本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种胸腺法新的合成方法。
背景技术：
胸腺法新是一种免疫调节因子,由28个氨基酸组成，它可以特异性地诱导t细胞lyt1+、2+、3+表面标志的产生,促使t细胞及自然杀伤细胞(nk)的分化与成熟,促使致敏的t细胞在各种抗原或有丝分裂原激活后产生各种淋巴因子,如白介素2(il2)、α干扰素(ifnα)、γ干扰素(ifnγ)等淋巴因子,促使对il2高亲和力受体的表达增加,增强th细胞的功能,同时它还通过对t4细胞的激活作用来增强异体和自体的人类混合的淋巴细胞反应。胸腺法新可能影响nk前体细胞的募集,这前体细胞暴露于干扰素后变得更有细胞毒性，使机体能有效的发挥免疫防护功能。该品具有促进t细胞分化、成熟，提高nk细胞活性，促进t细胞分泌各类淋巴因子，提高il－2受体对il－2的亲合力等作用。早期临床应用主要集中于抗肿瘤、免疫功能低下方面，近年来药效学研究结果同时表明，本品更具有保护肝脏、特异性地抑制受hbv感染的hepg2-nu2细胞的生长和抑制土拨鼠whv病毒复制的作用。在用于治疗慢性肝炎的多中心试验结果表明单独使用该品的疗效与干扰素相同，但副反应比干扰素少得多。在临床上，已成功地应用于治疗乙、丙型肝炎及其它免疫缺陷的疾病。
药代动力学研究文献显示，本品健康人单次皮下注射胸腺法新1.6mg，血药峰浓度约为37.51ng/ml，达峰时间约为1.67小时，auc0-15约为152.15ng/ml·h，半衰期约为1.65小时。一组有关tα1药代动力学方面的由日达仙、timosina和tα1三种样品作对照的实验中显示，tα1释放快速(tmax为1-2h)，代谢缓慢(16-18h)，尽管80％由泌尿系统排出体外，但cmax为30-80ug/l，仍比正常tα1血浓度0.5～0.75ug/l高出几十倍。
当前胸腺法新的制备方法主要为固相合成法，但由于胸腺法新分子结构中有大量的β折叠结构，形成困难序列，如逐个氨基酸从c端到n端进行接肽，从第28氨基酸偶联至第21氨基酸时，肽树脂体积就发生20％以上的收缩，同时继续接到第11氨基酸时才恢复正常，这种收缩严重降低了后续氨基酸的偶联收率，增加了分离纯化的难度，同时严重降低了产品的收率，从已报道的制备方法可知，对于98％hplc纯度的胸腺法新，当前的制备总收率一般都在20％左右。
胸腺法新的氨基酸顺序如下所示：
ac-ser1-asp2-ala3-ala4-val5-asp6-thr7-ser8-ser9-glu10-ile11-thr12-thr13-lys14-asp15-leu16-lys17-glu18-lys19-lys20-glu21-val22-val23-glu24-glu25-ala26-glu27-asn28-oh
技术实现要素：
本发明解决上述技术问题的方案是提供一种胸腺法新的合成方法，使得本发明所述方法在保证产品质量的前提下，降低合成方法的复杂程度和提高产品的总收率。
上述胸腺法新的合成方法，包括以下步骤：
a、合成在侧链上有保护基的多肽片段1：
fmoc-thr(tbu)-thr(tbu)-lys(boc)-asp(otbu)-leu-lys(boc)-glu(otbu)-lys(boc)-lys(boc)-glu(otbu)-oh；
合成在侧链上有保护基的多肽片段2：
nh2-val-val-glu(otbu)-glu(otbu)-ala-glu(otbu)-asp(α-otbu)-氨基树脂；
b、将多肽片段1的c端和多肽片段2的n端偶联，然后脱除多肽片段的n端fmoc保护基，得到多肽树脂ⅰ：
nh2-thr(tbu)-thr(tbu)-lys(boc)-asp(otbu)-leu-lys(boc)-glu(otbu)-lys(boc)-lys(boc)-glu(otbu)-val-val-glu(otbu)-glu(otbu)-ala-glu(otbu)-asp(α-otbu)-氨基树脂；
c、根据胸腺法新的氨基酸序列，按照从c端到n端的顺序依次逐个偶联第11个至第1个氨基酸，然后脱除n端保护基，再进行乙酰化反应，得到胸腺法新树脂：
ac-ser(tbu)-asp(otbu)-ala-ala-val-asp(otbu)-thr(tbu)-ser(tbu)-ser(tbu)-glu(otbu)-ile-thr(tbu)-thr(tbu)-lys(boc)-asp(otbu)-leu-lys(boc)-glu(otbu)-lys(boc)-lys(boc)-glu(otbu)-val-val-glu(otbu)-glu(otbu)-ala-glu(otbu)-asp(α-otbu)-氨基树脂；
d、胸腺法新树脂酸解脱除c端树脂和所有保护基得到胸腺法新粗品，胸腺法新粗品纯化后，获得胸腺法新。
在本发明所述方法中，首先按照胸腺法新肽序列分成3个部分，即分成2个片段的合成以及其他氨基酸的逐个偶联，以胸腺法新主链n端到c端的氨基酸顺序编号，如下式所示：
ac-ser1-asp2-ala3-ala4-val5-asp6-thr7-ser8-ser9-glu10-ile11-thr12-thr13-lys14-asp15-leu16-lys17-glu18-lys19-lys20-glu21-val22-val23-glu24-glu25-ala26-glu27-asn28-oh
多肽片段1的氨基酸序列即为上式中编号12-21的多肽序列：
fmoc-thr(tbu)-thr(tbu)-lys(boc)-asp(otbu)-leu-lys(boc)-glu(otbu)-lys(boc)-lys(boc)-glu(otbu)-oh。
多肽片段2的氨基酸序列即为上式中编号22-28的多肽序列：
nh2-val-val-glu(otbu)-glu(otbu)-ala-glu(otbu)-asp(α-otbu)-氨基树脂。
作为本发明的优选方案，步骤a所述合成多肽片段1具体为：在偶联试剂存在下，将n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的谷氨酸(fmoc-glu(otbu)-oh)与载体树脂偶联，再脱fmoc保护基得到h-glu(otbu)-载体树脂，然后采用活化试剂和缩合试剂，根据胸腺法新氨基酸序列，按照从c端到n端的顺序依次逐个将n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有boc保护基的赖氨酸(fmoc-lys(boc)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有boc保护基的赖氨酸(fmoc-lys(boc)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的谷氨酸(fmoc-glu(otbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有boc保护基的赖氨酸(fmoc-lys(boc)-oh)、n端偶联有fmoc保护基的亮氨酸(fmoc-leu-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的天门冬氨酸(fmoc-asp(otbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有boc保护基的赖氨酸(fmoc-lys(boc)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的苏冬氨酸(fmoc-thr(tbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的苏氨酸(fmoc-thr(tbu)-oh)进行延伸偶联，偶联后裂解液裂解，脱除载体树脂得到多肽片段1：
