专利名称：一种卡丹宾的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种卡丹宾的制备方法，特别是涉及一种应用超临界CO2萃取和高速逆流色谱制备卡丹宾的方法。
背景技术：
Anthocephaluschinensis (lam. ) A Rich, et ffalp.为菌草科植物大叶黄梁木，别名黄梁木，生于山谷溪旁或杂木林下，分布于广东、广西、 云南，以树皮、叶入药，具有清热等功效，主治高热不退、头晕、头痛、失眠、神经性皮炎、牛皮癣。团花树皮含生物喊卡丹宾(cadambine), 3α -二氧卡丹宾(3a -dihvdrocadambine), 3 β - 二氧卡丹宾(3 β -dihydro-cadamb ine ), 3β -异二氢卡丹宾(3β -isodihydrocadarnbine)及四氢-β -咔啉(tetrahydro-β -carboline),还含以齐墩果酸(oleanolic acid)及团花酸(cadambagenic acid)为式兀的阜式；叶含生物碱卡丹宾,金鸡宁(cinchonine)及二氢金鸡宁(di-hydrOcinchonine)。卡丹宾是团花叶主要活性成分，为咔啉类生物碱。卡丹宾具有抗虐活性，能抑制恶性疟原虫的生长。经文献检索，尚未发现卡丹宾的工业提取纯化方法的相关报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种卡丹宾的制备方法，该方法产品收率高、含量高。为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下
(1)取团花叶原料细粉，加入碱性醇浸润2-6小时，加入萃取釜中，采用超临界CO2萃
取；
(2)萃取物用3%的盐酸水溶液溶解，过滤，滤液用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；
(3)以正己烷-氯仿-甲醇-pH=8.5的氨水溶液为溶剂系统,采用高速逆流色谱仪分离粗品中的卡丹宾，收集目标组分，浓缩、干燥即得高含量卡丹宾。所述步骤(I)中碱性醇为90-99%甲醇，氨水调节pH8-10。所述步骤(I)中超临界CO2萃取条件为萃取温度为40-55 °C ,萃取压力为30-40MPa，C(V流量为2_5ml/g生药/min，萃取时间为2_4h，分离釜I温度为40_45°C，压力为7-9MPa，分离釜II温度为30-40°C，压力为4_6MPa。所述步骤(3)中正己烷-氯仿-甲醇_pH=8. 5的氨水溶液体积比为3_5 :7_9 :4_5 2-4，上相为流动相，下相为固定相。本发明的积极效果在于
1)采用超临界CO2萃取，环保无污染，效率高，能耗较低；
2)采用高速逆流色谱分离，制备量大，样品损失少，制备周期短，产品含量高。
下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例I :
取团花叶原料细粉1kg，加300mlpH8的90%甲醇浸润2小时，加入萃取釜中，进行超临界CO2萃取，萃取温度为45°C，萃取压力为30MPa，CO2流量为2ml/g生药/min，萃取时间为4h，分离釜I温度为40°C，压力为7MP a，分离釜II温度为30°C，压力为4MPa，收集解析萃取物，用3%的盐酸水溶液溶解萃取物，过滤，滤液用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正己烷、氯仿、甲醇、pH=8. 5的氨水溶液，按体积比为3 7 4 :4混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节750rpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为2ml/min，收集卡丹宾流分，浓缩、干燥得卡丹宾191mg，经HPLC检测，含量为96. 3%。实施例2:
取团花叶原料细粉1kg，加400mlpH9的95%甲醇浸润6小时，加入萃取釜中，进行超临界CO2萃取，萃取温度为40°C，萃取压力为30MPa，CO2流量为3ml/g生药/min，萃取时间为3h，分离釜I温度为40°C，压力为7MPa，分离釜II温度为35°C，压力为5MPa，收集解析萃取物，用3%的盐酸水溶液溶解萃取物，过滤，滤液用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正己烷、氯仿、甲醇、pH=8. 5的氨水溶液，按体积比为4 9 5 3混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节SOOrpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为2. 5ml/min，收集卡丹宾流分，浓缩、干燥得卡丹宾230mg,经HPLC检测，含量为95. 4%。实施例3
