本发明提供抑制正粘病毒复制的化合物，因此可用于治疗由正粘病毒引起的病毒感染。本发明还提供含有这些化合物的药物组合物以及使用这些化合物治疗或预防由正粘病毒引起的病毒感染。
技术背景
正粘病毒具有负义单链RNA基因组，并且在感染细胞的细胞核中复制，因为它们缺乏产生帽结构以产生其自身mRNA的机制。正粘病毒家族的成员具有带内切核酸酶活性的RNA依赖性RNA聚合酶，其切割细胞mRNA的带帽5'末端的一部分；然后RNA聚合酶使用切割产物作为合成病毒mRNA的引物。这个过程被称为抢帽。该核酸内切酶已被公认为开发有效针对正粘病毒的抗病毒药物的有希望的靶标。ACS Med.Chem.Letters,2014,vol.5,61-64.该内切核酸酶的抑制剂已有公开，例如，在WO2015/038660和US2015/0072982、WO2010/147068和US2013/0197219中，其报道了这些抑制剂可用于治疗哺乳动物的流感感染。
正粘病毒家族包括甲型流感、乙型流感和丙型流感(所有这些都可以感染人类)，以及一些通常不感染人类的其他几种病毒。甲型流感是人类中这些病原体中毒性最强的，通常占典型流感季节期间严重流感病例中的大多数。据估计，尽管广泛使用疫苗来降低流感的发病率，但美国每年有多达40,000人死于流感，因此非常需要有效治疗流感尤其是甲型流感的抗病毒疗法。本发明提供抑制正粘病毒(包括甲型流感、乙型流感和丙型流感)复制的化合物。不受理论束缚地，据信这些化合物通过抑制病毒聚合酶的内切核酸酶功能而实现其抗病毒作用。因为这种内切核酸酶在甲型流感病毒(同上)中高度保守，所以这些化合物特别适用于治疗甲型流感。
技术实现要素：
一方面，本发明提供了式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
G是H或选自–C(O)R、–C(O)-OR、-C(RG)2-O-C(O)R、–C(RG)2-O-C(O)-OR、–C(O)-NR2和–C(RG)2-O-C(O)NR2的基团,其中每个R独立地为C1-C4烷基、苯基、吡啶基、C3-C7环烷基或含选自N、O和S的一个或两个杂原子作为环成员的3-6元杂环；且各R可选被一个或两个选自卤素、CN、-OH、氨基、C1-4烷基、苯基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基和C1-4卤代烷氧基的基团取代；
且各RG独立选自氢和C1-4烷基；
X1是CRX1或N,其中RX1是H、卤素、C1-6烷基、C1-4卤代烷基、CN、COOH，或含有1-4个选自N、O和S的杂原子作为环成员的5-6元杂芳基环，并且任选被1-2个选自卤素、羟基、氨基、C1-3烷基、C1-3卤代烷基和C1-3烷氧基的基团取代；
X2是CRX2或N，其中RX2是H、卤素、C1-6烷基或C1-4卤代烷基；
X3是CRX3或N，其中RX3是H、C1-4烷基或C1-4卤代烷基；
条件是如果X1和X3中的任何一个或两个代表N，则X2为CRX2；
R1是H、卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基或C1-4烷氧基；
R2和R3独立地为H、C1-4烷基或C3-5环烷基，其中每个C1-4烷基和C3-5环烷基可选被一个或两个选自卤素、CN、-OH、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基的基团取代；
或者R2和R3与两者所连接的碳原子一起形成3-5元环烷基环或具有一个氧作为环成员的3-5元环醚环；
环A是含有至少一个碳环原子和至多四个选自N、O和S的杂原子作为环成员的五元杂芳环，其中
Z1是N、O或S；
Z2和Z3独立地为CRz、N、NRz、O或S；和
Z4和Z5各自独立地代表C或N，
条件是Z4和Z5不同时为N，
其中各Rz独立地选自H、卤素、C1-4烷基、C3-6环烷基、苯基、含有一个或两个选自N、O和S的杂原子作为环成员的5-6元杂芳基、C1-4烷氧基、CN、CON(R4)2和C1-4卤代烷基，其中C1-4烷基可选被一个或两个选自-OR4、-N(R4)2、COOR4、CON(R4)2和含有一个或两个选自N、O和S的杂原子作为环成员的5-6元杂环的基团取代；
每次出现的R4独立地选自H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基、苯基、含有一个或两个选自N、O和S的杂原子作为环成员的5-6元杂环，其中C1-4烷基、C3-6环烷基、苯基和含有一个或两个选自N、O和S的杂原子作为环成员的5-6元杂环各自可选地被一个或两个独立地选自卤素、-OH、C1-2烷基和-O(C1-2烷基)的基团取代；
可选地将两个直接连接到相同氮原子上的R4基团一起形成4-6元杂环，其可选含有选自N、O和S的另外杂原子作为环成员并可选被一个或两个选自以下的基团取代：卤素、-OH、C1-2烷基和-O(C1-2烷基)；
Ar1和Ar2各自表示苯基或含有1-3个选自N、O和S的杂原子作为环成员的5-6元杂芳基环，并且各自独立地被至多三个选自卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷氧基、C2-4炔烃、-S(C1-3烷基)、-SO2(C1-3烷基)和CN的基团取代；
并且Ar1和Ar2任选地通过式-C(RL)2-L-的桥连接在一起以形成三环体系，其中每个Ar1和Ar2任选被至多两个独立地选自卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷氧基、C2-4炔烃、-S(C1-3烷基)、-SO2(C1-3烷基)和CN的基团取代，
其中L选自S、S＝O、SO2、O、C(RL)2和CF2，
且各RL独立选自氢或C1-2烷基；
其在本文中进一步描述。
如本文提供的数据所示，式(I)化合物是流感病毒的内切核酸酶功能的抑制剂，并且它们抑制流感病毒的复制。因此，这些化合物可用于治疗或预防在易感这种感染的哺乳动物中的正粘病毒感染，并且特别适用于治疗人类的流感病毒感染。它们还可用于抑制细胞中正粘病毒(包括流感病毒)的复制。
另一方面，本发明提供药物组合物，其包含混合有至少一种药学上可接受的载体或赋形剂的式(I)化合物，可选混合有两种或更多种药学上可接受的载体或赋形剂。
另一方面，本发明提供了治疗感染甲型、乙型或丙型流感的对象的方法，其包括向需要这种治疗的对象施用有效量的如本文所述的式(I)的化合物或其任何亚属或亚种，或包含所述化合物的药物组合物。对象可以是哺乳动物，并且优选是人，尽管本发明的化合物和方法适用于治疗感染甲型流感、乙型流感或丙型流感以及其它正粘病毒的其他物种。本发明包括本文所述的式(I)的化合物和式(I)的亚属，以及这些化合物的所有立体异构体(包括非对映异构体和对映异构体)(除非明确描述了特定的异构体)，以及互变异构体和其同位素富集形式(包括氘取代)以及药学上可接受的盐。本发明化合物还包含式(I)(或其子式)化合物及其盐的多晶型物。
发明详述
除非另有明确规定，否则以下定义适用：
如本文所用，术语“卤素”或卤是指氟、溴、氯或碘，特别是当与烷基连接时是指氟或氯，并且当在芳基或杂芳基上时还包括溴或碘。
除非另有说明，本文所用的术语“杂原子”是指氮(N)、氧(O)或硫(S)原子。
如本文所用，术语“烷基”是指具有至多10个碳原子的完全饱和的支链或无支链的烃部分。除非另外提供，否则烷基是指具有1至6个碳原子的烃部分。烷基的代表性实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。取代的烷基是含有一个或多个取代基代替氢的烷基，例如1、2或3个取代基，最多达未取代烷基上的存在的氢的数目。如果没有另外说明，烷基的合适取代基可以选自卤素、CN、氧代、羟基、C1-4烷氧基、取代或未取代的C3-6环烷基、取代或未取代的苯基、氨基、(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基、C1-4烷硫基、C1-4烷基磺酰基、-C(＝O)-C1-4烷基、COOH、COO(C1-4烷基)、-O(C＝O)-C1-4烷基，-NHC(＝O)C1-4烷基和-NHC(＝O)OC1-4烷基；其中，对于取代的环烷基或苯基，取代基是最多三个选自Me、Et、-OMe、-OEt、CF3、卤素、CN、OH和NH2的基团。
如本文所用，术语“亚烷基”是指具有1至10个碳原子和两个开放化合价以连接至其他特征的二价烷基。除非另外提供，否则亚烷基是指具有1至6个碳原子的烃部分。亚烷基的代表性实例包括但不限于亚甲基、亚乙基、正亚丙基、异亚丙基、正亚丁基、仲亚丁基、异亚丁基、叔亚丁基、正亚戊基、异亚戊基、新亚戊基、正亚己基、2,2-二甲基亚丁基等。取代的亚烷基是含有一个或多个，例如1、2或3个取代基的亚烷基；除非另有说明，合适的烯烃取代基选自上述所列的烷基取代基。
如本文所用，术语“卤代烷基”是指如本文所定义的烷基被一个或多个卤素基团取代。卤代烷基可以是单卤代烷基、二卤代烷基、三卤代烷基或包括全卤代烷基的多卤代烷基。单卤代烷基可以在烷基内具有一个氯或氟。氯和氟通常作为在烷基或环烷基上的取代基存在；氟、氯和溴通常存在于芳基或杂芳基上。二卤代烷基和多卤代烷基可以在烷基上具有两个或多个相同的卤素原子或不同的卤素基团的组合。典型地，多卤代烷基含有最多12或10或8或6或4或3或2个卤素基团。卤代烷基的非限制性实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、2,2,2-三氟乙基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。全卤代烷基是指所有氢原子被卤素原子取代的烷基，例如三氟甲基。
如本文所用，术语“烷氧基”是指烷基-O-，其中烷基如上定义。烷氧基的代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。通常，烷氧基具有1-6个碳，更通常1-4个碳原子。
“取代的烷氧基”是在烷氧基的烷基部分上含有一个或多个，例如一个、两个或三个取代基的烷氧基。除非另有说明，否则合适的取代基选自上面针对烷基所列的取代基，除了羟基和氨基通常不存在于被取代的“烷基-O'基团的氧所直接连接的碳上。
类似地，其它基团如“烷基氨基羰基”、“烷氧基烷基”、“烷氧基羰基”、“烷氧基-羰基烷基”、“烷基磺酰基”、“烷基亚砜基”、“烷基氨基”、“卤代烷基”的各烷基部分如上述“烷基”定义中所述。当以这种方式使用时，除非另有说明，烷基通常是1-4个碳的烷基并且不被除了所述组分以外的基团进一步取代。当这样的烷基被取代时，除非另有说明，合适的取代基是上面针对烷基而言的那些。
如本文所用，术语“卤代烷氧基”是指卤代烷基-O-，其中卤代烷基如上定义。卤代烷氧基的代表性实例包括但不限于氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、三氯甲氧基、2-氯乙氧基、2,2,2-三氟乙氧基、1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙氧基等等。通常，卤代烷基具有1-4个碳原子。
如本文所用，术语“环烷基”是指3-12个碳原子的饱和或不饱和的非芳族单环、双环、三环或螺环烃基：环烷基可以是不饱和的，并且可以与另一个可以是饱和的、不饱和的或芳族的环稠合，条件是与目标分子式连接的环烷基的环原子不是芳环碳。除非另有说明，否则环烷基是指具有3至9个环碳原子或3至7个环碳原子的环状烃基。优选地，环烷基是具有3-7个环原子的饱和单环，例如环丙基、环丁基、环戊基和环己基，除非另有说明。
取代的环烷基是被一个、或两个、或三个、或多于三个取代基、直至未取代的基团上氢的数目所取代的环烷基。通常，除非另有说明，取代的环烷基将具有1-4个取代基。除非另有说明，合适的取代基独立地选自卤素、羟基、硫醇、氰基、硝基、氧代、C1-C4烷基亚氨基、C1-C4-烷氧基亚氨基、羟基亚氨基、C1-C4烷基、C2-C4-烯基、C2-C4-炔基、C1-C4-烷氧基、C1-C4-硫代烷基、C2-C4-烯氧基、C2-C4-炔氧基、C1-C4-烷基羰基、羧基、C1-C4-烷氧基羰基、氨基、C1-C4-烷基氨基、二-C1-C4-烷基氨基、C1-C4-烷基氨基羰基、二-C1-C4-烷基氨基羰基、C1-C4-烷基羰基氨基，C1-C4-烷基羰基(C1-C4-烷基)氨基、C1-C4-烷基磺酰基、C1-C4-烷基氨磺酰基和C1-C4-烷基氨基磺酰基，其中每个上述烃基(例如，烷基、烯基、炔基、烷氧基残基)可以进一步被一个或多个在每次出现时独立选自本文中“烷基”取代基列表的基团取代。环烷基的优选取代基包括C1-C4烷基和上面列出的作为烷基合适取代基的取代基。
示例性的单环烃基包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基和环己烯基等。示例性双环烃基包括：冰片基、吲哚基、六氢吲哚基、四氢萘基、十氢萘基、二环[2.1.1]己基、双环[2.2.1]庚基、双环[2.2.1]庚烯基、6,6-二甲基双环[3.1.1]庚基、2,6,6-三甲基双环[3.1.1]庚基、双环[2.2.2]辛基等。示例性的三环烃基包括金刚烷基等。
类似地，其它基团的各环烷基部分如“环烷氧基”、“环烷氧基烷基”、“环烷氧基羰基”、“环烷氧基-羰基烷基”、“环烷基磺酰基”、“卤代环烷基”应具有与上述“环烷基”定义中所述相同的含义。当在这些术语中使用时，环烷基通常是单环3-7碳环，其是未取代的或被1-2个基团取代。当任选被取代时，取代基通常选自C1-C4烷基和上述适合于烷基的那些。
如本文所用，术语“芳基”是指环部分中具有6-14个碳原子的芳族烃基。通常，芳基是具有6-14个碳原子、通常为6-10个碳原子的单环、双环或三环芳基，例如苯基或萘基。此外，如本文所用的术语“芳基”是指芳族取代基，其可以是单个芳族环，或稠合在一起的多个芳族环。非限制性实例包括苯基、萘基和1,2,3,4-四氢萘基，条件是四氢萘基通过四氢萘基的芳环的碳与所述式连接。除非另有说明，优选的芳基是苯基。
取代的芳基是被1-5个(例如一个、或两个或三个)取代基取代的芳基，所述取代基独立地选自羟基、硫醇、氰基、硝基、C1-C4烷基、C2-C4-烯基、C2-C4-炔基、C1-C4-烷氧基、C1-C4-硫代烷基、C2-C4-烯氧基、C2-C4-炔氧基、卤素、C1-C4-烷基羰基、羧基、C1-C4-烷氧基羰基、氨基、C1-C4-烷基氨基、二-C1-C4-烷基氨基、C1-C4-烷基氨基羰基、二-C1-C4-烷基氨基羰基、C1-C4-烷基羰基氨基、C1-C4-烷基羰基(C1-C4-烷基)氨基、C1-C4-烷基磺酰基、氨磺酰基、C1-C4-烷基氨磺酰基和C1-C4-烷基氨基磺酰基，其中每个上述烃基(例如，烷基、烯基、炔基、烷氧基残基)可以进一步被一个或多个在每次出现时独立选自上面列出的作为烷基合适取代基的基团取代。取代的芳基的优选取代基是C1-4烷基，以及上述作为烷基的合适取代基的那些基团，不包括二价基团如氧代。
类似地，其它基团的各环烷基部分如“芳氧基”、“芳氧基烷基”、“芳氧基羰基”、“芳氧基-羰基烷基”应具有与上述“芳基”定义中所述相同的含义。
如本文所用，术语“杂环基”是指饱和或部分不饱和但不是芳香族的杂环基，并且可以是单环或多环(在多环的情况下，特别是双环、三环或螺环)；并且具有3至14个、更常见的是4至10个、最优选5或6个环原子；其中一个或多个、优选一至四个、尤其是一个或两个环原子是独立地选自O、S和N的杂原子(其余的环原子因此是碳)。即使被描述为例如C5-6原子环，杂环含有至少一个杂原子作为环原子，其它环原子是碳，并且具有所述的环原子数，例如在此示例中是5-6。优选地，杂环基具有一个或两个这样的杂原子作为环原子，并且优选地，杂原子不直接彼此连接。除非另有说明，键合环(即连接到目标式的环)优选具有4-12个、特别是5-7个环原子。杂环基团可以稠合到芳环上，条件是与目标化学式连接的杂环基团的原子不是芳香性的。杂环基团可以通过杂原子(通常为氮)或杂环基团的碳原子与目标式连接。杂环基可以包括稠环或桥环以及螺环，并且只要多环杂环基团的一个环含有杂原子作为环原子。杂环的示例包括四氢呋喃(THF)、二氢呋喃、1,4-二氧六环、吗啉、1,4-二噻烷、哌嗪、哌啶、1,3-二氧戊环、咪唑烷、咪唑啉、吡咯啉、吡咯烷、四氢吡喃、二氢吡喃、氧硫杂环戊烷、二硫杂环戊烷、1,3-二氧六环、1,3-二噻烷、氧硫杂环己烷、硫代吗啉等。
取代的杂环基是独立地被1-5个(例如一个、或两个或三个)取代基取代的杂环基，所述取代基选自上述环烷基的取代基。
类似地，其他基团的各杂环基部分如“杂环基氧基”、“杂环基氧基烷基”、“杂环基氧基羰基”应具有与上述“杂环基”定义中所述相同的含义。
如本文所用，术语“杂芳基”是指5-14元单环-或双环-或三环-芳族环系统，具有1至8个杂原子作为环成员，其余环原子为碳，并且杂原子选自N、O和S。通常，杂芳基是5-10元环系，特别是5-6元单环或8-10元双环基团。典型的杂芳基包括2-或3-噻吩基，2-或3-呋喃基，2-或3-吡咯基，2-、4-或5-咪唑基，1-、3-、4-或5-吡唑基，2-、4-或5-噻唑基，3-、4-或5-异噻唑基，2-、4-或5-恶唑基，3-、4-或5-异恶唑基，3-或5-1,2,4-三唑基，4-或5-1,2,3-三唑基，1-或2-四唑基，2-、3-或4-吡啶基，3-或4-哒嗪基，3-、4-或5-吡嗪基，2-吡嗪基和2-、4-或5-嘧啶基。
术语“杂芳基”还指其中杂芳环与一个或多个芳基、环烷基或杂环基环稠合的基团。非限制性实例包括2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基，1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基，2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基，2-、3-、4-、5-、6-或7-苯并[b]噻吩基，2-、4-、5-、6-或7-苯并恶唑基，2-、4-、5-、6-或7-苯并咪唑基，和2-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基。
取代的杂芳基是含有一个或多个取代基的杂芳基，通常是一个或两个取代基，选自上述适合于芳基的取代基。
类似地，其他基团的各杂芳基部分如“杂芳氧基”、“杂芳氧基烷基”、“杂芳氧基羰基”应具有与上述“杂芳基”定义中所述相同的含义。
本文描述了本发明的各种实施方式。将认识到，每个实施例中指定的特征可以与其他指定特征组合以提供本发明的进一步实施方式。
在第一个实施方式(实施方式1)中，本发明提供了式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
G是H或选自–C(O)R、–C(O)-OR、-C(RG)2-O-C(O)R、–C(RG)2-O-C(O)-OR、–C(O)-NR2和–C(RG)2-O-C(O)NR2的基团,其中每个R为H或独立地选自C1-C4烷基、苯基、吡啶基、C3-C7环烷基和含选自N、O和S的一个或两个杂原子作为环成员的3-6元杂环；且不是H的各R可选被一个或两个选自卤素、CN、-OH、氨基、C1-4烷基、苯基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基和C1-4卤代烷氧基的基团取代；
且各RG独立选自氢和C1-4烷基；
X1是CRX1或N,其中RX1是H、卤素、C1-6烷基、C1-4卤代烷基、CN、COOH，或含有1-4个选自N、O和S的杂原子作为环成员的5-6元杂芳基环，并且任选被1-2个选自卤素、羟基、氨基、C1-3烷基、C1-3卤代烷基和C1-3烷氧基的基团取代；
X2是CRX2或N，其中RX2是H、卤素、C1-6烷基或C1-4卤代烷基；
X3是CRX3或N，其中RX3是H、卤素、C1-4烷基或C1-4卤代烷基；
条件是如果X1和X3中的任何一个或两个代表N，则X2为CRX2；
R1是H、卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基或C1-4烷氧基；
R2和R3独立地为H、C1-4烷基或C3-5环烷基，其中每个C1-4烷基和C3-5环烷基可选被一个或两个选自卤素、CN、-OH、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基的基团取代；
或者R2和R3与两者所连接的碳原子一起形成3-5元环烷基环或具有一个氧作为环成员的3-5元环醚环；
环A是含有至少一个碳环原子和至多四个选自N、O和S的杂原子作为环成员的五元杂芳环，其中
Z1是N、O或S；
Z2和Z3独立地为CRz、N、NRz、O或S；和
Z4和Z5各自独立地代表C或N，
条件是Z4和Z5不同时为N，
其中各Rz独立地选自H、卤素、C1-4烷基、C3-6环烷基、苯基、含有一个或两个选自N、O和S的杂原子作为环成员的5-6元杂芳基、C1-4烷氧基、CN、CON(R4)2和C1-4卤代烷基，其中C1-4烷基可选被一个或两个选自-OR4、-N(R4)2、COOR4、CON(R4)2和含有一个或两个选自N、O和S的杂原子作为环成员的5-6元杂环的基团取代；
每次出现的R4独立地选自H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基、苯基、含有一个或两个选自N、O和S的杂原子作为环成员的5-6元杂环，其中C1-4烷基、C3-6环烷基、苯基和含有一个或两个选自N、O和S的杂原子作为环成员的5-6元杂环各自可选地被一个或两个独立地选自卤素、-OH、C1-2烷基和-O(C1-2烷基)的基团取代；
可选地将两个直接连接到相同氮原子上的R4基团一起形成4-6元杂环，其可选含有选自N、O和S的另外杂原子作为环成员并可选被一个或两个选自以下的基团取代：卤素、-OH、C1-2烷基和-O(C1-2烷基)；
Ar1和Ar2各自表示苯基或含有1-3个选自N、O和S的杂原子作为环成员的5-6元杂芳基环，并且各自独立地被至多三个选自卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷氧基、C2-4炔基、-S(C1-3烷基)、-SO2(C1-3烷基)和CN的基团取代；
