可注射的改性透明质酸及其制备方法和组合物的制作方法
【专利摘要】本发明公开了可注射的改性透明质酸及其制备方法和组合物。改性透明质酸由透明质酸结构单元中的-COOH上中的-OH被基部分取代，取代率不低于40%。本发明的改性HA，可以与壳聚糖直接反应形成水凝胶，没有化学交联反应，不会破坏HA结构。流变动力学实验显示AHA-CS可被制成注射剂，形成的水凝胶结构较为稳定。动物实验表明AHA-CS水凝胶能加快伤口的愈合，促进细胞增殖并能促进角化细胞迁移。在水凝胶治疗的伤口中，组织学检测同时证明这种水凝胶促进肉芽组织及毛血管形成。在凝胶处理的创伤处，血管生成因子(VEGF-A)、趋化因子(SDF-1)、细胞外基质重构因子MMPs等MRNA的表达增加或表达上调。更有意义的是，在凝胶处理的伤口上找到了新生成的毛囊。
【专利说明】可注射的改性透明质酸及其制备方法和组合物
【技术领域】
[0001]本发明主要涉及一种改性透明质酸，本发明还涉及该改性高分子的制备方法和组合物。
【背景技术】
[0002]透明质酸是一种高分子的聚合物。是由单位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的高级多糖。D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺之间由β-1，3-糖苷键相连，双糖单位之间由β-1，4-糖苷键相连。双糖单位可达25000之多。在体内透明质酸的分子量从5千到2千万道尔顿。透明质酸具有特殊生物学上的活性，且拥有无毒、低免疫反应、高生物相容、及生物可分解以及人体可吸收等特性，所以也可用于眼睛外科手术、关节内注射液、伤口愈合、外科手术防黏剂。实验证明，透明质酸也可以透过口服，进入人体血液、肌肉、硬骨组织堆积，排出体外的仅5%左右。另外，透明质酸也可用来进行皱纹的填补，脸部组织的调整。
[0003]烧伤及慢性皮肤溃疡，是一个可以引起严重生理压力并危及生命的重要公众健康问题。皮肤损伤会引发包括体液损失、体温降低、感染和疤痕组织在内的一系列问题。皮肤损伤的修复过程涉及多种细胞和生长因子的复杂反应，这些反应包括凝聚、炎症反应、基质降解、合成及沉积，血管生成，纤维素增生，上皮的再次形成，收缩以及重建。在三度烧伤及慢性溃疡性损伤时，皮肤的再生及修复仍然是临床面临的难以攻克的挑战。细胞增殖、血管生成及上皮组织的重生是皮肤再生的决定性因素。而现有的组织工程皮肤支架材料在治疗这些皮肤损伤的过程中，在功能方面有其相应的局限性，不能很好地修复皮肤。
[0004]聚合纤维及水凝胶可以用来载荷生物活性分子及细胞以促进血管生成、上皮细胞迁移及整合。在组织工程中，透明质酸(HA)由于其生物相容性好、非硫酸化、源自糖胺聚糖，不引发炎症而被广泛使用，但是细胞不能黏附天然透明质酸上，这严重限制了其应用。
[0005]为了方便使用，人家对HA进行了改性，以使其可被制成注射剂。现有主要的改性方法中，其中一种是氧化透明质酸(HA)从而获得乙醛基，而醛基可与其他聚合物的氨基起反应产生水凝胶。但是这氧化过程需要HIO4与H2O2参与破坏HA中的化学键，致HA整个结构的丢失及进一步降解等问题。另一种方法是赋予HA可用于聚合反应的烯键，从而获得多种可注射的水凝胶包括热敏类型的水凝胶。但此方法需要应用引发物及化学交联剂，会对宿主产生不可避 免的毒害。
[0006]参考文献:
1.Zhang, X.， et al.， Association of increasing burn severity in mice withdelayed mobilization of circulating angiogenic cells.Arch Surgj 2010.145(3):p.259-66.2.Fauerbachj J.A., T.Pruzinskyj and G.N.Saxe, Psychological health andfunction after burn injury: setting research priori ties.J Burn Care Res, 2007.28(4): p.587-92.3.Sen, S.， D.Greenhalghj and T.Palmierij Review of burn in jury research
【权利要求】
1.改性透明质酸，其特征在于:透明质酸结构单元中的-COOH上中的-OH被
2.改性透明质酸的制备方法，包括如下步骤: 将透明质酸溶解于水性溶液中，加入1-氨基-3，3-二乙氧基丙烷ADEP以及可选的酰胺反应催化剂，反应完全得到反应物HA-ADEP并纯化； 将纯化的HA-ADEP溶解，使用非氧化性酸调节HA-ADEP溶液的pH至酸性，反应完全，纯化得到改性HA，记为AM’ AM的结构如权利要求1所述。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于:ADEP的摩尔添加量至少为透明质酸中羧基量的0.4倍。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于:ADEP的摩尔添加量优选为透明质酸中羧基量的0.6~3倍。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于:调节HA-ADEP溶液的pH至I~6。
6.根据权利要求2~5任意一项所述的制备方法，其特征在于:酰胺反应催化剂为EDC,或者是EDC与NHS、N-羟基硫代琥珀酰亚胺至少一种的混合物。
7.一种组合物，由权利要求1所述的改性透明质酸和壳聚糖组成，改性透明质酸和壳聚糖的当量比为1:0.2~3。
【文档编号】C08B37/08GK103848928SQ201410041904
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2014年1月28日 优先权日:2014年1月28日
【发明者】石敏, 邢梦秋, 鲁峰 申请人:南方医科大学南方医院