取团花叶原料细粉3kg，加1000mlpH8的99%甲醇浸润6小时，加入萃取釜中，进行超临界CO2萃取，萃取温度为50°C，萃取压力为40MPa，CO2流量为4ml/g生药/min，萃取时间为3h，分离釜I温度为45°C，压力为8MPa，分离釜II温度为30°C，压力为4MPa，收集解析萃取物，用3%的盐酸水溶液溶解萃取物，过滤，滤液用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正己烷、氯仿、甲醇、pH=8. 5的氨水溶液，按体积比为4 9 4 :4混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节700rpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为2ml/min，收集卡丹宾流分，浓缩、干燥得卡丹宾601mg，经HPLC检测，含量为95. 7%。实施例4:
取团花叶原料细粉5kg，加I. 8LpH10的99%甲醇浸润2小时，加入萃取釜中，进行超临界CO2萃取，萃取温度为48°C，萃取压力为32MPa，CO2流量为3. 5ml/g生药/min，萃取时间为4h，分离釜I温度为45°C，压力为7MPa，分离釜II温度为35°C，压力为4. 5MPa，收集解析萃取物，用3%的盐酸水溶液溶解萃取物，过滤，滤液用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正己烷、氯仿、甲醇、PH=8. 5的氨水溶液，按体积比为5 8 5 4混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节900rpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为2. 5ml/min，收集卡丹宾流分，浓缩、干燥得卡丹宾897mg，经HPLC检测，含量为98. 8%。 实施例5:
取团花叶原料细粉10kg，加3LpH8的95%甲醇浸润5小时，加入萃取釜中，进行超临界CO2萃取，萃取温度为55°C，萃取压力为40MPa，CO2流量为5ml/g生药/min，萃取时间为2h，分离釜I温度为45°C，压力为9MPa，分离釜II温度为40°C，压力为6MPa，收集解析萃取物，用3%的盐酸水溶液溶解萃取物，过滤，滤液用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正己烷、氯仿、甲醇、pH=8. 5的氨水溶液，按体积比为5 9 5 :4混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节850rpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为3ml/min，收集卡丹宾流分，浓缩、干燥得卡丹宾 2.Ig,经HPLC检测，含量为96. 3%。
权利要求
1.ー种卡丹宾的制备方法，其特征在于包括以下步骤 (1)取团花叶原料细粉，加入碱性醇浸润2-6小吋，加入萃取釜中，采用超临界CO2萃取； (2)萃取物用3%的盐酸水溶液溶解，过滤，滤液用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品； (3)以正己烷-氯仿-甲醇-pH=8.5的氨水溶液为溶剂系统,采用高速逆流色谱仪分离粗品中的卡丹宾，收集目标组分，浓缩、干燥即得高含量卡丹宾。
2.根据权利要求I所述ー种卡丹宾的制备方法，其特征在于所述步骤(I)中碱性醇为90-99%甲醇，氨水调节pH8-10。
3.根据权利要求I所述ー种卡丹宾的制备方法，其特征在于所述步骤(I)中超临界CO2萃取条件为萃取温度为40-55°C，萃取压カ为30-40MPa，C(V流量为2_5ml/g生药/min，萃取时间为2-4h，分离釜I温度为40-45°C，压カ为7-9MPa，分离釜II温度为30_40°C，压カ为4_6MPa。
4.根据权利要求I所述ー种卡丹宾的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中正己烷-氯仿-甲醇_pH=8. 5的氨水溶液体积比为3-5 :7-9 :4_5 :2_4，上相为流动相，下相为固定相。
全文摘要
本发明提供了一种卡丹宾的制备方法。工艺步骤为取团花叶原料细粉，加入碱性醇浸润2-6小时，加入萃取釜中，采用超临界CO2萃取；萃取物用3%的盐酸水溶液溶解，过滤，滤液用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；以正己烷-氯仿-甲醇-pH=8.5的氨水溶液为溶剂系统，采用高速逆流色谱仪分离粗品中的卡丹宾，收集目标组分，浓缩、干燥即得高含量卡丹宾。本发明操作简单、污染小，采用本发明制备的卡丹宾，产品纯度高，易于实现产业化放大。
文档编号C07H1/08GK102659866SQ20121011933
公开日2012年9月12日 申请日期2012年4月23日 优先权日2012年4月23日
发明者万冬梅, 刘东锋 申请人:南京泽朗医药科技有限公司