结构域来增加抗体的血清半衰期，因此允许相同的恒定区与不同的抗原结合序列(例如包括CDR的可变区)一起使用，并且将免疫原性改变的可能性最小化。因此，如本文所述，提供具有恒定区变异体、具有减小的Pl以及延长的半衰期的抗体为改善抗体的药物代谢动力学特性提供了一种更模块化的方法。另夕卜，由于本文概括的方法，通过导入来自不同的IgG同种型的Pl变异体来明显减小由Pl变异体引起的免疫原性的可能，以使得在没有引入明显的免疫原性的情况下减小P〗。因此，要解决的另一个问题是阐明具有高的人类序列含量(例如在任何特定位置上最小化或避免非人类残基)的低Pl恒定结构域。MM因此，一方面，本发明提供了用于通过引入至少6个氨基酸突变来修改抗体的等电点的方法，所述氨基酸突变包括在选自重链恒定结构域和轻链恒定结构域的恒定结构域中用非原生的氨基酸取代，其中用于取代的氨基酸具有低于原生氨基酸的PI，以使得变异抗体的等电点降低至少O. 51og。在一些情况下，仅改变重链恒定结构域；在一些情况下，仅改变轻链恒定结构域，并且在一些情况下，重恒定结构域与轻恒定结构域均包含突变的氨基酸。另一方面，所述方法提供通过选自由以下组成的组的氨基酸突变来产生这些变异体在位置119上的非原生谷 氨酸、在位置131上的非原生半胱氨酸，在位置133上的非原生精氨酸、赖氨酸或谷氨酰胺，在位置137上的非原生谷氨酸、在位置138上的非原生丝氨酸、在位置164上的非原生谷氨酸、在位置192上的非原生天冬酰胺、在位置193上的非原生苯丙氨酸、在位置196上的非原生赖氨酸、在位置199上的非原生苏氨酸、在位置203上的非原生天冬氨酸、在位置205上的非原生谷氨酸或谷氨酰胺、在位置208上的非原生天冬氨酸、在位置210上的非原生谷氨酸或谷氨酰胺、在位置214上的非原生苏氨酸、在位置217上的非原生精氨酸和在位置219上的非原生半胱氨酸、在位置221上的缺失、在位置222上的非原生缬氨酸或苏氨酸、在位置223上的缺失、在位置224上的非原生谷氨酸、在位置225上的缺失、在位置235上的缺失、在位置274上的非原生谷氨酰胺或谷氨酸、在位置296上的非原生苯丙氨酸、在位置300上的非原生苯丙氨酸、在位置309上的非原生缬氨酸、在位置320上的非原生谷氨酸、在位置322上的非原生谷氨酸、在位置326上的非原生谷氨酸、在位置327上的非原生甘氨酸、在位置334上的非原生谷氨酸、在位置339上的非原生苏氨酸、在位置355上的非原生谷氨酰胺或谷氨酸、在位置384上的非原生丝氨酸、在位置392上的非原生天冬酰胺或谷氨酸、在位置397上的非原生甲硫氨酸、在位置419上的非原生谷氨酸、以及在位置447上的缺失或非原生天冬氨酸(使用EU编号)。另一方面，本发明提供了用于通过在轻恒定结构域中引入至少2个氨基酸突变来修改抗体的等电点，以使得变异抗体的所述等电点降低至少O. 51og的方法，并且其中所述变异抗体包含选自由以下组成的组的取代在位置126上的非原生谷氨酰胺或谷氨酸、在位置145上的非原生谷氨酰胺、谷氨酸或苏氨酸、在位置152上的非原生天冬氨酸、在位置156上的非原生谷氨酸、在位置169上的非原生谷氨酰胺或谷氨酸、在位置199上的非原生谷氨酸、在位置202上的非原生谷氨酸以及在位置207上的非原生谷氨酸(使用EU编号)。