专利名称：一种竹节草素的制备方法
技术领域：
本发明属于植物有效成分提取技术领域，涉及一种竹节草素的制备方法。
背景技术：
竹节草素(Nudaphantin)，黄色结晶，分子式为C22H22O8，分子量为414. 41，是从竹节草的根茎中提取分离得到的一种黄酮苷类化合物。药理研究表明，竹节草素对KB细胞具有细胞毒活性。竹节草为鸭跖草科植物竹筋草的全草，具有清热解毒、利尿消肿、止血的功效；主疮疖痈肿、咽喉肿痛、热痢、白浊、小便不利、外伤出血等症。目前对竹节草素的研究较少，国内尚无竹节草素提取工艺方面的相关报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种利用聚酰胺树脂和高速逆流色谱结合提取分离竹节草素的方法。本发明所述的一种竹节草素的制备方法，其特征在于按下列步骤进行
(1)将竹节草根茎粉碎，用乙醇溶液进行超声提取，提取液浓缩干燥，得到竹节草根茎乙醇粗提物；
(2)用乙酸乙酯对粗提物进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，得到浓缩液；
(3)浓缩液与少量聚酰胺树脂拌样后，挥干溶剂，上聚酰胺树脂柱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集竹节草素洗脱液；
(4)洗脱液浓缩后经高速逆流色谱法分离纯化，冷冻干燥即得产品。所述步骤(I)中乙醇溶液为体积分数60-85%的乙醇水溶液，乙醇溶液与竹节草根茎的质量比为8-12 :1。所述步骤(I)中超声频率为25-40KHZ。所述步骤(3)中二氯甲烷-甲醇体积比为11-1:1。所述步骤(4)中高速逆流色谱法溶剂系统为环己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，体积比为(3-5) :(2-5) :(6-8) : (2-4)，上相为固定相，下相为流动相。本发明的有益效果在于本发明先用聚酰胺树脂柱层析对目标成分进行富集，降低了后续工序的处理量，高速逆流色谱法分离纯化样品损失小、产品纯度高、制备量大。
具体实施例方式下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明，下列实施例旨在举例描述本发明，而不是以任何方式限制本发明。实施例I :
将竹节草根茎粉碎，取lkg，用12kg75%乙醇溶液进行超声提取，超声频率为30KHz，提取3次，每次O. 5h，提取液浓缩干燥，得到竹节草根茎乙醇粗提物，用乙酸乙酯对粗提物进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，得到浓缩液，与少量聚酰胺树脂拌样后，挥干溶剂，上聚酰胺树脂柱，二氯甲烷-甲醇按体积比10:1、6:1、I: I梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集竹节草素洗脱液，洗脱液浓缩注入高速逆流色谱仪，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-水5:3:8:4为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，主机转速为800rpm，流动相流速为3ml/min，根据检测器谱图收集竹节草素流分，浓缩，冷冻干燥即得竹节草素I. 4g，HPLC检测含量为98%。
实施例2:
将竹节草根茎粉碎，取lkg，用10kg70%乙醇溶液进行超声提取，超声频率为25-40KHZ，提取2次，每次I. 5h，提取液浓缩干燥，得到竹节草根茎乙醇粗提物，用乙酸乙酯对粗提物进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，得到浓缩液，与少量聚酰胺树脂拌样后，挥干溶剂，上聚酰胺树脂柱，二氯甲烷-甲醇按体积比11:1、5:1、I: I梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集竹节草素洗脱液，洗脱液浓缩注入高速逆流色谱仪，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-水5:5:8:4为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，主机转速为750rpm，流动相流速为3. 5ml/min，根据检测器谱图收集竹节草素流分，浓缩，冷冻干燥即得竹节草素I. 9g，HPLC检测含量为97%。实施例3
将竹节草根茎粉碎，取lkg，用8kg60%乙醇溶液进行超声提取，超声频率为40KHz，提取2次，每次I. 5h，提取液浓缩干燥，得到竹节草根茎乙醇粗提物，用乙酸乙酯对粗提物进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，得到浓缩液，与少量聚酰胺树脂拌样后，挥干溶剂，上聚酰胺树脂柱，二氯甲烷-甲醇按体积比10:1、5:1、I: I梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集竹节草素洗脱液，洗脱液浓缩注入高速逆流色谱仪，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-水3:2:6:2为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，主机转速为750rpm，流动相流速为4ml/min，根据检测器谱图收集竹节草素流分，浓缩，冷冻干燥即得竹节草素I. 3g，HPLC检测含量为95%。实施例4:
将竹节草根茎粉碎，取lkg，用12kg85%乙醇溶液进行超声提取，超声频率为25KHz，提取2次，每次lh，提取液浓缩干燥，得到竹节草根茎乙醇粗提物，用乙酸乙酯对粗提物进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，得到浓缩液，与少量聚酰胺树脂拌样后，挥干溶剂，上聚酰胺树脂柱，二氯甲烷-甲醇按体积比11: 1、6: I、I: I梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集竹节草素洗脱液，洗脱液浓缩注入高速逆流色谱仪，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-水5:5:7:4为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，主机转速为900rpm，流动相流速为2. 5ml/min，根据检测器谱图收集竹节草素流分，浓缩，冷冻干燥即得竹节草素2. 0g, HPLC检测含量为98%。
权利要求
1.一种竹节草素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)将竹节草根茎粉碎，用乙醇溶液进行超声提取，提取液浓缩干燥，得到竹节草根茎乙醇粗提物； (2)用乙酸乙酯对粗提物进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，得到浓缩液； (3)浓缩液与少量聚酰胺树脂拌样后，挥干溶剂，上聚酰胺树脂柱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集竹节草素洗脱液； (4)洗脱液浓缩后经高速逆流色谱法分离纯化，冷冻干燥即得产品。
2.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于所述步骤(I)中乙醇溶液为体积分数 60-85%的乙醇水溶液，乙醇溶液与竹节草根茎的质量比为8-12 :1。
3.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于所述步骤(I)中超声频率为25-40KHZ。
4.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中二氯甲烷-甲醇体积比为 11-1:1。
5.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于所述步骤(4)中高速逆流色谱法溶剂系统为环己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，体积比为(3-5) :(2-5) :(6-8) : (2-4)，上相为固定相，下相为流动相。
全文摘要
本发明属于植物有效成分提取技术领域，涉及一种竹节草素的制备方法。制备方法包括以下步骤将竹节草根茎粉碎，用醇类溶剂进行超声提取，得到醇提物，用乙酸乙酯对醇提物进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，与少量聚酰胺树脂拌样后，挥干溶剂，上聚酰胺树脂柱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩后经高速逆流色谱法分离纯化，冷冻干燥即得产品。本发明操作简单、能耗小、产品纯度高。
文档编号C07D493/18GK102643287SQ20121011956
公开日2012年8月22日 申请日期2012年4月23日 优先权日2012年4月23日
发明者万冬梅, 刘东锋 申请人:南京泽朗医药科技有限公司