一种多功能生物菌肥的制作方法

文档序号:15936394发布日期:2018-11-14 02:27阅读:613来源:国知局
本发明涉及一种生物菌肥,特别涉及一种多功能生物菌肥。
背景技术
生物菌肥,又称微生物肥料,是以微生物的生命活动导致作物得到特定肥料效应的一种制品,是农业生产中使用肥料的一种。主要靠生物菌肥中含有的大量有益微生物的生命活动来完成。只有当这些有益微生物处于旺盛的繁殖和新陈代谢的情况下,物质转化和有益代谢产物才能不断形成。因此,微生物肥料中有益微生物的种类、生命活动是否旺盛是其有效性的基础,而不像其它肥料是以氮、磷、钾等主要元素的形式和多少为基础。目前,我国全年化肥总用量达1.4亿吨,折合的纯氮养分达4240万吨。由于化肥的长期、大量使用,特别是不科学、不合理的盲目使用,导致化肥的实际利用率非常低。损失的氮肥对空气和地下水的污染越来越严重。近年来,太湖、巢湖和滇池相继爆发蓝藻,严重危及了周边群众的饮水安全和养殖业。因此,急需提供一种能减弱氮元素污染的生物菌肥,对饮水安全和养殖业进行保护。根结线虫(meloidogyne)是一种高度专化型的杂食性植物病原线虫。根结线虫主要为害各种蔬菜的根部,表现为侧根和须根较正常增多,并在幼根的须根上形成球形或圆锥形大小不等的白色根瘤,有的呈念珠状。被害株地上部生长矮小、缓慢、叶色异常,结果少,产量低,甚至造成植株提早死亡。因此,对根结线虫的防治对于农作物是非常必要的。现有技术当中还没有将防治根结线虫和减弱氮元素污染相结合的生物菌肥,而这是非常必要的,因为据研究表明,氮元素污染的地段通常根结线虫的爆发率会比其余地段高。技术实现要素:有鉴于此,本发明的主要目的在于提供一种生物菌肥,其一方面能够防治根结线虫,另一方面可以减弱氮元素污染。为达到上述目的,本发明的技术方案是这样实现的:本发明提供一种多功能生物菌肥,其特征在于,所述多功能生物菌肥包括:第一菌液,用于吸附土壤中的硝态氮;和第二菌液,用于防治根结线虫。进一步地,所述第一菌液的菌种为反硝化细菌和嗜热侧孢霉。进一步地,所述第二菌液的菌种为:枯草芽孢杆菌和淡紫拟青霉。反硝化细菌购自北海群林生物工程有限公司;嗜热侧孢霉购自上海名劲生物科技有限公司;枯草芽孢杆菌购自北海群林生物工程有限公司;淡紫拟青霉购自山东长泰生物科技有限公司。在一个实施方案中,所述两种菌液的比例为1:2。在另一个实施方案中,所述多功能菌肥还可以包括载体。除菌液以外,用于制备生物菌肥所需要的其他材料和技术均是本领域技术人员所熟知的常规材料和技术。发明人令人意料的发现,将第一菌液和第二菌液共同施用时,其效果远好于单独施用第二菌液,微生物之间的协同作用导致共同施用的生物菌肥的效果有一个极大的提升。具体实施方式实施例一、第一菌液的制备第一菌液的制备方法包括以下步骤:1.反硝化细菌菌液的制备:a.斜面培养:将反硝化细菌原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上,在37℃条件下培养36小时;b.摇床培养:将步骤a培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中,在ph7.0、37℃条件下,200r/min摇床培养16小时;c.发酵罐培养:将步骤b培养的菌种在无菌条件下接种于液体发酵培养基中,在ph7.5、罐压0.05mpa、65℃条件下,培养45小时后,活菌数大于2.0×108cfu/ml,90%菌体成为芽孢时下罐,得到发酵液。其中,步骤a中使用的斜面培养基的配方如下:硝酸钠0.15%,乙酸钠0.1%,磷酸二氢钾0.1%,葡萄糖0.15%,硫酸镁0.01%,天冬氨酸0.05%,三氯化铁0.005%,酵母膏0.015%,琼脂2.0%,余量为水,ph值7.0;步骤b和c中使用的培养基配方如下:硝酸钠0.2%,乙酸钠0.1%,磷酸二氢钾0.1%,葡萄糖0.15%,硫酸镁0.02%,天冬氨酸0.05%,三氯化铁0.01%,酵母膏0.015%,余量为水,ph值7.2。2.嗜热侧孢霉菌液的制备:a.斜面培养:将嗜热侧孢霉原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上,在37℃条件下培养36小时;b.摇床培养:将步骤a培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中,在ph7.0、37℃条件下,150r/min摇床培养16小时;c.发酵罐培养:将步骤b培养的菌种在无菌条件下接种于液体发酵培养基中,在ph7.2、罐压0.05mpa、37℃条件下,培养48小时后,活菌数大于1.0×109cfu/ml得到发酵液。其中,步骤a中使用的斜面培养基的配方如下:米糠:麸皮:玉米粉:豆粕:保水性树胶=1:1.5:1.5:2.5:0.1的比例混合;步骤b和c中使用的培养基配方为pda培养基和含有镧、铈的稀土促培养基,其比例为1:0.0003。反硝化细菌菌液和嗜热侧孢霉菌液混合得到第一菌液。实施例二、第二菌液的制备1.枯草芽孢杆菌菌液的制备:a.斜面培养:将枯草芽孢杆菌原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上,在37℃条件下培养42小时;b.