本发明属于化工技术领域，涉及从树兰花油浸膏中分离富集天然茉莉酮酸甲酯的方法。
背景技术：
茉莉酮酸甲酯,中文名称：茉莉酮酸甲酯，2-戊烯基环戊酮-3-乙酸甲酯，无色至淡黄色液体,沸点：高于300℃，密度：1.02；闪点：156℃,折光率20℃：1.473-1.477；几乎不溶于水，溶于乙醇和油类,强烈、柔和而又甜蜜的茉莉花香，比二氢茉莉酮酸甲酯香气持久。天然存在于大花茉莉、突尼斯迷迭香、胡椒、留兰香、树兰和茶叶中。可广泛应用于人工配制茉莉精油，也可以用于茉莉香基中使香精具有天然的茉莉花的特征香气，但目前价格较贵，现主要用于高档香水香精、化妆品香精等配方中。目前的化学合成线路很多，但均很复杂。
茉莉酮酸甲酯是一种具有多种功能的小分子化合物。茉莉酮酸甲酯在香精香料领域中占有重要的地位，具有强烈的持久的类似茉莉精油的花草香和甜香，由于其价格昂贵一般用于高档化妆品中。同时，茉莉酮酸酯类是新型的植物激素，能够参与植物器官的衰老、诱导次生代谢产物含量、诱导果实成熟、防冷冻伤害等生理过程。此外，在医药领域茉莉酮酸酯及其衍生物表现出很好的抗肿瘤活性，虽然其在肿瘤治疗中的作用以及抗肿瘤机制还需要更广泛的深入研究，但是与现行的化疗药相比可以降低正常细胞组织毒性反应，而且对多耐药的肿瘤细胞也有一定的疗效，既可以作为治疗性用药也可以作为预防性用药。
鉴于茉莉酮酸酯潜在的巨大开发价值，寻找含量更多的天然植物或者开发新的制备方法将成为茉莉酮酸酯研究的首要任务。茉莉酮酸酯传统的制备方法是化学合成，合成工艺步骤均比较复杂，而且产物为异构体的混合物，单一异构体不易得到，且为化学品。
植物来源的茉莉酮酸甲酯为单一构型茉莉酮酸甲酯，而且是天然茉莉酮酸甲酯。目前天然茉莉酮酸甲酯通常存在于植物精油或浸膏或净油中，如树兰花油挥发性成分86种，茉莉酮酸甲酯占约4.5％。常规技术如蒸馏、柱层析等难以分离能得到高含量的茉莉酮酸甲酯。
技术实现要素：
针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是提供一种简单，且天然茉莉酮酸甲酯含量高的制备方法。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种从树兰花油中富集天然茉莉酮酸甲酯的方法，包括如下步骤：
步骤1，萃取液配制
取石油醚、甲醇、水，按照体积比2-8：1-7：0.3-1混合，充分混匀后静置分层，将上相和下相分开保存于不同容器中，得到上相a溶液和下相b溶液；
步骤2，meja萃取分离
将树兰花油加入上相a溶液溶解后，加入等体积的下相b溶液萃取，其中兰花油与上相a溶液溶解的质量体积比为1:1-10，分层后放出下相溶液，上相溶液继续加下相b溶液萃取1次或多次，合并每次萃取所有下相溶液，减压浓缩得到meja的富集部位c；
步骤3，柱层析分离纯化meja
将步骤2萃取得到的meja富集部位c加硅胶拌样后上样于硅胶层析柱，其中富集部位c与拌样硅胶比例为1：1-2，用石油醚-乙酸乙酯系统梯度洗脱，当洗脱液比例为5-40：1时，收集洗脱液，减压浓缩得到纯化后meja的富集部位d。
作为优化，所述步骤1中，石油醚、甲醇、水，按照体积比5：4：1；
所述步骤2中兰花油与上相a溶液溶解的质量体积比为1:5；
所述步骤3中当洗脱液比例为20：1时，收集洗脱液，减压浓缩得到纯化后meja的富集部位d。