fmoc-thr(tbu)-thr(tbu)-lys(boc)-asp(otbu)-leu-lys(boc)-glu(otbu)-lys(boc)-lys(boc)-glu(otbu)-oh。
作为本发明的优选方案，步骤a所述合成多肽片段2具体为：在偶联试剂存在下，将n端偶联有fmoc保护基的天门冬氨酸(fmoc-asp(α-tbu)-oh)与脱保护后的氨基树脂偶联，脱fmoc保护基得到h-asp(α-tbu)-氨基树脂，然后采用活化试剂和缩合试剂，根据胸腺法新氨基酸序列，按照从c端到n端的顺序依次逐个将n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的谷氨酸(fmoc-glu(otbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基的丙氨酸(fmoc-ala-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的谷氨酸(fmoc-glu(otbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的谷氨酸(fmoc-glu(otbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基的缬氨酸(fmoc-val-oh)、n端偶联有fmoc保护基的缬氨酸(fmoc-val-oh)进行延伸偶联，脱除n段带有的fmoc保护基得到多肽片段2：
nh2-val-val-glu(otbu)-glu(otbu)-ala-glu(otbu)-asp(α-otbu)-氨基树脂。
作为优选方案，步骤c具体为：
采用活化试剂和缩合试剂，根据胸腺法新氨基酸序列，按照从c端到n端的顺序先将n端偶联有fmoc保护基的异亮氨酸(fmoc-ile-oh)的c端与多肽树脂ⅰ的n端偶联后脱fmoc保护基得到h-ile-多肽树脂ⅰ，然后依次逐个将n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的谷氨酸(fmoc-glu(otbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的丝氨酸(fmoc-ser(tbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的丝氨酸(fmoc-ser(tbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的苏氨酸(fmoc-thr(tbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有otbu保护基的天冬氨酸(fmoc-asp(otbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基的缬氨酸(fmoc-val-oh)、n端偶联有fmoc保护基的丙氨酸(fmoc-aal-oh)、n端偶联有fmoc保护基的丙氨酸(fmoc-aal-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有otbu保护基的天冬氨酸(fmoc-asp(otbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的丝氨酸(fmoc-ser(tbu)-oh)进行延伸偶联，偶联后脱除n端带有的fmoc保护基，进行乙酰化反应后得到胸腺法新树脂：
ac-ser(tbu)-asp(otbu)-ala-ala-val-asp(otbu)-thr(tbu)-ser(tbu)-ser(tbu)-glu(otbu)-ile-thr(tbu)-thr(tbu)-lys(boc)-asp(otbu)-leu-lys(boc)-glu(otbu)-lys(boc)-lys(boc)-glu(otbu)-val-val-glu(otbu)-glu(otbu)-ala-glu(otbu)-asp(α-otbu)-氨基树脂。
上述方法步骤a的合成多肽片段1中，第一个保护氨基酸与载体树脂偶联所形成的多肽树脂取代值为0.3～1.2mmol/g多肽树脂；优选的取代值为0.6～1.0mmol/g多肽树脂。
上述方法步骤a的合成多肽片段2中，第一个保护氨基酸与氨基树脂偶联所形成的多肽树脂取代值为0.2～0.8mmol/g多肽树脂；优选的取代值为0.4～0.6mmol/g多肽树脂。
本发明所述延伸偶联是指在第一个氨基酸与氨基载体偶联后，剩余氨基酸按照各自序列的顺序逐个和前一个偶联的氨基酸发生缩合反应(主链氨基和羧基的缩合反应)进行偶联。本发明偶联时，每个保护氨基酸或多肽片段用量优选为多肽树脂摩尔数的1～6倍；更优选为2.5～3.5倍。所述偶联的反应时间为60～300分钟；优选为100～140分钟。
在延伸偶联中，由于每个氨基酸的n端都有保护基，因此需要用去n端保护基试剂先脱除n端保护基再偶联。本发明用pip/dmf(哌啶/n,n-二甲基甲酰胺)混合溶液作为去n端保护基试剂脱除n端保护基；所述混合溶液中含哌啶为10～30％(v)，其余为dmf。所述去n端保护基试剂的用量为每克多肽树脂5～15ml，优选的为每克多肽树脂8～12ml。去n端保护基的时间为10～60分钟，优选的为15～25分钟。
需要说明的是，本发明所述多肽树脂指任意个数保护氨基酸按照胸腺法新氨基酸顺序和氨基载体相连接形成的多肽树脂，这其中也包括多肽树脂ⅰ、胸腺法新树脂。
上述方法步骤a的合成多肽片段1中，所述的载体树脂为trityl-cl(三苯甲基氯)类树脂。优选的，所述trityl-cl类树脂为trityl-cl树脂、4-methyltrityl-cl(4-甲基三苯甲基氯)树脂、4-methoxytrityl-cl(4-甲氧基三苯甲基氯)树脂或2-cltrity-cl(2-氯三苯甲基氯)树脂中的任意一种。
进一步优选的，当载体树脂为trityl-cl类树脂时，保护氨基酸与载体树脂的偶联方法为：保护氨基酸的羧基与树脂中的cl代烷基在碱的作用下发生酯化反应而接入保护氨基酸。