并且Ar1和Ar2任选地通过式-C(RL)2-L-的桥连接在一起以形成三环体系，其中每个Ar1和Ar2任选被至多两个独立地选自卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷氧基、C2-4炔烃、-S(C1-3烷基)、-SO2(C1-3烷基)和CN的基团取代，
其中L选自S、S＝O、SO2、O、C(RL)2和CF2，
各RL独立选自氢或C1-2烷基；
实施方式1的一个具体方面是实施方式1a的化合物，其是具有下式的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
X1是CRX1或N,其中RX1是H、卤素、C1-6烷基、C1-4卤代烷基、CN、COOH，或含有1-4个选自N、O和S的杂原子作为环成员的5-6元杂芳基环，并且任选被1-2个选自卤素、羟基、氨基、C1-3烷基、C1-3卤代烷基和C1-3烷氧基的基团取代；
X2是CRX2或N，其中RX2是H、卤素、C1-6烷基或C1-4卤代烷基；
X3是CRX3或N，其中RX3是H、卤素、C1-4烷基或C1-4卤代烷基；
条件是如果X1和X3中的任何一个或两个代表N，则X2为CRX2；
R1是H、卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基或C1-4烷氧基；
环A是含有至少一个碳环原子和至多四个选自N、O和S的杂原子作为环成员的五元杂芳环，其中
Z1是N、O或S；
Z2和Z3独立地为CRz、N、NRz、O或S；和
Z4和Z5各自独立地代表C或N，条件是Z4和Z5不同时为N，
其中各Rz独立选自H、卤素、C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷基；
R2和R3独立是氢或C1-4烷基；
Ar1和Ar2各自表示苯基或含有1-3个选自N、O和S的杂原子作为环成员的5-6元杂芳基环，并且各自独立地被至多三个选自卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷氧基、C2-4炔烃和CN的基团取代；
并且Ar1和Ar2任选地通过式-C(RL)2-L-的桥连接在一起以形成三环体系，其中每个Ar1和Ar2任选被至多两个独立地选自卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷氧基、C2-4炔烃和CN的基团取代，
其中L选自S、S＝O、SO2、O、C(RL)2和CF2，
各RL独立选自氢或C1-2烷基。
实施方式2 实施方式1或1a的化合物或其药学上可接受的盐，其中X1是CH。
实施方式3 实施方式1或1a或实施方式2的化合物或其药学上可接受的盐，其中X2是CH或N。
实施方式4 根据前述任一实施方式的化合物或其药学上可接受的盐，其中X3是CH。
实施方式5 根据前述任一实施方式的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2和R3都是H。
实施方式6 根据前述任一实施方式的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是H。
实施方式7 根据前述任一实施方式的化合物或其药学上可接受的盐，其中环A选自咪唑、吡唑、三唑、恶唑、异恶唑、噻唑、异噻唑、恶二唑、噻二唑和四唑。
实施方式8 根据前述任一实施方式的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z5是C。
实施方式9 根据前述任一实施方式的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z4是N。
实施方式10 根据前述任一实施方式的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z3是CRZ或N。
实施方式11 根据前述任一实施方式的化合物或其药学上可接受的盐，其中环A选自咪唑、吡唑、三唑和四唑。
实施方式12 任何前述实施方式的化合物，其具有下式：
其中Y代表选自以下的基团：
其中各Rz独立选自H、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷氧基、C2-4炔基和氰基，
或其药学上可接受的盐。在这些实施方式中，G有时是H。在这些实施方式的其他实施例中，G选自-C(O)R、-C(O)-OR、-CH2-O-C(O)R和-CH2-O-C(O)-OR；其中R是C1-C4烷基，任选被一个或两个选自卤素、CN、-OH、氨基、苯基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基和C1-4卤代烷氧基的基团取代。
实施方式13 实施方式1或1a的化合物，其选自表1中的化合物及其药学上可接受的盐。
实施方式14 一种药物组合物，其包含前述任一实施方式所述的化合物或其药学可接受盐，以及一种或多种药学可接受的载体。
实施方式15 一种组合，其包含治疗有效量的如前述实施方式1-13中任一项所述的化合物或其药学可接受盐以及一种或多种治疗活性联合试剂。
实施方式16 一种治疗流感的方法，包括给予有需要的对象治疗有效量的实施方式1-13所述的化合物或其药学可接受盐。
实施方式17 根据前述实施方式1-13中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，用作药物。
实施方式18 根据前述实施方式1-13中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗流感。
实施方式19 实施方式1至13中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗流感的药物中的用途。
在一些实施方式中，式(I)化合物是下式(I-A)至(I-J)之一的化合物：
在式(I-G)中，Z1和Z2中的一个是N，另一个是O或S。在式(I-H)中，Z2和Z3独立地是N或CRz。式(I-A)至(I-J)中的其他变量如上式(I)所定义。在一些实施方式中，式(I-A)至(I-J)的化合物中的G为H。在式(I-A)至(I-J)的其他化合物中，G选自-C(O)R、-C(O)-OR、-CH2-OC(O)R和-CH2-OC(O)-OR。这些实施方式的化合物可用于实施方式14-19的组合物、组合、方法和用途。
如本文所用，术语“光学异构体”或“立体异构体”是指对于给定的本发明化合物可存在的各种立体异构构型中的任一种，并且包括几何异构体。应该理解，取代基可以连接在碳原子的手性中心。术语“手性”是指在其镜像伴侣上具有不可重叠性质的分子，而术语“非手性”是指可重叠在其镜像伴侣上的分子。因此，本发明包括该化合物的对映异构体、非对映异构体或外消旋体。“对映异构体”是一对彼此不可重叠镜像的立体异构体。一对对映异构体的1:1混合物是一种“外消旋”混合物。该术语在适当时用于指定外消旋混合物。“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子的立体异构体，但其不是彼此的镜像。根据Cahn-lngold-Prelog‘R-S'系统确定绝对立体化学。当化合物为纯对映体时，每个手性碳上的立体化学可以由R或S指定。绝对构型未知的拆分化合物可以根据它们在钠D线的波长处旋转平面偏振光的方向(右旋或左旋)命名为(+)或(-)。本文所述的某些化合物含有一个或多个不对称中心或轴，并因此可产生对映异构体、非对映异构体和其它立体异构形式，其可根据绝对立体化学定义为(R)-或(S)-。
根据起始原料和合成过程的选择，这些化合物能以可能的异构体之一的形式或作为其混合物存在，例如作为纯的光学异构体，或作为异构体混合物，例如外消旋体和非对映异构体混合物，取决于不对称碳原子的数目。本发明意在包括所有这些可能的异构体，包括外消旋混合物、非对映异构体混合物和光学纯形式。光学活性(R)-和(S)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂来制备，或者使用常规技术来拆分。如果化合物含有双键，则取代基可以是E或Z构型，除非另有说明。如果化合物含有二取代的环烷基，除非另有说明，环烷基取代基可以具有顺式或反式构型。所有的互变异构形式也意在包括在内。
在许多情况下，本发明化合物能由于存在氨基和/或羧基或类似基团而形成酸和/或碱盐。如本文所用，术语“盐”或“盐类”是指本发明化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别包括“药学可接受的盐”。术语“药学可接受的盐”是指保留本发明化合物的生物有效性和性质并且通常不是生物学上或其他方面不合需要的盐。
药学可接受的酸加成盐可以用无机酸和有机酸形成，例如乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸、氯茶碱盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。其他合适盐的列表可见例如“Remington's Pharmaceutical Sciences”，第20版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.(1985)和Stahl和Wermuth(Wiley-VCH，Weinheim，Germany，2002)的“Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection，and Use”。
可由其衍生盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。
可以衍生盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。
药学上可接受的碱加成盐可以与无机碱或有机碱形成并且可以具有无机或有机平衡离子。
用于这种碱盐的无机平衡离子包括例如铵盐和来自元素周期表第I至XII列的金属。在某些实施方式中，平衡离子选自钠、钾、铵、具有1至4个C1-C4烷基的烷基铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别合适的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。
可以衍生盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代的胺、环胺、碱性离子交换树脂等。合适的有机胺包括异丙胺、苄星青霉素、胆碱、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。
本发明的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法由碱性或酸性部分合成。通常，这些盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计量量的适当碱(例如Na、Ca、Mg或K氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应来制备，或者通过使这些化合物的游离碱形式与化学计算量的合适的酸反应。这样的反应通常在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中进行。通常，在可行的情况下，使用非水介质如醚、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯、氯仿、二氯甲烷、甲醇、乙醇、异丙醇或乙腈是理想的。
本文给出的任何式也旨在表示化合物的未标记形式(即，化合物中所有原子以天然同位素丰度存在，且非同位素富集)以及同位素富集或标记形式。同位素富集或标记的化合物具有本文给出的通式描述的结构，不同之处在于该化合物的至少一个原子被原子质量或质量数不同于天然存在的原子质量或原子量分布的原子替代。可以掺入本发明的富集或标记化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl和125I。本发明包括如本文所定义的各种同位素标记的化合物，例如其中放射性同位素如3H和14C，或其中非放射性同位素如2H和13C的存在显著高于这些同位素的天然丰度的那些化合物。这些同位素标记的化合物可用于代谢研究(例如，用14C)、反应动力学研究(用例如2H或3H)、检测或成像技术如正电子发射断层摄影术(PET)或单光子发射计算机断层摄影术(SPECT)包括药物或底物组织分布测定，或用于患者的放射性治疗。具体地，18F标记的化合物可能对于PET或SPECT研究是特别理想的。式(I)的同位素标记化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过类似于所附实施例中所述的方法使用适当的同位素标记试剂代替另外使用的未标记试剂来制备。
此外，用较重同位素特别是氘(即2H或D)取代可以提供由更大的代谢稳定性产生的某些治疗优势，例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求或改善的治疗指数。这种较重同位素特别是氘的浓度可以由同位素富集因子来定义。如本文所用的术语“同位素富集因子”意指指定同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比率。如果本发明化合物中的取代基被表示为氘，则这种化合物对于指定的各氘原子具有至少3500的氘同位素富集因子(在每个指定的氘原子处52.5％的氘掺入)，至少4000(60％的氘掺入)，至少4500(67.5％氘掺入)，至少5000(75％氘掺入)，至少5500(82.5％氘掺入)，至少6000(90％氘掺入)，至少6333.3(95％氘掺入)，至少6466.7(97％的氘掺入)，至少6600(99％的氘掺入)或至少6633.3(99.5％的氘掺入)。
根据本发明的药学上可接受的溶剂化物包括其中结晶溶剂可以被同位素取代的那些，例如D2O、d6-丙酮，d6-DMSO以及具有非富集态溶剂的溶剂合物。
本发明的化合物，即含有能够充当氢键供体和/或受体的基团的式(I)化合物可以能够与合适的共晶形成物形成共晶。这些共晶可以由式(I)的化合物通过已知的共晶形成过程制备。此类过程包括研磨、加热、共升华、共熔融或在结晶条件下于溶液中使式(I)化合物与共晶形成物接触并分离由此形成的共晶。合适的共晶形成物包括在WO2004/078163中描述的那些。因此，本发明进一步提供了包含式(I)化合物的共晶。
如本文所用，术语“药学可接受的载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料等及其组合，如本领域技术人员已知(参见例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy，第22版)。除了与活性成分不相容的任何常规载体之外，还考虑其在治疗或药物组合物中的用途。
术语“治疗有效量”的本发明化合物是指在对象中引发生物或医学反应的本发明化合物的量，例如，足以减少一种或多种症状、缓解病症、减慢或延迟疾病进展或预防疾病等的量。在一个非限制性实施方式中，术语“治疗有效量”是指当施用于对象时，本发明化合物有效减少与流感病毒感染相关的一种或多种症状，或缩短流感病毒感染的症状阶段的持续时间，或减缓流感病毒感染的进展，或减少或阻止流感病毒感染引起的潜在病症的恶化的量。
在另一个非限制性实施方式中，术语“治疗有效量”是指当施用于细胞、组织或非细胞生物材料或培养基时，能有效地引起正粘病毒株的复制或增殖速率的统计学显著降低的量。
本文所用术语“对象”是指动物。通常对象是人。
如本文所用，术语“抑制”是指减少或抑制给定的病症、症状或紊乱或疾病，或者显著降低生物活动或过程的基线活性。
如本文所用，任何疾病或紊乱的术语“治疗”、“处治”或“处理”在一个实施方式中指改善所述疾病或紊乱(即减缓或阻滞或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个实施方式中，“治疗”、“处治”或“处理”是指减轻或改善至少一种身体参数，包括那些患者可能无法识别的身体参数。在另一个实施方式中，“治疗”、“处治”或“处理”是指在身体上(例如稳定可辨别的症状)、生理上(例如稳定身体参数)或两方面调节疾病或紊乱。在另一种实施方式中，“治疗”、“处治”或“处理”是指预防或延迟疾病或紊乱的发展或进展。
如本文所用，如果对象会从某种治疗中于生物学、医学或生活质量上受益，则该对象对该治疗“有需要”。
如本文所使用的，在本发明语境(特别是在权利要求语境)中使用的术语“一个”、“一种”、“所述”以及类似术语应被解释为涵盖单数和复数，除非另有说明或与语境明显矛盾。
本文所述的所有方法可以以任何合适的顺序进行，除非本文另外指出或另外明显与语境相矛盾。本文提供的任何和所有示例或示例性语言(例如“诸如”)的使用仅意在更好地说明本发明，而不是对本发明另行要求保护的范围进行限制。
本发明化合物的任何不对称原子(例如碳等)可以以外消旋或对映体富集例如(R)-、(S)-或(R，S)-构型的形式存在。在某些实施方式中，每个不对称原子具有至少50％对映体过量、至少60％对映体过量、至少70％对映体过量、至少80％对映体过量、至少90％对映体过量、至少95％或至少99％对映体过量的(R)-或(S)-构型；即，对于光学活性化合物，通常优选使用一种对映体来基本上排除另一对映体，因此通常优选至少95％的对映体纯度。如果可能，具有不饱和双键的原子上的取代基可以以顺式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。
因此，如本文所用，本发明化合物可以是可能的异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物之一的形式，例如基本上纯的几何(顺式或反式)异构体、非对映异构体、光学异构体(对映体)、外消旋体或其混合物。如本文所用，“基本纯”或“基本不含其他异构体”是指相对于优选异构体，产物含有的其他异构体的量按重量计少于5％，并且优选少于2％。
得到的异构体混合物可以通常基于组分的物理化学差异，例如通过色谱法和/或分级结晶，分离成纯的或基本纯的几何或光学异构体、非对映异构体、外消旋体。
可通过已知方法将最终产物或中间体的外消旋体拆分成光学对映体，例如通过分离用光学活性酸或碱获得的其非对映异构体盐，并释放光学活性的酸性或碱性化合物。具体地，碱性部分可由此被用来将本发明的化合物拆分成它们的光学对映体，例如通过用光学活性酸例如酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二乙酰酒石酸、二-O，O'-对甲苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸所形成盐的分级结晶。外消旋产物也可以通过手性色谱法拆分，例如使用手性固定相的高压液相色谱(HPLC)。
此外，本发明的化合物，包括它们的盐，也可以以其水合物的形式获得，或者包括用于其结晶的其他溶剂。本发明化合物可以固有地或经设计与可药用溶剂(包括水)形成溶剂合物；因此，本发明意在包括溶剂合和非溶剂合两种形式。术语“溶剂合物”是指本发明化合物(包括其药学上可接受的盐)与一种或多种溶剂分子的分子复合物。此类溶剂分子是药物领域中常用的那些，已知其对接受者无害，例如水、乙醇等。术语“水合物”是指其中溶剂分子是水的复合物。
另一方面，本发明提供药物组合物，其包含本发明化合物或其药学上可接受的盐和至少一种药学可接受的载体。在一些实施方式中，所述组合物包含至少两种药学上可接受的赋形剂或载体。药学上可接受的载体和其它赋形剂是本领域技术人员已知的，并且可以选自例如通过类似施用途径来施用的已批准(注册)配制治疗剂中使用的载体和赋形剂。可以配制药物组合物用于特定的给药途径，例如口服给药、胃肠外给药和直肠给药等。此外，本发明的药物组合物可以以固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂或栓剂)或以液体形式(包括但不限于溶液剂、混悬剂或乳剂)制成。药物组合物可以进行常规的药物操作，例如灭菌和/或可以包含常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂，以及佐剂例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。
在一个实施方式中，配制本发明化合物用于口服递送。通常，这些药物组合物是片剂或明胶胶囊，其包含活性成分(至少一种式(I)化合物)和一种或多种选自以下的赋形剂：
a)稀释剂，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素和/或甘氨酸；
b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、其镁或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂还有
c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要
d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐或泡腾混合物；和/或
e)吸收剂、着色剂、调味剂和甜味剂。
根据本领域已知的方法，片剂可以是薄膜包衣或肠溶包衣。