在其它方面中，本发明提供了用于通过引入以下各项来修改抗体的等电点的方法a)在重恒定结构域中引入至少6个氨基酸突变，其中所述变异抗体包含选自由以下组成的组的突变在位置119上的非原生谷氨酸、在位置131上的非原生半胱氨酸，在位置133上的非原生精氨酸、赖氨酸或谷氨酰胺，在位置137上的非原生谷氨酸、在位置138上的非原生丝氨酸、在位置164上的非原生谷氨酸、在位置192上的非原生天冬酰胺、在位置193上的非原生苯丙氨酸、在位置196上的非原生赖氨酸、在位置199上的非原生苏氨酸、在位置203上的非原生天冬氨酸、在位置205上的非原生谷氨酸或谷氨酰胺、在位置208上的非原生天冬氨酸、在位置210上的非原生谷氨酸或谷氨酰胺、在位置214上的非原生苏氨酸、在位置217上的非原生精氨酸和在位置219上的非原生半胱氨酸、在位置221上的缺失、在位置222上的非原生缬氨酸或苏氨酸、在位置223上的缺失、在位置224上的非原生谷氨酸、在位置225上的缺失、在位置235上的缺失、在位置274上的非原生谷氨酰胺或谷氨酸、在位置296上的非原生苯丙氨酸、在位置300上的非原生苯丙氨酸、在位置309上的非原生缬氨酸、在位置320上的非原生谷氨酸、在位置322上的非原生谷氨酸、在位置326上的非原生谷氨酸、在位置327上的非原生甘氨酸、在位置334上的非原生谷氨酸、在位置339上的非原生苏氨酸、在位置355上的非原生谷氨酰胺或谷氨酸、在位置384上的非原生丝氨酸、在位置392上的非原生天冬酰胺或谷氨酸、在位置397上的非原生甲硫氨酸、在位置419上的非原生谷氨酸、以及在位置447上的缺失或非原生天冬氨酸；和b)在轻恒定结构域中用至少2个非原生氨基酸取代，其中所述变异抗体包含选自由以下组成的组的取代在位置126上的非原生谷氨酰胺或谷氨酸，在位置145上的非原生谷氨酰胺、谷氨酸或苏氨酸，在位置152上的非原生天冬氨酸、在位置156上的非原生谷氨酸、在位置169上的非原生谷氨酰胺或谷氨酸、在位置199上的非原生谷氨酸、在位置202上的非原生谷氨酸以及在位置207上的非原生谷氨酸(使用EU编号)，以使得变异抗体的所述等电点降低至少O. 51og。另一方面，本发 明的pi抗体(使用以上方法产生)与没有突变的抗体相比较，具有增加的血清半衰期。另一方面，本发明提供了包含变异的重恒定结构域多肽的抗体，所述变异的重恒定结构域多肽包含SEQ ID NO 2的变异体，所述抗体包含选自由以下组成的组的至少6个突变在位置119上的非原生谷氨酸、在位置131上的非原生半胱氨酸，在位置133上的非原生精氨酸、赖氨酸或谷氨酰胺，在位置137上的非原生谷氨酸、在位置138上的非原生丝氨酸、在位置164上的非原生谷氨酸、在位置192上的非原生天冬酰胺、在位置193上的非原生苯丙氨酸、在位置196上的非原生赖氨酸、在位置199上的非原生苏氨酸、在位置203上的非原生天冬氨酸、在位置205上的非原生谷氨酸或谷氨酰胺、在位置208上的非原生天冬氨酸、在位置210上的非原生谷氨酸或谷氨酰胺、在位置214上的非原生苏氨酸、在位置217上的非原生精氨酸和在位置219上的非原生半胱氨酸、在位置221上的缺失、在位置222上的非原生缬氨酸或苏氨酸、在位置223上的缺失、在位置224上的非原生谷氨酸、在位置225上的缺失、在位置235上的缺失、在位置274上的非原生谷氨酰胺或谷氨酸、在位置296上的非原生苯丙氨酸、在位置300上的非原生苯丙氨酸、在位置309上的非原生缬氨酸、在位置320上的非原生谷氨酸、在位置322上的非原生谷氨酸、在位置326上的非原生谷氨酸、在位置327上的非原生甘氨酸、在位置334上的非原生谷氨酸、在位置339上的非原生苏氨酸、在位置355上的非原生谷氨酰胺或谷氨酸、在位置384上的非原生丝氨酸、在位置392上的非原生天冬酰胺或谷氨酸、在位置397上的非原生甲硫氨酸、在位置419上的非原生谷氨酸、以及在位置447上的缺失或非原生天冬氨酸。