一种单分子标记核酸检测试剂盒的制作方法

本实用新型涉及一种试剂盒，特别涉及一种单分子标记核酸检测试剂盒，属于分子生物科研领域。

背景技术：

目前，NGS被广泛应用于临床DNA检测和法医DNA分析中，在对靶基因进行扩增的时候会出现位点突变和链滑脱的问题，可能导致临床样本的检测出现假阳性，导致临床判断错误。另外，在科学研究中，由于突变引起了对DNA、RNA和miRNA存在偏向的不准确定量，对变异无法进行准确定量和定性。

随着转化和临床研究逐渐投入NGS的怀抱，问题也应运而生。有时候，样品很有限，或核酸被降解。由于PCR扩增偏向的存在，在定量稀有转录本时，这些问题可能导致实验失败。

现有的单分子标记技术，主要在PCR反应管中通过T4连接酶的活性，将分子条码标记在单分子上，这种方法存在的问题就是连接效率低，导致很多低频变异的核酸无法被连接和检测，造成很多有效信息的丢失。另外，现有的单分子标记技术的分子条码数量非常有限，可以检测的样本中的单分子数量有限，在很大程度上会导致需要分子无法得到检测，很多低频变异或者有效信息无法检测出。

常用的单分子标记试剂盒包含了连接反应液和分子条码，但是试剂盒的材质为纸质，且无保温功能，这就需要操作者将试剂和耗材放置于冰上操作，这就增加了操作的复杂性和污染的可能性。

技术实现要素：

本实用新型的目的在于提供一种操作便捷并具有保温功能的单分子标记核酸检测试剂盒，可以保证所有试剂在室温条件下保持低温活性，并且可以将分子条码和PCR反应液整合在同一盒体内，便于使用者的保管和操作方便性，解决以上背景技术中提出的问题。

本实用新型解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种单分子标记核酸检测试剂盒，包括盒体和盒盖，盒盖设置在盒体顶部，盒盖一侧与盒体一侧固定连接，所述的盒体包括上层盒体和下层盒体，上层盒体和下层盒体均为聚丙烯长方体，下层盒体设置在上层盒体底部，所述的上层盒体顶面设有多个凹槽，上层盒体内部设有用于放置保冷剂的内腔，所述的下层盒体内设有抽屉，抽屉内设有96孔板。96孔板是由光学透明纯聚苯乙稀制造的标准96孔细胞培养板，用于放置用于单分子标记的分子条码反应液和磁珠；上层盒体顶面的凹槽用于放置微反应器生成液、PCR反应液、Taq酶、超纯水等；上层盒体内腔的保冷剂可以保证盒体保持在4℃以下低温环境8小时左右。

作为优选，所述的凹槽数量至少为五个。每个凹槽分别单独放置微反应器生成液、PCR反应液、Taq酶、超纯水等。

作为优选，所述的盒盖开启处设有第一磁铁，盒体与盒盖开启处配合的侧面设有第二磁铁。

作为优选，所述的抽屉底部边缘设有短拉带。短拉带方便使用者拉开抽屉。

本实用新型的有益效果是：

本实用新型的一种单分子标记核酸检测试剂盒，采用双层盒体设计，并且在上层盒体中设置保冷剂保持盒体低温环境，使用过程中，无需将试剂放置于冰上使用，可以在试剂盒上直接进行操作，且保证了试剂的低温环境和酶的活性，盒体与盒盖通过磁铁启闭，开启方便，增加了操作的便捷性。

附图说明

图1是本实用新型的结构示意图；

图2是本实用新型96孔板的结构示意图。

图中：1、盒盖，2、上层盒体，3、下层盒体，4、第一磁铁，5、第二磁铁，6、凹槽，7、内腔，8、抽屉，9、96孔板，10、短拉带。

具体实施方式

下面通过具体实施例，并结合附图，对本实用新型的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本实用新型的实施并不局限于下面的实施例，对本实用新型所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本实用新型保护范围。

实施例：

如图1和图2所示的一种单分子标记核酸检测试剂盒，包括盒体和盒盖1，盒盖设置在盒体顶部，盒盖一侧与盒体一侧固定连接，所述的盒体包括上层盒体2和下层盒体3，上层盒体和下层盒体均为聚丙烯长方体，下层盒体设置在上层盒体底部。盒盖开启处设有第一磁铁4，盒体与盒盖开启处配合的侧面设有第二磁铁5。

上层盒体顶面设有五个凹槽6，每个凹槽分别单独放置微反应器生成液、PCR反应液、Taq酶、超纯水等。上层盒体内部设有用于放置保冷剂的内腔7，上层盒体内腔的保冷剂可以保证盒体保持在4℃以下低温环境8小时左右。

下层盒体内设有抽屉8，抽屉内设有96孔板9。如图2所示，96孔板是由光学透明纯聚苯乙稀制造的标准96孔细胞培养板，用于放置用于单分子标记的分子条码反应液和磁珠。抽屉底部边缘设有短拉带10，短拉带方便使用者拉开抽屉。

本实用新型的单分子标记核酸检测试剂盒，可用于临床样本和科研样本的DNA、RNA等核酸分子的分子标记，保证所有试剂在室温条件下保持低温活性，且将分子条码和PCR反应液整合在同一盒体内，便于使用者的保管和操作方便性。

以上所述的实施例只是本实用新型的一种较佳的方案，并非对本实用新型作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。