用于口服给药的合适组合物包括以片剂、锭剂、水性或油性混悬剂、可分散粉剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊剂或糖浆剂或酏剂形式的有效量的本发明化合物。旨在用于口服使用的组合物根据本领域就制备药物组合物已知的任何方法来制备，并且此类组合物可以含有选自甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的一种或多种试剂以提供药学上优雅和适口的制品。片剂可含有活性成分，混以适于制造片剂的无毒药学可接受赋形剂。这些赋形剂是例如惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂未经包衣或通过已知技术包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而提供较长时期的持续作用。例如，可以使用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。口服使用的制剂可以呈现为硬明胶胶囊，其中活性成分混以惰性固体稀释剂，例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土，或者呈现为软明胶胶囊，其中活性成分混以水或油性基质，例如花生油、液体石蜡或橄榄油。
某些可注射组合物是水性等渗溶液或悬浮液，且栓剂有利地由脂肪乳剂或混悬剂制备。所述组合物可以是灭菌的和/或含有佐剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。另外，它们也可能含有其他有治疗价值的物质。所述组合物分别根据常规的混合、制粒或包衣方法制备，并且含有约0.1-75％或含有约1-50％的活性成分。
用于透皮施用的合适组合物包含有效量的本发明化合物与合适的载体。适合透皮递送的载体包括可吸收的药理学可接受的溶剂以帮助穿过宿主皮肤。例如，透皮装置为绷带形式，其包含背衬构件，含有化合物以及可选有载体的储库，可选地速率控制屏障来在长时间段以受控并预定的速率作宿主皮肤的化合物递送，以及将装置固定到皮肤的手段。
用于局部施用(例如皮肤和眼睛)的合适组合物包括水溶液、混悬剂、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂或可喷雾制剂，例如用于通过气雾剂递送等。这些局部递送系统可以涉及(例如)可适用于治疗流感的吸入或鼻内应用且可含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。使用或不使用合适的推进剂，它们可以方便地以干粉(单独地，作为混合物，例如与乳糖的干混物，或混合组分颗粒，例如与磷脂)形式从干粉吸入器递送或以气溶胶喷雾剂形式递送自加压容器、泵、喷器、雾化器或喷雾器。
本发明进一步提供了包含本发明化合物作为活性成分的无水药物组合物和剂型，因为水可能促进某些化合物的降解。
本发明的无水药物组合物和剂型可以使用无水或含水量低的成分和低水分或低湿度条件来制备。无水药物组合物可以制备和储存使其保持其无水性质。因此，使用已知防止暴露于水的材料来包装无水组合物，使得它们可以包含在合适的配方药盒中。合适的包装的实例包括但不限于气密密封箔、塑料、单位剂量容器(例如小瓶)、泡罩包装和条形包装。
本发明进一步提供了药物组合物和剂型，其包含降低作为活性成分的本发明化合物的分解速率的一种或多种试剂。在本文中称为“稳定剂”的这些试剂包括但不限于抗氧化剂如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。
游离形式或盐形式的式(I)化合物显示出有价值的药理学性质，例如，它们抑制或阻止正粘病毒的复制，如下部分中提供的试验数据所示，并因此用于治疗或用作研究化学品，例如作为工具化合物，例如用于研究正粘病毒、特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感的复制。因此，本发明化合物可用于治疗由正粘病毒，特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感引起的感染，特别是在人类对象中。在一些实施方式中，待治疗的对象是罹患或有风险感染流感病毒的人。例如,具有可被流感感染大大加剧的预先存在的病症例如哮喘或COPD的对象，可以在表现出流感感染的症状之前用本发明的方法或化合物治疗,特别是如果他们由于与患有或似乎患有流感的家庭成员等人员非常接近而有感染风险的话。在其他实施方式中，通过本发明的方法和组合物治疗的对象是被诊断为具有与流感感染一致的症状的对象。在其他实施方式中，对象可以是已用已知诊断方法例如快速流感诊断测试(RIDT)或逆转录酶PCT(RT-PCR)方法测试来检测流感病毒存在的人，并且被发现感染流感，不论是否存在典型的流感症状。
作为另一实施方式，本发明提供了式(I)或如本文所述的式(I)范围内任何实施方式的化合物在治疗中的用途。特别地，该化合物适用于治疗患有或特别高风险患有正粘病毒病毒感染的对象，特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感。
在另一个实施方式中，本发明提供治疗由正粘病毒引起的疾病的方法，包括施用治疗有效量的式(I)化合物或如本文所述的式(I)范围内的任何实施方式给需要该治疗的对象。在一些实施方式中，式(I)化合物口服施用。在另一个实施方式中，所述疾病选自甲型流感、乙型流感和丙型流感。该方法通常包括将有效量的本文所述的化合物或包含有效量的所述化合物的药物组合物施用于对此类治疗有需要的对象。该化合物可以通过任何合适的方法例如本文所述的那些方法来施用，并且可以以治疗医师可选择的间隔重复施用。在一些实施方式中，化合物或药物组合物口服施用。
因此，作为另一实施方式，本发明提供式(I)化合物或如本文所述这些化合物的任意实施方式在制备药物中的用途。在一个具体实施方式中，该药物用于治疗正粘病毒感染，尤其是甲型流感、乙型流感或丙型流感。
本发明的化合物可以与一种或多种联合试剂同时或之前或之后施用。本发明的化合物可以通过相同或不同的给药途径分开给药，或者作为联合试剂在同一药物组合物中一起给药。适用于本发明化合物的联合药物包括对流感病毒有活性的抗病毒药，例如神经氨酸酶抑制剂，包括奥司他韦、帕拉米韦、扎那米韦和拉尼米韦、辛酸拉尼米韦和金刚烷，如金刚烷胺和金刚乙胺。用于这些方法的其他联合试剂包括M2蛋白抑制剂、聚合酶抑制剂、PB2抑制剂、法匹拉韦、流感酶、ADS-8902、贝前列素、利巴韦林、CAS Reg.No.1422050-75-6、VX-787、四价四价四价和
在一个实施方式中，本发明提供了包含式(I)化合物和至少一种其他治疗联合试剂的产品，作为用于同时、分开或顺序用于治疗的组合制品。在一个实施方式中，该疗法是治疗由正粘病毒引起的病毒感染，特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感。作为组合制品提供的产品包括在相同的药物组合物中一起包含式(I)化合物和至少一种其它治疗性联合试剂的组合物，或者式(I)化合物和至少一种其他治疗性联合试剂以单独的形式，例如以套件的形式用于通过本文所述的方法治疗对象。
在一个实施方式中，本发明提供了包含式(I)化合物和另一治疗联合试剂(一种或多种)的药物组合物。合适的联合试剂包括对流感病毒有活性的抗病毒剂，例如神经氨酸酶抑制剂，包括奥司他韦、帕拉米韦、扎那米韦和拉尼米韦，以及金刚烷，例如金刚烷胺和金刚乙胺。可选地，药物组合物可以包含如上所述的药学可接受的载体。
在一个实施方式中，本发明提供了包含两种或更多种分开的药物组合物的药盒，其中至少一种药物组合物含有式(I)的化合物。另一种药物组合物可含有一种合适的联合试剂。在一个实施方式中，药盒包含用于分开保存所述组合物的装置，例如容器、分开的瓶子或分开的箔包装。这种药盒的一个例子是泡罩包装，如片剂、胶囊等通常所用的包装。
本发明的药盒可以用于施用不同的剂型，例如口服和肠胃外，用于以不同剂量间隔施用分开的组合物，或者用于滴定彼此分开的组合物。为帮助依从性，本发明的药盒通常包含给药指导。
在本发明的组合疗法中，本发明的化合物和治疗性联合试剂可以由相同或不同的制造商制造和/或配制。此外，可以将本发明的化合物和治疗联合剂一起整合入联合疗法中：(i)在向医师发布组合产品之前(例如在药盒包含本发明化合物和其他治疗剂的情况下)；(ii)在施用前不久由医师自己(或在医师指导下)；(iii)患者本身，例如在顺序施用本发明化合物和治疗联合剂的过程中。
因此，本发明提供式(I)化合物用于治疗由正粘病毒、特别是流感病毒(其可以是甲型流感、乙型流感或丙型流感)引起的病毒感染的用途，其中所述药物制备用于与治疗联合剂一起施用。通常在使用本发明化合物的方法中，治疗前未鉴定流感血清型。本发明还提供治疗性联合试剂用于治疗疾病或病症的用途，其中所述药物与式(I)的化合物一起施用。
因此，本发明还提供了式(I)化合物供用于治疗由由正粘病毒、特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感病毒引起的病毒感染的方法，其中所述式(I)化合物被制备用于与一种治疗联合剂一起施用。本发明还提供另一种治疗性联合试剂用于治疗由正粘病毒、特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感病毒引起的病毒感染的方法，其中所述治疗性联合试剂被制备用于与式(I)化合物一起施用。因此，本发明还提供了式(I)化合物供用于治疗由正粘病毒、特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感病毒引起的病毒感染的方法，其中所述式(I)化合物与一种治疗联合剂一起施用。本发明还提供一种治疗性联合试剂用于治疗由正粘病毒、特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感病毒引起的病毒感染的方法，其中所述治疗性联合试剂与式(I)化合物一起施用。
本发明提供了式(I)化合物用于治疗由正粘病毒、特别是流感例如甲型流感、乙型流感或丙型流感病毒引起的病毒感染，其中患者先前(例如，在24小时内)已用另一种治疗剂治疗。本发明提供了另一种治疗剂用于治疗由正粘病毒、特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感病毒引起的病毒感染，其中患者先前(例如，在24小时内)已用式(I)化合物治疗。
在一个实施方式中，治疗性联合剂选自据称可用于治疗由流感病毒引起的感染的抗病毒剂，例如神经氨酸酶抑制剂，包括奥司他韦、帕拉米韦、扎那米韦和拉尼米韦，以及金刚烷，例如金刚烷胺和金刚乙胺。
对于约50-70kg的人类对象，本发明的药物组合物或组合的单位剂量可含有约1-1000mg活性成分(一种或多种)，或约1-500mg或约1-250mg或约1-150mg或约0.5-100mg，或约1-50mg活性成分。化合物、药物组合物或其组合的治疗有效剂量取决于对象的种类、体重、年龄和个体状况、所治疗的紊乱或疾病或其严重程度。普通技术的医师、临床医生或兽医可以容易地确定预防、治疗或抑制病症或疾病进展所必需的各活性成分的有效量。
上述剂量特性可以有利地使用哺乳动物例如小鼠、大鼠、狗、猴或分离的器官、组织和制品进行体外和体内测试来证明。本发明化合物可以以溶液(例如水溶液)的形式体外施用，并且可以肠内、肠胃外、有利地静脉内体内施用，例如作为悬浮液或水溶液。体外剂量范围可以在约10-3摩尔浓度和10-9摩尔浓度之间。体内治疗有效量可取决于给药途径，范围在约0.1-500mg/kg或约0.1-50mg/kg。
本发明进一步包括制备本文公开的式(I)化合物的方法，以及本发明方法的任何变体，其中在其任何阶段可获得的中间体产物用作原料并进行剩余步骤，或者其中原料在反应条件下原位形成，或其中反应组分以其盐或光学纯物质的形式使用。
本发明化合物和中间体也可以根据本领域技术人员通常已知的方法互相转化。
合成式(I-A)化合物的方法描述于反应式A中。第一步是通过用还原剂如DIBAL-H处理从酯A-1产生醛A-2。然后，A-2在乙酸铵和1,2-二羰基物质如乙二醛或二缩醛存在下，用氨基醇A-3处理进行环加成反应，得到异恶唑A-4。可以将醇A-4转化为相应的甲磺酸酯A-5，随后将保护基团P1和P2进行一步或两步脱保护，得到A-6。A-6在非质子溶剂如DMF或NMP中用碱如碳酸钾或碳酸铯处理，得到A-7。以类似的方式，适当保护的酯A-8可以转化为A-9。
或者，P1和P2可以从中间体A-4一起或分步除去以提供A-10，其可以在Mitsunobu条件下处理以提供如图所示的A-7。
反应式A
反应式B中描述了合成式(I-B)化合物的方法。第一步是将酰胺B-1与二甲基缩醛甲胺B-2缩合，得到B-3。在由例如水、丁醇和乙酸组成的混合溶剂体系中，在高温下用肼B-4处理B-3，得到B-5。可以将醇B-5转化为相应的甲磺酸酯B-6，随后将保护基团P1和P2进行一步或两步脱保护，得到B-7。B-7在非质子溶剂如DMF或NMP中用碱如碳酸钾或碳酸铯处理，得到B-8。以类似的方式，适当保护的酯B-9可以转化为B-10。或者，P1和P2可以从中间体B-5一起或分步除去以提供B-11，其可以在Mitsunobu条件下处理以提供B-8。
反应式B
反应式C中描述了合成式(I-C)化合物的方法。第一步是将由相应羧酸方便制备的酰基肼C-1与二甲基缩醛甲胺C-2偶合，得到C-3。在由例如乙腈和乙酸组成的混合溶剂体系中，在高温下用胺C-4处理C-3，得到C-5。按照先前所述(反应式A和反应式B)，甲磺酰化、脱保护和用碱(例如碳酸钾或碳酸铯)处理的三步操作提供C-6。以类似的方式，适当保护的中间体C-7可以转化为C-8。
或者，如反应式A和反应式B中类似的中间体所述，P1和P2可以从中间体C-5一起或分步除去以提供B-11，且所得的醇可以在Mitsunobu条件下处理以提供C-6。
反应式C
反应式D中描述了合成式(I-D)化合物的方法。第一步是将羧酸D-1与胺D-2偶联，得到酰胺D-3。用硅烷化试剂(例如TBDMS-Cl或TBDPS-Cl)保护D-3上的醇，得到中间体D-4。用PCl3或光气处理D-4得到D-5。用叠氮化物处理，然后除去硅基保护基，得到D-6。按照先前所述(反应式A和反应式B)，甲磺酰化、脱保护和用碱(例如碳酸钾或碳酸铯)处理的三步操作提供D-7。以类似的方式，适当保护的中间体D-8可以转化为D-9。或者，如反应式A和反应式B中类似的中间体所述，P1和P2可以从中间体D-6一起或分步除去，且所得的醇可以在Mitsunobu条件下处理以提供D-7。
反应式D
反应式E中描述了合成式(I-E)化合物的方法。第一步是用试剂(例如溴在乙酸中)溴化酮E-1，得到E-2。将酮还原，然后用硅基化试剂(例如TBS-Cl)保护，得到E-3。在诸如氢化钠的碱存在下用TosMIC(甲苯磺酰基甲基异腈)处理溴化物E-3，得到中间体E-4。将E-4与醛E-5在碱存在下在溶剂(例如甲醇)中混合，得到恶唑E-6。除去硅基保护基团得到醇E-7。按照先前所述(反应式A和反应式B)，甲磺酰化、脱保护和用碱(例如碳酸钾或碳酸铯)处理的三步操作提供E-8。以类似的方式，适当保护的中间体E-9可以转化为E-10。
或者，如反应式A和反应式B中类似的中间体所述，P1和P2可以从中间体E-7一起或分步除去，且所得的醇可以在Mitsunobu条件下处理以提供E-8。
反应式E
反应式F中描述了合成式(I-F)化合物的方法。第一步是在TMS-Cl和甲酰胺存在下，在混合溶剂体系(例如甲苯和乙腈)中将醛F-1与甲苯亚磺酸偶联，得到F-2。用POCl3在碱如2,6-二甲基吡啶存在下，在溶剂如THF中处理，得到F-3。在碱如碳酸钾存在下，在溶剂如甲醇中用醛F-4处理F-3，得到恶唑F-5。除去硅基保护基团得到醇F-6。按照先前所述(反应式A和反应式B)，甲磺酰化、脱保护和用碱(例如碳酸钾或碳酸铯)处理的三步操作提供F-7。以类似的方式，适当保护的中间体F-8可以转化为F-9。
或者，如反应式A和反应式B中类似的中间体所述，P1和P2可以从中间体F-6一起或分步除去，且所得的醇可以在Mitsunobu条件下处理以提供F-7。
反应式F
反应式G中描述了合成式(I-G)化合物的方法。第一步是在碱性条件下用乙腈处理环氧化物G-1以提供G-2。用碱如KOtAmyl(叔戊醇钾)处理G-2，然后加入酯G-3，得到中间体G-4。除去硅基，然后甲磺酰化，得到中间体G-5。随后将保护基团P1和P2一步或两步脱保护以提供G-6。在溶剂如DMF或NMP中用碱如碳酸钾或碳酸铯处理，得到G-7。用还原剂如DIBAL-H将腈还原成醛提供醛G-8。然后用羟胺处理G-8，得到G-9和G-10的混合物。
或者，可以用两步反应顺序处理G-8，例如先用劳森试剂然后用氨得到G-11，或先用氨然后用劳森试剂得到G-12。然后用氧化剂如过氧化氢处理G-11或G-12，分别得到G-13和G-14。
以类似的方式，适当保护的中间体G-15可以转化为G-16。
反应式G
反应式H中描述了合成式(I-H)化合物的方法。第一步是用诸如NBS的试剂溴化H-1，然后用保护基如苄基保护-OH以提供H-2。然后与1,3,4-三唑硼酸(或相应硼酸酯)的Suzuki偶联得到H-3。相关的咪唑H-6可以通过使用还原剂如DIBAL-H将酯还原为醛而由酯H-4得到H-5。随后在1,2-二羰基物质如乙二醛或二缩醛存在下用氨源如碳酸铵处理，然后得到H-6。可以通过钯介导的氰化从H-2制备相关的四唑，得到H-7，然后用叠氮化物源如TMS-叠氮处理，得到H-8。
然后用肼处理中间体H-3、H-6或H-8，得到中间体H-9。然后醛或酮与H-9缩合，得到中间体H-10。然后用诸如H-11的二芳基溴进行烷基化，得到H-12。
或者，在还原胺化条件下用二芳基酮处理H-10得到H-12。
反应式H
使用这些合成反应式和提供的实施例，技术人员可以制备式(I)的化合物。
实施例
以下实施例旨在说明本发明，而不应被解释为对其限制。温度以摄氏度给出。如果没有另外提及，所有蒸发都在减压下进行，通常在约15mmHg和100mmHg(约20-133mbar)之间。最终产物、中间体和原料的结构通过标准分析方法例如微量分析和光谱学特征例如MS、IR、NMR来确认。所使用的缩写是本领域中常规的缩写。
用于合成本发明化合物的所有起始材料、结构单元、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂可商购获得或可通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法(Houben-Weyl第4版1952，Methods of Organic Synthesis，Thieme，第21卷)制得。此外，基于以下实施例，本发明的这些化合物可以通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法制备。
缩写
ATP 腺苷5'-三磷酸
Bn 苄基
BOC 叔丁基羧基
br 宽峰
BSA 牛血清白蛋白
d 双峰
dd 双二重峰
DCM 二氯甲烷
DEAD 偶氮二羧酸二乙酯
DBAD 偶氮二羧酸二叔丁酯
DIBAL-H 二异丁基氢化铝
DIEA 二乙基异丙基胺
DME 1,4-二甲氧基乙烷
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
DTT 二硫苏糖醇
EDTA 乙二胺四乙酸
ESI 电喷雾电离
EtOAc 乙酸乙酯
FCC 快速柱色谱
h 小时
HBTU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-苯并三唑六氟磷酸盐(1-)3-氧化物
HOBt 1-羟基-7-氮杂苯并三唑
HPLC 高压液相色谱
IR 红外光谱
LCMS 液相色谱和质谱
MeOH 甲醇
MS 质谱
MW 微波
m 多重峰
min 分钟
mL 毫升
m/z 质荷比
NBS N-溴代琥珀酰亚胺
NCS N-氯代琥珀酰亚胺
NIS N-碘代琥珀酰亚胺
NMP N-甲基吡咯烷酮
NMR 核磁共振
ppm 百万分之一
PyBOP 六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基磷
rac 外消旋
rt 室温
s 单峰
SEM (2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基
t 三重峰
TBDMS 叔丁基二甲基硅基
TBDPS 叔丁基二苯基硅基
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
Tris·HCl 三(羟甲基)氨基甲烷
实施例1：6-二苯甲基-11-羟基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮
中间体1.1:3-硝基-1,1-二苯基丙-2-醇
向2,2-二苯基乙醛(5.0g，26mmol)的硝基甲烷(27mL)溶液中加入K2CO3(11.3g，82.0mmol)。悬液在室温下搅拌30分钟。然后过滤混合物以除去固体，浓缩滤液。将剩余物溶于EtOAc(100mL)中，依次用水(100mL)、盐水(2×25mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。硅胶柱色谱(EtOAc/庚烷)得到3-硝基-1,1-二苯基丙-2-醇(5.6g，无色油状物，静置后变为固体)，产率85％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44–7.27(m,10H),5.13(dddd,J＝9.3,6.8,5.2,3.9Hz,1H),4.46–4.34(m,2H),3.99(d,J＝9.3Hz,1H),2.33(d,J＝3.8Hz,1H).MS m/z 228.2(M+1).
中间体1.2:3-氨基-1,1-二苯基丙-2-醇
在氮气氛下，向3-硝基-1,1-二苯基丙-2-醇(5.6g，22mmol)的无水EtOH(73mL)溶液中加入10％Pd/C(2.3g)。将烧瓶抽空并从气球中重新填充H2(三次)，然后在室温下在H2气球下剧烈搅拌24小时。然后用氮气吹扫反应烧瓶，并将混合物通过硅藻土过滤。浓缩滤液，得到3-氨基-1,1-二苯基丙-2-醇(4.9g，无色油)，收率100％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.41–7.10(m,10H),4.28(ddd,J＝9.0,7.8,3.1Hz,1H),3.89(d,J＝9.0Hz,1H),2.75(ddd,J＝12.9,3.1,1.7Hz,1H),2.54(ddd,J＝12.9,7.9,1.0Hz,1H).