另一方面，本发明提供了包含变异的轻恒定结构域多肽的抗体，所述变异的轻恒定结构域多肽包含SEQ ID NO :112的变异体，其中所述变异抗体包含选自以下组成的组的取代在位置126上的非原生谷氨酰胺或谷氨酸、在位置145上的非原生谷氨酰胺、谷氨酸或苏氨酸；在位置152上的非原生天冬氨酸、在位置156上的非原生谷氨酸、在位置169上的非原生谷氨酰胺或谷氨酸、在位置199上的非原生谷氨酸、在位置202上的非原生谷氨酸以及在位置207上的非原生谷氨酸(使用EU编号)。另一方面，本发明提供了编码抗体的核酸，所述核酸包括编码变异的重链恒定结构域的核酸和/或编码变异的轻链恒定结构域的核酸·。还包括了含有所述核酸的宿主细胞和产生所述抗体的方法。另一方面，本发明提供了包含变异的重链恒定结构域的抗体，所述变异的重链恒定结构域具有下式A_X119_T_K_G_P_S_V_F_P_L_A_P_X131_S_X133_S_T_S_X137_X138_T_A_A_L_G_C_L_V_K_D-Y-F-P-E-P-V-T-V-S-W-N-S-G-A-L-X164-S-G-V-H-T-F-P-A-V-L-Q-S-S-G-L-Y-S-L-S-S-V-V-T-V-P-S-S-X192-X193-G-T-X196-T-Y-X199-C-N-V-X203-H-X205-P-S-X208-T-X210-V-D-K-X214-V-E-X217-K-X219-C-X221-X222-X223-X224-X225_C-P-P-C-P-A-P-X233-X234_X235_X236_G-P-S-V-F-L-F-P-P-K-P-K-D-T-L-M-1-S-R-T-P-E-V-T-C-V-V-V-D-V-S-H-E-D-P-E-V-X274-F-N-W-Y-V-D-G-V-E-V-H-N-A-K-T-K-P-R-E-E-Q-X296-N-S-T-X300-R-V-V-S-V-L-T-V-X309-H-Q-D-W-L-N-G-K-E_Y_X320_C_X322_V_S_N_X326_X327_L_P_A_P_I_E_X334_T_I_S_K_X339_K_G_Q_P_R_E_P_Q_V_Y_T_L-P-P-S-X355-E-E-M-T-K-N-Q-V-S-L-T-C-L-V-K-G-F-Y-P-S-D-1-A-V-E-W-E-S-X384-G-Q-P-E-N-N-Y-X392-T-T-P-P-X397-L-D-S-D-G-S-F-F-L-Y-S-K-L-T-V-D-K-S-R-W-Q-X419-G-N-V-F-S_C_S~V_X428_H_E_A_L_H_X434_H_Y_T_Q_K_S_L_S_L_S_P_G_X447，其中X119选自由S和E组成的组；其中X131选自由S和C组成的组；其中X133选自由K、R、E以及Q组成的组；其中X137选自由G和E组成的组；其中X138选自由G和S组成的组；其中X164选自由T和E组成的组；其中X192选自由S和N组成的组；其中X193选自由L和F组成的组； 其中X196选自由Q和K组成的组；其中X199选自由I和T组成的组；其中X2tl3选自由N和D组成的组；其中X2tl5选自由K、E以及Q组成的组；
其中X2tl8选自由N和D组成的组；其中X21tl选自由K、E以及Q组成的组；其中X214选自由K和T组成的组；其中X217选自由P和R组成的组；其中X219选自由S和C组成的组；其中X22tl选自由C、PLG以及G组成的组；其中X221选自由D和缺失组成的组；其中X222选自由K、V以及T组成的组；其中X223选自由T和缺失组成的组；其中X224选自由H和E组成的组；其中X225选自由T和缺失组成的组；其中X233选自由E和P组成的组；其中X234选自由L和V组成的组；其中X235选 