一种巴戟天寡糖5聚糖在制备抗心肌缺血及再灌注损伤药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了巴戟天提取物以及巴戟天寡糖5聚糖在制备抗心肌缺血和／或再灌注损伤及促进治疗性血管新生药物中的应用。所述的心肌缺血及再灌注损伤是心肌在血液灌注停止或不良时，即经历缺血、缺氧损伤，及重新建立循环、恢复血供后给机体带来的再次损伤。对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型及离体纯化培养的乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型均有保护作用，可显著缩小心肌梗死面积、减轻再灌注期心律失常的发生，有效保护心肌细胞的形态，减轻缺氧复氧对心肌细胞的损伤。所述的促进治疗性血管新生是通过一些方法的刺激包括某些药物的治疗作用增加功能性的冠状动脉分支或侧支，达到恢复缺血心肌血供，改善心脏功能的目的。
【专利说明】一种巴戟天寡糖5聚糖在制备抗心肌缺血及再灌注损伤药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物提取物的药物应用领域，具体涉及巴戟天寡糖在制备抗心肌缺血及再灌注损伤药物中的应用。
【背景技术】
[0002]冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease, CAD),简称冠心病，也称为缺血性心脏病，是人类常见的心血管疾病，是最主要的成人致死性心血管疾病。冠心病导致的急性心肌梗塞是目前造成心血管疾病发病率高、死亡率高的主要原因。冠心病发病持续增多，而且年轻化趋势明显。冠心病在临床上表现有严重的心肌缺血病症，严重威胁人类健康。冠心病患者的死亡率和长期预后与心肌损伤面积所决定的左心室功能相关，而心肌损伤面积是由心肌缺血的程度和时间决定的。心肌在血液供应阻断30min以上，就会引起各细胞器超微结构的改变和功能障碍，导致心肌细胞不可逆的损伤甚至死亡。心肌缺血性损伤随着缺血时间的延长而加重。
[0003]溶栓、冠脉动脉搭桥以及冠脉介入等是治疗急性心肌梗死的有效方法，这些方法可以使阻塞冠脉再通，但心肌缺血的及时再灌注，虽然可以挽救部分损伤但尚未坏死的心肌细胞，也可能加重缺血心肌的损伤，表现为心肌细胞的坏死加快，细胞肿胀，肌纤维收缩带的形成，心肌内出血以及无灌流现象，还可能产生严重的再灌注心律失常。这种冠心病发作治疗中发生的心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemical reperfusion injury,MIRI)严重影响了冠脉血运重建后即时的生存率和远期心功能的恢复。
[0004]巴戟天(Radixmorinda officinalis, RM0),为菌草科植物(Rubiaceae),是我国著名的四大南药之一，也是出口创汇的名贵药材。巴戟天具有补肾壮阳，强筋骨，祛风湿之功效，毒理实验证明它是一种 安全的药物。有文献报道，5~7年生巴戟天总糖的含量可超过50%，是巴戟天化学成分的重要组成部分。活性研究显示，巴戟天糖类成分具有免疫调节、抗肿瘤、抗抑郁、抗应激、抗炎、抗氧化、抗衰老等作用。
【发明内容】
[0005]本发明对巴戟天提取物特别是提取于菌草科植物巴戟天(Morinda officinalisHow)的干燥根的巴戟天寡糖(Morindae officinalis oligosaccharides,MOO)的生物活性进行了研究。 申请人:意外的发现，巴戟天提取物在抗心肌缺血和/或再灌注损伤中具有明显活性。对其活性成分追踪发现其保护心肌缺血及再灌注损伤、促进血管新生作用的有效成分为菊淀粉型低聚寡糖的混合物，其中巴戟天寡糖单体中4、5、6聚糖对促进缺氧复氧损伤后的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及小管形成作用最明显，且三者间作用相互协同。