中间体1.3:5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-甲醛
在-78℃下，将DIBAL-H(1.0M，在甲苯中，4.9mL，4.9mmol)的溶液滴加到在THF(25mL)中的5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸乙酯(1.0g，2.5mmol：参见US 2015/0072982 A1)的溶液中。将反应在-78℃下搅拌20分钟，然后通过在相同温度下逐滴加入MeOH(3mL)淬灭。移去冷浴，用EtOAc和饱和罗谢尔盐水溶液稀释反应。分层，并将水层用EtOAc萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。硅胶柱色谱(EtOAc/庚烷)得到5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-甲醛(0.51g，黄色油状物，静置后变为固体)，产率57％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.37(s,1H),7.67(s,1H),7.46–7.31(m,5H),5.34(s,2H),5.30(s,2H),3.54–3.45(m,2H),0.88–0.81(m,2H),-0.01(d,J＝7.3Hz,9H).MS m/z 361.3(M+1).
中间体1.4:5-苄氧基-3-(1-(2-羟基-3,3-二苯基丙基)-1H-咪唑-2-基)-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)哒嗪-4(1H)-酮
将乙酸铵(75mg，0.97mmol)和乙二醛(40％在水中，0.11mL，0.97mmol)加入到5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-甲醛(350mg，0.97mmol)和3-氨基-1,1-二苯基丙-2-醇(110mg，0.48mmol)的MeOH(2mL)溶液中。将该混合物加热回流2小时，然后冷却至室温。反应混合物用EtOAc稀释并用淡盐水洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到粗5-苄氧基-3-(1-(2-羟基-3,3-二苯基丙基)-1H-咪唑-2-基)-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)哒嗪-4(1H)-酮，其不经进一步纯化而使用。MS m/z 609.3(M+1).
中间体1.5:3-(2-(5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐
0℃下将甲磺酰氯(0.094mL，1.2mmol)滴加到粗5-苄氧基-3-(1-(2-羟基-3,3-二苯基丙基)-1H-咪唑-2-基)-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)哒嗪-4(1H)-酮和Et3N(0.20mL，1.5mmol)的DCM(24mL)溶液中。将混合物在相同温度下搅拌30分钟，然后用水淬灭。分层，并将水层用DCM萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，过滤并浓缩。硅胶柱色谱(EtOAc/庚烷)得到3-(2-(5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐(0.13g，黄色油状物)，两步收率为40％。MS m/z 687.4(M+1).
中间体1.6:3-(2-(5-羟基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐
在氮气下，在室温下，将10％Pd/C(21mg)加入到3-(2-(5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐(0.13g，0.20mmol)在甲醇(10mL)中的溶液。将烧瓶抽空并从气球中重新填充H2(三次)，然后在H2气球气氛下剧烈搅拌30分钟。然后用氮气吹扫反应烧瓶，并将混合物通过硅藻土过滤。滤液浓缩以给出3-(2-(5-羟基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐，其不经进一步纯化而使用。MS m/z 597.2(M+1).
中间体1.7:3-(2-(5-羟基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐
粗3-(2-(5-羟基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐溶于TFA(4mL)，并在室温搅拌2小时。然后浓缩反应。剩余物溶于甲苯并再次浓缩以给出粗3-(2-(5-羟基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐，其不经进一步纯化而使用。MS m/z 467.2(M+1).
实施例1：6-二苯甲基-11-羟基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮
K2CO3(81mg,0.59mmol)加入到粗3-(2-(5-羟基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐在DMF(2mL)中的溶液。混合物室温搅拌12小时，然后过滤以移除固体。滤液通过反相HPLC纯化。合并产物级分，冷冻并冻干以获得6-二苯甲基-11-羟基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮的TFA盐(21mg,0.043mmol,白色固体)，三步产率22％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.72–7.65(m,1H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝7.3Hz,2H),7.41–7.32(m,3H),7.31–7.25(m,1H),7.16(dddd,J＝19.6,6.7,5.4,1.6Hz,5H),5.89(dd,J＝11.4,4.0Hz,1H),4.73(dd,J＝14.1,4.3Hz,1H),4.35(d,J＝14.1Hz,1H),4.24(d,J＝11.4Hz,1H).MS m/z 371.2(M+1).
实施例2 6-(双(3-氟苯基)甲基)-11-羟基-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10-酮。
该化合物通过与制备实施例1相同的方法制备。
MS m/z 406.9(M+1).
实施例3 6-二苯甲基-11-羟基-5,6-二氢-10H-[1,2,4]三唑[5',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10-酮
中间体3.1:5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺
在0℃下，将三乙胺(0.11mL,0.80mmol)加入到在DMF(4mL)中的5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(200mg,0.53mmol:参见US 2015/0072982 A1)的溶液中。然后加入氯甲酸乙酯(0.061mL，0.64mmol)，将所得混合物在0℃下搅拌20分钟。然后滴加NH4OH水溶液(30％，1.5mL，11.6mmol)。将混合物在0℃下搅拌30分钟，然后水稀释并用EtOAc萃取产物(3次)。将合并的有机萃取液依次用水、盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)、过滤并浓缩，得到粗5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺，其不经进一步纯化而使用。MS m/z 376.3(M+1).
中间体3.2:(E)-5-苄氧基-N-((二甲基氨基)亚甲基)-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺
将粗5-苄氧基-N-((二甲基氨基)亚甲基)-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(0.2g，0.53mmol)在N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(10mL)中的混合物在100℃下加热1.5小时。然后将溶液冷却到室温并浓缩以给出(E)-5-苄氧基-N-((二甲基氨基)亚甲基)-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺，其不经进一步纯化而使用。
中间体3.3:3-肼基-1,1-二苯基丙-2-醇
在微波小瓶中，将肼(0.33mL，10.5mmol)加入到2-二苯甲基环氧乙烷(220mg，1.05mmol：参见Zhang，S.；Zhen，J.；Reith，Maarten EA；Dutta，AKJ Med.Chem.2005,48，4962-4971)的乙醇(10.5mL)溶液。盖上小瓶，将混合物在微波中在100℃加热10分钟。浓缩反应混合物，将剩余物溶于EtOAc，并依次用水和盐水洗涤。然后将有机层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到粗3-肼基-1,1-二苯基丙-2-醇，其不经进一步纯化而使用。MS m/z 243.3(M+1).
中间体3.4:5-苄氧基-3-(1-(2-羟基-3,3-二苯基丙基)-1H-1,2,4-三唑-5-基)-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)哒嗪-4(1H)-酮
将粗3-肼基-1,1-二苯基丙-2-醇(257mg，1.06mmol)的乙酸(15mL)溶液加入到粗(E)-5-苄氧基-N-((二甲基氨基)亚甲基)-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(229mg，0.531mmol)中。将混合物加热至90℃保持5分钟，然后冷却至室温。加入EtOAc，依次用水、饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤混合物。将有机层干燥(Na2SO4),过滤并浓缩。硅胶柱色谱(0-10％MeOH的EtOAc溶液)得到5-苄氧基-3-(1-(2-羟基-3,3-二苯基丙基)-1H-1,2,4-三唑-5-基)-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)哒嗪-4(1H)-酮(220mg，无色油)，收率68％。MS m/z 610.4(M+1).
中间体3.5:3-(5-(5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐
在0℃下，将甲磺酰氯(0.042mL,0.54mmol)滴加到5-苄氧基-3-(1-(2-羟基-3,3-二苯基丙基)-1H-1,2,4-三唑-5-基)-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)哒嗪-4(1H)-酮(220mg,0.36mmol)和三乙胺(0.10mL,0.72mmol)的DCM(24mL)溶液。将混合物在0℃下搅拌30分钟，然后用水淬灭反应。分层，并将水层用DCM萃取。将合并的DCM层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)、过滤并浓缩，得到粗3-(5-(5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐，其不经进一步纯化而使用。MS m/z 688.3(M+1).
中间体3.6:3-(5-(5-羟基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐
在氮气下，在室温下，将10％Pd/C(38mg)加入到粗3-(5-(5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐(0.25g，0.36mmol)的甲醇(36mL)溶液。然后将烧瓶抽空并从气球中重新填充H2(三次)，然后在H2气球气氛下剧烈搅拌30分钟。然后用氮气吹扫反应烧瓶，并将混合物通过硅藻土过滤。滤液浓缩以给出粗3-(5-(5-羟基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐，其不经进一步纯化而使用。MS m/z 598.3(M+1).
中间体3.7:3-(5-(5-羟基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐
粗3-(5-(5-羟基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐(0.22g,0.36mmol)溶于TFA(4mL)，并在40℃搅拌30分钟。然后浓缩反应。剩余物溶于甲苯并再次浓缩以给出粗3-(5-(5-羟基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐，其不经进一步纯化而使用。MS m/z 468.2(M+1).
实施例3制备6-二苯甲基-11-羟基-5,6-二氢-10H-[1,2,4]三唑[5',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10-酮
K2CO3(150mg,1.08mmol)加入到粗3-(5-(5-羟基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基甲磺酸盐(169mg,0.36mmol)的DMF(3.6mL)溶液。混合物室温搅拌12小时，然后过滤以移除固体。滤液通过反相HPLC纯化。合并产物级分，冷冻并冻干以获得6-二苯甲基-11-羟基-5,6-二氢-10H-[1,2,4]三唑[5',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10-酮(34mg,0.069mmol,黄色固体)的TFA盐，四步产率19％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),7.46–7.41(m,2H),7.39–7.25(m,4H),7.23–7.09(m,5H),5.92(ddd,J＝11.8,4.3,1.2Hz,1H),4.91(dd,J＝13.9,4.3Hz,1H),4.26–4.20(m,1H),3.95(d,J＝11.6Hz,1H).MS m/z 372.3(M+1).
实施例4制备(S)-6-二苯甲基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
中间体4.1:(S)-(3-(2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯
将乙酸铵(189mg,2.45mmol)和乙二醛(40％在水中，0.28mL，2.45mmol)溶液加入到3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-甲醛(564mg,2.45mmol:US 2015/0202208 A1)和(S)-(3-氨基-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(400mg,1.23mmol:US 2012/0022251 A1)的MeOH(6mL)溶液中。然后反应加热回流1小时。加入另外的乙酸铵(95mg，1.2mmol)和乙二醛(40％在水中，0.14mL，1.2mmol)，再将溶液加热回流30分钟。将混合物冷却至室温并用EtOAc和水稀释。分层，并将水层用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。硅胶柱色谱(0-10％MeOH的EtOAc溶液)得到(S)-(3-(2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(270mg，黄色油状物)，收率38％。MS m/z 578.4(M+1).
中间体4.2:(S)-2-(1-(2-氨基-3,3-二苯基丙基)-1H-咪唑-2-基)-3-苄氧基-4H-吡喃-4-酮
在室温下，将TFA(3.6mL)加入到(S)-(3-(2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(270mg，0.47mmol)的DCM(12mL)溶液中。将溶液搅拌1小时，然后真空浓缩，得到粗(S)-2-(1-(2-氨基-3,3-二苯基丙基)-1H-咪唑-2-基)-3-苄氧基-4H-吡喃-4-酮，其不经进一步纯化而使用。MS m/z 478.3(M+1).
中间体4.3:(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
将乙酸(12mL)加入到粗(S)-2-(1-(2-氨基-3,3-二苯基丙基)-1H-咪唑-2-基)-3-苄氧基-4H-吡喃-4-酮(223mg,0.47mmol)的乙醇(24mL)溶液。混合物在80℃加热1小时。反应物冷却到室温，并浓缩给出粗(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮，其不经进一步纯化而使用。MS m/z 460.3(M+1).
实施例4(S)-6-二苯甲基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
在微波小瓶中将TFA(10mL)加入粗(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮(215mg,0.47mmol)。将小瓶加盖并在微波中90℃加热10分钟。然后浓缩反应。将剩余物溶于DMSO中并通过反相HPLC纯化。合并产物级分，冷冻并冻干以获得(S)-6-二苯甲基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮的TFA盐(63mg,0.13mmol,黄色固体)，三步产率28％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.72(d,J＝1.7Hz,1H),7.62(d,J＝1.8Hz,1H),7.51–7.45(m,2H),7.44–7.36(m,2H),7.35–7.10(m,7H),5.92(d,J＝7.2Hz,1H),5.82(dd,J＝11.4,3.7Hz,1H),4.66(dd,J＝14.0,4.1Hz,1H),4.34–4.27(m,1H),4.19(d,J＝11.8Hz,1H).MS m/z 370.3(M+1).
实施例5制备(S)-6-二苯甲基-3-氯-11-羟基-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10-酮
中间体5.1:(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-氯-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10-酮
在室温下，将Palau'Chlor(24mg，0.11mmol：Baran等，J.Am.Chem.Soc.136(19)，6908-11(2014))加入到粗中间体4.3(43mg，0.094)在氯仿(0.9mL)中的溶液。混合物RT搅拌20分钟然后真空浓缩。硅胶色谱(0-10％MeOH的EtOAc溶液)得到(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-氯-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10-酮(18mg，黄色油状物)，收率39％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.69–7.64(m,2H),7.40–7.27(m,7H),7.20(s,1H),7.12(dt,J＝7.5,2.5Hz,5H),6.93–6.86(m,2H),6.48(d,J＝7.6Hz,1H),5.81(d,J＝7.5Hz,1H),5.50(d,J＝10.4Hz,1H),5.37(d,J＝10.5Hz,1H),4.61(ddd,J＝11.4,3.6,1.4Hz,1H),4.10–4.05(m,1H),3.75(s,4H),3.52(d,J＝11.3Hz,1H).MS m/z 494.3(M+1).
实施例5(S)-6-二苯甲基-3-氯-11-羟基-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10-酮
将(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-氯-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10-酮(18mg，0.036mmol)的三氟乙酸(3mL)溶液在微波中于90℃加热10分钟。然后浓缩反应。将剩余物溶于DMSO中并通过反相HPLC纯化。合并产物级分，冷冻并冻干以获得(S)-6-二苯甲基-3-氯-11-羟基-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10-酮的TFA盐(7mg,0.013mmol,黄色固体)，产率37％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.51(s,1H),7.49–7.44(m,2H),7.44–7.36(m,2H),7.35–7.25(m,4H),7.24–7.13(m,3H),5.94(d,J＝7.3Hz,1H),5.86(dd,J＝11.7,3.6Hz,1H),4.51(dd,J＝13.6,3.8Hz,1H),4.02(d,J＝11.6Hz,1H),3.95(dd,J＝13.7,1.2Hz,1H).MS m/z 404.2(M+1).
实施例6(S)6-二苯甲基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10(6H)-酮
中间体6.1:2-(1H-咪唑-2-基)-3-甲氧基-4H-吡喃-4-酮向3-甲氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-甲醛(5.0g，32.4mmol)的MeOH(50mL)溶液中加入草酰醛(40％，9.41mL，64.9mmol)和NH4OAc(10.00g，130mmol)。反应密封并加热至80℃保持1小时。将混合物冷却并浓缩。将剩余物在SiO2上纯化(EtOAc在庚烷中10％至100％)，得到产物(3.21g，51％)。MS m/z 193.1(M+1).
中间体6.2:1-苄基-2-(1H-咪唑-2-基)-3-甲氧基吡啶-4(1H)-酮向2-(1H-咪唑-2-基)-3-甲氧基-4H-吡喃-4-酮(3.1g,16.13mmol)的EtOH(30mL)溶液加入HOAc(4mL)和苯基甲胺(8.64g,81mmol)。反应密封并加热至100℃保持20分钟。将混合物冷却并浓缩。将剩余物在SiO2上纯化(EtOAc在庚烷中10％至100％)，得到产物(3.88g，86％)。MS m/z 282.3(M+1).
中间体6.3:2-(1-苄基-3-甲氧基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-基)-1H-咪唑-1-羧酸叔丁酯向1-苄基-2-(1H-咪唑-2-基)-3-甲氧基吡啶-4(1H)-酮(3.2g,11.38mmol)的ACN(30mL)溶液加入Cs2CO3(7.41g,22.75mmol)和二碳酸二叔丁酯(4.97g,22.75mmol)。反应密封并加热至60℃保持3小时。将混合物冷却并用EtOAc(100mL)稀释。将混合物用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤。然后将有机层干燥(Na2SO4)并浓缩。将剩余物在SiO2上纯化(EtOAc在庚烷中10％至100％)，得到产物(3.68g，85％)。MS m/z 382.3(M+1).
中间体6.4:2-(3-甲氧基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-基)-1H-咪唑-1-羧酸叔丁酯向2-(1-苄基-3-甲氧基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-基)-1H-咪唑-1-羧酸叔丁酯(400mg,1.049mmol)的MeOH(10mL)溶液加入钯炭(10％,400mg,0.376mmol)。反应物用氢气吹扫并在氢气下搅拌6小时。然后将混合物用氮气吹扫并通过硅藻土过滤并用MeOH洗涤。浓缩滤液，得到粗产物。MS m/z 282.3(M+1).
中间体6.5:2-(1-氨基-3-甲氧基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-基)-1H-咪唑-1-羧酸叔丁酯向2-(3-甲氧基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-基)-1H-咪唑-1-羧酸叔丁酯(300mg,1.030mmol)的DMF(3mL)溶液加入Cs2CO3(403mg,1.236mmol)。将混合物搅拌15分钟，然后加入O-(2,4-二硝基苯基)羟胺(246mg，1.236mmol)。反应搅拌一小时。然后将混合物用水(20mL)稀释，并用IPA的DCM溶液(15％，3×30mL)萃取。然后将有机层干燥(Na2SO4)并浓缩得到粗产物。MS m/z 307.2(M+1).
中间体6.6:1-氨基-2-(1H-咪唑-2-基)-3-甲氧基吡啶-4(1H)-酮向2-(1-氨基-3-甲氧基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-基)-1H-咪唑-1-羧酸叔丁酯(300mg,0.979mmol)的DCM(3mL)溶液加入TFA(4mL)。将反应搅拌20分钟，然后浓缩得到粗产物。MS m/z 207.2(M+1).
中间体6.7:11-甲氧基-5H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10(6H)-酮向1-氨基-2-(1H-咪唑-2-基)-3-甲氧基吡啶-4(1H)-酮(200mg,0.970mmol)的MeOH(3mL)溶液加入甲醛水溶液(30％,291mg,2.91mmol)。反应密封并加热至55℃保持2小时。将混合物冷却并浓缩。将剩余物在SiO2上纯化(MeOH在DCM中0％至10％)，得到产物(156mg，73％)。MS m/z 219.3(M+1).
中间体6.8:6-二苯甲基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10(6H)-酮向11-甲氧基-5H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10(6H)-酮(25mg,0.115mmol)的DMF(1mL)溶液加入二苯基溴甲烷(56.6mg,0.229mmol)和氢化钠(60％,9.16mg,0.229mmol)。反应搅拌20分钟。然后将混合物用水(5mL)稀释，并用IPA的DCM溶液(15％，3×30mL)萃取。然后将有机层干燥(Na2SO4)并浓缩。将剩余物在SiO2上纯化(MeOH在DCM中0％至10％)，得到产物(30mg，68％)。MS m/z 385.2(M+1).
实施例6 6-二苯甲基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10(6H)-酮向6-二苯甲基-11-甲氧基-5H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10(6H)-酮(20mg,0.052mmol)的DMF(2mL)溶液加入BF3-Et2O(1M在DCM中,0.156mL,0.156mmol)和LiBr(45.2mg,0.520mmol)。反应密封并加热至100℃保持60分钟。将混合物冷却并通过HPLC纯化得到产物(11mg，56％)。MS m/z 371.3(M+1).
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.7(s,1H),7.59(s,1H),7.57(m,2H),7.52(d,J＝7.6Hz,1H),7.46(m,2H),7.4(m,1H),7.23-7.3(m,5H),5.88(d,J＝7.6Hz,1H),5.66(dd,J＝10Hz,2H),5.14(s,1H).