自由L、A以及缺失组成的组；其中X236选自由G、A以及缺失组成的组；其中X274选自由K、Q以及E组成的组；其中X296选自由Y和F组成的组；其中X咖选自由Y和F组成的组；其中X3tl9选自由L和V组成的组；其中X32tl选自由K和E组成的组；其中X322选自由K和E组成的组；其中X326选自由K和E组成的组；其中X327选自由A和G组成的组；其中X334选自由K和E组成的组；其中X339选自由A和T组成的组；其中X355选自由R、Q以及E组成的组；其中X384选自由N和S组成的组；其中X392选自由K、N以及E组成的组；其中X397选自由V和M组成的组；其中X419选自由Q和E组成的组；其中X428选自由M和L组成的组；其中X434选自由N和S组成的组；并且其中X447选自由K、DEDE以及缺失组成的组；其中所述变异的重链恒定结构域与SEQ ID NO :2相比较，包含至少6个取代，并且所述变异体不是SEQ ID N0:3。另一方面，本发明提供了变异的重链恒定结构域，所述变异的重链恒定结构域与SEQ ID NO 2相比较包含至少10个或15个取代。另一方面，本发明提供了具有变异的轻链恒定结构域的抗体，所述变异的轻链恒定结构域具有下式
X108-T-V-A-A-P-S-V-F-1-F-P-P-S-D-E-X124-L-X126-S-G-T-A-S-V-V-C-L-L-N-X138-F-Y-P-R-E-A-X145-V-Q-W-K-V-D-X152-A-L-Q-X156-G-N-S-Q-E-S-V-T-E-Q-D-S-X169-D-S-T-Y-S-L-S-S-T-L-T-L-S-K-A-D-Y-E-K-H-K-V-Y-A-C-E-V-T-H-X199-G-L-X202-S-P-V-T-X207-S-F-N-R-G-E-X214J
其中X108选自由R和Q组成的组；
其中X124选自由Q和E组成的组；
其中X126选自由K、E以及Q组成的组；
其中X138选自由N和D组成的组；
其中X145选自由K、E、Q以及T组成的组；
其中X152选自由N和D组成的组；
其中X156选自由S和E组成的组；
其中X169选自由K、E以及Q组成的组；
其中X199选自由Q和E组成的组；
其中X2tl2选自由S和E组成的组；并且
其中X2tl7选自由K和E组成的组；并且
其中X214选自由C和⑶EDE组成的组。
其中所述变异的轻链恒定结构域与SEQ ID NO :112相比较，包含至少2个取代。
附图简述
图1.在本发明中使用的野生型恒定区的氨基酸序列。
图2.重链CHl结构域的 工程改造。四种IgG同种型的CHl残基、暴露分数以及可以进行以降低Pl的取代的实例的列表。根据EU索引进行编号。
图3.轻链CK结构域的工程改造。CK残基、暴露分数以及可以进行以降低pi的取代的列表。根据EU索引进行编号。
图4. pi工程改造的恒定区IgGl-CHl-pI (6)和CK_pI (6)的氨基酸序列。
图5.在本发明中使用的野生型抗VEGF VH和VL可变区的氨基酸序列。
图6.在本发明中使用的Pl工程改造的抗VEGF抗体 XENP9493IgGl-CHl-pI (6) -CK-pI (6)的重链和轻链的氨基酸序列。
图7.抗体Fab结构域的结构，所述结构示出XENP9493IgGl_CHl_pI (6)_CK_pI (6) 中Pi降低的突变的位置。
图8.在Agilent Bioanalyzer上进行的pi工程改造的抗VEGF变异体的分析,所述分析示出高的纯度。
图9.在SEC上进行的pi工程改造的抗VEGF变异体的分析，所述分析示出高的纯度。
图10.在IEF凝胶上进行的pi工程改造的抗VEGF变异体的分析，所述分析示出变异体具有改变的Pi。
图11.贝伐单抗(bevacizumab)和结合至VEGF的经过pi工程改造的抗VEGF的结合分析(Biacore)。
