葎草鲜嫩茎叶中同时分级提取葎草叶蛋白和总黄酮的方法
【专利摘要】本发明提供了一种葎草鲜嫩茎叶中同时分级提取葎草叶蛋白和总黄酮的方法，先取葎草茎叶，洗净晾干后，测定含水量和湿重，并将其切成片段；再加入蒸馏水后进行匀浆，匀浆后压滤得到葎草浆汁和滤饼；葎草浆汁经过加热、碱沉淀、离心得上清液和沉淀，沉淀经冷冻干燥即得葎草叶蛋白；然后将滤饼和上清液混合，在碱性条件下提取、进行酸沉，离心，将所得沉淀经水洗、乙醇溶解、抽滤后，将滤液浓缩、冷冻干燥即得葎草总黄酮。本发明在一次工艺流程中同时分级提取葎草叶蛋白和葎草总黄酮，操作方便、提取工艺条件准确可靠、得率和纯度高，使葎草中的叶蛋白和黄酮这两种重要的有效成分能同时得以开发利用，提升了葎草资源的开发利用价值。
【专利说明】蘀草鲜嫩茎叶中同时分级提取蘀草叶蛋白和总黄酮的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物有效成分提取工艺的方法，具体涉及一种潷草鲜嫩茎叶中同时分级提取潷草叶蛋白和总黄酮的方法。
【背景技术】
[0002]_草[Humulus scandens (Lour.)Merr.]又名拉拉藤、拉拉秧、五爪龙、大叶五爪龙、割人藤等，为桑科潷草属草本植物，分布于我国除新疆、青海以外的所有省份，资源十分丰富。潷草营养成分较为全面，据分析，潷草鲜草粗脂肪、粗纤维的含量分别为0.6%、2.1%。潷草干物质中含有粗蛋白12.8%~20.46%，总黄酮含量约为2.03%，粗纤维15.4%~23.2%，无氮浸出物33.4%~41.8%,灰分7.1%~9.8%,钙0.84%~1.46%,磷0.26%~0.32%,以及Fe、Mn、Cu、Zn、VC、VE、叶绿素、胡萝卜素等多种微量元素及维生素。此外，潷草还含有木犀草素、葡萄糖甙、胆碱、挥发油、树脂等物质及潷草酮、蛇麻酮、牡荆素、B-潷草烯、石竹烯等多种化学活性物质。从而具有清热解毒、利尿消肿、消炎除湿、健胃化食等多种药理功效。因此，潷草具有很好的开发利用价值。
[0003]目前有关潷草叶蛋白提取的工艺只有王桃云等进行了研究(王桃云等，潷草叶蛋白提取工艺的优化，苏州科技学院学报一自然科学版，2005，22-1:59~64)，但其提取工艺只试验了单因素对叶蛋白得率的影响，未能进行多因素综合试验，致使工艺的稳定性和重复性较差，另外潷草叶蛋白的得率也较低。
[0004]潷草黄酮的提取工艺研究有很多，但多是采用乙醇溶液提取。目前，提取潷草叶蛋白和黄酮的方法各自分开，都是以提取单项物质为目的，这样导致这些工艺存在重复处理、费时，无法对潷草资源进行深度利用，浪费潷草资源等问题。对于从潷草鲜嫩茎叶中同时分级提取叶蛋白和总黄酮的工艺尚无先例，而潷草茎叶中富含蛋白质(干物质百分含量达12.8%~20.46%)和总黄酮(干物质百分含量约为2.03%)。因此，研发出一种从潷草鲜嫩茎叶中同时分级提取叶蛋白和总黄酮的方法，对于提高潷草鲜嫩茎叶加工的效益，深度开发和利用潷草资源具有十分重要的意`义。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种潷草鲜嫩茎叶中同时分级提取潷草叶蛋白和总黄酮的方法，使得潷草中的叶蛋白和黄酮这两种重要的有效成分能同时得以开发利用，所得叶蛋白和总黄酮得率、纯度较高，叶蛋白提取率在85%以上、纯度在60%以上，总黄酮提取率在85%以上、纯度在60%以上，工艺条件准确可靠、适用于大规模生产。
[0006]潷草鲜嫩茎叶中同时分级提取潷草叶蛋白和总黄酮的方法，包括以下步骤:
[0007]步骤1，取潷草茎叶，洗净晾干后，测定含水量和湿重，然后将其切成片段；
[0008]步骤2，将步骤I所得潷草茎叶加入9~11倍重量的水中，匀浆4~6min，然后压滤得到潷草浆汁和滤饼；
[0009]步骤3，将步骤2所得潷草浆汁先在pH9~11、65~75°C条件下进行加热和碱性沉降，然后离心得上清液和沉淀，沉淀物经冷冻干燥即得潷草叶蛋白；
[0010]步骤4，将步骤2所得潷草浆汁和步骤3所得上清液混合，在PH9~11、70~90°C条件下提取30~90min，然后滴加酸液调节pH2~4，离心，所得沉淀经水洗、乙醇溶解、抽滤后，将滤液浓缩、冷冻干燥即得潷草叶总黄酮。
[0011]作为上述发明的进一步优选，所述步骤2中匀浆时间为5.5min。
[0012]作为上述发明的进一步优选，所述步骤3中碱性沉降pH为10，沉降温度为71°C。
[0013]作为上述发明的进一步优选，所述步骤4中提取条件为pHl1、温度90°C，提取时间为30min,滴加酸液后混合液pH为3。
