本发明涉及一种新型细胞学dna检测样本保存液及应用。
背景技术：
分析细胞的细胞周期和dna倍体已日益广泛地应用于临床，为肿瘤的诊断、疗效评价和预后预测提供了重要的依据，在科研中也越来越多地用于细胞动力学，细胞调亡观察等方面。dna倍体分析结合临床病理的形态学诊断，对一些恶性肿瘤进行早期诊断，跟踪随访和早期治疗，提高肿瘤的治愈率和生存率。尤其对细胞抽提物、体液、腺体分泌物、组织的脱落细胞的分析，意义非常重要。dna倍体分析技术在膀胱癌、前列腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、皮肤黑色素瘤的早期诊断和预后方面具有重要价值，而随着时间变化的增殖状态测量和分析反映了肿瘤的生长速度和侵袭性。肿瘤细胞有异常的dna含量，通过对异常dna倍体细胞的检测，可以知道样本是否存在突变的细胞与突变细胞数量。
传统的显微目视技术过多的依靠医务人员的经验，眼睛观察检测，容易因为视觉疲劳对异常细胞视而不见，导致漏诊误诊，检测结果的主观性大，难于量化、标准化。计算机图像技术发展，把显微图像数字化，使用自动化扫描仪对样本实现连续图像采集，对图像分析，可快速采集到图像几何学、形态学、光学等上百种参数。检测结果准确性，特异性与敏感性均提高，肿瘤早期诊断中有非常明显的优势。dna的非整倍体出现与癌变率和癌前病变增生程度有关，是癌前病变发生癌变的一个重要指标。dna非整倍体出现是鉴别良性与恶性肿瘤的特异性指标：良性肿瘤和正常组织良性增生不出现dna非整倍体细胞而恶性肿瘤常可出现异倍体细胞，实体瘤以超三倍体或多倍体居多。实体恶性肿瘤的非整倍体出现率＞70%，淋巴瘤和白血病以亚二倍体居多，出现率达50%。非整倍体的肿瘤：恶性程度高，复发率高，转移率高，预后差。
鉴于以上分析，细胞学dna倍体检测以及用于保存样本的保存液技术尤为重要。dna双螺旋是一种核酸的构象，在该构象中，两条反向平行的多核苷酸链相互缠绕形成一个右手的双螺旋结构，要进行dna倍体的含量检测需要将双螺旋链打开，使dna染色体中脱氧核糖核酸着色。在保存液阶段实现这一步骤一方面节约时间成本，另一方面可以实现前处理标准化控制，避免人为因素干扰结果准确性。
目前临床常用的细胞保存液主要针对脱落细胞学的整体保存，没有前处理的功能，没有专门适用细胞学dna检测的保存液，并且有以下干扰因素：粘液样本中存在的粘液影响细胞沉淀与吸取，容易造成假阴性；血性样本处理不彻底，红细胞干扰判读；细胞溶解或膨胀，细胞保存效果较差，容易导致误判；细胞重叠与抱团现象较多，制片效果不能均匀平铺。此外，临床较多采用进口保存液，成本高，不利于普及与推广。
本发明旨在提供一种新型细胞学dna检测样本的细胞保存液，利于推广与普及。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种新型细胞学dna检测样本的细胞保存液，能够保护细胞的完整性与固定性，粘液处理能力与血细胞崩解能力强，可同时分解dna分子中的嘌呤碱基，打开双螺旋链条，现出醛基，便于吸附碱性倍体染液，不仅节约时间成本，而且可以实现前处理标准化控制，避免人为因素干扰结果准确性。
上述细胞保存液含有细胞固定液、渗透压维持剂、微生物灭活剂、粘液消化成分、红细胞处理成分与dna水解剂。各组分与含量百分比：固定液20-60%，渗透压维持剂1-25%、微生物灭活剂1-5%、粘液消化成分0.1-8%、红细胞处理成分0.1-1.2%、dna水解剂1-25%。
