本发明涉及食品加工技术领域，具体涉及一种短梗五加多肽提取物的制备方法，及其由此方法获得的短梗五加多肽提取物在调味盐制备中的应用。
背景技术：
短梗五加，是五加科五加属典型药用植物，属多年生落叶灌木，原产于中国的北部、东部地区。短梗五加在《神农本草经》、《本草纲目》中均有记载，被列为上品，在中国、俄罗斯、韩国等地作为一种传统药材，被长期广泛应用。短梗五加含有黄酮、木脂素、有机酸、挥发油、色素等多种活性成分，同时富含硒、铁、钙、锌等微量元素，具有抗疲劳、保护肝脏、抗癌、消炎、安神等功效。
多肽通常是指10-50个氨基酸分子组成的化合物，可以从动植物及微生物中提取制得，可不经降解直接被肠道吸收。科学试验表明多肽除了基础的营养价值外，通常还具有降低胆固醇、降血压、降血脂、抗氧化、抑菌等功能，作为新型的功能活性因子，在低过敏食品、运动强化食品、功能保健食品、易吸收食品等特殊用途食品方面，具有广阔的市场前景。经农业部农产品质量监督检测中心（沈阳）测定，短梗五加干果蛋白质含量为13.99%，但是目前对其蛋白质深加工的研究开发不足，所得的多肽产品含量较低，分子大小范围较大，功能性不稳定，同时，产品溶解性差，口感不佳，限制了其在食品中的应用。
因此，研发一种分子量范围确定，多肽含量较高，具有良好感官性状的短梗五加多肽提取物是十分必要的。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种短梗五加多肽提取物的制备方法及应用，该方法通过果胶酶和纤维素酶预处理、提取短梗五加蛋白质、分段酶解、超滤纯化、减压浓缩和冷冻干燥等步骤，制得含量较高、口感较好的短梗五加多肽提取物。
本发明第一个目的是提供一种短梗五加多肽提取物的制备方法，包括如下步骤：
a.短梗五加蛋白提取：将短梗五加干果粉碎，过100-140目筛得短梗五加细粉，加入适量纯化水，采用复合酶酶解后，用naoh溶液调节ph值至8.5-9.5，提取20-40min，分离、沉淀、洗涤得到短梗五加蛋白；
所述复合酶由质量比0.7-0.9:1的果胶酶和纤维素酶复配而成，酶解条件为：酶解温度40-50℃，ph值4.5-5.5，时间为1.5-2.5h，短梗五加与纯化水的质量比为1:10-20。
b.第一阶段酶解：向步骤（a）制得的短梗五加蛋白中加入适量水，升温至30-40℃，按照酶底比0.2-0.8%加入中性蛋白酶，调节ph值为6-7，酶解3-5h；
所述中性蛋白酶的活力为200u/mg。
c.第二阶段酶解：将步骤（b）制得的酶解液升温至40-50℃，按照酶底比0.2-0.8%加入风味蛋白酶，调节ph值为7-8，进一步酶解1-3h，95℃灭酶40min，冷却，离心，得酶解液；
所述风味蛋白酶的活力为500lapu/g。
d.超滤纯化：将步骤（c）制得的酶解液，在温度40-50℃，压力0.6-1.0mpa条件下，用500da和5000da的超滤膜进行分离，减压浓缩，冷冻干燥，制得短梗五加多肽提取物。
为了进一步提高短梗五加多肽提取物中的多肽含量，改善其风味，本发明提供了一种最优的短梗五加多肽提取物的制备方法。
a.短梗五加蛋白提取：将短梗五加干果粉碎，过120目筛得短梗五加细粉，加入适量纯化水，采用复合酶酶解后，用naoh溶液调节ph值至9.0，提取30min，分离、沉淀、洗涤得到短梗五加蛋白；
所述复合酶由质量比0.8:1的果胶酶和纤维素酶复配而成，酶解条件为：酶解温度45℃，ph值5.0，时间为2.0h，短梗五加与纯化水的质量比为1:15。