实施例7(S)-6-二苯甲基-3-溴-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
步骤1：(S)-(3-(2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在室温下，将乙酸铵(224mg，2.91mmol)加入3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-甲醛(670mg，2.91mmol)、(S)-(3-氨基)-1,1-二苯基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.455mmol)(US2012/00222251A1))和乙二醛(0.332mL，2.91mmol)的MeOH溶液(体积：9mL)。然后反应在加热块中加热回流1小时。LC-MS显示一些副产物之外形成所需产物。仍然看到未反应的胺。再加入各1当量的乙酸铵和乙二醛，继续加热另外1-2小时。依据LC-MS，反应完全。将混合物冷却至室温并用EtOAc和水稀释。分层，并将水层用EtOAc萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。使用0-100％EtOAc(含有10％MeOH)/庚烷，通过硅胶色谱法纯化粗产物，得到(S)-(3-(2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯，为浅黄色泡沫状固体。
(840mg,1.454mmol,产率50.0％)LCMS:MH+578.2,0.81分钟。
步骤2：(S)-(3-(2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-5-溴-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯
向(S)-(3-(2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(430mg，0.744mmol)的DCM(体积：10mL)溶液加入NBS(159mg，0.893mmol)并在室温下搅拌/1H。依据LC-MS，反应完全。反应混合物在DCM和水之间分配。分出DCM层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使用0-100％EtOAc(含有10％MeOH)/庚烷，通过硅胶色谱法纯化粗产物，得到(S)-(3-(2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-5-溴-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯，为浅黄色泡沫状固体(360mg,0.548mmol,产率73.7％)。LCMS:MH+655.9,0.98分钟。
步骤3：(S)-2-(1-(2-氨基-3,3-二苯基丙基)-5-溴-1H-咪唑-2-基)-3-苄氧基-4H-吡喃-4-酮
向(S)-(3-(2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-5-溴-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(360mg,0.548mmol)的DCM(1mL)溶液加入40％TFA/DCM(4mL,20.77mmol)溶液。室温搅拌1小时。依据LC-MS，反应完全。将反应混合物真空浓缩，与甲苯共沸得到粗产物(S)-2-(1-(2-氨基-3,3-二苯基丙基)-5-溴-1H-咪唑-2-基)-3-苄氧基-4H-吡喃-4-酮(305mg,0.548mmol,产率100％)。LCMS:MH+556.0,0.78分钟。
无需进一步纯化，进行下一步。
步骤4：(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-溴-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
将来自步骤3的粗(S)-2-(1-(2-氨基-3,3-二苯基丙基)-5-溴-1H-咪唑-2-基)-3-苄氧基-4H-吡喃-4-酮(305mg,0.548mmol)溶于乙醇(6ml)和乙酸(3ml)。然后混合物在加热块中80℃加热1小时。依据LC-MS，反应完全。将反应混合物真空浓缩，粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用0-100％EtOAc(含有10％MeOH)/庚烷，得到(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-溴-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮，为淡黄色固体，(205mg,0.381mmol,产率69.4％)。LCMS:MH+538.0,0.81分钟。
步骤5：(S)-6-二苯甲基-3-溴-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
向(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-溴-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮(8mg,0.015mmol)加入三氟乙酸(0.5ml)。然后溶液在微波中90℃加热15分钟。依据LC-MS，反应完全。反应真空浓缩，与甲苯共沸。通过制备HPLC纯化粗产物以获得(S)-6-二苯甲基-3-溴-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮，为TFA盐，(5.8mg,10.31μmol,产率69.4％)。
LCMS(m/z):448.0(MH+),0.71分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.46(s,1H)7.43(d,J＝4.35Hz,3H)7.35(dq,J＝8.76,4.17Hz,1H)7.30(d,J＝7.24Hz,1H)7.17-7.26(m,4H)6.18(d,J＝7.14Hz,1H)5.71(dd,J＝11.52,2.91Hz,1H)4.45(dd,J＝13.79,3.86Hz,1H)4.28(d,J＝12.91Hz,1H)4.04(d,J＝11.54Hz,1H).
实施例8(S)-6-二苯甲基-3-环丙基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
步骤1：(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-环丙基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
向含(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-溴-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮(40mg,0.074mmol)(参见实施例7步骤4的合成)的甲苯(体积:1,比例:10.00)和水(体积:0.1mL,比例:1.000)加入环丙基三氟硼酸钾(33.0mg,0.223mmol)、正丁基-二(1-金刚烷基)-膦(5.33mg,0.015mmol)、碳酸铯(121mg,0.371mmol)和乙酸钯(II)(1.668mg,7.43μmol)。将反应混合物在100℃的加热块中加热。依据LC-MS，反应完成80％。停止反应，旋蒸浓缩。将粗产物在EtOAc和水之间分配。分层，并将水层用EtOAc萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用0-10％MeOH/DCM，得到(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-环丙基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮，(23mg,0.046mmol,产率62.0％)。LCMS:MH+500.3,0.74分钟。
步骤2：(S)-6-二苯甲基-3-环丙基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
向(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-环丙基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮(23mg,0.046mmol)加入三氟乙酸(1ml)。然后溶液在微波中90℃加热15分钟。依据LC-MS，反应完全。反应真空浓缩，与甲苯共沸。通过制备HPLC纯化粗产物以获得(S)-6-二苯甲基-3-环丙基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮，为TFA盐，(6.5mg,0.012mmol,产率26.7％)。
LCMS(m/z):410.3(MH+),0.66分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.40-7.56(m,4H)7.29-7.40(m,2H)7.13-7.26(m,5H)6.03(d,J＝7.24Hz,1H)5.58-5.81(m,1H)4.45-4.70(m,2H)4.12(d,J＝11.69Hz,1H)1.33-1.56(m,1H)0.75-0.98(m,2H)0.60-0.71(m,1H)0.32-0.43(m,1H)
实施例9(S)-6-二苯甲基-3-乙基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
步骤1：(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-乙烯基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
向含(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-溴-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮(30mg,0.056mmol)(参见实施例1的合成)和4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(17.16mg,0.111mmol)的DME(体积:1.5mL)溶液和碳酸钠(200μL,0.400mmol)中加入PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(4.55mg,5.57μmol)。将反应混合物在微波中以110℃/15分钟加热。依据LC-MS，反应完成，观察到的主要质量归于所需产物。反应混合物在EtOAc和水之间分配。分离有机层，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到粗(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-乙烯基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮，(27mg,0.056mmol,产率100％)。LCMS:MH+486.3,0.75分钟。
无需纯化，进行下一步。
步骤2：(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-乙基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
在室温氮气氛下，将10％Pd-C(10.96mg,10.30μmol)加入粗(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-乙烯基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮(25mg,0.051mmol)的MeOH(体积:5mL)溶液。将烧瓶抽空并从气球中重新填充氢气(三次)，然后在氢气球下搅拌1小时。LCMS显示反应完全。
将反应物通过硅藻土塞过滤(用MeOH洗涤)，将滤液真空浓缩，得到粗(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-乙基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮，LCMS:MH+488.3,0.72分钟。
步骤3：(S)-6-二苯甲基-3-乙基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
向粗(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-乙基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮(25mg,0.051mmol)加入三氟乙酸(1ml)。然后溶液在微波中90℃加热15分钟。反应真空浓缩，与甲苯共沸。通过制备HPLC纯化粗产物以获得(S)-6-二苯甲基-3-乙基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮，为TFA盐，(1.25mg,2.23μmol,产率4.5％)。LCMS(m/z):398.3(MH+),0.64分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.40-7.48(m,5H)7.36(td,J＝8.57,4.28Hz,2H)7.16-7.24(m,5H)6.03(d,J＝7.19Hz,1H)5.63-5.75(m,1H)4.52(dd,J＝14.01,3.89Hz,1H)4.32(d,J＝14.57Hz,1H)4.09(d,J＝11.54Hz,1H)2.24-2.48(m,3H)1.04-1.16(m,3H)
实施例10 6-(双(4-氯苯基)甲基)-11-羟基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮
由实施例1的方法合成。LCMS(m/z):439.3(MH+),0.75分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.58(d,J＝1.47Hz,1H)7.54(d,J＝1.47Hz,1H)7.50(s,1H)7.40(s,4H)7.12-7.21(m,4H)5.81(dd,J＝11.15,3.37Hz,1H)4.75(dd,J＝14.26,4.28Hz,1H)4.50(d,J＝13.79Hz,1H)4.28(d,J＝11.20Hz,1H)
实施例11 6-(双(3-氯苯基)甲基)-11-羟基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮
由实施例1的方法合成。LCMS(m/z):439.3(MH+),0.74分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.65(d,J＝1.66Hz,1H)7.61(d,J＝1.61Hz,1H)7.52(s,1H)7.48(s,1H)7.32-7.44(m,3H)7.14-7.24(m,3H)7.07-7.13(m,1H)5.89(dd,J＝11.05,3.37Hz,1H)4.79(dd,J＝14.35,4.28Hz,1H)4.57(d,J＝13.69Hz,1H)4.36(d,J＝11.10Hz,1H)
实施例12 6-(双(4-氟苯基)甲基)-11-羟基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮
由实施例1的方法合成。LCMS(m/z):407.3(MH+),0.63分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.61(d,J＝1.52Hz,1H)7.55(d,J＝1.61Hz,1H)7.48(s,7.52H)7.48(s,1H)7.38-7.48(m,2H)7.07-7.24(m,4H)6.83-6.98(m,2H)5.74(dd,J＝5.97,3.37Hz,1H)4.72(dd,J＝4.80,4.28Hz,1H)4.52(d,J＝13.69Hz,1H)4.29(d,J＝11.15Hz,1H)
实施例13(S)-6-二苯甲基-11-羟基-3-甲基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
由实施例7的方法合成，除了使用2-氧代丙醛替代乙二醛。LCMS(m/z):384.3(MH+),0.61分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.40-7.47(m,5H)7.35-7.40(m,1H)7.16-7.30(m,6H)6.04(d,J＝7.19Hz,1H)5.66(dd,J＝11.42,2.96Hz,1H)4.47(dd,J＝14.06,3.84Hz,1H)4.26(d,J＝13.30Hz,1H)4.07(d,J＝11.44Hz,1H)2.02(d,J＝0.73Hz,3H)
实施例14(S)-6-二苯甲基-11-羟基-2,3-二甲基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
由实施例7的方法合成，除了使用2,3-丁二酮替代乙二醛。LCMS(m/z):398.3(MH+),0.62分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.44(d,J＝4.35Hz,4H)7.37(dq,J＝8.69,4.20Hz,1H)7.16-7.30(m,6H)6.03(d,J＝7.29Hz,1H)5.64(dd,J＝11.40,3.03Hz,1H)4.47(dd,J＝14.13,3.86Hz,1H)4.24(d,J＝13.74Hz,1H)4.09(d,J＝11.44Hz,1H)2.42(s,3H)1.90-2.01(m,3H)
实施例15(S)-6-(双(3-氯苯基)甲基)-11-羟基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮
通过实施例1的方法合成，除了通过手性HPLC分离相应中间体15.5的对映异构体。LCMS(m/z):439.3(MH+),0.74分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm7.61(dd,J＝13.11,1.52Hz,2H)7.51(s,1H)7.48(s,1H)7.33-7.44(m,3H)7.14-7.24(m,3H)7.07-7.12(m,1H)5.89(dd,J＝11.05,3.37Hz,1H)4.78(dd,J＝14.31,4.33Hz,1H)4.55(d,J＝13.94Hz,1H)4.34(d,J＝11.10Hz,1H)
实施例16(R)-6-(双(3-氯苯基)甲基)-11-羟基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮
通过实施例1的方法合成，除了通过手性HPLC分离相应中间体16.5的对映异构体。LCMS(m/z):439.3(MH+),0.73分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.62(dd,J＝12.74,1.59Hz,2H)7.51(s,1H)7.48(s,1H)7.33-7.44(m,3H)7.14-7.24(m,3H)7.07-7.12(m,1H)5.89(dd,J＝11.05,3.37Hz,1H)4.78(dd,J＝14.38,4.35Hz,1H)4.56(d,J＝14.33Hz,1H)4.35(d,J＝11.10Hz,1H)
手性氨基醇的一般合成
步骤1：(E)-3-(4-氟苯基)丙烯酸乙酯
在-78℃下，将正丁基锂(2.5M己烷溶液，17.60ml，44.0mmol)的溶液滴加到磷酰基乙酸三乙酯(8.01ml，40.0mmol)的THF(体积：40ml)溶液中。5分钟后，滴加4-氟苯甲醛(4.29ml,40mmol)。然后将溶液在-78℃下搅拌10分钟并在室温下搅拌2小时。将反应用盐水淬灭，用乙醚稀释，然后用盐水洗涤3次。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到粗(E)-3-(4-氟苯基)丙烯酸乙酯，其不经进一步纯化而使用。MS m/z 195.1(M+1).
步骤2：(E)-3-(4-氟苯基)丙-2-烯-1-醇
在0℃下，将DIBAL-H(1.0M在甲苯中，120ml，120mmol)的溶液缓慢加入到粗(E)-3-(4-氟苯基)丙烯酸乙酯(7.77g，40mmol)的THF溶液(体积：40ml)中。加完后，将混合物在室温下搅拌2小时。通过加入饱和酒石酸钾钠水溶液(100mL)淬灭反应。将所得溶液在40℃下搅拌并加入固体酒石酸钾钠(～30克)。然后将混合物冷却至室温并用乙醚(600mL)稀释，用饱和酒石酸钾钠水溶液(3×200mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。硅胶柱色谱(EtOAc/庚烷)得到(E)-3-(4-氟苯基)丙-2-烯-1-醇(4.12g，白色固体)，两步收率68％。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.41–7.30(m,2H),7.05–6.95(m,2H),6.59(dt,J＝15.8,1.5Hz,1H),6.28(dt,J＝15.9,5.7Hz,1H),4.32(dd,J＝5.8,1.6Hz,2H).
步骤3：((2S,3S)-3-(4-氟苯基)环氧乙烷-2-基)甲醇
在-20℃(氮气下)下，依次将异丙醇钛(0.802ml，2.71mmol)和叔丁基过氧化氢(5.5M癸烷溶液，9.85ml，54.2mmol)加入到(+)-L-酒石酸二异丙酯(0.708ml，3.38mmol)和4A分子筛(粉末状)(1.3g，27.1mmol)在DCM(体积：246ml)中的搅拌混合物中。将混合物在-20℃下搅拌1小时，然后在在30分钟内逐滴加入(E)-3-(4-氟苯基)丙-2-烯-1-醇(4.12g，27.1mmol)的DCM溶液(7mL)。混合物在-20℃搅拌3小时。在-20℃下，用NaCl饱和的10％NaOH水溶液(2.7mL)淬灭反应。然后，加入乙醚(40mL)并将冷浴温热至10℃，同时加入MgSO4(2.7g)和硅藻土(677mg)。再搅拌15分钟后，使混合物沉降，然后通过硅藻土垫过滤(用乙醚洗涤)。将滤液浓缩。硅胶柱色谱(EtOAc/庚烷)得到((2S,3S)-3-(4-氟苯基)环氧乙烷-2-基)甲醇(3.47g，无色油状物)，收率76％。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.30–7.21(m,2H),7.09–7.00(m,2H),4.04(ddd,J＝12.8,5.2,2.4Hz,1H),3.92(d,J＝2.2Hz,1H),3.81(ddd,J＝12.7,7.8,3.7Hz,1H),3.19(dt,J＝4.2,2.3Hz,1H),1.87–1.77(m,1H).
步骤4：2-(((2S,3S)-3-(4-氟苯基)环氧乙烷-2-基)甲基)异二氢吲哚-1,3-二酮
在室温下，将DEAD(1.22ml，7.73mmol)滴加到((2S,3S)-3-(4-氟苯基)环氧乙烷-2-基)甲醇(1g，5.95mmol)、邻苯二甲酰亚胺(0.962g，6.54mmol)和三苯基膦(2.028g，7.73mmol)的THF溶液(体积：19.8ml)中。将黄色溶液搅拌30分钟，此时LCMS显示反应完成。浓缩反应混合物。硅胶柱色谱(EtOAc/庚烷)得到2-(((2S,3S)-3-(4-氟苯基)环氧乙烷-2-基)甲基)异二氢吲哚-1,3-二酮(1.6g，白色固体)，收率91％。MS m/z 298.1(M+1).1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.88(dt,J＝5.1,2.5Hz,2H),7.75(ddd,J＝8.6,5.4,3.1Hz,2H),7.25–7.18(m,2H),7.07–6.95(m,2H),4.14(dd,J＝14.3,4.6Hz,1H),3.90–3.79(m,2H),3.21(ddd,J＝5.6,4.6,2.0Hz,1H).
步骤5：2-((2R,3R)-3-(4-氟苯基)-2-羟基-3-苯基丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮
在室温下，向溴化亚铜-二甲基硫醚络合物(484mg，2.35mmol)和((2S,3S)-3-(4-氟苯基)环氧乙烷-2-基)甲醇(700mg,2.35mmol)中加入THF(体积：23.5mL)。在丙酮浴中冷却至-20℃，并定期加入干冰。滴加苯基氯化镁溶液(1M，在THF中，4.47mL,8.95mmol)。用饱和NH4Cl水溶液淬灭反应，并用乙醚萃取(两次)。合并的有机萃取物经MgSO4干燥，过滤并浓缩。硅胶柱色谱(EtOAc/庚烷)得到2-((2R,3R)-3-(4-氟苯基)-2-羟基-3-苯基丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮(0.463g，白色固体)，收率52％。MS m/z 376.3(M+1).
步骤6：(1R,2R)-3-氨基-1-(4-氟苯基)-1-苯基丙-2-醇
在室温下，将肼(0.581mL,18.5mmol)加入到2-((2R,3R)-3-(4-氟苯基)-2-羟基-3-苯基丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮(463mg,1.233mmol)的乙醇(体积:10mL)溶液中。将混合物在65℃下加热1小时，此时LCMS显示反应完成。将反应冷却至室温，旋蒸浓缩。将剩余物用DCM研磨，然后过滤以除去固体。浓缩滤液以给出粗(1R,2R)-3-氨基-1-(4-氟苯基)-1-苯基丙-2-醇(254mg,黄色泡沫)，产率84％，其不经进一步纯化而使用。MS m/z 246.2(M+1).
下表中的中间体通过类似于中间体AA-1的方法制备。
合成中间体AA-26
(1S,2R)-3-氨基-1-(4-氟苯基)-1-(3-(甲磺酰基)苯基)丙-2-醇
步骤1：2-((2R,3S)-3-(4-氟苯基)-2-羟基-3-(3-甲磺酰基)苯基)丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮
在0℃下，将过硫酸氢钾(175mg，0.285mmol)的水溶液(体积：3.00mL)加入到2-((2R,3S)-3-(4-氟苯基)-2-羟基-3-(3-甲硫基)苯基)丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮(60mg，0.142mmol，合成：参见中间体AA-12，步骤1-5)的THF(体积：3mL)溶液。将反应混合物在冰浴中搅拌3小时。此时的LC-MS显示出所需产物为主。用饱和硫代硫酸钠溶液淬灭反应，并用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到粗2-((2R,3S)-3-(4-氟苯基)-2-羟基-3-(3-甲磺酰基)苯基)丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮(65.0mg,0.142mmol,产率100％)。LCMS:MH+454.3,0.91分钟。
无需进一步纯化，进行下一步。
步骤2：(1S,2R)-3-氨基-1-(4-氟苯基)-1-(3-(甲磺酰基)苯基)丙-2-醇
通过中间体AA-1步骤6的方法，自2-((2R,3S)-3-(4-氟苯基)-2-羟基-3-(3-甲磺酰基)苯基)丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮制备。LCMS:MH+324.3,0.67分钟。
合成中间体AA-27
步骤1：4-((1R,2R)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1-(4-氟苯基)-2-羟丙基)苄腈
在室温下，将2-((2R,3S)-3-(4-氯苯基)-3-(4-氟苯基)-2-羟丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(250mg,0.610mmol,合成参见中间体AA-17步骤1-5)、锌粉(39.9mg,0.610mmol)、氰化锌(143mg,1.22mmol)、外消旋-2-(二叔丁基膦基)-1,1'-联萘(48.6mg,0.122mmol)和双(2,2,2-三氟乙酰基)钯(18mg,0.061mmol)加入装有搅拌棒的微波小瓶中。盖上盖子并使N2通过5分钟。然后通过注射器加入DMA(体积：5mL)，并使N2再通过5分钟。将微波小瓶置于加热块中并在95℃下加热1小时。LCMS显示反应完全。反应混合物用DCM稀释并通过硅藻土过滤。用DCM洗涤并蒸发溶剂。使用0-40％EtOAc/庚烷通过硅胶色谱法纯化粗物质，得到4-((1R,2R)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1-(4-氟苯基)-2-羟丙基)苄腈，(195mg,0.463mmol,产率76％)。LCMS:MH+401.3,0.79分钟.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.79-7.86(m,2H)7.68-7.76(m,2H)7.55-7.61(m,2H)7.45-7.51(m,2H)7.29-7.36(m,2H)7.01(t,J＝8.58Hz,2H)4.62-4.79(m,1H)4.05-4.14(m,1H)3.68-3.87(m,2H)2.46(d,J＝5.23Hz,1H).