上述方法步骤a的合成多肽片段2中，所述的氨基树脂选自rinkamideam树脂、rinkamide树脂和rinkmbha树脂中的任意一种，优选为rinkamidembha树脂。
上述方法步骤a的合成多肽片段1中，所述裂解液为体积百分比25％的三氟乙醇的二氯甲烷溶液。
作为优选的方案，所述缩合试剂为n,n-二异丙基碳二亚胺(dic)、n,n-二环己基碳二亚胺(dcc)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有机碱(pybop/有机碱)、2-(7-氮杂-1h-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/有机碱(hatu/有机碱)、苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐/有机碱(hbtu/有机碱)或o-苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲四氟硼酸酯/有机碱(tbtu/有机碱)中的任意一种。所述缩合试剂的摩尔用量为多肽树脂中氨基总摩尔数的1～6倍；优选为2.5～3.5倍。
上述缩合试剂中所述的有机碱为n,n-二异丙基乙胺(dipea)、三乙胺(tea)或n-甲基吗啡啉(nmm)中的任意一种；优选为dipea。
需要说明的是，所述pybop/有机碱、hatu/有机碱、hbtu/有机碱、tbtu/有机碱，在本发明中属于四种双体系的缩合试剂，即pybop、hatu、hbtu在使用时需要分别和有机碱组合在一起成为一种缩合试剂使用。其中所述有机碱和pybop、hatu、hbtu、tbtu的摩尔比为1.3～3.0:1；更优选为1.3～1.5:1。
作为优选的方案，所述活化试剂为1-羟基苯并三唑(hobt)或n-羟基-7-氮杂苯并三氮唑(hoat)。所述活化试剂的用量为多肽树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍；优选为2.5～3.5倍。
作为优选的方案，所述的偶联试剂为n,n-二异丙基乙胺(dipea)、n,n-二异丙基碳二亚胺/4-二甲氨基吡啶(dic/dmap)两种之一。
在本发明合成过程中，优选采用dmf溶剂来溶解。
除上述列举的合成方法，本发明也可以采用液相合成法按照本发明片段合成策略进行合成。
作为优选方案，步骤d所述的酸解，是采用由体积百分比为80～95％的tfa、体积百分比为1～10％的edt、余量为水组成的混合酸解液进行酸解。优选地，用由体积百分比为90％的tfa、体积百分比为5％的edt、余量为水组成的混合酸解液进行酸解。所述混合酸解液用量为每克胸腺法新树脂需要4～15ml；优选为9～11ml。所述酸解的时间为室温条件下1～6小时；优选为室温条件下3～4小时。
作为优选的方案，步骤d所述的纯化具体为：
胸腺法新粗品，加水搅拌，用氨水调ph7.0至完全溶解，溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，纯化备用；
采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相c18，流动相系统为0.1％tfa/水溶液-0.1％tfa/乙腈溶液，77mm*250mm的色谱柱流速为90ml/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得胸腺法新纯化中间体浓缩液；
取胸腺法新纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用；
采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为1％醋酸/水溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相c18，77mm*250mm的色谱柱流速为90ml/min，采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，减压浓缩，得到胸腺法新醋酸水溶液，冷冻干燥，得胸腺法新纯品。
由本发明提供的方法合成的胸腺法新，经hplc检测纯度为99％以上，总收率为30％以上，而且本发明所述方法中2个片段可以同时进行合成，与现有逐个合成氨基酸的技术方案相比，缩短了合成周期，提高总收率。
附图说明
图1rinkamideam树脂的结构。
图2rinkamide树脂的结构。
图3rinkmbha树脂的结构。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解发明的技术方案，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明。
由于胸腺法新分子结构中有大量的β折叠结构，形成困难序列，如逐个氨基酸从c端到n端进行接肽，从第28氨基酸偶联至第21氨基酸时，肽树脂体积就发生20％以上的收缩，同时继续接到第11氨基酸时才恢复正常，这种收缩严重降低了后续氨基酸的偶联收率，增加了分离纯化的难度，同时严重降低了产品的收率。
本发明是采用先分别合成在侧链上有保护基的多肽片段1(fmoc-thr(tbu)-thr(tbu)-lys(boc)-asp(otbu)-leu-lys(boc)-glu(otbu)-lys(boc)-lys(boc)-glu(otbu)-oh)和在侧链上有保护基的多肽片段2(nh2-val-val-glu(otbu)-glu(otbu)-ala-glu(otbu)-asp(α-otbu)-氨基树脂)，然后将将多肽片段1的c端和多肽片段2的n端偶联，然后脱除多肽片段的n端fmoc保护基，得到多肽树脂ⅰ；再根据胸腺法新的氨基酸序列，按照从c端到n端的顺序依次逐个偶联第11个至第1个氨基酸。由于胸腺法新分子结构中有大量的β折叠结构，形成困难序列，如逐个氨基酸从c端到n端进行接肽，从第28氨基酸偶联至第21氨基酸时，肽树脂体积就发生20％以上的收缩，同时继续接到第11氨基酸时才恢复正常，这种收缩严重降低了后续氨基酸的偶联收率，增加了分离纯化的难度，同时严重降低了产品的收率。本发明创造性地采用先合成多肽片段1(fmoc12-21)和22-28氨基树脂，再依次逐个偶联第11个至第1个氨基酸(合成工艺见图1)，这样，成功地避免了β折叠结构形成的困难序列，提高固相合成收率，提高产品纯度和收率。
后脱除n端保护基，经乙酰化反应后得到整个胸腺法新树脂。
上述方法步骤a的合成多肽片段1中，第一个保护氨基酸与载体树脂偶联所形成的多肽树脂取代值优选为0.3～1.2mmol/g多肽树脂；更优选的取代值为0.6～1.0mmol/g多肽树脂。
上述方法步骤a的合成多肽片段2中，第一个保护氨基酸与氨基树脂偶联所形成的多肽树脂取代值优选为0.2～0.8mmol/g多肽树脂；更优选的取代值为0.4～0.6mmol/g多肽树脂。
