专利名称：一种从下垂长叶暗罗中提取考拉维酸的方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及ー种从下垂长叶暗罗中提取考拉维酸的方法。
背景技术：
考拉维酸是ー种ニ萜类化合物，分子式为C2tlH32O2,分子量为304. 47，主要存在于番荔枝科(Annonaceae)下垂长叶暗罗的茎皮中，资源丰富。药理研究表明，考拉维酸具有细胞毒活性，对Crown gall tumors有显著抑制作用，对三种人型肿瘤细胞株(A-549肺癌、MCF-7乳癌、HT-29结肠腺癌)有明显的细胞毒活性；具有抗菌活性，对革兰阳性菌(枯草杆菌和金黄色葡萄球菌)有强的抑制作用；具有拒食活性。在1%浓度时，对地下白蚁有强的拒食活性。目前，对考拉维酸的研究较少，经检索，尚未发现大量制备考拉维酸的エ业化方法的公开报道。
发明内容
针对上述情况，本发明的目的是提供ー种从下垂长叶暗罗中提取考拉维酸的方法。本发明是通过如下技术方案实现的
ー种从下垂长叶暗罗中提取考拉维酸的方法，其特征在于包括以下步骤将下垂长叶暗罗茎皮粉碎，投入萃取釜，通入处于超临界状态的CO2进行萃取，获得油状萃取物，将萃取物用こ醚萃取多次，所得萃取液浓缩后得こ醚浸膏，将こ醚浸膏加入氧化镁柱层析，正己烷-こ醚梯度洗脱，洗脱液旋转蒸发浓缩，干燥即得考拉维酸粗品，用制备高效液相分离得到考拉维酸，纯度达98%以上。所述超临界0)2萃取温度为35_60°C，萃取压カ为20_35MPa，时间为l_3h，通入CO2流量为15-22L/h，以こ醇为夹带剂，夹带剂的用量为药材重量的5-15%。所述氧化镁柱径高比为1:8_15，正己烷-こ醚混合溶剂体积比为1:1-7。所述高效液相色潜法流动相为甲醇-O. 8%醋酸-四氢呋喃，体积比为480-510:100-120:1，流速 20_50ml/min，检测波长 237nm。本发明的有益效果是采用超临界CO2萃取，可实现连续提取，同时浓缩提取液，既节约溶剂，又提高了萃取率；采用反相高效液相色谱法精制纯化，纯度高达98%以上，所得产品可作为对照品使用，同时可进行大量制备；本发明エ艺稳定，可用于エ业化生产。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明进行进ー步说明。实施例I :
将下垂长叶暗罗茎皮粉碎，称取lOOOg，投入萃取釜中，通入处于超临界状态的CO2进行萃取，设定萃取釜參数萃取温度38°C，压カ为20MPa，通入CO2流量为18L/h，待萃取罐内环境稳定后，通入50mlこ醇作为夹带剂參与萃取，萃取2h后从分离釜中收集油状萃取物，将萃取物用こ醚反复萃取4次，合并こ醚萃取液，浓缩后得到こ醚浸膏。将こ醚浸膏与适量氧化镁混合拌匀，用浸膏5倍量的氧化镁装柱(柱径高比1:10)，将拌样氧化镁置于柱顶，用正己烷-こ醚按体积比I: I、1: 3、1:7进行梯度洗脱，薄层跟踪监测，收集考拉维酸的流分，旋转蒸发浓缩，干燥得考拉维酸粗品。将考拉维酸粗品用甲醇溶解，O. 45 μ m微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，流动相为甲醇-O. 8%醋酸-四氢呋喃，体积比为510:120:1，流速25ml/min,以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长237nm，连续进样，收集含有考拉维酸的高纯度流分，浓缩干燥得产品3. lg，含量为98. 6%。实施例2:
将下垂长叶暗罗茎皮粉碎，称取lOOOg，投入萃取釜中，通入处于超临界状态的CO2进行萃取，设定萃取釜參数萃取温度60°c，压カ为28MPa，通入CO2流量为15L/h，待萃取罐内环境稳定后，通入150mlこ醇作为夹带剂參与萃取，萃取2h后从分离釜中收集油状萃取物，将萃取物用こ醚反复萃取4次，合并こ醚萃取液，浓缩后得到こ醚浸膏。将こ醚浸膏与适量氧化镁混合拌匀，用浸膏5倍量的氧化镁装柱(柱径高比1:8)，将拌样氧化镁置于柱顶，用正己烷-こ醚按体积比I: I、1:3. 5、1:7进行梯度洗脱，薄层跟踪监测，收集考拉维酸的流分，旋转蒸发浓缩，干燥得考拉维酸粗品。将考拉维酸粗品用甲醇溶解，O. 45 μ m微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，流动相为甲醇-O. 8%醋酸-四氢呋喃，体积比为490:120:1，流速20ml/min,以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长237nm，连续进样，收集含有考拉维酸的高纯度流分，浓缩干燥得产品2. 7g，含量为98. 7%。实施例3:
将下垂长叶暗罗茎皮粉碎，称取lOOOg，投入萃取釜中，通入处于超临界状态的CO2进行萃取，设定萃取釜參数萃取温度40°c，压カ为35MPa，通入CO2流量为20L/h，待萃取罐内环境稳定后，通入IOOmlこ醇作为夹带剂參与萃取，萃取Ih后从分离釜中收集油状萃取物，将萃取物用こ醚反复萃取3次，合并こ醚萃取液，浓缩后得到こ醚浸膏。将こ醚浸膏与适量氧化镁混合拌匀，用浸膏5倍量的氧化镁装柱(柱径高比1:15)，将拌样氧化镁置于柱顶，用正己烷-こ醚按体积比I: I、1: 3、1:7进行梯度洗脱，薄层跟踪监测，收集考拉维酸的流分，旋转蒸发浓缩，干燥得考拉维酸粗品。将考拉维酸粗品用甲醇溶解，0. 45 μ m微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，流动相为甲醇-0. 8%醋酸-四氢呋喃，体积比为500:110:1，流速50ml/min,以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长237nm，连续进样，收集含有考拉维酸的高纯度流分，浓缩干燥得产品2. 5g，含量为98. 4%。实施例4:
将下垂长叶暗罗茎皮粉碎，称取lOOOg，投入萃取釜中，通入处于超临界状态的CO2进行萃取，设定萃取釜參数萃取温度50°c，压カ为25MPa，通入CO2流量为18L/h，待萃取罐内环境稳定后，通入120mlこ醇作为夹带剂參与萃取，萃取3h后从分离釜中收集油状萃取物，将萃取物用こ醚反复萃取4次，合并こ醚萃取液，浓缩后得到こ醚浸膏。将こ醚浸膏与适量氧化镁混合拌匀，用浸膏5倍量的氧化镁装柱(柱径高比1:12)，将拌样氧化镁置于柱顶，用正己烷-こ醚按体积比I: I、1: 3、1:7进行梯度洗脱，薄层跟踪监测，收集考拉维酸的流分，旋 转蒸发浓缩，干燥得考拉维酸粗品。将考拉维酸粗品用甲醇溶解，0. 45 μ m微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，流动相为甲醇-0. 8%醋酸-四氢呋喃，体积比为510:120: 1，流速40ml/min,以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长237nm，连续进样，收集含有考拉维酸的高纯度流分，浓缩干燥得产品3. Og，含量为98. 2%。 实施例5:
将下垂长叶暗罗茎皮粉碎，称取lOOOg，投入萃取釜中，通入处于超临界状态的CO2进行萃取，设定萃取釜參数萃取温度35°C，压カ为23MPa，通入CO2流量为22L/h，待萃取罐内环境稳定后，通入120mlこ醇作为夹带剂參与萃取，萃取2h后从分离釜中收集油状萃取物，将萃取物用こ醚反复萃取5次，合并こ醚萃取液，浓缩后得到こ醚浸膏。将こ醚浸膏与适量氧化镁混合拌匀，用浸膏5倍量的氧化镁装柱(柱径高比1:10) ，将拌样氧化镁置于柱顶，用正己烷-こ醚按体积比I: I、1: 4、1:7进行梯度洗脱，薄层跟踪监测，收集考拉维酸的流分，旋转蒸发浓缩，干燥得考拉维酸粗品。将考拉维酸粗品用甲醇溶解，O. 45 μ m微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，流动相为甲醇-O. 8%醋酸-四氢呋喃，体积比为480:100:1，流速35ml/min,以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长237nm，连续进样，收集含有考拉维酸的高纯度流分，浓缩干燥得产品2. 9g，含量为98. 8%。
权利要求
1.ー种从下垂长叶暗罗中提取考拉维酸的方法，其特征在于包括以下步骤将下垂长叶暗罗茎皮粉碎，投入萃取釜，通入处于超临界状态的CO2进行萃取，获得油状萃取物，将萃取物用こ醚萃取多次，所得萃取液浓缩后得こ醚浸膏，将こ醚浸膏加入氧化镁柱层析，正己烷-こ醚梯度洗脱，洗脱液旋转蒸发浓缩，干燥即得考拉维酸粗品，用制备高效液相分离得到考拉维酸，纯度达98%以上。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于所述超临界CO2萃取温度为35-60°C，萃取压カ为20-35MPa，时间为l_3h，通入CO2流量为15_22L/h，以こ醇为夹带剂，夹带剂的用量为药材重量的5-15%。
3.根据权利要求I所述的方法，其特征在于所述氧化镁柱径高比为1:8-15，正己烷-こ醚混合溶剂体积比为1:1-7。
4.根据权利要求I所述的方法，其特征在于所述高效液相色谱法流动相为甲醇-O.8%醋酸-四氢呋喃，体积比为480-510:100-120:1，流速20_50ml/min，检测波长237nm。
全文摘要
本发明提供一种从下垂长叶暗罗中提取考拉维酸的方法，包括以下步骤将下垂长叶暗罗茎皮粉碎，投入萃取釜，通入处于超临界状态的CO2进行萃取，获得油状萃取物，将萃取物用乙醚萃取多次，所得萃取液浓缩后得乙醚浸膏，将乙醚浸膏加入氧化镁柱层析，正己烷-乙醚梯度洗脱，洗脱液旋转蒸发浓缩，干燥即得考拉维酸粗品，用制备高效液相分离得到考拉维酸。本发明工艺简单，得率高，产品质量好、纯度高。
文档编号C07C51/42GK102690190SQ20121018456
公开日2012年9月26日 申请日期2012年6月7日 优先权日2012年6月7日
发明者刘东锋, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司