图12. CHl和CK pi工程改造的抗VEGF的DSC分析，所述分析示出高的热稳定性。
图13. huFcRn小鼠中贝伐单抗变异体的PK。具有pi工程改造的CHl和CK结构域的9493变异体延长了体内半衰期。图14. huFcRn小鼠中四个独立体内研究中的贝伐单抗的原生IgGl型式的PK。平 均IgGl半衰期是3. 2天。图15. huFcRn小鼠中贝伐单抗的原生IgG2型式的PK。图16.具有不同恒定链的抗体变异体的半衰期与等电点(pi)之间的相关性。
图17. IgG子类别的氨基酸序列比对。具有边界框的残基图解了 IgG之间的同种 型差异。用粗体突出了促成较高Pi的残基(K、R以及H)或较低pi的残基(D和E)。用灰 色示出降低Pi或扩展表位的所设计的取代。图18. CK和C X轻恒定链的氨基酸序列。用粗体突出了促成较高pi的残基(K、R 以及H)或较低pi的残基(D和E)。用灰色示出可以被修饰以降低pi的优选位置。图19. pi工程改造的变异重链的氨基酸序列。图20. pi工程改造的变异轻链的氨基酸序列。图21. huFcRn小鼠中pi工程改造的变异贝伐单抗抗体的PK结果。图22.将pi工程改造的修饰与增强结合至FcRn的Fc修饰相组合的变异体的PK 结果。图23.原生贝伐单抗抗体、具有减小的pi的pi工程改造的变异型式以及原生型 式和pi工程改造的型式的半衰期与等电点(pi)之间的相关性，所述pi工程改造的型式并 入了提高结合至人类FcRn的Fc修饰。图24.新型同种型IgG-pI_Iso3与IgG子类别的氨基酸序列比对。蓝色指出 pI-iso3与四种原生IgG的IgGl、IgG2、IgG3以及IgG4中的残基之间的匹配。具有边界框 的残基图解了 IgG同种型的差异，这些差异已经被并入减小pi的IgG-pI-Iso3中。图25.铰链区和Fc区中IgGl与IgG-pI_Iso3之间的差异。图26. CH1 区中 IgGl 与 IgG-pI-Iso3 之间的差异。图27. CK-pI⑷变异体的氨基酸图解。红色指出相对于原生CK轻恒定链，赖氨酸 至谷氨酸的电荷取代。图28. pi工程改造的重恒定链和轻恒定链的氨基酸序列。图29.抗体Fc区中碱性残基的分析，它示出暴露分数和取代成Glu的相对于WT 残基的能量正规化的计算能量。具有高暴露分数和取代成Glu的有利AE的碱性残基是电 荷交换突变以便降低Pi的靶标。图30.示出电荷交换突变对抗体pi的作用的曲线图。随着pi降低，每次电荷交 换Pi的变化减小。图31. pi工程改造的同种型变异的贝伐单抗抗体(IgG-pI-Is03)和与取代N434S 的组合在huFcRn小鼠中的PK结果。图32. pi工程改造的同种型变异的贝伐单抗抗体和与取代N434S的组合在huFcRn 小鼠中的PK结果。图33. pi工程改造的同种型变异的贝伐单抗抗体和与取代N434S的组合在huFcRn 小鼠中的PK结果的散点图。每个点表示来自研究的单一个小鼠。应注意的是，还可以将 428L取代添加至这些pi抗体的每一个当中。图34.示出pi工程改造的变异体pi与半衰期(tl/2)之间的相关性的曲线图。
图35. CK与CX结构域的结构比对。
图36. 20种氨基酸的文献pi。应注意的是，列出的pi是按照游离氨基酸计算；在蛋白质情况下的任何侧链的实际Pi是不同的，并且因此出于本发明的目的，这个列表是用来示出pi趋势，并且不是绝对数。
图37.示例性的pi工程改造的变异体的数据表，它列出
权利要求
