本发明属于生物工程
技术领域：
：，具体涉及一种从薏仁米糠中制备薏仁米糠多肽的方法。
背景技术：
：薏仁米糠是薏仁米在加工过程中的主要副产物，含有丰富的营养物质，但目前薏仁米糠通常被直接加工成饲料，仅有小部分被用来榨油，综合利用不充分，精深加工技术应用不足，给薏仁米生产加工企业造成了较大损失，制约了其进一步的市场拓展和产品开发。为提高薏仁米糠的利用价值，促进薏仁高附加值产品开发，充分利用薏仁米资源，推动薏仁米产业向精深加工方向发展，宜利用薏仁米糠制备多肽。现有专利201310634437.6公开了一种从米糠高温粕中制备米糠多肽的方法，其主要利用风味蛋白酶对米糠进行酶解得到多肽，风味蛋白酶主要是由米曲霉菌株发酵提纯、复配而成的酶制剂，在食品加工中的动植物水解产品，加入风味蛋白酶，可去除苦味，改善口感，但是其酶活力低，且价格高，增加了企业生产成本。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种得率高、氨基酸种类丰富,具有较高的亲水性，易于人体吸收，营养价值高的薏仁米糠制备多肽的方法。一种从薏仁米糠中制备薏仁米糠多肽的方法，所述制备方法包括下列步骤：(1)碱提：将薏仁米糠按照料液质量比1:22加水搅拌均匀,调节ph至9.5-9.7，于45-46℃碱提170-190分钟，然后3950-4050r/min离心14-16分钟得上清液,将上清液ph值调至4.1-4.3,静置50-70分钟,3950-4050r/min离心14-16分钟去除上清液，沉淀水洗至中性，真空冷冻干燥得到薏仁米糠蛋白；(2)中性蛋白酶酶解：取步骤(1)得到的薏仁米糠蛋白，按底物浓度5％加蒸馏水溶解，加入米糠蛋白质量1.5-2.5％的中性蛋白酶，于40-50℃酶解150-210分钟，酶解过程中维持酶解液ph值7-8，酶解结束后灭酶，然后离心去除沉淀，获得一次酶解上清液；(3)碱性蛋白酶酶解：将步骤(2)的一次酶解上清液调ph值为9.5-10.5，加入4-6％的碱性蛋白酶于45-55℃酶解90-150分钟，酶解过程中维持酶解液ph值呈碱性，酶解完成后灭酶，然后离心去除沉淀，获得二次酶解上清液；(4)浓缩和干燥：将步骤(3)获得的二次酶解上清液经过真空冷冻干燥，得到薏仁米糠蛋白多肽。上述的一种从薏仁米糠中制备薏仁米糠多肽的方法，其中步骤(2)所述的中性蛋白酶酶解：优选中性蛋白酶加入量为米糠蛋白质量的2.0％。上述的一种从薏仁米糠中制备薏仁米糠多肽的方法，其中步骤(2)所述的中性蛋白酶酶解：优选酶解温度为45℃。上述的一种从薏仁米糠中制备薏仁米糠多肽的方法，其中步骤(2)所述的中性蛋白酶酶解：优选酶解时间为210分钟。上述的一种从薏仁米糠中制备薏仁米糠多肽的方法，其中步骤(2)所述的中性蛋白酶酶解：优选溶液ph值为7.0。上述的一种从薏仁米糠中制备薏仁米糠多肽的方法，其中步骤(3)所述的碱性蛋白酶酶解：优选碱性上清液ph值为10。上述的一种从薏仁米糠中制备薏仁米糠多肽的方法，其中步骤(3)所述的碱性蛋白酶酶解：优选碱性蛋白酶加入量为4.8％。上述的一种从薏仁米糠中制备薏仁米糠多肽的方法，其中步骤(3)所述的碱性蛋白酶酶解：优选酶解温度为50℃。上述的一种从薏仁米糠中制备薏仁米糠多肽的方法，其中步骤(3)所述的碱性蛋白酶酶解：优选酶解时间为120分钟。本发明与现有技术相比，具有明显有益效果，从以上技术方案可知:本发明利用酶活高的中性蛋白酶，通过对影响薏仁米糠多肽得率的4个主要因素：加酶量、酶解温度、酶解时间、酶解ph进行单因素试验，再通过正交优化试验确认最佳酶解条件，进一步确保了生产工艺的稳定性与多肽的高产率，所制备的薏仁米糠多肽氨基酸种类丰富,具有较高的亲水性，易于人体吸收，营养价值高。