本发明所述延伸偶联是指在第一个氨基酸与氨基载体偶联后，剩余氨基酸按照各自序列的顺序逐个和前一个偶联的氨基酸发生缩合反应(主链氨基和羧基的缩合反应)进行偶联。本发明偶联时，每个保护氨基酸或多肽片段用量优选为多肽树脂摩尔数的1～6倍；更优选为2.5～3.5倍。所述偶联的反应时间优选为60～300分钟；更优选为100～140分钟。
在延伸偶联中，由于每个氨基酸n端都有保护基，因此需要用去n端保护基试剂先脱除n端保护基再偶联。本发明优选用pip/dmf(哌啶/n,n-二甲基甲酰胺)混合溶液作为去n端保护基试剂脱除n端保护基；所述混合溶液中含哌啶为10～30％(v)，其余为dmf。所述去n端保护基试剂的用量为每克多肽树脂5～15ml，优选的为每克多肽树脂8～12ml。去n端保护基的时间为10～60分钟，优选的为15～25分钟。
需要说明的是本发明所述多肽树脂指任意个数保护氨基酸按照胸腺法新氨基酸顺序和氨基载体相连接形成的多肽树脂，这其中也包括多肽树脂ⅰ、胸腺法新树脂。
上述方法步骤a的合成多肽片段1中，所述的载体树脂为trityl-cl(三苯甲基氯)类树脂。优选地，所述trityl-cl类树脂为trityl-cl树脂、4-methyltrityl-cl(4-甲基三苯甲基氯)树脂、4-methoxytrityl-cl(4-甲氧基三苯甲基氯)树脂或2-cltrity-cl(2-氯三苯甲基氯)树脂中的任意一种。
其中，进一步优选地，当载体树脂为trityl-cl类树脂时，保护氨基酸与载体树脂的偶联方法为：保护氨基酸的羧基与树脂中的cl代烷基在碱的作用下发生酯化反应而接入保护氨基酸。
上述方法步骤a的合成多肽片段2中，所述的氨基树脂选自rinkamideam树脂、rinkamide树脂和rinkmbha树脂中的任意一种，优选为rinkamidembha树脂。
上述方法步骤a的合成多肽片段1中，所述裂解液为体积百分比25％的三氟乙醇的二氯甲烷溶液。
作为本发明优选的方案，所述缩合试剂为n,n-二异丙基碳二亚胺(dic)、n,n-二环己基碳二亚胺(dcc)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有机碱(pybop/有机碱)、2-(7-氮杂-1h-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/有机碱(hatu/有机碱)、苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐/有机碱(hbtu/有机碱)或o-苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲四氟硼酸酯/有机碱(tbtu/有机碱)中的任意一种。所述缩合试剂的摩尔用量为多肽树脂中氨基总摩尔数的1～6倍；优选为2.5～3.5倍。
上述缩合试剂中所述的有机碱为n,n-二异丙基乙胺(dipea)、三乙胺(tea)或n-甲基吗啡啉(nmm)中的任意一种；优选为dipea。
需要说明的是，所述pybop/有机碱、hatu/有机碱、hbtu/有机碱、tbtu/有机碱，在本发明中属于四种双体系的缩合试剂，即pybop、hatu、hbtu在使用时需要分别和有机碱组合在一起成为一种缩合试剂使用。其中所述有机碱和pybop、hatu、hbtu、tbtu的摩尔比为1.3～3.0:1；更优选为1.3～1.5:1。
作为优选，所述活化试剂为1-羟基苯并三唑(hobt)或n-羟基-7-氮杂苯并三氮唑(hoat)。所述活化试剂的用量为多肽树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍；优选为2.5～3.5倍。
作为优选，本发明所述偶联试剂为n,n-二异丙基乙胺(dipea)、n,n-二异丙基碳二亚胺/4-二甲氨基吡啶(dic/dmap)两种之一。
在本发明合成过程中，优选采用dmf溶剂来溶解。
除上述列举的合成方法，本发明也可以采用液相合成法按照本发明片段合成策略进行合成。
作为优选方案，步骤d所述的酸解，是采用由体积百分比为80～95％的tfa、体积百分比为1～10％的edt、余量为水组成的混合酸解液进行酸解。优选地，用由体积百分比为90％的tfa、体积百分比为5％的edt、余量为水组成的混合酸解液进行酸解。所述混合酸解液用量为每克胸腺法新树脂需要4～15ml；优选为9～11ml。所述酸解的时间为室温条件下1～6小时；优选为室温条件下3～4小时。
作为优选，步骤d所述纯化具体为：
胸腺法新粗品，加水搅拌，用氨水调ph7.0至完全溶解，溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，纯化备用；
采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相c18，流动相系统为0.1％tfa/水溶液-0.1％tfa/乙腈溶液，77mm*250mm的色谱柱流速为90ml/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得胸腺法新纯化中间体浓缩液；
取胸腺法新纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用；
采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为1％醋酸/水溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相c18，77mm*250mm的色谱柱流速为90ml/min，采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，减压浓缩，得到胸腺法新醋酸水溶液，冷冻干燥，得胸腺法新纯品。
在本发明具体实施方式中，所有偶联由保护基的氨基酸均可通过市售获得，本发明中的保护氨基酸购自于成都晖蓉生物科技有限公司，所用树脂购自于上虞普尔树脂有限公司，其中本发明所述多肽片段1也可以通过市售获得，申请文件中所用英文缩写对应的中文含义如下：ala丙氨酸，lys赖氨酸，asp天冬氨酸，ser丝氨酸，glu谷氨酸，thr苏氨酸，ile异亮氨酸，val缬氨酸，leu亮氨酸otbu叔丁氧基，fmoc9-芴甲氧羰基，boc叔丁氧羰酰基，tbu叔丁基，ac2o醋酸酐。
上述为本发明的详细阐述，下面为本发明实施例。
下面结合实施例，进一步阐述本发明。
实施例1
多肽片段1的合成
称取替代度为0.6mol/g的2-ctc树脂0.5kg，加入到固相合成仪反应器中，用dmf洗涤2次，用dmf溶胀树脂30分钟后抽干，取0.6molfmoc-glu(otbu)-oh用dmf溶解，加入上述装有树脂的反应柱中，再加入1.2moldipea，反应2小时后抽干，加入含有1.2mol无水甲醇的dmf溶液，搅拌反应1小时，用dmf洗涤6次，得到fmoc-glu(otbu)-2-ctc树脂。
用每克树脂10ml20％哌啶/dmf溶液脱除fmoc-glu(otbu)-2-ctc树脂中的fmoc保护基20分钟，然后用dmf洗涤6次，得到h-glu(otbu)-2-ctc树脂。