1.一种抗体，其包含具有下式的变异的重链恒定结构域A-X119-T-K-G-P-S-V-F-P-L-A-P-X131-S-X133-S-T-S-X137-X138-T-A-A-L-G-C-L-V-K-D-Y-F-P-E-P-V-T-V-S-W-N-S-G-A-L-X164-S-G-V-H-T-F-P-A-V-L-Q-S-S-G-L-Y-S-L-S-S-V-V-T-V-P-S-S-X192-X193-G-T-X196-T-Y-X199-C-N-V-X203-H-X205-P-S-X208-T-X210-V-D-K-X214-V-E-X217-K-X219-C-X221-X222-X223-X224-X225_C-P-P-C-P-A-P-X233-X234_X235_X236_G-P-S-V-F-L-F-P-P-K-P-K-D-T-L-M-1-S-R-T-P-E-V-T-C-V-V-V-D-V-S-H-E-D-P-E-V-X274-F-N-W-Y-V-D-G-V-E-V-H-N-A-K-T-K-P-R-E-E-Q-X296-N-S-T-X300-R-V-V-S-V-L-T-V-X309-H-Q-D-W-L-N-G-K-E-Y-X32o_C_X322_V_S_N_X326_X327_L_P_A_P_ I _E_X334_T_ I _S_K_X339_K_G_Q_P_R_E_P_Q_V_Y_T_L_P_P-S-X355-E-E-M-T-K-N-Q-V-S-L-T-C-L-V-K-G-F-Y-P-S-D-1-A-V-E-W-E-S-X384-G-Q-P-E-N-N-Y-X392-T-T-P-P-X397-L-D-S-D-G-S-F-F-L-Y-S-K-L-T-V-D-K-S-R-W-Q-X419-G-N-V-F-S-C-S-V-X42S-H-E-A-L-H-X434-H-Y-T-Q-K-S-L-S-L-S-P-G-X447 j其中X119选自由s和E组成的组； 其中X131选自由S和C组成的组； 其中X133选自由K、R、E以及Q组成的组； 其中X137选自由G和E组成的组； 其中X138选自由G和S组成的组； 其中X164选自由T和E组成的组； 其中X192选自由S和N组成的组； 其中X193选自由L和F组成的组； 其中X196选自由Q和K组成的组； 其中X199选自由I和T组成的组； 其中X2tl3选自由N和D组成的组； 其中X2tl5选自由K、E以及Q组成的组； 其中X2tl8选自由N和D组成的组； 其中X21tl选自由K、E以及Q组成的组； 其中X214选自由K和T组成的组； 其中X217选自由P和R组成的组； 其中X219选自由S和C组成的组； 其中X22tl选自由C、PLG以及G组成的组； 其中X221选自由D和缺失组成的组； 其中X222选自由K、V以及T组成的组； 其中X223选自由T和缺失组成的组； 其中X224选自由H和E组成的组； 其中X225选自由T和缺失组成的组； 其中X233选自由E和P组成的组； 其中X234选自由L和V组成的组； 其中X235选自由L、A以及缺失组成的组； 其中X236选自由G、A以及缺失组成的组； 其中X274选自由K、Q以及E组成的组；其中X296选自由Y和F组成的组； 其中X3qq选自由Y和F组成的组； 其中X3tl9选自由L和V组成的组； 其中X32tl选自由K和E组成的组； 其中X322选自由K和E组成的组； 其中X326选自由K和E组成的组； 其中X327选自由A和G组成的组； 其中X334选自由K和E组成的组； 其中X339选自由A和T组成的组； 其中X355选自由R、Q以及E组成的组； 其中X384选自由N和S组成的组； 其中X392选自由K、N以及E组成的组； 其中X397选自由V和M组成的组； 其中X419选自由Q和E组成的组； 其中X428选自由M和L组成的组； 其中X434选自由N和S组成的组；并且 其中X447选自由K、DEDE以及缺失组成的组； 其中所述变异的重链恒定结构域与SEQ ID NO: 2相比较，包含至少6个突变，所述变异的重链恒定结构域不是SEQ ID NO: 3，并且其中根据EU索引进行所述编号。