摇床培养:将步骤a培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中,在ph7.0、37℃条件下,150r/min摇床培养18小时;c.发酵罐培养:将步骤b培养的菌种在无菌条件下接种于液体发酵培养基中,在ph7.5、罐压0.05mpa、37℃条件下,培养56小时后,活菌数大于5.0×108cfu/ml,80%菌体成为芽孢时下罐,得到发酵液。其中,步骤a中使用的斜面培养基的配方如下:葡萄糖15g、蛋白胨5g、酵母膏5g、琼脂15g和水1000ml;步骤b中使用的种子培养基配方如下:葡萄糖10g、牛肉膏5g、酵母粉5g、淀粉10g、豆饼粉5g、kh2po40.5g、mgso40.2g和水1000ml;步骤c中使用的液体发酵培养基配方如下:玉米粉26kg、豆饼粉16kg、硫酸铵4kg、葡萄糖8kg、酵母粉2.5kg、蛋白胨1.7kg和消泡剂50ml,加水至600l。2.淡紫拟青霉菌液的制备:a.将淡紫拟青霉原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上,在28℃条件下培养72小时;b.摇床培养:将步骤e培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中,在ph6.0、26℃条件下,160r/min摇床培养24小时;c.发酵罐培养:将步骤f培养的菌种在无菌条件下分别接种于液体发酵培养基,在ph6.0、罐压0.05mpa、26℃条件下,在培养72小时后终止发酵,进行固体发酵产孢;d.固体发酵产孢:将步骤c经过发酵罐培养后的菌丝体接种到固体发酵培养基上,培养168-180小时,待淡紫拟青霉90%产孢时停止发酵;再用液体发酵培养基重悬获得菌液。其中,步骤a中使用的斜面培养基的配方如下:葡萄糖20g、土豆汁200g、琼脂20g和水1000ml;步骤b中使用的种子培养基配方如下:白糖20g、蛋白胨5g、磷酸二氢钾0.2g、硫酸镁0.2g、氯化钠2g和水1000ml;步骤c中使用的液体发酵培养基配方如下:淀粉12kg、玉米粉3kg、豆饼粉1.2kg、白糖12kg、蛋白胨3kg、硫酸镁0.12kg、氯化钠12kg、消泡剂50ml,加水至600l;步骤d中的固体发酵培养基配方如下:麸皮、玉米粉和豆饼粉按7:2:1重量比混合组成的固体料中加入水,即得固体发酵培养基,固体料与水的重量比为1:0.6。枯草芽孢杆菌菌液和淡紫拟青霉菌液混合,得到第二菌液。实施例3、多功能生物菌肥的田间试验根据实验设计,分为实验组和对照组。实验组为添加第一菌液和第二菌液的适合肥料,其余肥料必须成分为本领域技术人员所熟知的常规选择。对照组为第二菌液,其余肥料必须成分为本领域技术人员所熟知的常规选择。为保证单因素以及避免误差,除第二菌液以外的其余成分均保持一致,且在田间操作时,也采取避免误差的各种操作。参考微生物肥料田间实验技术规程及肥效评价指南(ny/t1536-2007)中的田间效果实验设计要求。实验分为3组,种植番茄,每组种植面积20m2,每组做3个重复实验。种植密度为3000株/亩,病虫防治等均按大田生产要求进行管理。实验组a:施用包含第一菌液和第二菌液的生物菌肥,第一菌液和第二菌液的比例为1:2,每亩用量80kg,其余成分为本领域技术人员熟知的常规成分,例如基肥(瓜果类专用有机肥80kg/亩,碳铵12kg/亩、过磷酸钙30kg/亩、硫酸氢钾17kg/亩)混匀做基肥施用;实验组b:施用包含第二菌液的生物菌肥,每亩用量80kg,其余成分为本领域技术人员熟知的常规成分,例如基肥(瓜果类专用有机肥80kg/亩,碳铵12kg/亩、过磷酸钙30kg/亩、硫酸氢钾17kg/亩)混匀做基肥施用;实验组c:为普通肥料。在番茄移植60天时每小区随机取10株进行根结情况调查。病情指数计算采用0~4级的分级标准进行病情分级,统计病情指数,并计算防效。参考肖炎农等的分级标准:0级,无根结;1级,有根结的根系占全根系的1%~24%;2级,有根结的根系占全根系的25%~49%;3级,有根结的根系占全根系的50%~74%;4级,有根结的根系占全根系的75%~100%。防治效果=[(空白对照病情指数-施肥处理后病情指数)/空白对照病情指数]×100%。其结果如表1所示。另外具体调查了番茄各种病病情的情况,结果如表2所示。表1.三种处理对根结线虫病情指数、产量的影响处理病情指数防治效果(%)平均亩产量(kg)增产率(%)实验组a2.189.3%508323.73%实验组b6.272.1%476315.94%实验组c18.54108从表中可以看出,未添加生物菌肥的实验组c的病情指数最高,平均亩产量最低。而添加了第一菌液和第二菌液的实验组a明显从防治效果和增产率方面效果都远好于实验组b。证明了添加第一菌液和第二菌液的实验组a取得了很好的效果。表2三种处理对番茄病害发生的影响以上所述,仅为本发明的较佳实施例而已,并非用于限定本发明的保围。当前第1页12
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