b.第一阶段酶解：向步骤（a）制得的短梗五加蛋白中加入适量水，升温至35℃，按照酶底比0.5%加入中性蛋白酶，调节ph值为6.5，酶解4小时；
所述中性蛋白酶的活力为200u/mg。
c.第二阶段酶解：将步骤（b）制得的酶解液升温至45℃，按照酶底比0.5%加入风味蛋白酶，调节ph值为7.5，进一步酶解2小时，95℃灭酶40min，冷却，离心，得酶解液；
所述风味蛋白酶的活力为500lapu/g。
d.超滤纯化：将步骤（c）制得的酶解液，在温度45℃，压力0.8mpa条件下，用500da和5000da的超滤膜进行分离，减压浓缩，冷冻干燥，制得短梗五加多肽提取物。
经检测，本发明制得的短梗五加多肽提取物的多肽含量为95%，多肽的分子量范围在500-5000da之间。
本发明第二个目的是提供短梗五加多肽提取物在调味盐制备中的应用方法。
所述调味盐按质量份数，包括如下组份：短梗五加多肽提取物5-8份，酵母提取物3-5份，香辛料4-6份，低钠盐81-88份。
所述调味盐的制备方法如下：准确称取短梗五加多肽提取物、酵母提取物、香辛料，混合均匀形成预混料；混料机中加入部分低钠盐，搅拌状态下投入预混料，混合均匀；搅拌状态下加入余量低钠盐，混合均匀，包装，即得到短梗五加调味盐。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1.本发明通过果胶酶和纤维素酶预处理，碱提工艺提取短梗五加蛋白，最大限度排除其他成分的干扰，提高了多肽提取物的纯度；依次使用中性蛋白酶、风味蛋白酶在各自适宜条件下酶解蛋白质，通过内切肽酶、外切肽酶的联合作用，酶解参数的优化和控制，提高了短梗五加多肽的提取率，降低了苦味的产生，改善了产物的感官性状；
2.本发明采用超滤方法纯化酶解液，收集500-5000da分子量范围的多肽，制得的多肽提取物纯度≥95%，活性稳定。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明所述技术方案做进一步的说明：
实施例一
一种短梗五加多肽提取物的制备方法，包括如下步骤：
a.短梗五加蛋白提取：将短梗五加干果粉碎，过100目筛得短梗五加细粉，加入适量纯化水，采用复合酶酶解后，用naoh溶液调节ph值至9.5，提取20min，分离、沉淀、洗涤得到短梗五加蛋白；
所述复合酶由质量比0.7:1的果胶酶和纤维素酶复配而成，酶解条件为：酶解温度50℃，ph值5.5，时间为2.0h，短梗五加与纯化水的质量比为1:20。
b.第一阶段酶解：向步骤（a）制得的短梗五加蛋白中加入适量水，升温至30℃，按照酶底比0.8%加入中性蛋白酶，调节ph值为7，酶解3小时；
所述中性蛋白酶的活力为200u/mg。
c.第二阶段酶解：将步骤（b）制得的酶解液升温至50℃，按照酶底比0.2%加入风味蛋白酶，调节ph值为8，进一步酶解3小时，95℃灭酶40min，冷却，离心，得酶解液；
所述风味蛋白酶的活力为500lapu/g。
d.超滤纯化：将步骤（c）制得的酶解液，在温度40℃，压力1.0mpa条件下，用500da和5000da的超滤膜进行分离，减压浓缩，冷冻干燥，制得短梗五加多肽提取物。
经检测，本发明制得的短梗五加多肽提取物的多肽含量为93%。
实施例二
一种短梗五加多肽提取物的制备方法，包括如下步骤：
a.短梗五加蛋白提取：将短梗五加干果粉碎，过120目筛得短梗五加细粉，加入适量纯化水，采用复合酶酶解后，用naoh溶液调节ph值至9.0，提取30min，分离、沉淀、洗涤得到短梗五加蛋白；