取0.9molfmoc-lys(boc)-oh和0.9molhobt，用dmf溶解，搅拌下加入0.9moldic，继续搅拌反应1小时，加入固相合成仪反应器中，室温反应2h(反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再延长偶联反应时间)，得到fmoc-lys(boc)-glu(otbu)-2-ctc树脂。
按照胸腺法新氨基酸序列第20至第12氨基酸顺序，重复上述脱除保护基和加入相应氨基酸偶联的步骤，依次完成fmoc-lys(boc)-oh、fmoc-lys(boc)-oh、fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-lys(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-asp(otbu)-oh、fmoc-lys(boc)-oh、fmoc-thr(tbu)-oh、fmoc-thr(tbu)-oh的延伸偶联的延伸偶联。
反应结束后用甲醇洗涤6次，树脂真空干燥过夜，称重得到1.21kg未脱除2-ctc树脂的多肽片段1，加入至25l玻璃反应器中。
配置裂解液25％tfe/二氯甲烷溶液12l，将裂解试剂倒入烧瓶中，室温反应2h。反应结束，过滤树脂，收集滤液。将滤液体积旋蒸干后，加入3ldcm，将混合液滴加至15l乙醚中，析出白色固体，过滤收集沉淀，无水乙醚洗涤，并且真空干燥，得到0.58kg多肽片段1，纯度95.1％，收率90.7％。
fmoc-thr(tbu)-thr(tbu)-lys(boc)-asp(otbu)-leu-lys(boc)-glu(otbu)-lys(boc)-lys(boc)-glu(otbu)-oh。
实施例2
多肽片段1的合成
称取替代度为0.6mol/g的2-ctc树脂0.5kg，加入到固相合成仪反应器中，用dmf洗涤2次，用dmf溶胀树脂30分钟后抽干，取0.6molfmoc-glu(otbu)-oh用dmf溶解，加入上述装有树脂的反应柱中，再加入1.2moldipea，反应2小时后抽干，加入含有1.2mol无水甲醇的dmf溶液，搅拌反应1小时，用dmf洗涤6次，得到fmoc-glu(otbu)-2-ctc树脂。
用每克树脂10ml20％哌啶/dmf溶液脱除fmoc-glu(otbu)-2-ctc树脂中的fmoc保护基20分钟，然后用dmf洗涤6次，得到h-glu(otbu)-2-ctc树脂。
取0.9molfmoc-lys(boc)-oh和0.9molhobt，用dmf溶解，搅拌下加入0.86molhbtu，继续搅拌反应1小时后再加入1.3moldipea，混合均匀后加入到固相合成仪反应器中，室温反应2h(反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再延长偶联反应时间)，得到fmoc-lys(boc)-glu(otbu)-2-ctc树脂。
按照胸腺法新氨基酸序列第20至第12氨基酸顺序，重复上述脱除保护基和加入相应氨基酸偶联的步骤，依次完成fmoc-lys(boc)-oh、fmoc-lys(boc)-oh、fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-lys(boc)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-asp(otbu)-oh、fmoc-lys(boc)-oh、fmoc-thr(tbu)-oh、fmoc-thr(tbu)-oh的延伸偶联的延伸偶联。
反应结束后用甲醇洗涤6次，树脂真空干燥过夜，称重得到1.17kg未脱除2-ctc树脂的多肽片段1，加入至25l玻璃反应器中。
配置裂解液25％tfe/二氯甲烷溶液12l，将裂解试剂倒入烧瓶中，室温反应2h。反应结束，过滤树脂，收集滤液。将滤液体积旋蒸干后，加入3ldcm，将混合液滴加至15l乙醚中，析出白色固体，过滤收集沉淀，无水乙醚洗涤，并且真空干燥，得到0.55kg多肽片段1，纯度91.7％，收率86.4％。
fmoc-thr(tbu)-thr(tbu)-lys(boc)-asp(otbu)-leu-lys(boc)-glu(otbu)-lys(boc)-lys(boc)-glu(otbu)-oh。
实施例3
多肽片段2的合成
称取替代度为0.5mol/g的rinkmbha树脂0.2kg，加入到固相合成仪反应器中，用dmf洗涤2次，用dmf溶胀树脂30分钟后抽干，用每克树脂10ml20％哌啶/dmf溶液脱除树脂中的fmoc保护基20分钟，然后用dmf洗涤6次，得到去保护的rinkmbha树脂。
取0.3molasp(α-otbu)-oh和0.3molhobt，用dmf溶解，搅拌下加入0.3moldic，继续搅拌反应1小时，加入固相合成仪反应器中，室温反应2h(反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再延长偶联反应时间)，得到fmoc-asp(α-otbu)-rinkmbha树脂。
按照胸腺法新氨基酸序列第27至第22氨基酸顺序，重复上述脱除保护基和加入相应氨基酸偶联的步骤，依次完成fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-ala、fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-val、fmoc-val-oh的延伸偶联的延伸偶联。最后以每克氨基树脂15mlpip(20％)/dmf(80％)混合溶液脱除n段带有的fmoc保护基20min，然后用dmf洗涤6次，得到多肽片段2：
nh2-val-val-glu(otbu)-glu(otbu)-ala-glu(otbu)-asp(α-otbu)-rinkmbha树脂。
实施例4
多肽片段2的合成
称取替代度为0.5mol/g的rinkmbha树脂0.2kg，加入到固相合成仪反应器中，用dmf洗涤2次，用dmf溶胀树脂30分钟后抽干，用每克树脂10ml20％哌啶/dmf溶液脱除树脂中的fmoc保护基20分钟，然后用dmf洗涤6次，得到去保护的rinkmbha树脂。
取0.3molfmoc-lys(boc)-oh和0.3molhobt，用dmf溶解，搅拌下加入0.28molhbtu，继续搅拌反应1小时后再加入0.45moldipea，混合均匀后加入到固相合成仪反应器中，室温反应2h(反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再延长偶联反应时间)，得到fmoc-asp(α-otbu)-rinkmbha树脂。