发明通过研究发现，双相萃取体系有助于从树兰花油中富集分离茉莉酮酸甲酯。进一步研究发现，由石油醚、甲醇、水组成的三组分双相萃取体系更有利于茉莉酮酸甲酯的富集。再进一步发现，石油醚、甲醇、水三组分按照一定的比例混合后可以分为上下两层，上层为上相a溶液，下层为下相b溶液。再进一步发现，由上相a溶液和下相b溶液共同从树兰花油中萃取茉莉酮酸甲酯，富集分离效果最好。再进一步发现，树兰花油先加入上相a溶液，再加下相b溶液，萃取效果好于树兰花油先加入下相b溶液，再加上相a溶液萃取。因为在树兰花油与下相b溶液以1：5质量体积比混合时，如果树兰花油先加入下相b溶液，那么树兰花油在下相b溶液中难于完全溶解，因而随后加入上相a溶液时萃取效率差。当然增加下相b溶液体积直至加入的树兰花油溶解的话，一是增加b溶液成本，二是需要增加更多a溶液来萃取，从而增加a溶液成本，三是随着a溶液和b溶液增加，废水量增加。再进一步发现，下相b溶液加入的量应尽可能等体积于上相a溶液，过多或过少均不利于两相分离，从而导致富集产物数量少，而且含量低。
再进一步发现，双相萃取方法与简单硅胶柱层析相结合，可以进一步去除富集物中其他成分，提高富集物中茉莉酮酸甲酯的含量。而单一方法如双相萃取或柱层析均不能显著提高富集产物茉莉酮酸甲酯含量。
相对于现有技术，本发明具有如下优点：
1、本发明采用复合溶剂富集以及柱层析相结合的方法纯化树兰花油中的茉莉酮酸甲酯化合物，分离程度好，所得茉莉酮酸甲酯化合物纯度高，质量好；茉莉酮酸甲酯富集纯化效果明显，提高了茉莉酮酸甲酯的有效浓度。
2、本发明提供了一条从植物中分离富集茉莉酮酸甲酯的新途径，含有茉莉酮酸甲酯的植物来源丰富，且工艺简单，操作方便，设备投资少，具有良好的应用前景。
具体实施方式
下面对本发明作进一步详细说明。
本发明经过萃取液配制、萃取分离、柱层析等工艺步骤提取茉莉酮酸甲酯，富集效果从树兰精油中茉莉酮酸甲酯单组份含量从4.5％提高到90％以上，茉莉酮酸甲酯富集纯化效果明显，提高了茉莉酮酸甲酯的有效浓度，本发明工艺简便，富集效率高，设备投资少，具有良好的应用前景。另外，本发明提出从树兰花油浸膏中分离富集天然茉莉酮酸甲酯的方法，丰富了天然茉莉酮酸甲酯化合物分离提取制备的原料来源，有利于天然茉莉酮酸甲酯化合物的增香开发，同时也有利于缓解因天然茉莉酮酸甲酯价格高，而限制了天然茉莉酮酸甲酯化合物的开发和应用研究的难题。
一种从树兰花油中富集天然茉莉酮酸甲酯的方法，包括如下步骤：
步骤1，萃取液配制
取石油醚(100ml)、甲醇(80ml)、水(20ml)，按照体积比5：4：1混合，充分混匀后静置分层，将上相和下相分开保存于不同容器中，得到上相a溶液和下相b溶液。
步骤2，meja萃取分离
取树兰花油6g，加入30ml上相a溶液溶解后转移至分液漏斗中，加入等体积的下相b溶液萃取，分层后放出下相溶液，上相溶液继续加下相b溶液(30毫升)萃取2次，合并每次萃取所有下相溶液，减压浓缩得到meja的富集部位c。取少量meja的富集部位c加入二氯甲烷溶剂稀释后用于gc检测分析，结果显示茉莉酮酸甲酯占44.2％，淡黄色透明液体。
步骤3，柱层析分离纯化meja
将步骤2萃取得到的meja富集部位c加入1倍于富集部位c质量的硅胶拌样后上样于硅胶层析柱，用石油醚-乙酸乙酯系统梯度洗脱，当洗脱液比例为20：1时，收集洗脱液，减压浓缩得到meja的富集部位d，无色透明液体。取meja富集部位d少量加适量二氯甲烷溶解稀释，过0.22μm有机相滤膜后用于gc分析，结果显示茉莉酮酸甲酯占90％。