所述复合酶由质量比0.8:1的果胶酶和纤维素酶复配而成，酶解条件为：酶解温度45℃，ph值5.0，时间为1.5h，短梗五加与纯化水的质量比为1:15。
b.第一阶段酶解：向步骤（a）制得的短梗五加蛋白中加入适量水，升温至35℃，按照酶底比0.5%加入中性蛋白酶，调节ph值为6.5，酶解4小时；
所述中性蛋白酶的活力为200u/mg。
c.第二阶段酶解：将步骤（b）制得的酶解液升温至45℃，按照酶底比0.5%加入风味蛋白酶，调节ph值为7.5，进一步酶解2小时，95℃灭酶40min，冷却，离心，得酶解液；
所述风味蛋白酶的活力为500lapu/g。
d.超滤纯化：将步骤（c）制得的酶解液，在温度45℃，压力0.8mpa条件下，用500da和5000da的超滤膜进行分离，减压浓缩，冷冻干燥，制得短梗五加多肽提取物。
经检测，本发明制得的短梗五加多肽提取物的多肽含量为95%。
实施例三
一种短梗五加多肽提取物的制备方法，包括如下步骤：
a.短梗五加蛋白提取：将短梗五加干果粉碎，过140目筛得短梗五加细粉，加入适量纯化水，采用复合酶酶解后，用naoh溶液调节ph值至8.5，提取40min，分离、沉淀、洗涤得到短梗五加蛋白；
所述复合酶由质量比0.9:1的果胶酶和纤维素酶复配而成，酶解条件为：酶解温度40℃，ph值4.5，时间为2.5h，短梗五加与纯化水的质量比为1:10。
b.第一阶段酶解：向步骤（a）制得的短梗五加蛋白中加入适量水，升温至40℃，按照酶底比0.2%加入中性蛋白酶，调节ph值为6，酶解5小时；
所述中性蛋白酶的活力为200u/mg。
c.第二阶段酶解：将步骤（b）制得的酶解液升温至40℃，按照酶底比0.8%加入风味蛋白酶，调节ph值为7，进一步酶解1小时，95℃灭酶40min，冷却，离心，得酶解液；
所述风味蛋白酶的活力为500lapu/g。
d.超滤纯化：将步骤（c）制得的酶解液，在温度50℃，压力0.6mpa条件下，用500da和5000da的超滤膜进行分离，减压浓缩，冷冻干燥，制得短梗五加多肽提取物。
经检测，本发明制得的短梗五加多肽提取物的多肽含量为90%。
实施例四
短梗五加多肽提取物应用于调味盐的制备方法，包括如下步骤：
调味盐原料组分，按质量份数，包括短梗五加多肽提取物5份，酵母提取物3份，香辛料4份，低钠盐88份。取上述质量份数的短梗五加多肽提取物、酵母提取物、香辛料，混合均匀形成预混料；混料机中加入部分低钠盐，搅拌状态下投入预混料，混合均匀；搅拌状态下加入余量低钠盐，混合均匀，包装，即得到短梗五加调味盐。
实施例五
短梗五加多肽提取物应用于调味盐的制备方法，包括如下步骤：
调味盐原料组分，按质量份数，包括短梗五加多肽提取物6份，酵母提取物4份，香辛料5份，低钠盐85份。取上述质量份数的短梗五加多肽提取物、酵母提取物、香辛料，混合均匀形成预混料；混料机中加入部分低钠盐，搅拌状态下投入预混料，混合均匀；搅拌状态下加入余量低钠盐，混合均匀，包装，即得到短梗五加调味盐。
实施例六
短梗五加多肽提取物应用于调味盐的制备方法，包括如下步骤：
调味盐原料组分，按质量份数，包括短梗五加多肽提取物8份，酵母提取物5份，香辛料6份，低钠盐81份。取上述质量份数的短梗五加多肽提取物、酵母提取物、香辛料，混合均匀形成预混料；混料机中加入部分低钠盐，搅拌状态下投入预混料，混合均匀；搅拌状态下加入余量低钠盐，混合均匀，包装，即得到短梗五加调味盐。