按照胸腺法新氨基酸序列第27至第22氨基酸顺序，重复上述脱除保护基和加入相应氨基酸偶联的步骤，依次完成fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-ala、fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-val、fmoc-val-oh的延伸偶联的延伸偶联。最后以每克氨基树脂15mlpip(20％)/dmf(80％)混合溶液脱除n段带有的fmoc保护基20min，然后用dmf洗涤6次，得到多肽片段2：
nh2-val-val-glu(otbu)-glu(otbu)-ala-glu(otbu)-asp(α-otbu)-rinkmbha树脂。
实施例5
多肽树脂ⅰ的合成
取0.25mol实施例1的多肽片段1、0.1mol实施例3的多肽片段1和0.25molhoat，用dmf溶解，搅拌下加入0.25moldic，室温反应6h(反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再延长偶联反应时间)，再用每克树脂10mlpip(20％)/dmf(80％)混合溶液脱fmoc保护基，时间为20min，用dmf洗涤6次，得到多肽树脂ⅰ:
nh2-thr(tbu)-thr(tbu)-lys(boc)-asp(otbu)-leu-lys(boc)-glu(otbu)-lys(boc)-lys(boc)-glu(otbu)-val-val-glu(otbu)-glu(otbu)-ala-glu(otbu)-asp(α-otbu)-rinkmbha树脂。
实施例6
多肽树脂ⅰ的合成
取0.25mol实施例2的多肽片段1和0.25molhoat，用dmf溶解，搅拌下加入0.24molhbtu，继续搅拌反应1小时后再加入0.4moldipea，搅拌均匀后加入0.1mol实施例4的多肽片段2，室温反应6h(反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再延长偶联反应时间)，再用每克树脂10mlpip(20％)/dmf(80％)混合溶液脱fmoc保护基，时间为20min，用dmf洗涤6次，得到多肽树脂ⅰ:
nh2-thr(tbu)-thr(tbu)-lys(boc)-asp(otbu)-leu-lys(boc)-glu(otbu)-lys(boc)-lys(boc)-glu(otbu)-val-val-glu(otbu)-glu(otbu)-ala-glu(otbu)-asp(α-otbu)-rinkmbha树脂。
实施例7
胸腺法新肽树脂的合成
取0.3molfmoc-ile-oh、0.1mol实施例5的多肽树脂ⅰ和0.3molhobt，用dmf溶解，搅拌下加入0.3moldic，继续搅拌反应1小时，加入固相合成仪反应器中，室温反应3h(反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，延长偶联反应时间)。
保护氨基酸按照胸腺法新氨基酸序列第1至第10氨基酸序列，从c端到n端的顺序依次逐个进行延伸偶联，依次逐个将n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的谷氨酸(fmoc-glu(otbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的丝氨酸(fmoc-ser(tbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的丝氨酸(fmoc-ser(tbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的苏氨酸(fmoc-thr(tbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有otbu保护基的天冬氨酸(fmoc-asp(otbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基的缬氨酸(fmoc-val-oh)、n端偶联有fmoc保护基的丙氨酸(fmoc-aal-oh)、n端偶联有fmoc保护基的丙氨酸(fmoc-aal-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有otbu保护基的天冬氨酸(fmoc-asp(otbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的丝氨酸(fmoc-ser(tbu)-oh)进行延伸偶联，偶联后脱除n端带有的fmoc保护基，用25％ac2o/dmf溶液进行乙酰化反应2小时，分别用dmf和甲醇洗涤6次，减压干燥后得到胸腺法新树脂578g，树脂总收率为89.6％。
ac-ser(tbu)-asp(otbu)-ala-ala-val-asp(otbu)-thr(tbu)-ser(tbu)-ser(tbu)-glu(otbu)-ile-thr(tbu)-thr(tbu)-lys(boc)-asp(otbu)-leu-lys(boc)-glu(otbu)-lys(boc)-lys(boc)-glu(otbu)-val-val-glu(otbu)-glu(otbu)-ala-glu(otbu)-asp(α-otbu)-rinkmbha树脂。
实施例8
胸腺法新肽树脂的合成
取0.3molfmoc-ile-oh和0.3molhobt，用dmf溶解，搅拌下加入0.28molhbtu，继续搅拌反应1小时后再加入0.45moldipea，转移至固相合成仪反应器中，搅拌均匀后加入0.1mol实施例6的多肽树脂ⅰ，室温反应3h(反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，延长偶联反应时间)。
保护氨基酸按照胸腺法新氨基酸序列第1至第10氨基酸序列，从c端到n端的顺序依次逐个进行延伸偶联，依次逐个将n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的谷氨酸(fmoc-glu(otbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的丝氨酸(fmoc-ser(tbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的丝氨酸(fmoc-ser(tbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的苏氨酸(fmoc-thr(tbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有otbu保护基的天冬氨酸(fmoc-asp(otbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基的缬氨酸(fmoc-val-oh)、n端偶联有fmoc保护基的丙氨酸(fmoc-aal-oh)、n端偶联有fmoc保护基的丙氨酸(fmoc-aal-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有otbu保护基的天冬氨酸(fmoc-asp(otbu)-oh)、n端偶联有fmoc保护基以及侧链偶联有tbu保护基的丝氨酸(fmoc-ser(tbu)-oh)进行延伸偶联，偶联后脱除n端带有的fmoc保护基，用25％ac2o/dmf溶液进行乙酰化反应2小时，分别用dmf和甲醇洗涤6次，减压干燥后得到胸腺法新树脂561g，树脂总收率为85.5％。