步骤2：4-((1R,2R)-3-氨基-1-(4-氟苯基)-2-羟丙基)苄腈
通过中间体AA-1步骤6的方法，自4-((1R,2R)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1-(4-氟苯基)-2-羟丙基)苄腈制备。LCMS:MH+271.3,0.63分钟。
下表中的中间体通过类似于中间体AA-27的方法制备。
实施例17(S)-6-((R)(4-氟苯基)(苯基)甲基)-11-羟基-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10-酮
步骤1：5-苄氧基-3-(1-((2R,3R)-3-(4-氟苯基)-2-羟基-3-苯基丙基)-1H-咪唑-2-基)-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)哒嗪-4(1H)-酮
将乙酸铵(118mg,1.53mmol)和乙二醛(40％在水中，0.18mL，1.53mmol)加入到5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-甲醛(551mg，1.53mmol)和(1R,2R)-3-氨基-1-(4-氟苯基)-1-苯基丙-2-醇(250mg，1.02mmol)的MeOH(5mL)溶液中。将该混合物加热回流2小时，然后冷却至室温。反应混合物用EtOAc稀释并用淡盐水洗涤。将有机层干燥(Na2SO4),过滤并浓缩。硅胶柱色谱(EtOAc/庚烷/MeOH)得到5-苄氧基-3-(1-((2R,3R)-3-(4-氟苯基)-2-羟基-3-苯基丙基)-1H-咪唑-2-基)-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)哒嗪-4(1H)-酮(0.143g，黄色油)，收率22％。MS m/z 627.4(M+1).
步骤2：(1R,2R)-3-(2-(5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1-(4-氟苯基)-苯基丙-2-基甲磺酸盐
0℃下将甲磺酰氯(0.036mL，0.46mmol)滴加到5-苄氧基-3-(1-((2R,3R)-3-(4-氟苯基)-2-羟基-3-苯基丙基)-1H-咪唑-2-基)-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)哒嗪-4(1H)-酮(143mg,0.228mmol)和Et3N(0.095mL，0.68mmol)的DCM(4.5mL)溶液中。将混合物在相同温度下搅拌30分钟，然后用水淬灭。分层，并将水层用DCM萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，过滤并浓缩。硅胶柱色谱(EtOAc/庚烷/MeOH)得到(1R,2R)-3-(2-(5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1-(4-氟苯基)-苯基丙-2-基甲磺酸盐(100mg，黄色油状物)，收率62％。MS m/z 705.3(M+1).
步骤3：(1R,2R)-1-(4-氟苯基)-3-(2-(5-羟基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1-苯基丙-2-基甲磺酸盐
在氮气下，在室温下，将10％Pd/C(15mg)加入到(1R,2R)-3-(2-(5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1-(4-氟苯基)-1-苯基丙-2-基甲磺酸盐(100mg，0.142mmol)在甲醇(10mL)中的溶液。然后将烧瓶抽空并从气球中重新填充H2(三次)，然后在H2气球气氛下剧烈搅拌30分钟。然后用氮气吹扫反应烧瓶，并将混合物通过硅藻土过滤。滤液浓缩以给出粗(1R,2R)-1-(4-氟苯基)-3-(2-(5-羟基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1-苯基丙-2-基甲磺酸盐，其不经进一步纯化而使用。MS m/z 615.3(M+1).
步骤4：(1R,2R)-1-(4-氟苯基)-3-(2-(5-羟基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1-苯基丙-2-基甲磺酸盐
粗(1R,2R)-1-(4-氟苯基)-3-(2-(5-羟基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1-苯基丙-2-基甲磺酸盐溶于TFA(5mL)，并在室温搅拌2小时。然后浓缩反应。剩余物溶于甲苯并再次浓缩以给出粗(1R,2R)-1-(4-氟苯基)-3-(2-(5-羟基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1-苯基丙-2-基甲磺酸盐，其不经进一步纯化而使用。MS m/z 485.2(M+1).
步骤5：(S)-6-((R)(4-氟苯基)(苯基)甲基)-11-羟基-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10-酮
K2CO3(59mg,0.43mmol)加入到粗(1R,2R)-1-(4-氟苯基)-3-(2-(5-羟基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1-苯基丙-2-基甲磺酸盐在DMF(2mL)中的溶液。混合物室温搅拌3小时，然后过滤以移除固体。滤液通过反相HPLC纯化。合并产物级分，冷冻并冻干以获得6-二苯甲基-11-羟基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮的TFA盐(26mg,0.051mmol,白色固体)，三步产率36％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.67(d,J＝1.6Hz,1H),7.56(s,1H),7.54–7.46(m,2H),7.35(s,1H),7.25–7.08(m,7H),5.88(dd,J＝11.2,4.0Hz,1H),4.71(dd,J＝14.1,4.2Hz,1H),4.36(d,J＝14.2Hz,1H),4.28(d,J＝11.4Hz,1H)..MS m/z 389.3(M+1).
下表中的化合物通过类似于实施例17的方法制备。
在某些情况下，步骤3和4用在纯TFA中的80-100℃微波加热30-60分钟替代。
实施例47(S)-6-(双(4-氟苯基)甲基)-2,3-二溴-11-羟基-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10-酮
步骤1：(R)-3-(2-(5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-5-溴-1H-咪唑-1-基)-1,1-双(4-氟苯基)-丙-2-基甲磺酸盐
将NBS(140mg,0.789mmol)加入到(R)-3-(2-(5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-双(4-氟苯基)丙-2-基甲磺酸盐(500mg,0.657mmol,通过实施例17步骤1-2的方法制备)在DCM(体积:12mL)中的溶液。反应混合物在60℃加热1小时。LC-MS显示反应完全，所需的单溴产物为主产物，二溴产物为次产物。反应混合物用水淬灭并分层。将水层用DCM萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。使用0-100％EtOAc(含有10％MeOH)/庚烷，通过硅胶色谱法纯化粗产物，得到(R)-3-(2-(5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-基)-5-溴-1H-咪唑-1-基)-1,1-双(4-氟苯基)-丙-2-基甲磺酸盐，为黄色固体(350mg,0.437mmol,产率66.4％)。LCMS:MH+801.4,1.17分钟.
步骤2：(R)-3-(5-溴-2-(5-羟基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-双(4-氟苯基)丙-2-基甲磺酸盐
将TFA(1mL,13mmol)加入(R)-3-(2-(5-苄氧基-4-氧代-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)4-二氢哒嗪-3-基)-5-溴-1H-咪唑-1-基)-1,1-双(4-氟苯基)-丙-2-基甲磺酸盐(55mg,0.069mmol)。在微波中80℃加热60分钟。LCMS显示反应完全。蒸发溶剂并与甲苯共沸。LCMS:MH+581.2,0.80分钟.无需进一步纯化，进行下一步。
步骤3：(S)-6-(双(4-氟苯基)甲基)-3-溴-11-羟基-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10-酮
室温下向(R)-3-(5-溴-2-(5-羟基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-双(4-氟苯基)丙-2-基甲磺酸盐(14.0mg,0.024mmol)的DMF(体积:1mL)溶液中加入碳酸钾(11.6mg,0.0.084mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示反应完全。过滤反应混合物，通过制备HPLC纯化粗溶液，得到(S)-6-(双(4-氟苯基)甲基)-3-溴-11-羟基-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10-酮，为TFA盐，(4.2mg,6.87μmol,产率28.3％)。LCMS(m/z):485.3(MH+),0.85分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 4.19(d,J＝11.35Hz,1H)4.27(d,J＝13.89Hz,1H)4.54(dd,J＝13.96,4.08Hz,1H)5.81(dd,J＝11.27,3.50Hz,1H)6.89-6.97(m,2H)7.15(t,J＝8.68Hz,2H)7.23(dd,J＝8.61,5.23Hz,2H)7.44(dd,J＝8.58,5.26Hz,2H)7.50(s,1H)7.53(s,1H).
实施例48(S)-6-(双(4-氟苯基)甲基)-2,3-二溴-11-羟基-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10-酮
由实施例47的方法制备。
LCMS(m/z):563.3(MH+),0.97分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 4.13-4.30(m,2H)4.50-4.64(m,1H)5.76(br dd,J＝11.18,2.91Hz,1H)6.91(t,J＝8.63Hz,2H)7.14(t,J＝8.66Hz,2H)7.22(dd,J＝8.49,5.31Hz,2H)7.38-7.53(m,3H).
实施例49(S)-6-(双(4-氟苯基)甲基)-11-羟基-10-氧代-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-3-腈
步骤1：(S)-11-苄氧基-6-(双(4-氟苯基)甲基)-3-溴-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮
室温下向粗(S)-6-(双(4-氟苯基)甲基)-3-溴-11-羟基-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10-酮(实施例47,209mg,0.431mmol)的DMF(体积:5mL)溶液中加入碳酸钾(208mg,1.507mmol)和苄基溴(0.128mL,1.077mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示反应完全。反应混合物在EtOAc/水之间分配。分离EtOAc层并用盐水洗涤。用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用0-100％EtOAc(含10％MeOH)/庚烷，得到(S)-11-苄氧基-6-(双(4-氟苯基)甲基)-3-溴-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮，(190mg,0.297mmol,产率69％)。LCMS:MH+575.2,1.12分钟.
步骤2：(S)-11-苄氧基-6-(双(4-氟苯基)甲基)-10-氧代-6,10-二氢-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-3-腈
向(S)-11-苄氧基-6-(双(4-氟苯基)甲基)-3-溴-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮(20mg,0.035mmol)的DMF(体积:1mL)溶液加入Zn(CN)2(12.24mg,0.104mmol)和Pd(Ph3P)4(6.02mg,5.21μmol)。用N2吹扫并将反应混合物在微波中100℃加热60分钟。LC-MS显示出主要的所需产物和次要SM。停止反应。反应混合物在EtOAc/水之间分配。分离EtOAc层并用盐水洗涤。用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗(S)-11-苄氧基-6-(双(4-氟苯基)甲基)-10-氧代-6,10-二氢-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-3-腈直接用于下一步。LCMS:MH+522.2,1.06分钟.
步骤3：(S)-6-(双(4-氟苯基)甲基)-11-羟基-10-氧代-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-3-腈
向粗(S)-11-苄氧基-6-(双(4-氟苯基)甲基)-10-氧代-6,10-二氢-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-3-腈加入TFA(1mL)。将反应混合物在微波中以90℃/20分钟加热。LCMS显示反应完全。蒸发溶剂并与甲苯共沸。粗品溶于DMSO，并使用ACN/Water/0.1％TFA通过制备HPLC纯化，得到(S)-6-(双(4-氟苯基)甲基)-11-羟基-10-氧代-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-3-腈，为TFA盐，(3.5mg,6.22μmol,产率18％)。LCMS(m/z):432.2(MH+),0.92分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 4.16(br d,J＝11.25Hz,1H)4.27(br d,J＝13.94Hz,1H)4.72(br dd,J＝14.06,3.69Hz,1H)5.81(br dd,J＝11.27,3.20Hz,1H)6.92(br t,J＝8.68Hz,2H)7.13-7.27(m,4H)7.37-7.55(m,3H)8.08(s,1H).
实施例50(S)-6-(双(4-氟苯基)甲基)-11-羟基-3-羟甲基-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10-酮
步骤1：(S)-11-苄氧基-6-(双(4-氟苯基)甲基)-3-乙烯基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮
向(S)-11-苄氧基-6-(双(4-氟苯基)甲基)-3-溴-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮(合成参见实施例49步骤1,90mg,0.156mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(48.2mg,0.312mmol)的DME(体积:2mL)溶液以及碳酸钠水溶液(1M,400μL,0.400mmol)中加入PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(12.8mg,0.0156mmol)。将反应混合物在微波中以110℃加热15分钟。LCMS显示反应完全。反应混合物在EtOAc和水之间分配。分出有机层，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用0-100％EtOAc(含10％MeOH)/庚烷，得到(S)-11-苄氧基-6-(双(4-氟苯基)甲基)-3-乙烯基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮，(52mg,0.100mmol,产率64％)，为浅褐色固体。LCMS:MH+523.3,0.93分钟.
步骤2：(S)-11-苄氧基-6-(双(4-氟苯基)甲基)-10-氧代-6,10-二氢-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-3-甲醛
向(S)-11-苄氧基-6-(双(4-氟苯基)甲基)-3-乙烯基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮(52mg,0.100mmol)的THF(体积:2mL)溶液加入高碘酸钠(53.2mg,0.249mmol)和四氧化锇(0.117mL,0.015mmol)(4％水溶液)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。再加入1当量高碘酸钠并再搅拌30分钟。LCMS显示反应完全。滤出ppt，用甲醇洗涤，浓缩滤液。将剩余物在EtOAc和NaHCO3饱和溶液之间分配。分离有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗(S)-11-苄氧基-6-(双(4-氟苯基)甲基)-10-氧代-6,10-二氢-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-3-甲醛，LCMS:MH+525.3,1.07分钟.
步骤3：(S)-11-苄氧基-6-(双(4-氟苯基)甲基)-3-羟甲基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮
将来自步骤2的粗(S)-11-苄氧基-6-(双(4-氟苯基)甲基)-10-氧代-6,10-二氢-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-3-甲醛(52mg,0.100mmol)溶于MeOH(体积:3mL)。将反应混合物在冰浴中冷却，然后加入硼氢化钠(5.27mg，0.139mmol)。将反应在冰浴温度下搅拌30分钟。LCMS显示反应完全。蒸发溶剂。将粗反应混合物在EtOAc和NaHCO3饱和溶液之间分配。分离有机层，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到粗(S)-11-苄氧基-6-(双(4-氟苯基)甲基)-3-羟甲基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10-酮，LCMS:MH+527.3,0.89分钟.
步骤4：(S)-6-(双(4-氟苯基)甲基)-11-羟基-3-羟甲基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮
向来自步骤3的粗(S)-11-苄氧基-6-(双(4-氟苯基)甲基)-3-羟甲基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮(52mg,0.100mmol)加入三氟乙酸(1ml,13mmol)。然后溶液在微波中80℃加热25分钟。反应真空浓缩，与甲苯共沸。通过制备HPLC纯化粗产物以获得(S)-6-(双(4-氟苯基)甲基)-11-羟基-3-羟甲基-5H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10(6H)-酮，为TFA盐，(5.2mg,9.26μmol,产率18.7％)。LCMS(m/z):437.3(MH+),0.76分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 4.29(d,J＝11.05Hz,1H)4.39(d,J＝13.84Hz,1H)4.52-4.62(m,2H)4.63-4.73(m,1H)5.81(dd,J＝11.00,3.52Hz,1H)6.91(t,J＝8.71Hz,2H)7.07-7.26(m,4H)7.46(dd,J＝8.58,5.26Hz,2H)7.53(d,J＝5.62Hz,2H).
实施例51(S)-6-((S)(4-氟苯基)(邻苯甲基)甲基)-11-羟基-3-羟甲基-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-10-酮
由实施例50的方法制备。LCMS(m/z):433.3(MH+),0.76分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 1.97(s,3H)4.38(d,J＝13.74Hz,1H)4.49(s,1H)4.50-4.54(m,1H)4.57(s,1H)4.60(s,1H)4.66(br dd,J＝14.18,4.16Hz,1H)5.89(br dd,J＝10.69,3.30Hz,1H)6.96(br d,J＝7.58Hz,1H)7.02-7.13(m,3H)7.17(br t,J＝7.78Hz,1H)7.35-7.45(m,3H)7.48(s,1H)7.66(br d,J＝7.83Hz,1H).
实施例52(S)-6-二苯甲基-11-羟基-3-(1H-吡唑-4-基)-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10-酮
制备自实施例9的方法，步骤1和3使用4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯。LCMS(m/z):436.3(MH+),0.58分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.68(s,1H)7.21-7.47(m,14H)6.18(d,J＝7.14Hz,1H)5.73(br dd,J＝11.47,2.71Hz,1H)4.58(dd,J＝14.01,3.74Hz,1H)4.41(d,J＝13.74Hz,1H)4.15(d,J＝11.54Hz,1H).
实施例53(S)-6-二苯甲基-11-羟基-3-苯基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
制备自实施例9的方法，步骤1和3使用4,4,5,5-四甲基-2-苯基-1,3,2-二氧硼戊环。LCMS(m/z):446.3(MH+),0.73分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.65(s,1H)7.36-7.44(m,3H)7.30-7.36(m,3H)7.26-7.29(m,1H)7.19-7.26(m,5H)7.05-7.15(m,2H)6.15(d,J＝7.14Hz,1H)5.69(br dd,J＝11.64,2.69Hz,1H)4.59(br dd,J＝13.94,3.72Hz,1H)4.40(br d,J＝13.89Hz,1H)4.18(d,J＝11.59Hz,1H).
实施例54(S)-6-二苯甲基-11-羟基-3-羟甲基-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10-酮
步骤1：(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-10-氧代-6,10-二氢-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-3-甲醛
向(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-乙烯基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮(50mg,0.103mmol)的THF(体积:3mL)溶液加入高碘酸钠(55.1mg,0.257mmol)和四氧化锇(0.121mL,0.015mmol)(4％水溶液)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。再加入1当量高碘酸钠并再搅拌30分钟。LCMS显示反应完全。滤出ppt，用甲醇洗涤并蒸发。剩余物在EtOAc/饱和NaHCO3溶液间分配。分离有机层，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到粗(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-10-氧代-6,10-二氢-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-3-甲醛，LCMS:MH+488.3,0.83分钟.
步骤2：(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-羟甲基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
将来自步骤2的粗(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-10-氧代-6,10-二氢-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-3-甲醛(50mg,0.103mmol)溶于MeOH(体积:3mL)。将反应混合物在冰浴中冷却，然后加入硼氢化钠(5.45mg，0.144mmol)。将RM在冰浴中搅拌30分钟。LCMS显示反应完全。蒸发溶剂。将粗反应混合物在EtOAc和NaHCO3饱和溶液之间分配。分离有机层，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到粗(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-羟甲基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮，LCMS:MH+490.3,0.76分钟.
步骤3：(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-羟甲基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
向来自步骤3的粗(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-羟甲基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮(25mg,0.036mmol)加入三氟乙酸(1ml)。然后溶液在微波中80℃加热25分钟。反应真空浓缩，与甲苯共沸。通过制备HPLC纯化粗产物以获得(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-羟甲基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮，为TFA盐，(3.2mg,5.98μmol,产率16.7％)。LCMS(m/z):400.3(MH+),0.59分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 3.34(s,1H)4.12(d,J＝11.54Hz,1H)4.23(d,J＝13.89Hz,1H)4.49-4.53(m,1H)4.53-4.63(m,2H)5.70(br d,J＝13.45Hz,1H)6.10(d,J＝7.19Hz,1H)7.21(s,4H)7.26(d,J＝7.24Hz,1H)7.33-7.39(m,1H)7.39-7.48(m,4H)7.56(s,1H).
实施例55(6S)-6-二苯甲基-11-羟基-3-(1-羟乙基)-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
步骤1：(6S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-(1-羟乙基)-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
在-78℃下，向纯(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-10-氧代-6,10-二氢-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-3-甲醛(实施例54步骤1)(30mg,0.062mmol)的THF(体积:2mL)溶液滴加甲基溴化镁(0.110mL,0.154mmol)。将反应混合物在该温度下搅拌30分钟，然后缓慢升温至室温。在室温下搅拌1H。用饱和NH4Cl淬灭，并用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到粗(6S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-(1-羟乙基)-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮，LCMS:MH+504.2,0.86分钟.