[0014]本发明与现有技术相比，其显著优点在于:第一，本发明在一次工艺工程中同时分级提取潷草叶蛋白和潷草总黄酮，使得潷草中的叶蛋白和黄酮这两种重要的有效成分能同时得以开发利用，提升了潷草资源的开发利用价值；第二，本发明克服了以往潷草总黄酮制备工艺中采用比色法定量导致测定总黄酮含量偏高且不能直接获取总黄酮的缺点，利用优化的碱提酸沉法获得较高纯度的潷草总黄酮；第三，所得叶蛋白和总黄酮得率、纯度较高，叶蛋白提取率在85%以上、纯度在60%以上，总黄酮提取率在85%以上、纯度在60%以上；第四，采用响应面和正交设计方法优化潷草叶蛋白和潷草总黄酮的提取工艺，确保了提取工艺条件准确可靠，具有安全、经济等特点，适用于大规模生产。
【专利附图】
【附图说明】
[0015]图1为提取潷草叶蛋白和潷草总黄酮的工艺流程图；图2为潷草叶蛋白沉降温度与打浆时间对潷草叶蛋白得率的响应面和等值线图；图3为潷草叶蛋白沉降pH与打浆时间对潷草叶蛋白得率的响应面和等值线图；图4为潷草叶蛋白沉降温度与潷草叶蛋白沉降pH对潷草叶蛋白得率的响应面和等值线图。
【具体实施方式】
`[0016]实施例1
[0017]参照图1所示，潷草鲜嫩茎叶中同时分级提取潷草叶蛋白和总黄酮的方法，包括以下步骤:
[0018]步骤1，取8月份采集的鲜嫩潷草茎叶，用蒸馏水洗净，在常温下晾干外表水，测定其含水量和重量后，将其直切成约0.5cm长度片段；
[0019]步骤2，将步骤I所得潷草茎叶加入重量10倍的水中，用高速匀浆机将其制作成匀浆状，然后将汁液完全压滤出来；
[0020]步骤3,在单因素试验基础上,根据Box-Behnken的中心组合设计原理，以打衆时间、叶蛋白沉降温度和叶蛋白沉降PH三个因素为自变量(分别以X1, X2, X3表示)，以潷草叶蛋白得率为响应值设计了三因素三水平共15个实验点的响应面分析实验，其中15个实验点分为12个析因点和3个零点。
[0021]步骤4，以步骤2所得滤渣和步骤3叶蛋白沉淀后离心所得的上清液为原料，在单因素试验基础上，选取对潷草总黄酮制备影响较大的因素，根据正交设计法设计原理，设计四因素三水平的试验，研究碱提pH、提取温度、提取时间及酸沉pH对潷草总黄酮得率的影响；然后将潷草总黄酮沉淀物进行蒸馏水洗涤，乙醇溶解、抽滤、旋转蒸发浓缩和冷冻干燥处理，得到总黄酮。
[0022]1.响应面试验
[0023](I)响应面试验具体包括如下几个方面实验:
[0024]X1:打衆时间(4min~6min)对_草叶蛋白得率的影响
[0025]X2:潷草叶蛋白沉降温度(65°C~75°C)对潷草叶蛋白得率的影响
[0026]X3:潷草叶蛋白沉降pH (9~11)对潷草叶蛋白得率的影响
[0027](2)响应面试验设计表:
[0028]表1三因素三水平响应面分析试验设计表
[0029]
【权利要求】
1.潷草鲜嫩茎叶中同时分级提取潷草叶蛋白和总黄酮的方法，其特征在于:包括以下步骤: 步骤1，取潷草茎叶，洗净晾干后，测定含水量和湿重，然后将其切成片段； 步骤2，将步骤I所得潷草茎叶加入9~11倍重量的水中，匀浆4~6min，然后压滤得到潷草浆汁和滤饼； 步骤3，将步骤2所得潷草浆汁先在pH9~11、65~75°C条件下进行加热和碱性沉降，然后离心得上清液和沉淀，沉淀经冷冻干燥即得潷草叶蛋白； 步骤4，将步骤2所得潷草浆汁和步骤3所得上清液混合，在pH9~11、70~90°C条件下提取30~90min，然后滴加酸液调节pH 2~4，离心，所得沉淀经水洗、乙醇溶解、抽滤后，将滤液浓缩、冷冻干燥即得潷草叶总黄酮。
2.根据权利要求1所述的潷草鲜嫩茎叶中同时分级提取潷草叶蛋白和总黄酮的方法，其特征在于:所述步骤2中匀浆时间为5.5min。
3.根据权利要求1所述的潷草鲜嫩茎叶中同时分级提取潷草叶蛋白和总黄酮的方法，其特征在于:所述步骤3中碱性沉降pH为10，沉降温度为71 °C。
4.根据权利要求1所述的潷草鲜嫩茎叶中同时分级提取潷草叶蛋白和总黄酮的方法，其特征在于:所述步骤4中提取条件为pHll、温度90°C，提取时间为30min，滴加酸液后混合液PH为3。`
【文档编号】C07K1/14GK103819534SQ201410091468
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2014年3月13日 优先权日:2014年3月13日
【发明者】王桃云, 薛凯, 陈子欣, 张慈安, 闵辉 申请人:苏州科技学院