[0006]巴戟天寡糖4聚糖分子式=C24H42O21，分子量:666.58，CAS登录号:13133_07_8，化学名称:鹿果四糖Nystose,结构式I ;缩写Hex4。
[0007]巴戟天寡糖5聚糖分子式=C3tlH52O26,分子量:828.72，CAS登录号:59432-60_9，化学名称:鹿果五糖lF-fructofuranosylnystose,结构式II ;缩写Hex5。
[0008]巴戟天寡糖6聚糖分子式=C36H62O31,分子量:990.86，化学名称:蔗果六糖Fru^ (2-1)-[Fru^ (2-1) ]4-a (2_l)Glc，结构式 III，缩写 Hex6。
[0009]我们的研究首次发现，巴戟天4、5、6聚糖可以显著缩小心肌梗死面积，减轻缺氧复氧对心肌细胞的损伤，减少再灌注期心律失常的发生，有效保护心肌细胞的形态，促进治疗性血管新生，其治疗效果优于地奥心血康和麝香保心丸。上述心肌缺血及再灌注损伤是心肌在血液灌注停止或不良时，即经历缺血、缺氧损伤，及重新建立循环、恢复血供后给机体带来的再次损伤。促进治疗性血管新生是通过一些方法的刺激包括某些药物的治疗作用增加功能性的冠状动脉分支或侧支，达到恢复缺血心肌血供，改善心脏功能的目的。
[0010]基于上述发现，本发明的目的在于提供巴戟天提取物特别是巴戟天4、5、6聚糖在制备抗心肌缺血再灌注损伤药物方面的新用途。
[0011]本发明提供了巴戟天提取物在制备抗心肌缺血、再灌注损伤或促进治疗性血管新生药物中的应用。
[0012]进一步地，所述巴戟天提取物提取于茜草科植物巴戟天的干燥根。
[0013]进一步地，本发明提供了巴戟天寡糖在制备抗心肌缺血、再灌注损伤或促进治疗性血管新生药物中的应用。优选地，所述巴戟天寡糖包含结构式1、结构式II和结构式III中所示化合物的一种或多种
[0014]
【权利要求】
1.巴戟天寡糖5聚糖在制备抗心肌缺血、再灌注损伤或促进治疗性血管新生药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其中，所述巴戟天寡糖5聚糖结构如结构式II所示
3.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中包含权利要求2中结构式II所示的巴戟天寡糖5聚糖组分。
4.如权利要求3所述的药物组合物，其剂型为注射剂、片剂、丸剂或胶囊剂。
5.一种巴戟天寡糖5聚糖的制备方法，包括如下步骤: . 1)、将巴戟天提取物溶解于水中，然后冷冻干燥； . 2)、在冻结干燥物中加入吡啶，并在O°C下边搅拌，边加入无水醋酸； . 3)、在温室状态下搅拌24h后，减压浓缩； . 4)、残留部分加入CHCl3，用饱和苏打水、饱和食盐水清洗；. 5)、用硫酸镁干燥后，再减压去除CHCl3； . 6)、用化合物精制法提纯，展开溶媒为甲苯:乙酸乙酯=2:1-1:1-1:2-1:3-1:.5，得乙酰化巴戟天寡糖5聚糖单体；. 7)、核磁共振检测确定乙酰化巴戟天寡糖5聚糖单体的结构； . 8)、乙酰化巴戟天寡糖5聚糖单体脱乙酰化； 将乙酰化巴戟天寡糖5聚糖单体溶解于的MeOH中，再加入的CH3ONa,在室温下搅拌.2.5h后，再加入DOWex50W x2[H+]进行中和，把树脂过滤之后，减压去除溶媒，将残留部分溶解到H2O中，通过Bio-Gel P_2Gel:10mL进行脱盐，冻结干燥后，获得白色固体； . 9)、白色固体经MALD1-TOF-MS的凝胶过滤后即得到巴戟天寡糖5聚糖纯品。
【文档编号】C07H3/06GK103638034SQ201310626425
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年12月2日 优先权日:2013年12月2日
【发明者】冯国清, 姚闵, 胡香杰, 赵胜, 张贺鸣, 杨景柯, 王奎鹏, 于爽, 察雪湘, 孟祥光, 吴瑶, 焦平利, 王宁, 刘茜, 徐君玲, 张晓宁, 郭婷婷, 王涵澄 申请人:冯国清, 姚闵