步骤2：(6S)-6-二苯甲基-11-羟基-3-(1-羟乙基)-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
关于合成参见实施例54步骤3。
LCMS(m/z):414.3(MH+),0.64分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 1.47(d,J＝6.50Hz,3H)4.10(d,J＝11.54Hz,1H)4.39(q,J＝6.55Hz,1H)4.58(d,J＝2.20Hz,2H)5.67(brd,J＝11.44Hz,1H)6.09(d,J＝7.19Hz,1H)7.17-7.27(m,5H)7.33-7.38(m,1H)7.40-7.48(m,4H)7.50-7.53(m,1H).
实施例56(S)-6-二苯甲基-11-羟基-3-甲氧基甲基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
步骤1：(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-甲氧基甲基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
向粗(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-羟甲基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮(实施例54步骤2)(40mg,0.074mmol)的DMF溶液(体积:1mL)中加入冰浴中的NaH(5.88mg,0.147mmol)。将反应混合物搅拌5-10分钟，然后加入碘甲烷(0.074mL，0.147mmol)。将RM温热至室温并搅拌30分钟。LCMS显示反应完全。反应混合物在EtOAc/水之间分配。分离有机层，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到粗(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-甲氧基甲基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮，LCMS:MH+504.2,0.78分钟。
步骤2：(S)-6-二苯甲基-11-羟基-3-甲氧基甲基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
关于合成参见实施例54步骤3。LCMS(m/z):414.3(MH+),0.69分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 3.04-3.12(m,3H)4.05-4.23(m,2H)4.40(d,J＝13.11Hz,1H)4.46-4.58(m,2H)5.67(dd,J＝11.52,2.23Hz,1H)6.06(d,J＝7.19Hz,1H)7.13-7.28(m,6H)7.32-7.39(m,1H)7.40-7.49(m,4H)7.56(s,1H).
实施例57(S)-6-二苯甲基-3-二氟甲基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
步骤1：(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-二氟甲基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
在室温下，向纯(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-10-氧代-6,10-二氢-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-3-甲醛(实施例54步骤1)(25mg,0.046mmol)的DCM(体积:1mL)溶液滴加DAST(0.030ml,0.231mmol)。然后反应混合物在加热块中60℃加热5小时。LCMS显示反应完全。反应混合物在DCM/饱和NaHCO3之间分配。分离有机层，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-二氟甲基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮，LCMS:MH+510.2,0.89分钟.
步骤2：(S)-6-二苯甲基-3-二氟甲基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
关于合成参见实施例54步骤3。LCMS(m/z):420.3(MH+),0.77分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 4.15(d,J＝11.69Hz,1H)4.53(d,J＝13.89Hz,1H)4.69(dd,J＝13.91,3.94Hz,1H)5.72(dd,J＝11.64,3.42Hz,1H)6.19(d,J＝7.19Hz,1H)6.75-7.05(m,1H)7.10-7.26(m,5H)7.28-7.50(m,6H)7.71(t,J＝2.35Hz,1H).
实施例58(S)-6-二苯甲基-11-羟基-3-三氟甲基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
步骤1：(S)-(3-(2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-5-碘-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯
向(S)-(3-(2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.259mmol)(中间体4.1)的DCM(体积：6mL)溶液加入TFA(5.7μl,0.075mmol)和NIS(117mg,0.518mmol)。反应混合物以60℃/5小时加热。LC-MS显示出所需产物为主。反应混合物在DCM和水之间分配。分出DCM层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使用0-100％EtOAc(含有10％MeOH)/庚烷，通过硅胶色谱法纯化粗产物，得到(S)-(3-(2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-5-碘-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯，为浅褐色泡沫状固体(80mg,0.114mmol,产率43.8％)。LCMS:MH+703.3,1.10分钟.
步骤2：(S)-(3-(2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-5-三氟甲基-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯
向(S)-(3-(2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-5-碘-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(80mg,0.114mmol)的DMF(体积:2mL)溶液加入(1,10-菲咯啉)(三氟甲基)亚铜(I)(35.6mg,0.114mmol)。RT/1H搅拌。LCMS显示仅10-15％转化为产物。LC-MS显示5H后％产物没有变化。再加入(1,10-菲咯啉)(三氟甲基)亚铜(I)(35.6mg,0.114mmol)，且反应在室温搅拌过夜。需要的产品仍然以少量存在。反应混合物用EtOAc稀释并过滤以移除固体。将EtOAc层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到含有起始原料和10-15％的(S)-(3-(2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-5-三氟甲基-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯的粗混合物。LCMS:MH+646.3,1.21分钟.进行下一步。
实施例58(S)-6-二苯甲基-11-羟基-3-三氟甲基-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
制备自(S)-(3-(2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-5-三氟甲基-1H-咪唑-1-基)-1,1-二苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯，通过实施例7步骤3-5的方法。LCMS(m/z):438.3(MH+),0.90分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 3.99-4.20(m,1H)4.38(br d,J＝12.91Hz,1H)4.69(br d,J＝12.67Hz,1H)5.68(br s,1H)6.05(br d,J＝18.44Hz,1H)7.03-7.72(m,12H)7.81-7.92(m,1H).
实施例59(S)-6-二苯甲基-11-羟基-10-氧代-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-3-腈
制备自(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-溴-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10-酮(参见实施例7步骤4)，通过实施例49步骤2-3的方法。LCMS(m/z):395.2(MH+),1H NMR(500MHz,MeOD-d4)δ8.08(s,1H),7.47–7.41(m,4H),7.39–7.33(m,2H),7.22(s,5H),6.19(d,J＝7.1Hz,1H),5.73(dd,J＝11.2,3.8Hz,1H),4.64(dd,J＝13.8,3.8Hz,1H),4.29(d,J＝13.8Hz,1H),4.05(d,J＝11.2Hz,1H).
实施例60(S)-6-二苯甲基-11-羟基-3-(吡咯烷-1-基甲基)-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
步骤1：(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-(吡咯烷-1-基甲基)-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
向纯(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-10-氧代-6,10-二氢-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-3-甲醛(实施例54步骤1)(25mg,0.046mmol)的MeOH(体积:1mL)溶液加入乙酸(7.93μl,0.138mmol)和吡咯烷(0.022mL,0.276mmol)。搅拌5分钟，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(97.8mg，0.462mmol)。反应用饱和NH4Cl淬灭，产物用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到粗(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-(吡咯烷-1-基甲基)-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮，LCMS:MH+543.3,0.87分钟.
步骤2：(S)-6-二苯甲基-11-羟基-3-(吡咯烷-1-基甲基)-5H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10(6H)-酮
关于合成参见实施例54步骤3。LCMS(m/z):453.3(MH+),0.57分钟,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 1.92-2.02(m,3H)2.03(s,1H)4.11(d,J＝11.59Hz,1H)4.25(br d,J＝14.92Hz,1H)4.43(br d,J＝14.87Hz,1H)4.50-4.65(m,2H)5.76(br dd,J＝11.59,2.74Hz,1H)6.05(d,J＝7.24Hz,1H)7.08-7.16(m,2H)7.17-7.22(m,3H)7.33-7.53(m,6H)7.65(s,1H).
本表中的化合物通过类似于实施例60的方法制备。
实施例68(S)-6-二苯甲基-11-羟基-N,N-二甲基-10-氧代-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-3-甲酰胺
步骤1：(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-N,N-二甲基-10-氧代-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-3-甲酰胺
向烘箱干燥的4mL小瓶中加入(S)-6-二苯甲基-11-苄氧基-3-溴-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-10-酮(参见实施例7步骤4)(30mg,0.056mmol)和Xantphos-Pd-G2(5.0mg,10mol％)。将小瓶用隔垫顶盖密封，并通过针用真空/N2吹扫(x3)。加入甲苯(0.55mL，0.1M)并通过针头鼓泡通过CO吹扫反应。然后加入Hunig碱(15μl，0.084mmol，1.5当量)和二甲胺(0.17mmol，3.0当量)，并将反应加热至80℃并在CO气氛下搅拌过夜，此时产物在小瓶的边缘附近沉淀。然后将反应浓缩，不经进一步纯化用于下一步。
步骤2：(S)-6-二苯甲基-11-羟基-N,N-二甲基-10-氧代-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-a]吡啶并[2,1-c]吡嗪-3-甲酰胺
关于合成参见实施例54步骤3。LCMS(m/z):441.2(MH+),0.76分钟.
下表中的化合物通过类似于实施例68的方法制备。
实施例73 6-二苯甲基-5-环丙基-11-羟基-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10-酮
步骤1：3-苄氧基-2-(1H-咪唑-2-基)-4H-吡喃-4-酮
向3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-甲醛(22.3g，97mmol)的MeOH(500mL)溶液中加入乙二醛(40％水溶液，19.7mL，136mmol)和乙酸铵(22.40g，291mmol)。反应密封并加热至80℃保持1小时。将混合物冷却并浓缩，得到粗3-苄氧基-2-(1H-咪唑-2-基)-4H-吡喃-4-酮，将其不经纯化用于下一步骤。LCMS(m/z):269.2(MH+),0.37分钟.
步骤2：2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-N,N-二甲基-1H-咪唑-1-磺酰胺
在0℃下，向3-苄氧基-2-(1H-咪唑-2-基)-4H-吡喃-4-酮(10g,37.3mmol)的DMF(200mL)溶液加入NaH(2.236g,55.9mmol)。将得到的混合物在0℃下搅拌30分钟。然后滴加二甲基胺磺酰氯(7.99mL，74.6mmol)。移去冷浴，将反应在室温搅拌2小时。将混合物用EtOAc(400mL)稀释，并用水(2×200mL)和盐水(100mL)洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)并浓缩。通过硅胶色谱法(10-100％EtOAc的庚烷溶液，含10％MeOH)纯化剩余物，得到2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-N,N-二甲基-1H-咪唑-1-磺酰胺(11g,29mmol,产率79％)。LCMS:MH+376.3,0.82分钟.
步骤3：2-(3-苄氧基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-基)-N,N-二甲基-1H-咪唑-1-磺酰胺
向2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-N,N-二甲基-1H-咪唑-1-磺酰胺(10g,26.6mmol)加入NH3(7.0M,10mL,70.0mmol)的MeOH溶液。将反应密封并加热至40℃。将反应搅拌3小时，然后浓缩。通过硅胶色谱法纯化剩余物，得到2-(3-苄氧基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-基)-N,N-二甲基-1H-咪唑-1-磺酰胺(2.1g,5.6mmol,产率21％)。LCMS:MH+375.3,0.53分钟.
步骤4：2-(1-氨基-3-苄氧基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-基)-N,N-二甲基-1H-咪唑-1-磺酰胺
向2-(3-苄氧基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-基)-N,N-二甲基-1H-咪唑-1-磺酰胺(2.1g,5.61mmol)的DMF(15mL)溶液加入Cs2CO3(2.74g,8.41mmol)。将混合物搅拌15分钟，然后加入O-(2,4-二硝基苯基)羟胺(2.234g，11.22mmol)。混合物搅拌2小时。然后通过旋转蒸发除去大部分溶剂。将剩余物用DCM/MeOH(30/10mL)和硅胶(20g)稀释。干法上样到硅胶色谱，并用(10-100％EtOAc的庚烷溶液，含10％MeOH)洗脱得到2-(1-氨基-3-苄氧基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-基)-N,N-二甲基-1H-咪唑-1-磺酰胺(1.8g,4.6mmol,产率82％)。LCMS:MH+390.3,0.55分钟.
步骤5：1-氨基-3-苄氧基-2-(1H-咪唑-2-基)吡啶-4(1H)-酮
向2-(1-氨基-3-苄氧基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-基)-N,N-二甲基-1H-咪唑-1-磺酰胺(1.8g,4.62mmol)的二氧六环(30mL)溶液加入10％H2SO4(30mL)。反应室温搅拌5小时。加入NaOH(6N)以调节至pH 9。将混合物用EtOAc萃取(5x50mL)。将有机层干燥(Na2SO4)并浓缩。通过硅胶色谱法(10-100％EtOAc的庚烷溶液，含10％MeOH)纯化剩余物，得到1-氨基-3-苄氧基-2-(1H-咪唑-2-基)吡啶-4(1H)-酮(1.1g,3.9mmol,产率84％)。LCMS:MH+283.2,0.29分钟.
步骤6：11-二苯甲基-5-环丙基-5H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10(6H)-酮
向1-氨基-3-苄氧基-2-(1H-咪唑-2-基)吡啶-4(1H)-酮(90mg,0.319mmol)的二氧六环(1mL)溶液加入硫酸(1mL,0.400mmol)。混合物搅拌10分钟。在旋转蒸发仪上蒸发溶剂(浴温50℃)并将剩余物在高真空下干燥过夜。将剩余物溶于MeOH(2mL)中，加入NaOH(0.4mL，1M)以淬灭硫酸。干燥混合物，剩余物用MeOH/DCM(1:1,10mL)洗涤。溶液干燥得到粗11-二苯甲基-5-环丙基-5H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10(6H)-酮(100mg)。LCMS:MH+335.3,0.51分钟.
步骤7：5-环丙基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10(6H)-酮
向粗11-苄氧基-5-环丙基-5H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10(6H)-酮(100mg,0.299mmol)的TFA(2mL)溶液加入苯甲硫醚(149mg,1.196mmol)。混合物搅拌一小时。混合物浓缩并真空干燥过夜，得到粗5-环丙基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10(6H)-酮(73mg)。LCMS:MH+245.2,0.32分钟.
步骤8：6-二苯甲基-5-环丙基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10(6H)-酮
向粗5-环丙基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10(6H)-酮(20mg,0.082mmol)的DMF(1mL)溶液加入氢化钠(13.1mg,0.328mmol)和二苯基溴甲烷(101mg,0.409mmol)。混合物室温搅拌20分钟。加入HCl(1N，0.4mL)以淬灭反应。得到的混合物通过反相HPLC(含0.1％TFA的MeCN/水)纯化，冷冻干燥后得到6-二苯甲基-5-环丙基-11-羟基-5H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10(6H)-酮(16.8mg,26μmol,产率32％)。LCMS(m/z):411.3(MH+),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.91(d,J＝1.6Hz,1H),7.71(m,1H),7.7-7.5(m,3H),7.45-7.30(m,3H),7.30-7.10(m,5H),5.78(d,J＝6.1Hz,1H),5.11(s,1H),4.95(d,J＝7.0Hz,1H),1.31(m,1H),0.85-0.65(m,2H),0.5-0.3(m,2H).
实施例74 6-(6,11-二氢二苯并[b,e]硫杂卓-11-基)-11-羟基-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10-酮
通过实施例73的方法制备，步骤6中使用DCM/MeOH(2:1)的30％甲醛水溶液和步骤8中使用11-溴-6,11-二氢二苯并[b,e]硫杂卓。LCMS(m/z):415.2(MH+),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.61(m,1H),7.55-7.38(m,3H),7.35-7.2(m,3H),7.2-7.0(m,3H),6.8-6.7(m,2H),5.72(d,J＝6.0Hz,1H),5.7-5.5(m,2H),5.12(d,J＝6.0Hz,1H),4.1-3.9(m,2H).
实施例75 6-二苯甲基-11-羟基-5,5-二甲基-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10-酮
由实施例73的方法制备，在步骤6中使用丙酮。LCMS(m/z):399.4(MH+),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.97(m,2H),7.8-7.6(m,3H),7.5-7.4(m,2H),7.30(d,J＝6Hz,1H),7.2-7.0(m,3H),6.8-6.7(m,2H),5.92(d,J＝6.0Hz,1H),5.41(s,1H),1.81(s,3H),1.55(s,3H).
实施例76 5-环丙基-6-(6,11-二氢二苯并[b,e]硫杂卓-11-基)-11-羟基-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10-酮
由实施例73的方法制备，在步骤8中使用11-溴-6,11-二氢二苯并[b,e]硫杂卓。LCMS(m/z):455.2(MH+)
实施例77 6-二苯甲基-11-羟基-5-异丙基-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10-酮
由实施例73的方法制备，在步骤6中使用异丁醛。LCMS(m/z):413.2(MH+),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.81(s,1H),7.78-7.62(m,4H),7.55-7.3(m,4H),7.3-7.15(m,4H),5.68(d,J＝6.0Hz,1H),5.12(d,J＝6.0Hz,1H),4.91(s,1H),1.92(m,1H),1.15(d,J＝7.0Hz,3H),0.85(d,J＝7.0Hz,3H).
实施例78 6-二苯甲基-5-乙基-11-羟基-5,6-二氢-10H-咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-10(6H)-酮
由实施例73的方法制备，在步骤6中使用丙醛。LCMS(m/z):399.2(MH+),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.6-7.55(m,4H),7.5-7.35(m,4H),7.3-7.15(m,4H),6.52-6.5(m,1H),5.65(d,J＝6.0Hz,1H),5.53-5.1(m,1H),4.96(s,1H),1.72(m,2H),1.05(d,J＝7.0Hz,3H).
实施例79 6-二苯甲基-11-羟基-6H,10H-螺[咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5,3'-氧杂环丁烷]-10-酮
通过实施例73的方法制备，在步骤6中使用3-氧杂环丁酮和乙酸，并颠倒步骤7和8的顺序。LCMS(m/z):413.3(MH+),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.95(d,J＝1.8Hz,1H),7.82(m,1H),7.7-7.5(m,3H),7.5-7.38(m,3H),7.34-7.10(m,5H),5.72(d,J＝6.0Hz,1H),5.02(s,1H),4.72(d,J＝8.2Hz,1H),4.42(d,J＝8.2Hz,1H),4.36(d,J＝8.0Hz,1H),4.05(d,J＝8.2Hz,1H).
实施例80 6-(6,11-二氢二苯并[b,e]硫杂卓-11-基)-11-羟基-6H,10H-螺[咪唑并[1,2-d]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5,3'-氧杂环丁烷]-10-酮
通过实施例73的方法制备，在步骤6中使用3-氧杂环丁酮和乙酸，并颠倒步骤7和8的顺序(使用11-溴-6,11-二氢二苯并[b,e]硫杂卓)。LCMS(m/z):457.1(MH+),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),7.75(s,1H),7.5-7.45(m,1H),7.42-7.35(m,1H),7.3-7.05(m,4H),7.0-6.8(m,2H),6.5(m,1H),6.12(d,J＝8.0Hz,1H),5.72(d,J＝6.0Hz,1H),5.1(d,J＝8.0Hz,1H),4.91(s,1H),4.62(d,J＝8.2Hz,1H),4.32(d,J＝8.2Hz,1H),4.26(d,J＝8.0Hz,1H),3.95(d,J＝8.2Hz,1H).
实施例81 5-二苯甲基-10-羟基-4,5-二氢-9H-吡啶并[1,2-b]噻唑并[4,5-d]哒嗪-9-酮
步骤1：3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-碳酰氯
向3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-甲酸(40g，162mmol)的DCM(500mL)悬浮液中加入1mL DMF，然后滴加草酰氯(15.6mL,179mmol)。30分钟后反应变清。再过30分钟后，浓缩反应物，剩余物直接用于下一步骤。
步骤2：3-甲基2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-羰基)丙二酸1-叔丁酯
在0℃下，向甲基丙二酸叔丁酯(31.1g，179mmol)和氯化镁(17.02g，179mmol)在350mL乙腈中的混合物中加入三乙胺(100mL，715mmol)。将混合物在0℃下搅拌15分钟。逐滴加入3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-碳酰氯(43g，162mmol)的乙腈(30mL)溶液。将反应混合物温热至室温并搅拌2小时。将反应混合物冷却至0℃并用30mL 6N HCl淬灭。向所得混合物中加入1L乙醚，将混合物转移到分液漏斗中。移除水层，用2×300mL水洗涤有机物，然后用盐水洗涤直至醚层澄清。有机层用硫酸镁干燥，过滤，然后浓缩，得到3-甲基2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-羰基)丙二酸1-叔丁酯，未经进一步纯化而使用。
步骤3：3-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-3-氧代丙酸甲酯
在室温下向3-甲基2-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-羰基)丙二酸1-叔丁酯(65g，162mmol)的DCM(200mL)溶液中加入TFA(100mL)。将反应搅拌1小时，然后浓缩。硅胶色谱(0-80％EtOAc的庚烷溶液)纯化得到3-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-3-氧代丙酸甲酯(42g，82％)。LCMS(MH+)303.1,0.72分钟。
步骤4：3-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-2-溴-3-氧代丙酸甲酯
在环境温度下和氮气下，在2小时的时间内分5份向3-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-3-氧代丙酸甲酯(5g,16.54mmol)的氯仿(体积:60mL)溶液中加入NBS(2.94g,16.54mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。通过加水淬灭反应。有机相用盐水洗涤，硫酸钠干燥并过滤。将滤液浓缩。将所得残余物通过硅胶色谱法(二氯甲烷中的甲醇0％至5％)纯化，得到3-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-2-溴-3-氧代丙酸甲酯(3.4g,8.30mmol,产率50.2％)。MS m/z 381/383(M+2).