ac-ser(tbu)-asp(otbu)-ala-ala-val-asp(otbu)-thr(tbu)-ser(tbu)-ser(tbu)-glu(otbu)-ile-thr(tbu)-thr(tbu)-lys(boc)-asp(otbu)-leu-lys(boc)-glu(otbu)-lys(boc)-lys(boc)-glu(otbu)-val-val-glu(otbu)-glu(otbu)-ala-glu(otbu)-asp(α-otbu)-rinkmbha树脂。
实施例9
胸腺法新粗品的制备
取实施例7所得胸腺法新树脂，加入体积比为tfa︰水︰edt＝90︰5︰5的混合酸解液(用量10ml/克胸腺法新树脂)，搅拌均匀，室温搅拌反应3小时，反应混合物使用砂芯漏斗过滤，收集滤液，树脂再用少量tfa洗涤3次，合并滤液后减压浓缩，加入无水乙醚沉淀，再用无水乙醚洗沉淀3次，抽干得类白色粉末，真空减压干燥至恒重，得胸腺法新粗品341g，粗品纯度为66.9％。
实施例10
胸腺法新粗品的制备
取实施例8所得胸腺法新树脂，加入体积比为tfa︰水︰edt＝90︰5︰5的混合酸解液(用量10ml/克胸腺法新树脂)，搅拌均匀，室温搅拌反应3小时，反应混合物使用砂芯漏斗过滤，收集滤液，树脂再用少量tfa洗涤3次，合并滤液后减压浓缩，加入无水乙醚沉淀，再用无水乙醚洗沉淀3次，抽干得类白色粉末，真空减压干燥至恒重，得胸腺法新粗品328g，粗品纯度为62.6％。
实施例11
胸腺法新粗品纯化
取实施例9所得胸腺法新粗品，加水搅拌，用氨水调ph7.0至完全溶解，溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，纯化备用；
采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相c18，流动相系统为0.1％tfa/水溶液-0.1％tfa/乙腈溶液，100mm*250mm的色谱柱流速为120ml/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得胸腺法新纯化中间体浓缩液；
取胸腺法新纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用；
采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为1％醋酸/水溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相c18，100mm*250mm的色谱柱流速为120ml/min，采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，减压浓缩，得到胸腺法新醋酸水溶液，冷冻干燥，得胸腺法新纯品106.1g，制备总收率为34.1％，分子量：3108.8(100％m+h)，纯度：99.4％，最大单一杂质0.13％。
实施例12
胸腺法新粗品纯化
取实施例10所得胸腺法新粗品，加水搅拌，用氨水调ph7.0至完全溶解，溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，纯化备用；
采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相c18，流动相系统为0.1％tfa/水溶液-0.1％tfa/乙腈溶液，100mm*250mm的色谱柱流速为120ml/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得胸腺法新纯化中间体浓缩液；
取胸腺法新纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用；
采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为1％醋酸/水溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相c18，100mm*250mm的色谱柱流速为120ml/min，采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，减压浓缩，得到胸腺法新醋酸水溶液，冷冻干燥，得胸腺法新纯品96.9g，制备总收率为31.2％，分子量：3108.6(100％m+h)，纯度：99.5％，最大单一杂质0.19％。
实施例13
采用胸腺法新的第2～11保护氨基酸片段来制备胸腺法新
ac-ser1-asp2-ala3-ala4-val5-asp6-thr7-ser8-ser9-glu10-ile11-thr12-thr13-lys14-asp15-leu16-lys17-glu18-lys19-lys20-glu21-val22-val23-glu24-glu25-ala26-glu27-asn28-oh
称取替代度为0.5mol/g的rinkmbha树脂0.2kg，加入到固相合成仪反应器中，用dmf洗涤2次，用dmf溶胀树脂30分钟后抽干，用每克树脂10ml20％哌啶/dmf溶液脱除树脂中的fmoc保护基20分钟，然后用dmf洗涤6次，得到去保护的rinkmbha树脂。
取0.3molasp(α-otbu)-oh和0.3molhobt，用dmf溶解，搅拌下加入0.3moldic，继续搅拌反应1小时，加入固相合成仪反应器中，室温反应2h(反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再延长偶联反应时间)，得到fmoc-asp(α-otbu)-rinkmbha树脂。
按照胸腺法新氨基酸序列，从c端向n端，重复上述脱除保护基和加入相应氨基酸偶联的步骤，按表1的顺序一次完成相应氨基酸或片段的延伸偶联。
表1
最后以每克氨基树脂15mlpip(20％)/dmf(80％)混合溶液脱除n段带有的fmoc保护基20min，然后用dmf洗涤6次，用25％ac2o/dmf溶液进行乙酰化反应2小时，分别用dmf和甲醇洗涤6次，减压干燥后得到胸腺法新树脂521g，树脂总收率为76.1％。
ac-ser(tbu)-asp(otbu)-ala-ala-val-asp(otbu)-thr(tbu)-ser(tbu)-ser(tbu)-glu(otbu)-ile-thr(tbu)-thr(tbu)-lys(boc)-asp(otbu)-leu-lys(boc)-glu(otbu)-lys(boc)-lys(boc)-glu(otbu)-val-val-glu(otbu)-glu(otbu)-ala-glu(otbu)-asp(α-otbu)-rinkmbha树脂。