其各项功能性质参数均优化薏仁米糠蛋白，具有更好的加工价值和更广的应用领域，可大大提高企业的经济效益，促进对薏仁米糠资源的充分利用。本方法适合薏仁生产行业。具体实施方式以下结合实验和较佳实施例，对依据本发明提出的一种从薏仁米糠中制备薏仁米糠多肽的方法具体实施方式、特征及其功效，详细说明如后。试验例：利用薏仁米糠制备薏仁米糠多肽的方法。试验方法为：中性蛋白酶酶解工艺优化：取步骤(1)得到的薏仁米糠蛋白1g，按底物浓度5％加蒸馏水溶解，对影响薏仁米糠多肽得率的4个主要因素：加酶量、酶解温度、酶解时间、酶解ph进行单因素试验，根据单因素试验结果，每种因素选取最佳水平3组，采用正交优化组合设计原理，进行l9(34)正交优化试验，(见表1)，以薏仁米糠多肽得率为指标，确定最佳工艺条件。表1中性蛋白酶l9(34)正交因素水平表表2中性蛋白酶酶解工艺正交优化试验如表2所示，经过正交优化分析，极差c>a>d>b，即表示酶解温度是影响制备工艺的最显著因素，其次依次为加酶量、酶解时间、酶解ph，最优组合为：c2a2d3b1，即在加酶量2％、ph7.0的条件下，45℃水浴酶解210min。经验证试验测得多肽得率为54.75％。(3)碱性蛋白酶酶解工艺优化：取步骤(1)得到的薏仁米糠蛋白1g，按底物浓度5％加蒸馏水溶解，对影响薏仁米糠多肽得率的4个主要因素：加酶量、酶解温度、酶解时间、酶解ph进行单因素试验，根据单因素试验结果，采用box-behnken中心组合设计原理，设计4因素3水平的响应面优化试验，对影响薏仁米糠多肽得率(tca-nsi)的4个因素：酶解ph、酶解温度、酶解时间、加酶量进行全因素响应面分析，编码表见表3，试验结果见表4，以薏仁米糠多肽得率为响应值，确定最佳工艺条件。表3响应面试验设计因素水平编码表表4box-behnken实验设计及结果用design-eepert软件对实验数据进行多元回归拟合分析，得酶解ph(a)、酶解温度(b)、加酶量(c)、酶解时间(d)的二次多项回归方程为：r＝12.09+0.096a+1.29b+0.51c-0.19d-1.21ab+0.82ac+1.01ad+2.36bc-0.72bd-3.09cd-3.36a2-3.22b2-2.44c2-2.00d2。对各因素进行响应面优化，得出碱性蛋白酶最佳酶解工艺为：底物浓度5％加酶量4.8％、酶解ph10.0、酶解温度50℃、酶解时间120min，在此条件下进行验证试验，得薏仁米糠多肽得率为48.73％。(4)双酶分步水解试验：分别用中性蛋白酶和碱性蛋白酶进行双酶分步水解试验，考虑到ph对酶解过程的影响，先加入中性蛋白酶，在调节体系至其最适条件进行酶解，灭酶后再加入碱性蛋白酶，使其在最适条件下进行酶解，其多肽得率为61.81％。实施例1：一种从薏仁米糠中制备薏仁米糠多肽的方法，所述制备方法包括下列步骤：(1)碱提：将薏仁米糠按照料液质量比1:22加水搅拌均匀,调节ph至9.6，于45℃碱提190分钟，然后3950r/min离心16分钟得上清液,将上清液ph值调至4.1,静置70分钟,3950r/min离心16分钟去除上清液，沉淀水洗至中性，真空冷冻干燥得到薏仁米糠蛋白；(2)中性蛋白酶酶解：取步骤(1)得到的薏仁米糠蛋白，按底物浓度5％加蒸馏水溶解，加入米糠蛋白质量1.5％的中性蛋白酶，于50℃酶解150分钟，酶解过程中维持酶解液ph值8，酶解结束后灭酶，然后离心去除沉淀，获得一次酶解上清液；(3)碱性蛋白酶酶解：将步骤(2)的一次酶解上清液调ph值为9.5，按底物浓度5％加入6％的碱性蛋白酶于55℃酶解90分钟，酶解过程中维持酶解液ph值呈碱性，酶解完成后灭酶，然后离心去除沉淀，获得二次酶解上清液；(4)浓缩和干燥：将步骤(3)获得的二次酶解上清液经过真空冷冻干燥，得到薏仁米糠蛋白多肽。