步骤5：4-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)噻唑-5-羧酸甲酯
向冰冷的3-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-2-溴-3-氧代丙酸甲酯(3.4g，5.35mmol)的EtOH溶液(体积：20mL))加入硫代甲酰胺(0.687g，11.24mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。浓缩反应混合物，所得残余物在硅胶上纯化(乙酸乙酯在庚烷中0％至60％)，得到4-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)噻唑-5-羧酸甲酯(610mg,产率32％)。MS m/z 344(M+1).
步骤6：4-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)噻唑-5-羧酸
向冰冷的4-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)噻唑-5-羧酸甲酯(270mg，0.78mmol)的THF(体积:1.5mL,比例:1.000)和MeOH(体积:1.5mL,比例:1.000)的混合溶液中加入1.0M氢氧化锂水合物(1.02mL,1.02mmol)。将所得混合物在55℃下在油浴中搅拌1小时。
浓缩反应溶液，剩余物用乙酸乙酯和水稀释。然后向溶液中滴加1.0M氯化氢(1.02mL，1.02mmol)。有机相用水、盐水洗涤，硫酸钠干燥并过滤。将滤液浓缩。将所得剩余物在高真空下干燥，得到4-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)噻唑-5-羧酸(260mg,产率100％),MS m/z 330(M+1).
步骤7：3-苄氧基-2-(5-(羟甲基)噻唑-4-基)-4H-吡喃-4-酮
在-40℃下，向4-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)噻唑-5-羧酸(260mg，0.78mmol)的THF(体积：3.0mL)冷溶液中加入氯甲酸异丁酯(0.24mL，1.82mmol)，然后加入4-甲基吗啉(0.20mL，1.82mmol)。将得到的混合物在-40℃下搅拌30分钟。然后将溶液温热至0℃并再搅拌40分钟。通过LCMS数据确认中间体的形成。继续反应5小时。将反应溶液通过过滤漏斗过滤，滤饼用10ml THF冲洗。将合并的滤液浓缩至一半体积，并将剩余物再次冷却至-40℃。此时加入硼氢化钠(29.9mg，0.79mmol)，然后加入0.4ml水。将所得混合物在-35℃下搅拌20分钟，然后使其温热至环境温度并再搅拌1小时。
将反应混合物用乙酸乙酯和水稀释。向溶液中滴加1ml Hcl(1.0M)，使pH＝5。将有机相用水、饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤。有机相用硫酸钠干燥并过滤。将滤液浓缩。将所得剩余物在高真空下干燥，得到3-苄氧基-2-(5-(羟甲基)噻唑-4-基)-4H-吡喃-4-酮(54mg,产率22％)，MS m/z 316(M+1).
步骤8：3-苄氧基-2-(5-(溴甲基)噻唑-4-基)-4H-吡喃-4-酮
向3-苄氧基-2-(5-(羟甲基)噻唑-4-基)-4H-吡喃-4-酮(54mg，0.17mmol)的DCM(体积：1mL)溶液中加入四溴化碳(108mg，0.32mmol)。将所得溶液在冰浴中冷却，然后加入在1ml DCM中的三苯基膦(90mg，0.34mmol)。加完后，除去冰浴，将所得混合物在25℃下搅拌6小时。将反应混合物浓缩以除去溶剂。将得到的剩余物萃取到乙醚(3×10ml)中，浓缩合并的醚层，得到粗产物3-苄氧基-2-(5-(溴甲基)噻唑-4-基)-4H-吡喃-4-酮(40mg，65％收率)，其无需纯化即可用于下一步骤。MS m/z 378/380(M+2).
步骤9：1-((4-(3-(苄氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)噻唑-5-基)甲基)肼-1,2-二羧酸二叔丁酯
向冰冷的3-苄氧基-2-(5-(溴甲基)噻唑-4-基)-4H-吡喃-4-酮(40mg，0.11mmol)的DMF(体积：0.5mL)溶液中加入二叔丁基肼-1,2-二甲酸酯(34.4mg，0.15mmol)和氢化钠(5.92mg，0.15mmol)在1.0ml DMF中的混合溶液。将所得混合物在0℃下搅拌10分钟，然后在环境温度下搅拌30分钟。将反应溶液用乙酸乙酯和水稀释，将有机相用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并过滤。浓缩滤液，得到粗产物1-((4-(3-(苄氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)噻唑-5-基)甲基)肼-1,2-二羧酸二叔丁酯(35mg,产率63％),MS m/z 530(M+1).
步骤10：3-苄氧基-2-(5-(肼甲基)噻唑-4-基)-4H-吡喃-4-酮
向冰冷的1-((4-(3-(苄氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-基)噻唑-5-基)甲基)肼-1,2-二羧酸二叔丁酯(35mg，0.066mmol)的DCM溶液(体积：1mL)加入TFA(3ml,38.9mmol)在1.0ml DCM中的冷溶液。将所得混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩反应溶液。通过反相HPLC纯化剩余物，得到3-苄氧基-2-(5-(肼甲基)噻唑-4-基)-4H-吡喃-4-酮(10mg,产率43.6％)，MS m/z 330(M+1).
步骤11：10-苄氧基-4,5-二氢-9H-吡啶并[1,2-b]噻唑并[4,5-d]哒嗪-9-酮
向3-苄氧基-2-(5-(肼甲基)噻唑-4-基)-4H-吡喃-4-酮(10mg，0.03mmol)的MeOH(体积：0.5mL)溶液中加入1N NaOH(0.09mL,0.09mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2小时。浓缩反应溶液，得到10-苄氧基-4,5-二氢-9H-吡啶并[1,2-b]噻唑并[4,5-d]哒嗪-9-酮(8.0mg,产率85％)，MS m/z 312(M+1).
步骤12：5-二苯甲基-10-羟基-4,5-二氢-9H-吡啶并[1,2-b]噻唑并[4,5-d]哒嗪-9-酮
向冰冷的10-苄氧基-4,5-二氢-9H-吡啶并[1,2-b]噻唑并[4,5-d]哒嗪-9-酮(8mg,0.026mmol)和二苯甲醇(9.47mg,0.051mmol)的乙酸(体积:0.5ml)溶液中加入浓硫酸(0.014ml,0.25mmol)。将反应混合物在油浴中加热至75℃，保持15分钟。将油浴温度升至90℃，并将反应混合物加热30分钟。将冷水(2ml)加入到反应混合物中，并将得到的混合物用乙酸乙酯(2ml)萃取。浓缩有机相。通过反相HPLC(含0.1％TFA的MeCN/水)纯化粗产物，得到5-二苯甲基-10-羟基-4,5-二氢-9H-吡啶并[1,2-b]噻唑并[4,5-d]哒嗪-9-酮(1.5mg，11％收率)，为TFA盐。MS m/z 388.3(M+1),0.70分钟.
实施例82 5-二苯甲基-10-羟基-3-甲基-4,5-二氢咪唑并[4,5-d]吡啶并[1,2-b]吡嗪-9(3H)-酮
步骤1：3-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-2,3-二氧代丙酸甲酯
将3-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-3-氧代丙酸甲酯(6g，19.85mmol)的乙腈(50mL)溶液加入到TEMPO(3.72g，23.82mmol)的乙腈(100mL)溶液，5分钟后加入DDQ(4.96g，21.83mmol)。一小时后加入另一部分DDQ(4.7g)。将反应搅拌3小时，并浓缩。硅胶色谱(0-100％EtOAc的庚烷溶液)得到3-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-2,3-二氧代丙酸甲酯(6g，96％)。LCMS:(MS+H2O+1,335.2,0.65分钟).
步骤2：4-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-1H-咪唑-5-羧酸甲酯
向乙酸铵(9.75g，126mmol)的HOAc(20mL)悬浮液中加入3-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-2,3-二氧代丙酸甲酯(4g，12.65mmol)。将混合物搅拌10分钟，然后加入甲醛(2.53g，25.3mmol)。然后将反应混合物加热至50℃保持3小时。然后浓缩反应混合物以除去大部分HOAc。然后将剩余物用饱和NaHCO3(50mL)稀释，并用IPA/DCM(15％)萃取。将有机层干燥(Na2SO4)并浓缩。硅胶色谱(0-100％EtOAc的庚烷溶液，含10％MeOH)得到4-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-1H-咪唑-5-羧酸甲酯(2.1g，51％)。LCMS:(MS+1,327.2,0.44分钟).
步骤3：4-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-羧酸甲酯
向4-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-1H-咪唑-5-羧酸甲酯(2.1g,6.44mmol)的DMF(20mL)0℃溶液加入NaH(0.386g,9.65mmol)。将混合物搅拌30分钟，然后滴加碘甲烷(0.601mL，9.65mmol)。将混合物再搅拌1小时，然后用EtOAc(20mL)稀释，并用HCl(1M，2mL)和水(10mL)淬灭。将水层用EtOAc萃取(2x10mL)。将合并的有机物干燥(Na2SO4)并浓缩。硅胶色谱(0-100％EtOAc的庚烷溶液，含10％MeOH)得到4-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-羧酸甲酯(1.45g，66％)。LCMS:(MS+1,341.2,0.71分钟).
实施例82 5-二苯甲基-10-羟基-3-甲基-4,5-二氢咪唑并[4,5-d]吡啶并[1,2-b]吡嗪-9(3H)-酮
制备自4-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-羧酸甲酯，通过实施例81步骤6-12的方法。LCMS(m/z):385.1(MH+),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(400MHz,DMSO-d6)δ7.95(s,1H),7.6-7.1(s,8H),6.7-6.4(m,3H),5.65(d,J＝6.0Hz,1H),4.92(s,1H),5.12(s,2H),3.5(s,3H).
实施例83 5-二苯甲基-10-羟基-4,5-二氢-9H-恶唑并[4,5-d]吡啶并[1,2-b]哒嗪-9-酮
步骤1：4-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)恶唑-5-羧酸甲酯
向3-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-3-氧代丙酸甲酯(6.46g，16.95mmol)的EtOH溶液(体积：24.2mL)加入甲酰胺(1.013ml,25.4mmol)和AgOTf(6.53g,25.4mmol)，并在70℃下加热过夜。LC/MS显示转化良好但不完全。每种都另外加入1.5当量，并另外加热过夜。LC/MS显示反应完全。将反应混合物冷却至室温后，加入EtOAc(20mL)和饱和NaCl(20mL)并搅拌2小时，过滤盐(AgBr和AgCl)，将得到的两相溶液转移至分液漏斗中，分层。将水层用EtOAc反萃取，并将所有有机物用水、饱和NaHCO3,1N HCl和水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到粗4-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)恶唑-5-羧酸甲酯(1.46g，26％)。LCMS:(MS+1,328.0,0.55分钟).
实施例83 5-二苯甲基-10-羟基-4,5-二氢-9H-恶唑并[4,5-d]吡啶并[1,2-b]哒嗪-9-酮
制备自4-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)恶唑-5-羧酸甲酯，通过实施例81步骤6-12的方法。LCMS(m/z):371.9(MH+),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(400MHz,DMSO-d6)δ8.65(s,1H),7.82-7.05(m,11H),5.63(d,J＝6.0Hz,1H),5.05(s,1H),4.78(m,1H),4.2(m,1H).
实施例84 5-二苯甲基-10-羟基-4,5-二氢-9H-恶唑并[5,4-d]吡啶并[1,2-b]哒嗪-9-酮
步骤1：5-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)恶唑-4-羧酸甲酯
将2-异氰基乙酸酯(9.01mL，100mmol)加入到3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-碳酰氯(13.23g，50mmol)的溶液中(关于合成，参见实施例81步骤1)和TEA(34.8ml，250mmol)的THF(200mL)溶液。混合物室温搅拌过夜。然后在旋转蒸发仪上除去溶剂。将剩余物溶于300mL乙酸乙酯中并用100mL水洗涤一次。将有机相用Na2SO4干燥，并在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过硅胶色谱法(EtOAc/庚烷)纯化粗品，得到5-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)恶唑-4-羧酸甲酯(12.3g,产率75％)。LCMS:(MS+1,328.1,0.71分钟).
实施例84 5-二苯甲基-10-羟基-4,5-二氢-9H-恶唑并[5,4-d]吡啶并[1,2-b]哒嗪-9-酮
制备自5-(3-苄氧基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)恶唑-4-羧酸甲酯，通过实施例81步骤6-12的方法。LCMS(m/z):372.1(MH+),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(s,1H),7.82-7.05(m,11H),5.51(d,J＝6.0Hz,1H),5.18(s,1H),4.2-3.7(m,2H).
实施例85(S)-6-(双(4-氟苯基)甲基)-10-氧代-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-11-基乙酸酯
在室温下，将二异丙基乙基胺(0.014mL，0.080mmol)然后是乙酰氯(3.06μl，0.043mmol)加入至实施例22(15mg，0.033mmol)的DCM(体积：1mL)溶液中。在室温下搅拌20分钟，此时LCMS显示完全转化为产物质量。用DCM稀释并用稀NaHCO3水溶液洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将剩余物溶于DMSO中，并通过反相制备HPLC(含0.1％甲酸的MeCN/水作为洗脱液)纯化，冷冻干燥后得到(S)-6-(双(4-氟苯基)甲基)-10-氧代-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-11-基乙酸酯(13mg,0.026mmol,产率79％)为白色固体。LCMS(m/z):449.3(MH+),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(400MHz,DMSO-d6)δ7.55–7.47(m,3H),7.45(s,1H),7.34(d,J＝1.0Hz,1H),7.19(q,J＝8.8Hz,3H),6.98(t,J＝8.7Hz,2H),6.55(d,J＝3.5Hz,1H),5.79(d,J＝11.5Hz,1H),4.72(dd,J＝14.0,4.1Hz,1H),4.21(d,J＝14.0Hz,1H),3.95(s,1H),2.33(s,3H).
实施例86(S)-6-(双(4-氟苯基)甲基)-10-氧代-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-11-基异丁酸酯
由实施例85的方法制备，但使用异丁酰氯。LCMS(m/z):477.3(MH+),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.52(dd,J＝8.7,5.5Hz,2H),7.48(s,1H),7.44(s,1H),7.32(s,1H),7.19(q,J＝8.6Hz,2H),6.99(t,J＝8.6Hz,2H),6.80(s,2H),5.79(d,J＝11.6Hz,1H),4.72(dd,J＝14.0,4.0Hz,1H),4.20(d,J＝13.9Hz,1H),3.98(m,1H),2.90(q,J＝7.1Hz,1H),1.30(t,J＝6.6Hz,6H).
实施例87(S)-6-(双(4-氟苯基)甲基)-10-氧代-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-11-基3-甲基丁酸酯
由实施例85的方法制备，但使用异戊酰氯。LCMS(m/z):491.3(MH+),1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 1.01-1.17(m,6H)2.24(dt,J＝13.22,6.77Hz,1H)2.61-2.70(m,2H)3.97(d,J＝11.44Hz,1H)4.34(d,J＝14.08Hz,1H)4.60(s,1H)4.71(dd,J＝14.04,4.01Hz,1H)5.55-5.79(m,1H)6.90(t,J＝8.71Hz,2H)7.07-7.20(m,4H)7.35(d,J＝12.57Hz,2H)7.42(dd,J＝8.63,5.26Hz,2H)7.49(s,1H).
实施例88(S)-((6-(双(4-氟苯基)甲基)-10-氧代-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-11-基)氧基)甲基甲基碳酸酯
在0℃下，向实施例22(15mg，0.033mmol)的DMF(体积：332μl)溶液中加入碳酸钾(13.75mg，0.099mmol)和碘甲基甲基碳酸酯(14.3mg，0.066mmol)。在0℃下搅拌1小时，然后在室温下再搅拌1小时，此时LCMS显示完全转化为产物质量。过滤反应物以除去固体，并通过反相制备HPLC(含有0.1％TFA的MeCN/水作为洗脱剂)纯化，冷冻干燥后得到(S)-((6-(双(4-氟苯基)甲基)-10-氧代-5,6-二氢-10H-咪唑并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]哒嗪-11-基)氧基)甲基甲基碳酸酯(10mg,0.016mmol,产率49％)为白色固体。LCMS(m/z):495.2(MH+),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(400MHz,DMSO-d6)δ7.52–7.41(m,4H),7.36(s,1H),7.25–7.13(m,4H),6.99(t,J＝8.8Hz,2H),5.86–5.72(m,3H),4.69(dd,J＝14.0,4.0Hz,1H),4.20(d,J＝14.0Hz,1H),3.95–3.84(m,1H),3.67(s,3H).
表1实施例化合物
生物学试验和数据
本发明化合物的活性可通过以下的体外和体内方法来评估。使用本文所述的测试分析，根据表2本发明的化合物显示出抑制功效。
核酸内切酶抑制测定(PA FP测定)
将化合物溶解并在100％DMSO中连续稀释，然后将0.5μl转移至384孔板中。在测定缓冲液(20mM Tris，pH＝7.5,10mM MgCl2,0.01％Tween 20,100mM NaCl和1mM DTT)中制备50nM截短的流感A/维多利亚/75Pa(1-209)，并将20ul加入到装有化合物的测试平板的每个测定孔中，以1000rpm离心1分钟，并在室温下孵育30分钟。然后加入测定缓冲液中的20μl 20nM荧光素标记的探针[5-(4-(3-羧基-3-氧代丙酰基)-4-(4-氯苄基)哌啶-1-羰基)-2-(6-羟基-3-氧代-3H-氧杂蒽-9-基)苯甲酸，在1000rpm下离心1分钟并在室温下温育60分钟。
在Perkin Elmer Envision读板仪上测量荧光偏振，激发波长为480nm，发射波长为535nm，并以毫微摩尔单位(mP)报告。相对于含有125uM已知结合PA活性位点的化合物和含有1.25％DMSO的未抑制孔的孔测定IC50值。
流感病毒小基因组测定(RNP测定)
对于甲型流感病毒小基因组报告分析，用编码PB2、PB1、PA、NP蛋白和甲型萤光素酶报告质粒的表达载体转染293T细胞。细胞收获在补有10％热灭活的FBS(胎牛血清)、1％丙酮酸钠和1％L-谷氨酰胺(Cellgro，Manassas，VA)的无酚红Dulbecco改良Eagle's培养基(DMEM)中。在OptiMEM(Gibco，Carlsbad，CA)中用Fugene 6转染试剂(Promega，Madison，WI)以1:3比例DNA(μg):Fugene 6(μl)共转染五种质粒。以384孔格式在1.8×104个细胞/孔的细胞密度下进行转染。转染后2小时加入化合物，并将板在37℃、5％CO2下温育48小时。孵育后，裂解细胞并通过加入Britelite Plus(Perkin-Elmer，Waltham，MA)来定量萤光素酶产生。对于细胞毒性测量，按照制造商的说明将CellTiter-Glo(Promega，Madison，WI)加入处理过的细胞中。
流感病毒神经氨酸酶测定(NA测定)
对于流感NA测定，以384孔格式将MDCK细胞接种于不含苯酚红的DMEM(Gibco)中，补充有2mM L-谷氨酰胺、1％丙酮酸钠(Cellgro，Manassas，VA)和0.1％BSA，细胞密度为1.8×104细胞/孔。在感染前2小时将化合物加入细胞中。感染以MOI 0.005进行，并将板在37℃、5％CO2下孵育48小时。孵育后，用NA测定试剂盒(ThermoFisher，Carlsbad，CA)评估神经氨酸酶活性。对于细胞毒性测量，按照制造商的说明将CellTiter-Glo(Promega，Madison，WI)加入处理过的细胞中。
表2所选化合物的生物活性
所选化合物对多种流感病毒株的抑制活性(NA测定)