取上述胸腺法新树脂，加入体积比为tfa︰水︰edt＝90︰5︰5的混合酸解液(用量10ml/克胸腺法新树脂)，搅拌均匀，室温搅拌反应3小时，反应混合物使用砂芯漏斗过滤，收集滤液，树脂再用少量tfa洗涤3次，合并滤液后减压浓缩，加入无水乙醚沉淀，再用无水乙醚洗沉淀3次，抽干得类白色粉末，真空减压干燥至恒重，得胸腺法新粗品303g，粗品纯度为43.8％。
取上述胸腺法新粗品，加水搅拌，用氨水调ph7.0至完全溶解，溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，纯化备用；
采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相c18，流动相系统为0.1％tfa/水溶液-0.1％tfa/乙腈溶液，100mm*250mm的色谱柱流速为120ml/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得胸腺法新纯化中间体浓缩液；
取胸腺法新纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用；
采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为1％醋酸/水溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相c18，100mm*250mm的色谱柱流速为120ml/min，采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，减压浓缩，得到胸腺法新醋酸水溶液，冷冻干燥，得胸腺法新纯品48.9g，制备总收率为15.7％，分子量：3108.4(100％m+h)，纯度：97.9％，最大单一杂质0.9％。
实施例14
采用胸腺法新的第7～16保护氨基酸片段来制备胸腺法新
ac-ser1-asp2-ala3-ala4-val5-asp6-thr7-ser8-ser9-glu10-ile11-thr12-thr13-lys14-asp15-leu16-lys17-glu18-lys19-lys20-glu21-val22-val23-glu24-glu25-ala26-glu27-asn28-oh
称取替代度为0.5mol/g的rinkmbha树脂0.2kg，加入到固相合成仪反应器中，用dmf洗涤2次，用dmf溶胀树脂30分钟后抽干，用每克树脂10ml20％哌啶/dmf溶液脱除树脂中的fmoc保护基20分钟，然后用dmf洗涤6次，得到去保护的rinkmbha树脂。
取0.3molasp(α-otbu)-oh和0.3molhobt，用dmf溶解，搅拌下加入0.3moldic，继续搅拌反应1小时，加入固相合成仪反应器中，室温反应2h(反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再延长偶联反应时间)，得到fmoc-asp(α-otbu)-rinkmbha树脂。
按照胸腺法新氨基酸序列，从c端向n端，重复上述脱除保护基和加入相应氨基酸偶联的步骤，按表2的顺序一次完成相应氨基酸或片段的延伸偶联。
表2
最后以每克氨基树脂15mlpip(20％)/dmf(80％)混合溶液脱除n段带有的fmoc保护基20min，然后用dmf洗涤6次，用25％ac2o/dmf溶液进行乙酰化反应2小时，分别用dmf和甲醇洗涤6次，减压干燥后得到胸腺法新树脂535g，树脂总收率为79.4％。
ac-ser(tbu)-asp(otbu)-ala-ala-val-asp(otbu)-thr(tbu)-ser(tbu)-ser(tbu)-glu(otbu)-ile-thr(tbu)-thr(tbu)-lys(boc)-asp(otbu)-leu-lys(boc)-glu(otbu)-lys(boc)-lys(boc)-glu(otbu)-val-val-glu(otbu)-glu(otbu)-ala-glu(otbu)-asp(α-otbu)-rinkmbha树脂。
取上述胸腺法新树脂，加入体积比为tfa︰水︰edt＝90︰5︰5的混合酸解液(用量10ml/克胸腺法新树脂)，搅拌均匀，室温搅拌反应3小时，反应混合物使用砂芯漏斗过滤，收集滤液，树脂再用少量tfa洗涤3次，合并滤液后减压浓缩，加入无水乙醚沉淀，再用无水乙醚洗沉淀3次，抽干得类白色粉末，真空减压干燥至恒重，得胸腺法新粗品317g，粗品纯度为47.2％。
取上述胸腺法新粗品，加水搅拌，用氨水调ph7.0至完全溶解，溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，纯化备用；
采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相c18，流动相系统为0.1％tfa/水溶液-0.1％tfa/乙腈溶液，100mm*250mm的色谱柱流速为120ml/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得胸腺法新纯化中间体浓缩液；
取胸腺法新纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用；
采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为1％醋酸/水溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相c18，100mm*250mm的色谱柱流速为120ml/min，采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，减压浓缩，得到胸腺法新醋酸水溶液，冷冻干燥，得胸腺法新纯品57.8g，制备总收率为18.6％，分子量：3108.6(100％m+h)，纯度：98.2％，最大单一杂质0.6％。
对照例
文献：王炜,张鸿鹏,黄鹤固相片段缩合法制备胸腺素α1的工艺化学工业与工程2018年7月第25卷第4期
采用三段(1～10、11～18和19～28)分别合成方式,以v(dmf)v(dcm)等于3.0的混合溶液为反应溶剂,hatu为缩合剂,n末端氨基先乙酰化后进行片段间缩合的途径进行合成,多肽片段间缩合反应时间采用20.0h。该条件下合成的胸腺素α1,粗品收率64.3％,纯度61.1％。
上述实施例表明，本发明采用的多肽片段1和2来合成胸腺法新，经hplc检测纯度可达99.5％，总收率可达34％以上，而采用其他片段来合成胸腺法新并不能达到类似的效果。本发明提供的方法合成胸腺法新，缩短了合成周期，提高了纯度和总收率。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。