其中，细胞固定液为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇中至少一种；渗透压维持剂为5%氯化钠溶液、氯化钾溶液中至少一种；微生物灭活剂为甲醛、β-丙内酯中至少一种；粘液消化成分为二硫苏糖醇、三羟甲基氨基甲烷、te中至少一种；红细胞处理成分为红细胞裂解液、碳酸氢钠、磷酸三钠中至少一种；dna水解剂为盐酸溶液、乙酸溶液、硫酸溶液中至少一种。
本发明提供的保存液含有dna水解剂，可分解dna分子中的嘌呤碱基，打开双螺旋链条，现出醛基，以吸附碱性倍体染液。
本发明提供的新型细胞学dna检测样本的细胞保存液应用步骤如下：
1）取所述保存液适量置于保存液瓶内；
2）取样后样本置于上述保存液瓶内；
3）振荡5-10分钟后转移6-10ml至试管中进行2000-2500r/min离心5分钟处理；
4）去除上清液，加入2-5ml细胞清洁液调节细胞浓度；
5）吸取0.5-1.5ml至制片仓，自然沉降10-30分钟或1000-2000r/min离心甩片2-5分钟；
6）取出玻片可直接进行dna染色流程；镜下检测判读结果。
本发明公开的保存液能够较好地保存需要做细胞学dna检测的样本，保护细胞的完整性与固定性；粘液处理能力与血细胞崩解能力强；细胞保存时间长达30天；使用方法简便，制片效果平铺均匀，背景干净清晰；保存液常温下有效期二年，微生物灭菌能力强，有效保护医技人员健康。
附图说明
附图1经过本发明的保存液保存后制片，异常细胞镜检图。
附图2经过本发明的保存液保存后制片，正常细胞镜检图。
附图3本发明实施例一镜检效果图。
附图4本发明实施例二镜检效果图。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，但是发明保护的范围不仅仅限于这些实施例，在发明基础上构思的或者等同替代的均在本发明的保护范围内。
实施例一：
本实施例中的保存液包含如下组分：甲醇55%，5%nacl20%，甲醛3%，te溶液1.5%，红细胞裂解液0.5%，1n盐酸溶液20%。
本实施例中保存液应用与制片方法，使用流程如下：
（1）取15ml保存液置于50ml保存瓶内，备用；
（2）临床取材后采样拭子放置于上述保存液瓶内，医技人员将样本编号、信息录入，震荡5分钟，静置30秒；
（3）转移细胞液6毫升至一次性试管中进行2000r/min离心5分钟处理；
（4）去除上清液，加入4ml细胞清洁液调节细胞浓；
（5）吸取1ml细胞悬液至制片仓，自然沉降10分钟；
（6）取出玻片直接进行dna倍体染色流程；
（7）镜下检测判读结果，通过数字扫描仪扫描分析检测细胞形态与细胞核内dna含量的变化。
实施效果：细胞保存完整，无细胞核固缩、溶解和膨胀，细胞舒张，平铺均匀，背景清晰干净，数字扫描仪正常运行分析，结果准确。
实施例二：
本实施例中的保存液包含如下组分：甲醇24%，乙醇24%，5%nacl10%、5%kcl9%，甲醛2.2%，三羟甲基氨基甲烷溶液5%，红细胞裂解液0.8%，乙酸溶液25%。
本实施例中保存液应用与制片方法，使用流程如下：
（1）取15ml保存液置于50ml保存液瓶内，备用；
（2）临床取材后采样拭子放置于上述保存液瓶内；医技人员将样本编号、信息录入，震荡7分钟，静置30秒；
（3）转移细胞液8毫升至一次性试管中进行2500r/min离心5分钟处理；
（4）去除上清液，加入3ml细胞清洁液调节细胞浓；
（5）吸取0.5ml细胞悬液至制片仓，自然沉降12分钟；
（6）取出玻片直接进行dna倍体染色流程；
（7）镜下检测判读结果，通过数字扫描仪扫描分析检测细胞形态与细胞核内dna含量的变化。
实施效果：细胞保存完整，无细胞核固缩、溶解和膨胀，细胞舒张，平铺均匀，背景清晰干净，数字扫描仪正常运行分析，结果准确。