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述变异的重链恒定结构域与SEQID NO: 2相比较，包含至少10个突变。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述变异的重链恒定结构域与SEQID NO: 2相比较，包含至少15个突变。
4.根据权利要求1、2或3所述的抗体，其进一步包含轻链恒定结构域。
5.根据权利要求4所述的抗体，其中所述轻链恒定结构域是SEQID NO: 112。
6.根据权利要求4所述的抗体，其中所述轻链恒定结构域是具有下式的变异的轻链恒定结构域X108-T-V-A-A-P-S-V-F-1-F-P-P-S-D-E-X124-L-X126-S-G-T-A-S-V-V-C-L-L-N-X138-F-Y-P-R-E-A-X145-V-Q-W-K-V-D-X152-A-L-Q-X156-G-N-S-Q-E-S-V-T-E-Q-D-S-X169-D-S-T-Y-S-L-S-S-T-L-T-L-S-K-A-D-Y-E-K-H-K-V-Y-A-C-E-V-T-H-X199-G-L-X202-S-P-V-T-X207-S-F-N-R-G-E-X214, 其中Xltl8选自由R和Q组成的组； 其中X124选自由Q和E组成的组； 其中X126选自由K、E以及Q组成的组； 其中X138选自由N和D组成的组； 其中X145选自由K、E、Q以及T组成的组； 其中X152选自由N和D组成的组； 其中X156选自由S和E组成的组； 其中X169选自由K、E以及Q组成的组；其中X199选自由Q和E组成的组； 其中X2tl2选自由S和E组成的组；并且 其中X2tl7选自由K和E组成的组；并且 其中X214选自由C和⑶EDE组成的组； 其中所述变异的轻链恒定结构域与SEQ ID NO: 112相比较，包含至少2个突变。
7.根据权利要求7所述的抗体，其中所述抗体选自由以下组成的组 a)在所述重链恒定结构域中包含SEQID NO: 52并且在所述轻链恒定结构域中包含SEQ ID NO: 117 的抗体； b)在所述重链恒定结构域中包含SEQID NO: 98并且在所述轻链恒定结构域中包含SEQ ID NO: 152 的抗体； c)在所述重链恒定结构域中包含SEQID NO: 66并且在所述轻链恒定结构域中包含SEQ ID NO: 152的抗体和 d)包含SEQID NO: 191的抗体；以及 e)在所述重链恒定结构域中包含SEQID NO: 98并且在所述轻链恒定结构域中包含SEQ ID NO: 150 的抗体。
8.—种核酸，其编码如权利要求1至7所述的抗体。
9.一种宿主细胞,其含有如权利要求8所述的核酸。
10.一种产生如权利要求1至7中任一项所述的抗体的方法，所述方法包括培养如权利要求9所述的宿主细胞和从所述细胞培养物中回收所述抗体。
全文摘要
本发明总体上涉及用于改变抗体的等电点，并且在一些情况下产生改善的血浆药物代谢动力学，例如增加的体内血清半衰期的组合物和方法。
文档编号C07K16/00GK103052649SQ201180036902
公开日2013年4月17日 申请日期2011年7月29日 优先权日2010年7月29日
发明者B.I.达希亚特, M.J.伯尼特, G.A.拉扎 申请人:Xencor公司