本发明属于植物遗传转化技术领域，特别提供了一种水稻遗传转化方法。
背景技术：
水稻是世界上分布最广、最为重要的粮食作物之一，其遗传转化一直受到大家的重视。传统水稻的品种改良方法一般是通过品种杂交、远缘杂交等，其转基因技术起源于1988年，到目前为止，其遗传转化体系已经发展的较为完善。但是，仍然存在着转化时间长、转化效率低等问题。
技术实现要素：
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种水稻遗传转化方法，通过调整过程中的培养基及培养参数，大大缩短了水稻遗传转化的时间，并且提高了遗传转化率。
本发明是这样实现的，一种水稻遗传转化方法，包括如下步骤：
1)愈伤诱导
水稻种子的灭菌：用75％的乙醇灭菌5min，再用25％naclo，加1滴吐温，于摇床200rpm，震荡处理40min；使用无菌水清洗3-5次，用灭菌滤纸吸干表面水分；
愈伤诱导：将灭菌后的种子，放到os1培养基上，31℃培养室中16h光照/8h黑暗培养8-10天；定期查看愈伤生长状态，有无长菌情况，待愈伤组织长至约与种子大小一致、呈金黄色时，即可用于侵染；
2)制备侵染液
取50mlos-inf，加入100μlas，将农杆菌挑至混合液中，制成侵染液；
3)侵染
将调好的侵染液加至水稻愈伤中，放置摇床100rpm侵染30min，取出用无菌滤纸吸干；
4)共培养
将步骤3)吹至表面无液体的愈伤组织接至os-cocu培养基，暗处培养3天，至每个侵染后的愈伤组织周围农杆菌长势良好，证明侵染成功；
5)脱菌-筛选
脱菌：200ml无菌水加cef400微升，终浓度500mg/l，分5次清洗愈伤：第1-2次，轻摇清洗后弃去废液；第3次摇床100rpm，震荡清洗90min；第4-5次，轻摇清洗后弃去废液，最后，用无菌滤纸吸干愈伤；
筛选：将吸干的愈伤，接至os-hn筛选培养基，每隔10天继代1次，继代至第3-4次时，外植体周围出现新生长的金黄色愈伤，为筛选成功的愈伤；
6)分化
将筛选出的阳性愈伤接至os2-hn分化培养基，每隔10-15d进行一次继代，继代3-4次，期间：分化开始15d，愈伤开始出现绿色；最终分化成功的愈伤再经25-30d成3-5cm幼苗；
7)生根
将长至3-5cm的阳性幼苗清理好基部愈伤，接种至os3培养基8-12天，至长出1-2条新生根；
各步骤中用到的培养基具体配方见下表：
上述培养基配方表中的各个代码代表含义为：
进一步地，所述愈伤诱导过程中，os1培养基上每皿接种18粒种子。
进一步地，所述步骤2)中制备的侵染液od600＝1.0。
进一步地，选用的农杆菌为eha105，载体骨架为pcambia1300，携带的为kan抗性基因。
与现有技术相比，本发明的优点在于：过程简单、操作方便、参数及培养基优化，能够在较短时间内获得高遗传转化率的水稻转基因植株。
附图说明
图1为利用本发明的方法得到的愈伤诱导阶段的水稻愈伤；
图2为利用本发明的方法得到的筛选阶段继代一次的阳性愈伤；
图3为利用本发明的方法得到的筛选阶段继代两次的阳性愈伤；
图4为利用本发明的方法得到的筛选阶段继代三次的阳性愈伤；
图5为利用本发明的方法得到的分化阶段的阳性苗；
图6为利用本发明的方法得到的生根阶段的阳性苗。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例、
一种水稻遗传转化方法，包括如下步骤：
1)愈伤诱导
水稻种子的灭菌：取水稻种子100粒(稻花香2号)，用75％的乙醇灭菌5min，再用25％naclo，加1滴吐温，于摇床200rpm，震荡处理40min；使用无菌水清洗3-5次，用灭菌滤纸吸干表面水分；
愈伤诱导：将灭菌后的种子，放到os1培养基上，每皿接种18粒种子，31℃培养室中16h光照8h黑暗培养8-10天；定期查看愈伤生长状态，有无长菌情况，待愈伤组织长至约与种子大小一致、呈金黄色时，即可用于侵染，约成功诱导出50个种子愈伤，参考图1；
2)制备侵染液
取50mlos-inf，加入100μlas，将农杆菌(eha105，载体骨架为pcambia1300，携带的为kan抗性基因)挑至混合液中，制成侵染液，od600＝1.0；
3)侵染
将调好的侵染液加至水稻愈伤中，放置摇床100rpm侵染30min，取出用无菌滤纸吸干；
4)共培养
将步骤3)吹至表面无液体的愈伤组织接至os-cocu培养基，暗处培养3天，至每个侵染后的愈伤组织周围农杆菌长势良好，证明侵染成功；
5)脱菌-筛选
脱菌：200ml无菌水加cef400微升，终浓度500mg/l，分5次清洗愈伤：第1-2次，轻摇清洗后弃去废液；第3次摇床100rpm，震荡清洗90min；第4-5次，轻摇清洗后弃去废液，最后，用无菌滤纸吸干愈伤；
筛选：将吸干的愈伤，接至os-hn筛选培养基，每隔10天继代1次，继代至第3-4次时，外植体周围出现新生长的金黄色愈伤，为筛选成功的愈伤，参考图2、图3和图4；
6)分化
将筛选出的阳性愈伤接至os2-hn分化培养基，每隔10-15d进行一次继代，继代3-4次，期间：分化开始15d，愈伤开始出现绿色；最终分化成功的愈伤再经25-30d成3-5cm幼苗，参考图5；
7)生根
将长至3-5cm的阳性幼苗清理好基部愈伤，接种至os3培养基8-12天，至长出1-2条新生根，参考图6；
各步骤中用到的培养基具体配方见下表：
上述培养基配方表中的各个代码代表含义为：