实施例2：一种从薏仁米糠中制备薏仁米糠多肽的方法，所述制备方法包括下列步骤：(1)碱提：将薏仁米糠按照料液质量比1:22加水搅拌均匀,调节ph至9.5，于45.5℃碱提180分钟，然后4000r/min离心15分钟得上清液,将上清液ph值调至4.2,静置60分钟,4000r/min离心15分钟去除上清液，沉淀水洗至中性，真空冷冻干燥得到薏仁米糠蛋白；(2)中性蛋白酶酶解：取步骤(1)得到的薏仁米糠蛋白，按底物浓度5％加蒸馏水溶解，加入米糠蛋白质量2％的中性蛋白酶，于45℃酶解210分钟，酶解过程中维持酶解液ph值7，酶解结束后灭酶，然后离心去除沉淀，获得一次酶解上清液；(3)碱性蛋白酶酶解：将步骤(2)的一次酶解上清液调ph值为10，按底物浓度5％加入4.8％的碱性蛋白酶于50℃酶解120分钟，酶解过程中维持酶解液ph值呈碱性，酶解完成后灭酶，然后离心去除沉淀，获得二次酶解上清液；(4)浓缩和干燥：将步骤(3)获得的二次酶解上清液经过真空冷冻干燥，得到薏仁米糠蛋白多肽。实施例3：一种从薏仁米糠中制备薏仁米糠多肽的方法，所述制备方法包括下列步骤：(1)碱提：将薏仁米糠按照料液质量比1:22加水搅拌均匀,调节ph至9.4，于46℃碱提170分钟，然后4050r/min离心14分钟得上清液,将上清液ph值调至4.3,静置50分钟,4050r/min离心14分钟去除上清液，沉淀水洗至中性，真空冷冻干燥得到薏仁米糠蛋白；(2)中性蛋白酶酶解：取步骤(1)得到的薏仁米糠蛋白，按底物浓度5％加蒸馏水溶解，加入米糠蛋白质量2.5％的中性蛋白酶，于40℃酶解180分钟，酶解过程中维持酶解液ph值7.5，酶解结束后灭酶，然后离心去除沉淀，获得一次酶解上清液；(3)碱性蛋白酶酶解：将步骤(2)的一次酶解上清液调ph值为10.5，按底物浓度5％加入4％的碱性蛋白酶于55℃酶解90分钟，酶解过程中维持酶解液ph值呈碱性，酶解完成后灭酶，然后离心去除沉淀，获得二次酶解上清液；(4)浓缩和干燥：将步骤(3)获得的二次酶解上清液经过真空冷冻干燥，得到薏仁米糠蛋白多肽。通过最优实施例2，测定薏仁米糠多肽氨基酸组成与含量分析如表5所示：表5薏仁米糠多肽氨基酸组成及含量table5aminoacidcompositionandcontentofadlaybranpolypeptide注：*为必需氨基酸，e为必需氨基酸总量，t为氨基酸总量，e/t：必需氨基酸与氨基酸总含量的百分比，e/n：必需氨基酸与非必需氨基酸含量的比由表5可知，薏仁米糠多肽中氨基酸有13种，其中6种为必需氨基酸，占氨基酸总量的40％。薏仁米糠多肽中氨基酸总量为63.8g/100ml，必需氨基酸总量为25.6g/100ml，其中疏水性氨基酸(gly、ala、leu、val、pro、phe、ile)含量为29.7g/100ml。从样品的氨基酸分析结果中可推测样品的理化性质，薏仁米糠多肽具有较高的溶解度和亲水性，易于人体吸收，利用此特点可将其添加至保健食品中。以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。当前第1页12当前第1页12